CN109942842A - 一种食用胶纳米颗粒的制备方法 - Google Patents

一种食用胶纳米颗粒的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于纳米颗粒制备技术领域,提供了一种食用胶纳米颗粒的制备方法,包括如下步骤:将短直链淀粉与水配制成淀粉浆,将淀粉浆置于恒温反应装置中,用氢氧化钠溶液调pH为10~12,然后逐滴加入3‑氯‑2‑羟丙基三甲基氯化铵溶液,最后再用氢氧化钠调pH至10~12;醚化反应时间2~4h,用乙酸溶液调pH至中性时终止醚化反应,离心得到沉淀;醇洗沉淀并冷冻干燥后得到阳离子化短直链淀粉,将其与加热溶解的食用胶配成悬浊液,糊化、离心后得到的沉淀经洗涤和冷冻干燥,得到食用胶纳米颗粒。本发明的食用胶纳米颗粒制备过程绿色环保,方法简单高效,制得的食用胶纳米颗粒可以作为纳米载体包埋输送营养物质、活性物质和药物。

Description

一种食用胶纳米颗粒的制备方法
技术领域
本发明属于纳米颗粒制备技术领域,具体涉及一种食用胶纳米颗粒的制备方法。
背景技术
食用胶也称亲水胶体、水溶胶,可以溶解或分散于水中,在一定条件下,其分子中的亲 水集团,如羧基、羟基、氨基和羧酸根等,能与水分子发生水化作用形成粘稠、滑腻的溶液 或凝胶。食用胶以其独特优良的理化性质,深受人们的关注,它的用途广泛,可应用于冷食 品、饮料、乳制品、调味品、食品保鲜与冷藏等食品行业,还可用于化妆品、涂料、光敏树 脂、烟草以及制药等行业。
纳米颗粒具有尺寸小,比表面积大,结构致密等优点,是一种生物多功能性材料,在食 品、生物医药、包装材料等领域具有潜在的应用价值。将食用胶制备成纳米颗粒可将食用胶 与纳米颗粒的优点相结合,赋予二者新的功能特性。目前,关于食用胶纳米颗粒的研究较少, 开发一种新型的食用胶纳米颗粒具有重要的意义,但是,如何将大分子食用胶制备成纳米颗 粒是一个亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于解决如何将大分子食用胶制备成纳米颗粒的问题,为此提出了一种食 用胶纳米颗粒的制备方法。
本发明的技术方案是:
一种食用胶纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将短直链淀粉与水配制成质量浓度为1~3%的淀粉浆;此浓度范围的淀粉浆有利于 充分反应,优选淀粉浆的质量浓度为2%。
(2)将淀粉浆置于恒温反应装置中,设置温度35~45℃,转速300~500r/min,用1~5mol/L 氢氧化钠溶液调pH为10~12,然后逐滴加入3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵溶液,3-氯-2-羟丙 基三甲基氯化铵(CHPTAC)的加入量占淀粉干基的60~180wt%,最后再用氢氧化钠调pH 至10~12;从加入3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵起开始计时,醚化反应时间为2~4h;
淀粉浆与3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵的醚化反应在恒温反应装置中进行,反应温度控制 在35~45℃,优选为40~45℃,为了保证醚化反应的充分进行,提高醚化效果,在反应的过程 中进行搅拌。本发明对淀粉浆与3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CHPTAC)的反应装置没有特 殊限定,能够维持反应温度的装置均可应用,优选集热式恒温加热磁力搅拌器。
