CN109957540A - 一种3d打印脂肪组织 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种3D打印脂肪组织，具体地，公开了一种人造脂肪组织，其包括生物相容性支架、脂肪组织以及混合培养液，通过3D生物打印技术，将生物相容性支架与脂肪组织制成具有生物活性的人造脂肪组织。本发明的混合培养液用于脂肪细胞及组织的培养和保存。生物相容性支架以3D打印方式制成。本发明的人造脂肪组织可作为脂肪相关内分泌代谢疾病的病理生理机制研究及治疗工具。

Description

一种3D打印脂肪组织
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及3D打印技术制备的脂肪组织。
背景技术
脂肪组织是由脂肪细胞构成，且被薄层疏松结缔组织分隔成小叶状。脂肪组织不仅仅是简单的能量储存器官，其更为重要的功能在于通过内分泌系统参与多种疾病的病理和生理过程。脂肪组织分为白色脂肪组织和棕色脂肪组织两类。白色脂肪组织是由大量的单泡脂肪细胞组成，主要分布在皮下、肠系膜等部位，是体内的能源库，具有存储脂肪，维持体温，调节脂肪代谢，支持保护等作用。而棕色脂肪特点在于富含毛细血管，其中脂肪细胞含有很多脂肪小滴，线粒体丰富。棕色脂肪主要分布于肩胛间区，颈后部等区域，主要的功能是在寒冷刺激下，被分解散发大量热能。在近年来的研究中发现，棕色脂肪在代谢性相关疾病中，包括肥胖，二型糖尿病及多囊卵巢综合征的治疗中具有重要的作用，通过生理或者药物的刺激诱导棕色脂肪的增多，能够改善这些病症中的代谢性指标。另外棕色脂肪可以分泌多种因子，可调控内分泌系统和机体激素水平。鉴于棕色脂肪对内分泌系统的调控功能，有一些研究尝试在不同的疾病模型(比如，二型糖尿病模型和多囊卵巢综合征模型)中移植棕色脂肪组织，发现移植后，这些模型中的疾病表型均有不同程度的改善，如二型糖尿病模型中体重下降，代谢性指标显著性改善；多囊卵巢综合征的卵巢功能改善等。然而，单纯棕色脂肪组织移植，由于供体细胞组织数量有限，松软组织不易移植，临床应用的局限性等问题，限制了脂肪组织用于相关疾病的治疗应用，因此，结合3D打印技术，人工构建具有生物活性的3D打印脂肪组织不仅有助于体外或体内探索脂肪内分泌代谢参与的相关病变的生理病理机制研究，而且也为人类的脂肪相关的内分泌代谢问题的研究提供了新的治疗工具。
发明内容
为了解决上述提到的问题，本发明在脂肪细胞培养的基础上，结合组织工程方法和目前先进的3D打印技术，体外打印具有生物学功能的3D脂肪组织，将脂肪前体细胞接种在液态支架材料进行共培养，通过脂肪细胞诱导液诱导7天左右，形成三维脂肪组织样复合结构，这种方式使细胞立体生长于三维结构中，更好的模拟了在体生长状态，且具有细胞分泌功能。
本发明一个方面提供了一种3D打印棕色脂肪组织，其由生物相容性支架材料、脂肪前体细胞、以及混合培养液通过3D生物打印方式制成。
在本发明的方案中，一种3D打印棕色脂肪组织通过以下方法制成，将生物相容性支架材料通过3D生物打印制成生物相容性支架，再将含棕色脂肪前体细胞的混合培养液注入支架上；再通过脂肪细胞诱导液诱导生成棕色脂肪组织；或者
将生物相容性支架材料与脂肪前体细胞混合培养液进行混合后，通过3D生物打印制成人造棕色脂肪组织，并通过棕色脂肪细胞诱导液诱导生成棕色脂肪组织。
在本发明的技术方案中，生物相容性支架材料选用胶原蛋白、海藻酸钠、明胶、琼脂糖、基质胶、透明质酸、壳聚糖、葡聚糖中的一种或者几种任意组合；优选地，所述胶原蛋白选自成纤维胶原，更优选为I型胶原蛋白、II型胶原蛋白、III型胶原蛋白、XI型胶原蛋白、XXIV型胶原蛋白、XXVII型胶原蛋白中的一种或者几种任意组合。
优选地，本发明的一个优选的实施方案中以明胶为支架材料。
在本发明的技术方案中，混合培养液是由培养基和促进脂肪细胞生长所需的生物活性物质制成的流动性液体；
混合培养液成分：
MEM/F12+10％FBS+链霉素+青霉素；
脂肪细胞诱导液成分：
I.MEM/F12+10％FBS+链霉素+青霉素+5ug/mL胰岛素+1nM 3,3',5-三碘-L-甲腺原氨酸(T3)；
