CN109929018B - Crk30基因及其编码蛋白在调控植物茎叶生长中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了CRK30基因及其编码蛋白在调控植物茎叶生长中的应用。CRK30蛋白的应用：抑制植物茎叶徒长；选育茎叶徒长受到抑制的植物品种；抑制植物叶片生长；选育叶片生长受到抑制的植物品种；抑制植物根系生长；选育根系生长受到抑制的植物品种；增加植物对脱落酸的敏感性；选育对脱落酸的敏感性增加的植物品种；增加脱落酸对植物叶片生长的抑制作用；通过和脱落酸共同作用抑制植物叶片生长；选育在脱落酸作用下叶片生长受到抑制的植物品种；增加脱落酸对植物根系生长的抑制作用；通过和脱落酸共同作用抑制植物根系生长；选育在脱落酸作用下根系生长受到抑制的植物品种。本发明对于培育绿色无公害新品种具有广阔的应用前景。

Description

CRK30基因及其编码蛋白在调控植物茎叶生长中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及CRK30基因及其编码蛋白在调控植物茎叶生长中的应用。

背景技术

茎叶徒长是指农作物，果树或者花卉蔬菜等植物的营养生长过于旺盛，导致地上部的生物量过大，从而导致养分的大量消耗和流失，并有可能出现籽粒不灌浆等现象。不利的环境因素，如潮湿、光照过弱、日照过短等条件下容易出现茎叶徒长的现象，此外，植物本身的遗传因素如也有可能导致茎叶徒长。因此，茎叶徒长的现象必须要得到合理遏制才能尽量避免损失。通过分子生物技术的不断提升以及基因信号传递网络研究的不断加强，利用基因工程手段来抑制植物茎叶徒长已成为可能。

脱落酸(ABA)是植物的五大激素之一，具有促进种子成熟和休眠，抑制种子萌发，促进叶片衰老和脱落，抑制茎叶生长以及调控植物对干旱的耐受性等作用。

发明内容

本发明的目的是提供CRK30基因及其编码蛋白在调控植物茎叶生长中的应用。

本发明要求保护CRK30蛋白的应用，为如下(c1)至(c14)中的任意一种：

(c1)抑制植物茎叶徒长；

(c2)选育茎叶徒长受到抑制的植物品种；

(c3)抑制植物叶片生长；

(c4)选育叶片生长受到抑制的植物品种；

(c5)抑制植物根系生长；

(c6)选育根系生长受到抑制的植物品种；

(c7)增加植物对脱落酸的敏感性；

(c8)选育对脱落酸的敏感性增加的植物品种；

(c9)增加脱落酸对植物叶片生长的抑制作用；

(c10)通过和脱落酸共同作用抑制植物叶片生长；

(c11)选育在脱落酸作用下叶片生长受到抑制的植物品种；

(c12)增加脱落酸对植物根系生长的抑制作用；

(c13)通过和脱落酸共同作用抑制植物根系生长；

(c14)选育在脱落酸作用下根系生长受到抑制的植物品种。

本发明还保护编码CRK30蛋白的基因的应用，为如下(c1)至(c14)中的任意一种：

(c1)抑制植物茎叶徒长；

(c2)选育茎叶徒长受到抑制的植物品种；

(c3)抑制植物叶片生长；

(c4)选育叶片生长受到抑制的植物品种；

(c5)抑制植物根系生长；

(c6)选育根系生长受到抑制的植物品种；

(c7)增加植物对脱落酸的敏感性；

(c8)选育对脱落酸的敏感性增加的植物品种；

(c9)增加脱落酸对植物叶片生长的抑制作用；

(c10)通过和脱落酸共同作用抑制植物叶片生长；

(c11)选育在脱落酸作用下叶片生长受到抑制的植物品种；

(c12)增加脱落酸对植物根系生长的抑制作用；

(c13)通过和脱落酸共同作用抑制植物根系生长；

(c14)选育在脱落酸作用下根系生长受到抑制的植物品种。

本发明还保护一种培育茎叶徒长受到抑制的转基因植物的方法，包括如下步骤：向受体植物中导入编码CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；所述转基因植物与所述受体植物相比茎叶徒长受到抑制。