淀粉浆与CHPTAC的醚化反应在pH值为10~12的条件下进行,优选pH值为12。向调节pH值后的淀粉浆中逐滴加入CHPTAC水溶液,溶质CHPTAC的添加总量占淀粉干基的 60~180wt%,优选为120~180wt%。CHPTAC溶液的质量浓度优选60%。在加入CHPTAC的 过程中,溶液的pH下降,此时再加入适量的碱保持溶液pH值在10~12,优选使用氢氧化钠。 作为pH调节剂的氢氧化钠采用溶液的形式进行添加,氢氧化钠溶液的摩尔浓度为1~5mol/L,优选为3mol/L。
(3)用质量分数为3~6%的乙酸调pH至中性时终止反应,设置离心机的转速为3500~8000 rpm,离心5~20min得到沉淀,用80~95%的乙醇洗涤至硝酸银检验无氯离子时即可,采用真 空冷冻干燥后得到阳离子化短直链淀粉;
反应完成后,引入阳离子基团,增加了短直链淀粉的表面正电荷。本发明中使用的乙酸 是以乙酸溶液的形式进行添加,质量分数为3~6%,优选为5%,对离心机的转速没有特殊限 定,优选采用6000~8000rpm的转速,离心时间优选为10~15min。将离心后得到的阳离子化 短直链淀粉沉淀进行醇洗,去掉未反应的试剂等,对醇洗的次数没有限定,优选为3~5次。
(4)将0.5mg/mL的食用胶加热溶解,将步骤(3)得到的阳离子化短直链淀粉配成0.5~2 mg/mL的悬浊液,糊化,等体积逐滴加到已溶解的食用胶溶液中,设置集热式恒温加热磁力 搅拌器的温度为25~35℃,转速为200~500rpm,反应2~4h后离心,离心速度为10000~15000 rpm,时间10~30min,离心后得到的沉淀经洗涤和冷冻干燥,得到食用胶纳米颗粒。
进一步的,食用胶是选自低甲氧基果胶、卡拉胶和变性淀粉中的至少一种。
进一步的,步骤(3)和步骤(4)中冷冻干燥的条件为真空度5~10Pa,温度-80~-60℃, 时间48~72h;优选为真空度6~9Pa,温度-75~-65℃。
进一步的,所述短直链淀粉为脱脂蜡质玉米淀粉经酶解脱支制备而成。本发明对短直链 淀粉的来源没有特殊限定,采用本领域中的常规短直链淀粉即可,制备短直链淀粉的方法采 用淀粉酶酶解法,没有特殊规定,采用本领域技术人员熟知的酶解方法即可。
进一步的,所述短直链淀粉的制备方法包括以下步骤:
(1)将淀粉与pH值为4.0~5.5的磷酸盐缓冲溶液混合得到5~15%的淀粉乳,沸水浴糊 化,得到糊化后的淀粉乳;
采用磷酸氢二钠与柠檬酸复配制备pH值为4.0~5.5的磷酸盐缓冲溶液,因为普鲁兰酶适 用pH值为4.0~6.5,最适pH值为4.2~4.6,酶解效果较好,因此磷酸盐缓冲溶液的pH值优 选为4.2~4.6。淀粉乳糊化的时间为30~60min,优选为40~50min,以保证淀粉乳的充分糊化。
采用蜡质玉米淀粉为原料制备短直链淀粉,将蜡质玉米淀粉通过甲醇脱脂后制备短直链 淀粉。
(2)以淀粉干基计,按照酶用量10~30ASPU/g,将糊化后的淀粉乳与普鲁兰酶混合, 在50~65℃条件下酶解6~12h,得到酶解液;将糊化后的淀粉乳用普鲁兰酶进行酶解脱支, 普鲁兰酶的用量优选为18~26ASPU/g,酶解温度优选53~62℃,酶解时间优选8~10h,酶解 后得到的酶解液中含有脱去支链的直链淀粉。
(3)将得到的酶解液灭酶;进一步的,将酶解液进行离心,对得到的上清液进行沸水浴 灭酶。本发明对灭酶的方式没有特殊限定,能够将酶解液中的普鲁兰酶失活的方式均可,优 选采用沸水浴灭酶,灭酶时间为10~20min。对酶解液离心的转速没有特殊规定,采用 3500~10000rpm的转速,优选为5000~8000rpm,离心的时间为1~3min,优选为2min。
(4)将灭酶后的酶解液离心,离心后得到的上清液经3~4倍无水乙醇沉淀,将得到的沉 淀洗涤,冷冻干燥后得短直链淀粉。将灭酶后的酶解液离心,弃去絮状失活酶。将得到的上 清液经3~4倍无水乙醇沉淀,洗涤。优选乙醇体积为3.5~4倍,洗涤次数为2~6次,优选3~5 次。
本发明的有益效果:
本发明公开了一种食用胶纳米颗粒的制备方法,利用CHPTAC醚化短直链淀粉,引入阳 离子基团,使短直链淀粉的正电荷增加,得到的阳离子化短直链淀粉通过静电作用与低甲氧 基果胶或卡拉胶形成纳米颗粒。本发明的食用胶纳米颗粒制备过程绿色环保,制备方法简单 高效,制得的食用胶纳米颗粒可以作为纳米载体包埋输送营养物质、活性物质和药物。
附图说明
图1为实施例1(1)得到的短直链淀粉与实施例1(2)、2(2)、3(2)得到的不同取代度的阳离子化短直链淀粉的核磁氢谱图;
图2为实施例1(1)得到的短直链淀粉与实施例1(2)、2(2)、3(2)得到的不同取代度的阳离子化短直链淀粉的X射线衍射图谱和相对结晶度;
图3为实施例1(3),2(3),3(3)中得到的阳离子化短直链与低甲氧基果胶纳米颗粒(CSLG-LMP)和阳离子化短直链与κ-卡拉胶纳米颗粒(CSLG-CRG)的透射电镜图。低甲 氧基果胶和κ-卡拉胶的浓度为0.5mg/mL。A、B、C分别为0.5,1.0,2.0mg/mL的阳离子 化短直链(CSLG)与0.5mg/mL的低甲氧基果胶形成的纳米颗粒,D、E、F分别为0.5,1.0, 2.0mg/mL的CSLG与0.5mg/mL的κ-卡拉胶形成的纳米颗粒;
图4A为实施例1(3),2(3),3(3)中得到的不同浓度的阳离子化短直链与低甲氧基果胶纳米颗粒(CSLG-LMP)的粒径分布图;低甲氧基果胶的浓度是0.5mg/mL。图4B为实 施例1(3),2(3),3(3)中得到的不同浓度的阳离子化短直链与κ-卡拉胶纳米颗粒 (CSLG-CRG)的粒径分布图,κ-卡拉胶的浓度是0.5mg/mL。
图5为实施例2(3)中得到的CSLG-LMP和CSLG-CRG纳米颗粒在模拟胃肠液中的透射电镜图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
(1)短直链淀粉的制备:蜡质玉米淀粉经甲醇脱脂后,酶解制得短直链淀粉。用浓度为 28.4g/L的无水磷酸氢二钠与浓度为19.2g/L的柠檬酸配成pH值为4.0的磷酸盐缓冲液。称 取10g脱脂蜡质玉米淀粉,加缓冲液调成50g/L淀粉乳,沸水浴30min使其糊化完全,边沸 边搅拌,粘稠过后可间断搅拌,糊化完成后冷却至50℃,加入普鲁兰酶(100ASPU/g)进行 脱支,水浴6h。脱支后3500rpm离心2min,弃去下层沉淀得到上清液,10min沸水浴灭酶,再次离心弃去絮状失活酶。加3倍无水乙醇沉出短直链淀粉,沉淀再加200mL无水乙醇洗涤2次,得到的沉淀在8Pa、-80℃下冻干50h,得到短直链淀粉。
(2)阳离子化短直链淀粉的制备:将2%的淀粉浆置于集热式恒温加热磁力搅拌器中, 设置温度35℃,转速300r/min。用1mol/L NaOH溶液调pH为10,然后逐滴加入质量浓度60%的3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CHPTAC)溶液,CHPTAC加入总量占淀粉干基的60wt%。CHPTAC加入之后,再用NaOH调pH至10。从加入CHPTAC起开始计时,反应2h,而后 用3%的CH3COOH调pH为中性终止反应,设置转速为5000rpm,离心5min得到沉淀,用 80%的乙醇洗涤多次,硝酸银检验无氯离子,8Pa、-80℃下冻干50h。
(3)复合纳米颗粒的制备:将0.5mg mL-1的低甲氧基果胶和κ-卡拉胶加热溶解。将得 到的阳离子化短直链淀粉配成0.5mg/mL的悬浊液,糊化,等体积逐滴加到溶解的低甲氧基 果胶或κ-卡拉胶溶液中,温度为25℃,转速为200rpm,反应2h,10000rpm离心10min, 得到的沉淀经洗涤和8Pa、-80℃下冻干50h,得到复合纳米颗粒。
实施例2