II.MEM/F12+10％FBS+链霉素+青霉素+5ug/mL胰岛素+1nM 3,3',5-T三碘-L-甲腺原氨酸(T3)+125uM吲哚美辛+2ug/mL地塞米松+0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)+0.5uM罗格列酮。
脂肪组织培养液：
MEM/F12+10％FBS+链霉素+青霉素
在本发明的技术方案中，所述脂肪细胞选自脂肪。经过机械分离，消化处理后，获得的脂肪前体细胞用于人造脂肪组织的制备。
在本发明的技术方案中，通过3D生物打印制成生物相容性支架上具有孔隙，空隙的直径不超过1mm。
在本发明的技术方案中，所述空隙的尺寸具有1种以上的尺寸，优选具有1-4种尺寸，更优选具有2-3种尺寸。
在一个优选的技术方案中，本发明生物相容性支架的3D打印尺寸为：孔隙尺寸(R)：50μm～800μm；线条堆积夹角:0-90°。孔隙尺寸(R)优选为100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm、550μm、600μm、650μm、700μm、750μm；线条堆积夹角优选为5°、10°、15°、20°、30°、40°、50°、60°、70°、80°、90°。
本发明另一个方面提供了本发明所述的人造脂肪组织的制备方法，其包括以下步骤：
1)制备生物相容性支架材料；
2)制备混合培养液和脂肪细胞诱导液；
3)以混合培养液培养脂肪前体细胞；
4)先将生物相容性支架材料，通过3D生物打印制成生物相容性支架，再将含棕色脂肪前体细胞的混合培养液注入生物相容性支架内制成脂肪组织前体；或者
4)生物相容性支架材料与棕色脂肪细胞混合，通过3D生物打印制成棕色脂肪组织前体；
5)通过脂肪细胞诱导液将人造脂肪组织前体诱导为棕色脂肪组织；
任选地，6)将制备得到的棕色脂肪组织在混合培养液中进行培养保存备用。
本发明另一个方面提供了本发明所述的人造棕色脂肪组织在治疗代谢紊乱疾病中的用途，其中代谢紊乱性疾病包括多囊卵巢综合征、肥胖、向心性肥胖、糖尿病(I型糖尿病或II型糖尿病)、高血压症、心气虚、缺血性心脏病、高血压、甘油三酯血脂异常、HDL血脂异常、胆固醇血脂异常、空腹血糖升高、瘦素调节异常和脂肪调节异常组成的组合物。
本发明另一个方面提供了本发明所述的人造棕色脂肪组织在制备治疗代谢紊乱疾病的医疗用品中的用途，其中代谢紊乱包括多囊卵巢综合征、肥胖、向心性肥胖、糖尿病(I型糖尿病或II型糖尿病)、高血压症、心气虚、缺血性心脏病、高血压、甘油三酯血脂异常、HDL血脂异常、胆固醇血脂异常、空腹血糖升高、瘦素调节异常和脂肪调节异常等等。
本发明另一个方面提供了本发明所述的人造棕色脂肪组织作为研究与棕色脂肪相关的生理过程模型的用途；优选地，所述的与棕色脂肪相关的生理过程指体内棕色脂肪组织的脂肪增殖，脂肪组织慢性炎症，巨噬细胞的募集与分化，脂肪血管生成等方面。
在本发明的技术方案中，所述的脂肪前体细胞或包含脂肪前体细胞的组织或混合细胞等均不包含生殖细胞或全能干细胞，或者其均为非人类细胞，或者本发明所使用到的脂肪前体细胞或混合细胞等均为商业化可以获得的。
在本发明的技术方案中，所述的脂肪前体细胞可以来源于受试者的自体细胞。
有益效果
1)本发明的人造脂肪组织可作为任何因素引起的脂肪内分泌代谢参与疾病的直接相关疾病或间接相关疾病的研究和治疗工具；
2)本发明的人造脂肪组织可作为研究生理问题的研究模型；
3)本发明的人造脂肪组织克服了现有技术中棕色脂肪移植至体内时结构疏松，不宜手术的问题，提供了可以根据受试者使用部位和体型设计的个性化脂肪组织；
4)本发明的人造脂肪组织通过脂肪细胞诱导液的激活，能够实现细胞分泌功能。
附图说明
图1：3D打印脂肪组织流程示意图：脂肪组织细胞与支架材料以先打印后注入或先混合后打印的方式，制备成3D打印脂肪组织。
图2：脂肪前体细胞诱导分化成的脂肪细胞，经过油红O染色后，可见脂肪细胞分泌的大量油滴。
具体实施方式
下列实施例描述了本发明的具体方面以便解释本发明并且为本领域技术人员提供有关本发明方法的描述。这些实施例不应用来限定本发明，因为这些实施例仅提供了用于理解和实施本发明及其各个方面的具体方法。
实施例1混合培养液及脂肪细胞诱导液的配置
混合培养液成分为：DMEM F12+10％FBS+1％链霉素+1％青霉素。混合培养液0.22μm过滤灭菌后在37℃，5％CO2的培养箱内平衡2-4小时。