本发明还保护一种抑制植物茎叶徒长的方法，包括如下步骤：

(1)向受体植物中导入编码CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；

(2)将所述转基因植物的种子播种于含有ABA的基质中或者向植物喷施外源ABA。

本发明还保护一种培育在脱落酸作用下叶片生长受到抑制的转基因植物的方法，包括如下步骤：向受体植物中导入编码CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；所述转基因植物在脱落酸作用下叶片生长受到抑制的程度大于所述受体植物。

本发明还保护一种抑制植物叶片生长的方法，包括如下步骤：

(1)向受体植物中导入编码CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；

(2)将所述转基因植物的种子播种于含有ABA的基质中或者向植物喷施外源ABA。

本发明还保护一种培育在脱落酸作用下根系生长受到抑制的转基因植物的方法，包括如下步骤：向受体植物中导入编码CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；所述转基因植物在脱落酸作用下根系生长受到抑制的程度大于所述受体植物。

本发明还保护一种抑制植物根系生长的方法，包括如下步骤：

(1)向受体植物中导入编码权CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；

(2)将所述转基因植物的种子播种于含有ABA的基质中或者向植物喷施外源ABA。

本发明还保护一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：向受体植物中导入编码CRK30蛋白的基因，得到转基因植物；所述转基因植物对脱落酸的敏感程度大于所述受体植物。

CRK30蛋白，为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)在(a1)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

(a3)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物对脱落酸的敏感性相关的蛋白质；

(a4)来源于拟南芥且与(a1)具有98％以上同一性且与植物对脱落酸的敏感性相关的蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL
HA	9	YPYDVPDYA

编码CRK30蛋白的基因为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)：

(b1)编码区如序列表中序列2第1至2100位核苷酸所示的DNA分子；

(b3)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(b3)序列表中序列3所示的DNA分子；

(b4)来源于拟南芥且与(b1)或(b2)或(b3)具有75％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；

(b5)在严格条件下与(b1)或(b2)或(b3)限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

所述75％以上同一性，具体可为90％以上同一性，更具体可为95％以上同一性，更具体可为98％以上同一性。

术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

编码CRK30蛋白的基因通过重组表达载体导入受体植物中；所述重组表达载体为含有编码CRK30蛋白的基因的重组表达载体。

可用现有的表达载体构建含有所述核酸分子的重组表达载体。使用所述核酸分子构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用所述核酸分子构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物或转基因微生物进行鉴定及筛选，可对所用表达载体进行加工，如加入在植物或微生物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以表型筛选转化植物或微生物。

所述重组表达载体中启动编码CRK30蛋白的基因转录的启动子为35S启动子。所述重组表达载体具体可为：在pCAMBIA-1300-221载体的Sma I和Kpn I酶切位点之间插入了序列2的第1-2100位核苷酸所示的双链DNA分子。

所述重组表达载体通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。

所述植物为双子叶植物或单子叶植物。所述双子叶植物为十字花科植物。所述十字花科植物为拟南芥属植物，具体可为拟南芥，例如哥伦比亚生态型拟南芥。

本发明研究结果表明CRK30蛋白正调节ABA信号转导。实验证明，相比野生型对照植株，CRK30基因过表达植株，茎叶以及根系生长受到明显抑制，因此，可以通过基因工程的方法获得CRK30基因高表达、茎叶徒长受到抑制的转基因作物。本发明符合农业可持续发展的目的，可以节约养分、减少化肥和农药的喷施，对于培育绿色无公害新品种提供了可能性，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为CRK30基因表达量分析的结果。

图2为CRK30转基因植物幼苗生长试验分析的结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

哥伦比亚生态型拟南芥(用Col表示)：拟南芥生物研究中心(ABRC，https://www.arabidopsis.org/)。

pCAMBIA-1300-221载体记载于如下文献：Lijing Liu,Yiyue Zhang,SanyuanTang,et al.An efficient system to detect protein ubiquitination byagroinfiltration in Nicotiana benthamiana.The Plant Journal,2010(61):893-903.。pCAMBIA-1300-221载体中，位于多克隆位点(MCS)上游的启动子为35S启动子。pCAMBIA-1300-221载体中，具有潮霉素抗性基因。