(1)短直链淀粉的制备:用浓度为28.4g/L的无水磷酸氢二钠与浓度为19.2g/L的柠檬 酸配成pH为4.5的磷酸盐缓冲液。称取10g脱脂蜡质玉米淀粉,加缓冲液调成100g/L淀粉 乳,沸水浴40min使其糊化完全,边沸边搅拌,粘稠过后可间断搅拌。糊化完成后冷却至55℃, 加入普鲁兰酶(20ASPU/g)进行脱支,水浴8h。脱支后5000rpm离心2min,弃去下层沉淀得到上清液,15min沸水浴灭酶,再次离心弃去絮状失活酶。加3.5倍无水乙醇沉出脱支淀粉,沉淀再加200mL无水乙醇洗涤3次,10Pa、-70℃冷冻干燥60h得到短直链淀粉。
(2)阳离子化短直链淀粉的制备:将2%的淀粉浆置于集热式恒温加热磁力搅拌器中, 设置温度40℃,转速400r/min。用2mol/L NaOH溶液调pH为11,然后逐滴加入质量浓度60%的3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CHPTAC)溶液,CHPTAC加入总量占淀粉干基的120wt%。CHPTAC加入之后,再用NaOH调pH至11。从加入CHPTAC起开始计时,反应3 h,而后用5%的CH3COOH调pH为中性终止反应,设置转速为6000rpm,离心10min得到 沉淀,用90%的乙醇洗涤多次,硝酸银检验无氯离子,10Pa、-70℃冷冻干燥60h。
(3)复合纳米颗粒的制备:将0.5mg/mL的低甲氧基果胶和κ-卡拉胶加热溶解。将得到的阳离子化短直链淀粉配成1.0mg/mL的悬浊液,糊化,等体积逐滴加到溶解的低甲氧基果胶或κ-卡拉胶溶液中,温度为30℃,转速为300rpm,反应3h,12000rpm离心20min, 得到的沉淀经洗涤和10Pa、-70℃冷冻干燥60h,得到复合纳米颗粒。
实施例3
(1)短直链淀粉的制备:用浓度为28.4g/L的无水磷酸氢二钠与浓度为19.2g/L的柠檬 酸配成pH为5的磷酸盐缓冲液。称取10g脱脂蜡质玉米淀粉,加缓冲液调成150g/L淀粉乳, 沸水浴50min使其糊化完全,边沸边搅拌,粘稠过后可间断搅拌。糊化完成后冷却至60℃, 加入普鲁兰酶(30ASPU/g)进行脱支,水浴10h。脱支后6000rpm离心2min,弃去下层沉淀得到上清液,20min沸水浴灭酶,再次离心弃去絮状失活酶。加4倍无水乙醇沉出脱支淀粉,沉淀再加300mL无水乙醇洗涤3次,将沉淀在5Pa、-60℃下冻干72h得到短直链淀粉。
(2)阳离子化短直链淀粉的制备:将2%的淀粉浆置于集热式恒温加热磁力搅拌器中, 设置温度45℃,转速500r/min。用5mol/L NaOH溶液调pH为12,然后逐滴加入质量浓度60%的3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CHPTAC)溶液,CHPTAC加入总量占淀粉干基的180wt%。CHPTAC加入之后,再用NaOH调pH至12。从加入CHPTAC起开始计时,反应4 h,而后用6%的乙酸(CH3COOH)调pH为中性终止反应,设置转速为8000rpm,离心20min 得到沉淀,用95%的乙醇洗涤多次,硝酸银检验无氯离子,5Pa、-60℃下冷冻干燥72h。
(3)复合纳米颗粒的制备:将0.5mg/mL的低甲氧基果胶和κ-卡拉胶加热溶解。将得到的阳离子化短直链淀粉配成2.0mg/mL的悬浊液,糊化,等体积逐滴加到溶解的低甲氧基果胶或κ-卡拉胶溶液中,温度为35℃,转速为500rpm,反应4h,15000rpm离心30min, 得到的沉淀经洗涤和5Pa、-60℃下冷冻干燥72h,得到复合纳米颗粒。
试验例1
对实施例1(1)得到的短直链淀粉与实施例1(2)、2(2)、3(2)得到的60~180%CHPTAC 醚化的短直链淀粉进行性能分析。
(1)取代度与电荷的测定:取代度通过扫描电镜能谱仪SEM-EDS测定,电荷由动态光 散射仪测定,结果见表1。
表1 阳离子化短直链淀粉的取代度与电位
短直链淀粉阳离子化后,取代度随CHPTAC用量增加而增加,最高可达到1.14。当取代 度为1.14时,电荷最高可达到35mV。