脂肪细胞诱导液成分I：MEM/F12+10％FBS+链霉素+青霉素+5ug/mL胰岛素+1nM 3,3',5-三碘-L-甲腺原氨酸(T3)；0.22μm过滤灭菌后在37℃，5％CO2的培养箱内平衡2-4小时。
脂肪细胞诱导液成分II：MEM/F12+10％FBS+链霉素+青霉素+5ug/mL胰岛素+1nM3,3',5-T三碘-L-甲腺原氨酸(T3)+125uM吲哚美辛+0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)+0.5uM罗格列酮；0.22μm过滤灭菌后在37℃，5％CO2的培养箱内平衡2-4小时。
实施例2棕色脂肪细胞获得
无菌条件下取出小鼠肩胛脂肪，小心的去除周围的白色脂肪组织，用PBS(含1％青、链霉素)洗3次，除去组织表面的血块和粘液，置入培养皿中，将脂肪组织剪碎后加入胶原酶D消化混合液(1.5U/mL胶原酶D+2.4u/mL DipaseⅡ+25mLPBS+10mM CaCl2)10ml，混匀，置于37℃水浴中振荡消化60min；700g离心10min，脂肪前体细胞位于离心管底部；倒掉上清液后，加入10ML的培养基重悬底部的细胞，反复吹打混匀后经70目滤网过滤，以除去未消化尽的组织，收集滤液；得到脂肪前体细胞和其他杂质的粗混合物。
用差异贴壁法分离脂肪组织中的前体细胞：将收集得到的细胞放置与10cm的培养皿中，以混合培养液在37℃培养箱中培养1-2h后，脂肪前体细胞已贴壁，去除上清液中的其他杂质细胞，加入新鲜的混合培养液。24h后换液，每天观察培养细胞的生长情况，详细记录细胞变化。
实施例3 3D打印棕色脂肪组织的制备
1.3D打印棕色脂肪组织的生物相容性支架的设计及制备
(1)结合计算机辅助设计(Computer aided design,CAD)，采用三维打印技术构建支架，其中形状、组成成分及内部结构都具有良好可设计性；
(2)三维脂肪组织的形状设计为类似脂肪组织的形状，并保证内部结构联通，具有一定孔隙结构；
(3)选择明胶(10％)配伍作为生物相容性支架的打印材料进行打印。
(4)所构建生物相容性支架内部结构参数：孔隙尺寸(R)＝0.2mm；线条堆积夹角：90°
(5)将制备好的生物相容性支架置于-80℃储存备用。
2.制备3D人造脂肪组织
将实施例2培养代的脂肪前体细胞以终浓度2×106细胞/mL注入生物相容性支架中，得到棕色脂肪组织前体。将制备得到棕色脂肪组织前体放入脂肪细胞诱导液I培养2天，换脂肪细胞诱导液II培养4-5天，诱导获得棕色脂肪组织。
实施例4 3D打印棕色脂肪组织的制备
1.3D打印棕色脂肪组织的生物相容性支架的设计及制备
(1)结合计算机辅助设计(Computer aided design,CAD)，采用三维打印技术构建支架，其中形状、组成成分及内部结构都具有良好可设计性；
(2)三维脂肪组织的形状设计为类似脂肪组织的形状，并保证内部结构联通，具有一定孔隙结构；
(3)所构建生物相容性支架内部结构参数：孔隙尺寸(R)＝0.2mm；线条堆积夹角：90°。
(4)选择明胶(10％)配伍作为生物相容性支架的打印材料，将明胶与实施例2获得的培养代的脂肪前体细胞以终浓度2×106细胞/mL进行混合，通过3D生物打印制成棕色脂肪组织前体。
2.制备3D人造棕色脂肪组织
将制备得到棕色脂肪组织前体放入脂肪细胞诱导液I培养2天，换脂肪细胞诱导液II培养4-5天，诱导获得棕色脂肪组织，通过油红O染色后，可见脂肪细胞分泌的大量油滴，证明已经获得了具有活性的棕色脂肪组织，并且可以正常分泌相关油脂和活性因子，能够实现细胞分泌功能。
因为可以在不脱离本发明范围和实质的情况下对上述主题进行各种改变，所以意图是上述描述中包含的或所附权利要求中定义的所有主题均解释为对本发明的描述和说明。能够根据上述教导对本发明进行许多修改和变型。

Claims (10)

1.一种3D打印棕色脂肪组织，其由生物相容性支架材料、脂肪前体细胞、以及混合培养液通过3D生物打印方式制成。
2.根据权利要求1所述的3D打印棕色脂肪组织，其通过以下方法制得：将生物相容性支架材料通过3D生物打印制成生物相容性支架，再将含棕色脂肪前体细胞的混合培养液注入支架上；再通过脂肪细胞诱导液诱导生成棕色脂肪组织；或者