实施例1、CRK30转基因植物的获得及鉴定

序列表的序列1所示蛋白质，来源于拟南芥(Arabidopsis thaliana)，命名为CRK30蛋白，如序列表的序列1所示。哥伦比亚生态型拟南芥的cDNA中，编码CRK30蛋白的开放阅读框如序列表的序列2所示。哥伦比亚生态型拟南芥的基因组DNA中，编码CRK30蛋白的基因如序列表的序列3所示，其中第830-914位、第1050-1152位、第1275-1370位、第1591-1659位、第1898-1993位及第2148-2221位均为内含子。

一、重组表达载体pCAMBIA-1300-221-CRK30的构建

1、提取哥伦比亚生态型拟南芥叶片的总RNA，反转录后获得cDNA。

2、以步骤1得到的cDNA为模板，采用F1和R1组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。

F1：5’-TCCCCCGGGATGCGTCAAAATAATCTCTTC-3’；

R1：5’-GGGGTACCATCCTCAGTGTTTCTATACATTG-3’。

3、取步骤2得到的PCR扩增产物，采用限制性内切酶Sma I和Kpn I进行双酶切，回收酶切产物。

4、取pCAMBIA-1300-221载体，采用限制性内切酶Sma I和Kpn I进行双酶切，回收载体骨架。

5、将步骤3得到的酶切产物和步骤4得到的载体骨架连接，得到重组质粒pCAMBIA-1300-221-CRK30。根据测序结果，对重组质粒pCAMBIA-1300-221-CRK30进行结构描述如下：在pCAMBIA-1300-221载体的Sma I和Kpn I酶切位点之间插入了序列2的第1-2100位核苷酸所示的双链DNA分子。

二、CRK30转基因拟南芥的获得

将重组质粒pCAMBIA-1300-221-CRK30导入根癌农杆菌GV3101，得到重组农杆菌。

采用用农杆菌花序侵染的方法(SJ Clough,AF Bent.Floral dip:a simplifiedmethod for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.ThePlant Journal,1998,16(6):735-743.)，将重组农杆菌对哥伦比亚生态型拟南芥进行遗传转化。然后进行潮霉素抗性筛选(筛选培养基为含40mg/L潮霉素的MS培养基平板)。然后收集再生植株的种子，即为T₁代种子。

将T₁代种子培养为植株并进行自交，获得T₂代种子。将T₂代种子培养为植株并进行潮霉素抗性筛选(筛选培养基为含40mg/L潮霉素的MS培养基平板)。根据遗传学原理，单拷贝插入之后自交后代会产生3:1的分离比。结合统计学的方法，统计潮霉素抗性植株和非抗性植株的数量，根据分离比方法鉴定出单拷贝插入的T₁代植株。

将T₂代种子培养为植株并进行自交，获得T₃代种子。将T₃代种子培养为植株并进行潮霉素抗性筛选(筛选培养基为含40mg/L潮霉素的MS培养基平板)。如果某一T₂代植株满足如下两个条件，该T₂代植株及其自交后代为一个纯合的转基因株系：①其自交获得的T₃代植株均为潮霉素抗性植株；②其T₁代植株为单拷贝插入的T₁代植株。

将两个纯合的转基因株系(OE-1株系和OE-2株系)进行步骤四的鉴定。

三、转空载体拟南芥植株的获得

用pCAMBIA-1300-221载体代替重组质粒pCAMBIA-1300-221-CRK30，按照步骤二进行操作，得到转空载体株系。

四、CRK30基因表达量分析

供试植株分别为：OE-1株系的T₃代植株、OE-2株系的T₃代植株、转空载体株系的T₃代植株和哥伦比亚生态型拟南芥植株。

在平行条件下培养供试植株，取生长4周左右的幼苗，提取RNA并且反转录cDNA，然后通过实时荧光定量PCR方法(以Actin2/8作为内参基因)，检测CRK30基因的相对表达水平。