(2)核磁氢谱分析:20mg样品溶于0.6mL DMSO,用四甲基硅烷作为内标,进行核磁氢谱测试。图1为短直链淀粉与不同取代度的阳离子化短直链淀粉的核磁氢谱图。3.3和2.5ppm处的峰是由于DMSO中的氢原子,3.6ppm处的峰是由于羟基基团,3.14ppm处的信号 是由于N+(CH3)3基团中的氢原子。与未阳离子化的短直链淀粉相比,不同取代度的阳离子化 短直链淀粉在3.14ppm处出现了新峰,这是由于引入到短直链淀粉上的阳离子基团的氢,且峰强随取代度增加而增加。表明了N+(CH3)3成功接枝到短直链淀粉上。
(3)X射线衍射分析:图2为样品的X射线衍射图谱和相对结晶度。样品的主要衍射峰在17.5°和22.5°处,接近淀粉的B型结晶。特征峰的强度和相对结晶度随取代度增加而降低,表明阳离子化后,短直链淀粉的结晶结构受到部分破坏。
(4)纳米颗粒的形貌:图3为实施例1(3),2(3),3(3)中得到的阳离子化短直链 与低甲氧基果胶纳米颗粒(CSLG-LMP)和阳离子化短直链与κ-卡拉胶纳米颗粒 (CSLG-CRG)的透射电镜图。A、B、C分别为0.5,1.0,2.0mg/mL的CSLG与0.5mg/mL 的低甲氧基果胶形成的纳米颗粒,D、E、F分别为0.5,1.0,2.0mg/mL的CSLG与0.5mg/mL 的κ-卡拉胶形成的纳米颗粒。图3A纳米颗粒大小为80-150nm,图3B纳米颗粒大小接近200 nm,当CSLG浓度为2.0mg/mL时,纳米颗粒大小约为250nm,总体上,粒径随着CSLG浓 度增加而增加。图3D纳米颗粒大小为80-250nm,图3E大约100nm,图3F稍有不规则的 纳米颗粒出现。CSLG-LMP与CSLG-CRG纳米颗粒的形成是由于阳离子化短直链与低甲氧基 果胶或卡拉胶之间的静电相互作用。
(5)纳米颗粒粒径测定:利用动态光散射仪测定纳米颗粒的粒径。图4A为实施例1(3), 2(3),3(3)中得到的阳离子化短直链与低甲氧基果胶纳米颗粒(CSLG-LMP)的粒径分布 图,低甲氧基果胶的浓度是0.5mg/mL,当CSLG浓度分别为0.5,1.0,2.0mg/mL时,相对 应地纳米颗粒的粒径分别为232.2±3.2,266.2±2.7,285.4±5.5nm。CSLG-LMP纳米颗粒粒径随CSLG浓度增加而增加,且展现了较好的分散性。图4B为实施例1(3),2(3),3(3) 中得到的阳离子化短直链与κ-卡拉胶纳米颗粒(CSLG-CRG)的粒径分布图,κ-卡拉胶的浓 度是0.5mg/mL,当CSLG浓度分别为0.5,1.0,2.0mg/mL时,相对应地纳米颗粒的粒径分 别为288.7±4.8,239.5±9.8,262.2±8.6nm。动态光散射测定的粒径要大于透射电镜的结果,可能是由于在透射观察之前,纳米颗粒在冻干过程中收缩,且动态光散射测定的是溶胀的颗 粒的水力学直径。
(6)纳米颗粒在模拟胃肠液中的稳定性分析:测定纳米颗粒在模拟胃肠液中的稳定性可 预测纳米颗粒口服后在消化道中的变化。5.0mg/mL的纳米颗粒用模拟胃液和模拟肠液以1:9 的比例稀释,模拟胃液包含32mM HCl,34mM NaCl,和0.32%(w/v)胃蛋白酶(pH1.5),模 拟肠液包含50mM KH2PO4,1%(w/v)胰酶(pH 6.8)。37℃反应40min后,取样,冻干,透 射电镜观察纳米颗粒形貌。图5A,B分别为在模拟胃液和模拟肠液中的实施例2(3)中1.0mg/mL CSLG和0.5mg/mL LMP所制备的CSLG-LMP纳米颗粒。C,D分别为在模拟胃液 和模拟肠液中的1.0mg/mL CSLG和0.5mg/mL CRG所制备的CSLG-CRG纳米颗粒。纳米 颗粒在模拟胃液中保持单个分散的颗粒,接近原来的形状和尺寸,表明纳米颗粒在模拟胃液 中可保持稳定。在模拟肠液中,CSLG-CRG纳米颗粒变得有些不规则,可能是由于纳米颗粒 被胰酶部分水解。此外,在模拟胃肠液中,两种纳米颗粒都没有观察到明显的蛋白环。因此, 这两种纳米颗粒可作为潜在的营养素或活性成分的口服载体。