将生物相容性支架材料与脂肪前体细胞混合培养液进行混合后，通过3D生物打印制成人造棕色脂肪组织，并通过脂肪细胞诱导液诱导生成棕色脂肪组织。
3.根据权利要求1-2任一项所述的3D打印棕色脂肪组织的制备方法，其包括以下步骤：
1)制备生物相容性支架材料；
2)制备混合培养液和脂肪细胞诱导液；
3)以混合培养液培养脂肪前体细胞；
4)将生物相容性支架材料，通过3D生物打印制成生物相容性支架，再将含棕色脂肪前体细胞的混合培养液注入生物相容性支架内制成脂肪组织前体；或者
4)生物相容性支架材料与棕色脂肪细胞混合，通过3D生物打印制成棕色脂肪组织前体；
5)通过脂肪细胞诱导液将脂肪组织前体细胞诱导为棕色脂肪组织；
任选地，6)将制备得到的棕色脂肪组织在混合培养液中进行培养保存备用。
4.根据权利要求1-2任一项所述的3D打印棕色脂肪组织，或权利要求3所述的制备方法，其中，混合培养液是由培养基和促进脂肪细胞生长所需的生物活性物质制成的流动性液体；
脂肪细胞诱导液为能够将脂肪前体细胞诱导为棕色脂肪细胞的，且包含活性成分的营养液。
5.根据权利要求1-2任一项所述的3D打印棕色脂肪组织，或权利要求3所述的制备方法，其中，生物相容性支架的3D打印尺寸为：孔隙尺寸(R)：50μm～800μm；线条堆积夹角:0-90°；
孔隙尺寸(R)优选为100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm、550μm、600μm、650μm、700μm、750μm；
线条堆积夹角优选为5°、10°、15°、20°、30°、40°、50°、60°、70°、80°、90°。
6.根据权利要求1-2任一项所述的3D打印棕色脂肪组织，或权利要求3所述的制备方法，其中，生物相容性支架材料选用胶原蛋白、海藻酸钠、明胶、琼脂糖、基质胶、透明质酸、壳聚糖、葡聚糖中的一种或者几种任意组合；
优选地，所述胶原蛋白选自成纤维胶原，更优选为I型胶原蛋白、II型胶原蛋白、III型胶原蛋白、XI型胶原蛋白、XXIV型胶原蛋白、XXVII型胶原蛋白中的一种或者几种任意组合。
7.根据权利要求1-2任一项所述的3D打印棕色脂肪组织，或权利要求3所述的制备方法，其中，所述的脂肪前体细胞可以来源于受试者的自体细胞。
8.根据权利要求1-2，4-7任一项所述的3D打印棕色脂肪组织在治疗代谢紊乱疾病中的用途，其中代谢紊乱疾病包括多囊卵巢综合征、肥胖、向心性肥胖、糖尿病(I型糖尿病或II型糖尿病)、高血压症、心气虚、缺血性心脏病、高血压、甘油三酯血脂异常、HDL血脂异常、胆固醇血脂异常、空腹血糖升高、瘦素调节异常和脂肪调节异常。
9.根据权利要求1-2，4-7任一项所述的3D打印棕色脂肪组织在制备治疗代谢紊乱疾病中的医疗用品中的用途，其中代谢紊乱疾病包括多囊卵巢综合征、肥胖、向心性肥胖、糖尿病(I型糖尿病或II型糖尿病)、高血压症、心气虚、缺血性心脏病、高血压、甘油三酯血脂异常、HDL血脂异常、胆固醇血脂异常、空腹血糖升高、瘦素调节异常和脂肪调节异常。
10.根据权利要求1-2，4-7任一项所述的3D打印棕色脂肪组织作为研究与棕色脂肪相关的生理过程模型的用途；优选地，所述的与棕色脂肪相关的生理过程指体内棕色脂肪组织的脂肪增殖、脂肪组织慢性炎症、巨噬细胞的募集与分化、脂肪血管生成。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113797392A (zh) * 2021-08-30 2021-12-17 中国人民解放军总医院 一种含有组织蛋白复合物的生物3d打印墨水的制备方法
CN115151634A (zh) * 2022-05-27 2022-10-04 超技良食(深圳)生物科技有限公司 一种海藻酸钠-明胶3d支架在支持脂肪前体细胞分化中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103930542A (zh) * 2011-06-29 2014-07-16 生物修复疗法有限公司 棕色脂肪细胞组合物及方法