用于检测CRK30基因的引物如下：

CRK30RT-F1：5’-ATGGTCTACGCTTTGATGC-3’；

CRK30RT-R1：5’-GACAATCCCAATGATAGTTCC-3’。

用于检测Actin2/8基因的引物如下：

Actin-F：5’-GGTAACATTGTGCTCAGTGGTGG-3’；

Actin-R：5’-AACGACCTTAATCTTCATGCTGC-3’。

反应体系(10μL)：2×SYBR Premix Ex Taq(TAKARA)5μL、正向引物(20μM)0.25μL、反向引物(20μM)0.25μL、cDNA模板0.5μL，ddH₂O补足。

反应采用的仪器：Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪。

反应条件见表2。

表2

以2^-ΔCt作为衡量基因转录水平的相对差值，对各株系中CRK30基因的表达进行分析比较。Ct值为PCR反应荧光信号达到设定阈值时的循环数，ΔCt值为特异引物Ct值与Actin引物Ct值之差。

以哥伦比亚生态型拟南芥中CRK30基因的表达量为1，各个株系的相对值结果见图1。OE-1株系植株和OE-2株系植株中CRK30基因的相对表达水平显著高于哥伦比亚生态型拟南芥。转空载体株系植株中CRK30基因的相对表达水平与哥伦比亚生态型拟南芥相比无显著差异。

实施例2、CRK30转基因植物幼苗生长试验分析

脱落酸(ABA)是植物抵抗外界逆境胁迫的重要信号分子，具有广泛生理效应。ABA可以促进种子成熟和休眠过程以及种子成熟过程中贮藏蛋白的积累、抑制种子萌发和幼苗生长、抑制主根发育、促进侧根发育以及促进叶片衰老和脱落等。因此当有外源ABA存在的条件下，植物的根长和茎叶的生长受到明显抑制，根据野生型与转基因植物对ABA的敏感性可以检测CRK30蛋白是否参与到ABA抑制的茎叶徒长过程。

供试种子分别为：OE-1株系的T₃代种子、OE-2株系的T₃代种子、转空载体株系的T₃代种子和哥伦比亚生态型拟南芥种子。

试验组甲：将供试种子播种于MS培养基平板，4℃层积3天，然后放在光照培养箱中正常培养7天(16h光照/8h黑暗，22℃)，然后拍照并且统计根长。

试验组乙：将供试种子播种于含0.5μM ABA的MS培养基平板，4℃层积3天，然后放在光照培养箱中正常培养7天(16h光照/8h黑暗，22℃)，然后拍照并且统计根长。

进行三次重复试验，每次重复试验中每个试验组每种供试种子的数量为80-100粒。试验重复3次，误差线表示标准误差(SE)，不同字母代表同一ABA浓度下各处理之间差异显著(P<0.05)。

照片见图2A。根长统计结果见图2B。在无ABA的条件下，OE-1株系、OE-2株系、转空载体株系以及哥伦比亚生态型拟南芥的根长无显著差异。当有ABA存在时，各个株系的根系生长均受到抑制，OE-1株系、OE-2株系受到抑制的程度远远大于哥伦比亚生态型拟南芥(表现为根长更短)，转空载体株系受到抑制的程度与哥伦比亚生态型拟南芥无显著差异。在无ABA的条件下，OE-1株系、OE-2株系、转空载体株系以及哥伦比亚生态型拟南芥的叶片生长均较好，叶片生长情况无显著差异。当有ABA存在时，各个株系的叶片生长均受到抑制，OE-1株系、OE-2株系受到抑制的程度远远大于哥伦比亚生态型拟南芥(表现为叶片更小)，转空载体株系受到抑制的程度与哥伦比亚生态型拟南芥无显著差异。

综合以上结果，相对于哥伦比亚生态型拟南芥，转基因植株对脱落酸更为敏感，表型为在有脱落酸的环境中，叶片更小、根长更短，这在农业生产上可应用与抑制作物的茎叶徒长，也可以抑制园艺植物和果树的徒长，从而起到保持养分的作用。