上述说明仅是本发明的优选实施方式,并非是对本发明的限制,应当指出,对于本技术 领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,在本发明的内容范围内所做出的 任何修改、等同替换和改型等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将短直链淀粉与水配制成质量浓度为1~3%的淀粉浆;
(2)将淀粉浆置于恒温反应装置中,设置反应温度35~45℃,转速300~500r/min,用氢氧化钠溶液调pH为10~12,然后逐滴加入3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵溶液,3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵的加入量占淀粉干基的60~180wt%,最后再用氢氧化钠溶液调pH至10~12;从加入3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵溶液起开始计时,醚化反应时间为2~4h;
(3)用乙酸溶液调pH至中性终止醚化反应,设置离心机的转速为3500~8000rpm,离心5~20min得到沉淀,用80~95%的乙醇洗涤至硝酸银检验无氯离子,真空冷冻干燥得到阳离子化短直链淀粉;
(4)将0.5mg/mL的食用胶加热溶解,将步骤(3)得到的阳离子化短直链淀粉配成0.5~2mg/mL的悬浊液,糊化,等体积逐滴加到已溶解的食用胶溶液中,控制反应温度为25~35℃,搅拌转速为200~500rpm,反应2~4h后离心,离心速度为10000~15000rpm,时间10~30min,离心后得到的沉淀经洗涤和冷冻干燥,得到食用胶纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)恒温反应装置为集热式恒温加热磁力搅拌器。
3.根据权利要求1所述的一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述食用胶选自低甲氧基果胶、卡拉胶、变性淀粉中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)和步骤(4)中冷冻干燥的条件为真空度5~10Pa,温度-80~-60℃,时间48~72h。
5.根据权利要求1所述的一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述短直链淀粉为脱脂蜡质玉米淀粉经酶解脱支制备而成。
6.根据权利要求1所述的一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述短直链淀粉的制备方法包括以下步骤:
(1)将淀粉与pH值为4.0~5.5的磷酸盐缓冲溶液混合,沸水浴糊化,得到糊化后的淀粉乳;
(2)以淀粉干基计,按照酶用量10~30ASPU/g,将糊化后的淀粉乳与普鲁兰酶混合,在50~65℃条件下酶解6~12h,得到酶解液;
(3)将得到的酶解液灭酶;
(4)将灭酶后的酶解液离心,离心后得到的上清液经3~4倍无水乙醇沉淀,将得到的沉淀洗涤,冷冻干燥后得短直链淀粉。
7.根据权利要求6所述的一种食用胶纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中将酶解液进行离心,对得到的上清液进行沸水浴灭酶。
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