WO2015002707A1 (en) * 2013-05-28 2015-01-08 The Johns Hopkins University Bone regeneration using stromal vascular fraction. platelet-derived growth factor-rich hydrogel, three dimensional printed poly-epsilon-caprolactone scaffolds
CN105435308A (zh) * 2015-12-23 2016-03-30 天津幂方科技有限公司 一种乳房植入体三维结构及其快速成形方法
US20170191035A1 (en) * 2014-07-10 2017-07-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Ex Vivo Browning of Adipose Tissue Therapy for Reversal of Obesity and Type II Diabetes

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103930542A (zh) * 2011-06-29 2014-07-16 生物修复疗法有限公司 棕色脂肪细胞组合物及方法
WO2015002707A1 (en) * 2013-05-28 2015-01-08 The Johns Hopkins University Bone regeneration using stromal vascular fraction. platelet-derived growth factor-rich hydrogel, three dimensional printed poly-epsilon-caprolactone scaffolds
US20170191035A1 (en) * 2014-07-10 2017-07-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Ex Vivo Browning of Adipose Tissue Therapy for Reversal of Obesity and Type II Diabetes
CN105435308A (zh) * 2015-12-23 2016-03-30 天津幂方科技有限公司 一种乳房植入体三维结构及其快速成形方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CLAIRE YU等: "Porous decellularized adipose tissue foams for soft tissue regeneration", 《BIOMATERIALS》 *
FALGUNIPATI等: "Biomimetic 3D tissue printing for soft tissue regeneration", 《BIOMATERIALS》 *
中国企业评价协会: "《中国企业自主创新评价报告》", 28 February 2015, 中国发展出版社 *
崔同魁等: "血管化脂肪组织研究进展", 《机械工程学报》 *
彭双清等主编: "《药物安全性评价关键技术》", 31 October 2013, 军事医学科学出版社 *
杨广礼: "《动物脂肪性状的分子调控机制》", 30 September 2017, 中国环境出版社（北京） *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113797392A (zh) * 2021-08-30 2021-12-17 中国人民解放军总医院 一种含有组织蛋白复合物的生物3d打印墨水的制备方法
CN115151634A (zh) * 2022-05-27 2022-10-04 超技良食(深圳)生物科技有限公司 一种海藻酸钠-明胶3d支架在支持脂肪前体细胞分化中的应用
CN115151634B (zh) * 2022-05-27 2023-11-03 汕头得宝投资有限公司 一种海藻酸钠-明胶3d支架在支持脂肪前体细胞分化中的应用

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