SEQUENCE LISTING

<110> 江苏省农业科学院

<120> CRK30基因及其编码蛋白在调控植物茎叶生长中的应用

<130> GNCYX190831

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 700

<212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 1

Met Arg Gln Asn Asn Leu Phe Ser Leu Ile Phe Trp Leu Val Pro Val

1 5 10 15

Ser Leu Ile Ile Val Val Ser Ala Gln Leu Cys Ser Glu Lys Phe Gly

20 25 30

Thr Phe Thr Pro Gly Gly Thr Phe Asp Lys Asn Arg Arg Ile Ile Leu

35 40 45

Ser Ser Leu Pro Ser Glu Val Thr Ala Gln Asp Gly Phe Tyr Asn Ala

50 55 60

Ser Ile Gly Thr Asp Pro Asp Gln Leu Tyr Ala Met Gly Met Cys Ile

65 70 75 80

Pro Gly Ala Lys Gln Lys Leu Cys Arg Asp Cys Ile Met Asp Val Thr

85 90 95

Arg Gln Leu Ile Gln Thr Cys Pro Asn Gln Thr Ala Ala Ile His Trp

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Lys Thr Val Cys Met Ala Arg Tyr Tyr Asn Gln Pro

115 120 125

Ser Ser Arg Pro Leu Asp Leu Glu Ser Val Ser Ile Gly Tyr Asn Val

130 135 140

Gly Asn Leu Ser Thr Asn Leu Thr Asp Phe Asp Arg Leu Trp Glu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Ala His Met Val Thr Lys Ala Ser Ser Ala Ser Ile Lys Tyr

165 170 175

Leu Ser Phe Asp Asn Ser Arg Phe Tyr Ala Ala Asp Glu Thr Asn Leu

180 185 190

Thr Asn Ser Gln Met Val Tyr Ala Leu Met Gln Cys Thr Pro Asp Val

195 200 205

Ser Pro Ser Asn Cys Asn Thr Cys Leu Lys Gln Ser Val Asp Asp Tyr

210 215 220

Val Gly Cys Cys His Gly Lys Gln Gly Gly Tyr Val Tyr Arg Pro Ser

225 230 235 240

Cys Ile Phe Arg Trp Asp Leu Tyr Pro Phe Asn Gly Ala Phe Asp Leu

245 250 255

Leu Thr Leu Ala Pro Pro Pro Ser Ser Gln Leu Gln Ser Pro Pro Pro

260 265 270

Val Thr Asn Lys Asp Glu Lys Thr Ile His Thr Gly Thr Ile Ile Gly

275 280 285

Ile Val Ile Val Val Ala Met Val Ile Ile Met Ala Leu Leu Ala Leu

290 295 300

Gly Val Ser Val Cys Arg Ser Arg Lys Lys Tyr Gln Ala Phe Ala Ser

305 310 315 320

Glu Thr Ala Asp Asp Ile Thr Thr Val Gly Tyr Leu Gln Phe Asp Ile

325 330 335

Lys Asp Ile Glu Ala Ala Thr Ser Asn Phe Leu Ala Ser Asn Lys Ile

340 345 350

Gly Gln Gly Gly Phe Gly Glu Val Tyr Lys Gly Thr Leu Ser Asn Gly

355 360 365

Thr Glu Val Ala Val Lys Arg Leu Ser Arg Thr Ser Asp Gln Gly Glu

370 375 380

Leu Glu Phe Lys Asn Glu Val Leu Leu Val Ala Lys Leu Gln His Arg

385 390 395 400

Asn Leu Val Arg Leu Leu Gly Phe Ala Leu Gln Gly Glu Glu Lys Ile

405 410 415

Leu Val Phe Glu Phe Val Pro Asn Lys Ser Leu Asp Tyr Phe Leu Phe

420 425 430

Gly Ser Thr Asn Pro Thr Lys Lys Gly Gln Leu Asp Trp Thr Arg Arg

435 440 445

Tyr Asn Ile Ile Gly Gly Ile Thr Arg Gly Leu Leu Tyr Leu His Gln

450 455 460

Asp Ser Arg Leu Thr Ile Ile His Arg Asp Ile Lys Ala Ser Asn Ile

465 470 475 480

Leu Leu Asp Ala Asp Met Asn Pro Lys Ile Ala Asp Phe Gly Met Ala

485 490 495

Arg Asn Phe Arg Asp His Gln Thr Glu Asp Ser Thr Gly Arg Val Val

500 505 510

Gly Thr Phe Gly Tyr Met Pro Pro Glu Tyr Val Ala His Gly Gln Phe

515 520 525

Ser Thr Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Leu Ile Leu Glu Ile

530 535 540

Val Ser Gly Arg Lys Asn Ser Ser Phe Tyr Gln Met Asp Gly Ser Val

545 550 555 560

Cys Asn Leu Val Thr Tyr Val Trp Arg Leu Trp Asn Thr Asp Ser Ser

565 570 575

Leu Glu Leu Val Asp Pro Ala Ile Ser Gly Ser Tyr Glu Lys Asp Glu

580 585 590

Val Thr Arg Cys Ile His Ile Gly Leu Leu Cys Val Gln Glu Asn Pro

595 600 605

Val Asn Arg Pro Ala Leu Ser Thr Ile Phe Gln Met Leu Thr Asn Ser

610 615 620

Ser Ile Thr Leu Asn Val Pro Gln Pro Pro Gly Phe Phe Phe Arg Asn

625 630 635 640

Arg Pro Glu Ser Asp Thr Leu Arg Arg Gly Leu Glu Pro Asp Gln Tyr

645 650 655

Asn Asn Glu Ser Val Thr Cys Ser Ile Asp Asn Ala Thr Ile Thr Thr

660 665 670

Leu Leu Gly Lys Thr Leu Ala Ser Ala Leu Cys Cys Ile Thr Ser Thr

675 680 685

Leu Phe Ser Lys Ser Met Tyr Arg Asn Thr Glu Asp

690 695 700

<210> 2

<211> 2103

<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 2

atgcgtcaaa ataatctctt ctcattgatc ttctggcttg tccctgtgag cttaattatt 60

gttgtctctg cacagttatg ctcggagaag tttggaactt ttacaccagg tggtacattt 120

gacaagaacc gccgaatcat tctctcatct cttccatctg aagtcacagc tcaagatggc 180

ttctacaacg cttcgattgg aacagatcct gaccaactct acgcaatggg gatgtgcatc 240

ccaggtgcta aacaaaagct ttgtagggat tgtatcatgg acgtcacaag acagttaata 300

cagacatgtc ccaaccagac agcagcaatt cactggtcag gtggagggaa aactgtatgt 360

atggcacgtt actataacca gccgtcttct agaccattgg atttggaatc agtttctatt 420

ggttataacg ttggaaatct cagcacaaac ttaacagatt ttgatagatt atgggagcga 480

ttgatagctc atatggtgac taaagcttca tcagcatcaa taaaatattt atcatttgat 540

aacagtagat tctatgcagc tgatgaaaca aacttgacaa attctcaaat ggtctacgct 600

ttgatgcaat gcacgccaga cgtctctcct tccaactgta acacttgttt aaaacaaagt 660

gttgatgact atgttggttg ttgtcatggg aagcaaggcg gctatgtgta tcggcctagt 720

tgcattttcc ggtgggatct ataccctttc aatggcgcct ttgatcttct tacgctagcg 780

cctccaccct catctcagct gcaatcccca cctccagtga ccaacaaaga tgaaaaaacg 840

attcatacag gaactatcat tgggattgtc attgtcgttg caatggtcat aatcatggct 900

ctgcttgctc taggggtttc tgtttgcagg agtagaaaaa aatatcaagc ttttgcctca 960

gaaactgccg atgatattac aacagttgga tatctccagt ttgatattaa agacattgaa 1020

gctgcaacaa gtaacttttt ggcgagtaac aagattggtc aaggtggttt cggcgaagtt 1080

tacaagggta cgttatcaaa tggaactgaa gttgcagtca agaggctgtc aagaacttca 1140

gatcaaggtg aattggagtt caagaacgag gtgcttcttg tagcaaaact tcagcaccgg 1200

aatctcgtta ggcttctcgg ttttgctctg caaggagaag aaaagatact cgtctttgag 1260

tttgttccca acaagagcct cgattatttc ctcttcggta gtactaaccc aacaaaaaag 1320

ggtcagctgg actggacaag acggtacaac atcattggag ggattacacg agggcttctc 1380

tatcttcatc aagactctag gctcaccatc atacaccgtg acatcaaagc gagtaacatt 1440

cttttagatg ctgatatgaa cccgaaaata gcggatttcg ggatggctag gaatttcaga 1500

gatcatcaaa ctgaagacag tacaggaaga gtcgttggaa ccttcggtta catgcctcca 1560

gaatatgttg cgcatggcca attctctacc aaatccgatg tctatagctt cggagtattg 1620

attctagaga ttgttagtgg caggaagaat agcagcttct atcagatgga tggttctgtt 1680

tgcaacttgg tcacatatgt ttggagactt tggaacactg attcatcttt agagctcgta 1740

gatccggcga ttagcggaag ctatgagaaa gatgaagtca ctagatgcat ccatatcgga 1800

cttttatgcg ttcaagaaaa tcctgtgaat cgaccagcat tgtctacaat attccaaatg 1860

ctcactaata gctccattac tctaaatgtc cctcaaccac ctggattttt cttcaggaac 1920

agacctgagt cagacacatt acgccgtgga ttggagccag accaatataa caatgaatct 1980

gttacttgtt ctatcgacaa tgcaacaatc actacactcc tcggtaaaac tcttgcttct 2040

gcactctgtt gtattacctc aactctattt tcaaagtcaa tgtatagaaa cactgaggat 2100

tga 2103

<210> 3

<211> 2626

<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 3

atgcgtcaaa ataatctctt ctcattgatc ttctggcttg tccctgtgag cttaattatt 60

gttgtctctg cacagttatg ctcggagaag tttggaactt ttacaccagg tggtacattt 120

gacaagaacc gccgaatcat tctctcatct cttccatctg aagtcacagc tcaagatggc 180

ttctacaacg cttcgattgg aacagatcct gaccaactct acgcaatggg gatgtgcatc 240

ccaggtgcta aacaaaagct ttgtagggat tgtatcatgg acgtcacaag acagttaata 300

cagacatgtc ccaaccagac agcagcaatt cactggtcag gtggagggaa aactgtatgt 360

atggcacgtt actataacca gccgtcttct agaccattgg atttggaatc agtttctatt 420

ggttataacg ttggaaatct cagcacaaac ttaacagatt ttgatagatt atgggagcga 480

ttgatagctc atatggtgac taaagcttca tcagcatcaa taaaatattt atcatttgat 540

aacagtagat tctatgcagc tgatgaaaca aacttgacaa attctcaaat ggtctacgct 600

ttgatgcaat gcacgccaga cgtctctcct tccaactgta acacttgttt aaaacaaagt 660

gttgatgact atgttggttg ttgtcatggg aagcaaggcg gctatgtgta tcggcctagt 720

tgcattttcc ggtgggatct ataccctttc aatggcgcct ttgatcttct tacgctagcg 780

cctccaccct catctcagct gcaatcccca cctccagtga ccaacaaagg tatgtgattt 840

acttaaataa atgatagaaa taacccttct tgtattcaac tctaagaaga gctaggtgat 900

ttggtcttgc acagatgaaa aaacgattca tacaggaact atcattggga ttgtcattgt 960

cgttgcaatg gtcataatca tggctctgct tgctctaggg gtttctgttt gcaggagtag 1020

aaaaaaatat caagcttttg cctcagaaag tgagttcctc ttgttttctt tcttatcagc 1080

tggtcttgct gctaatttac gaaagaattt caccgacctg accataaaac cacctacatt 1140

ttcattgtgc agctgccgat gatattacaa cagttggata tctccagttt gatattaaag 1200

acattgaagc tgcaacaagt aactttttgg cgagtaacaa gattggtcaa ggtggtttcg 1260

gcgaagttta caaggcattt tctccccaac tactcttaag ttgtatttgt gttatgtttg 1320

aagatattga gatagtggga tgattagtta gattcagttg taatatgcag ggtacgttat 1380

caaatggaac tgaagttgca gtcaagaggc tgtcaagaac ttcagatcaa ggtgaattgg 1440

agttcaagaa cgaggtgctt cttgtagcaa aacttcagca ccggaatctc gttaggcttc 1500

tcggttttgc tctgcaagga gaagaaaaga tactcgtctt tgagtttgtt cccaacaaga 1560

gcctcgatta tttcctcttc ggtagtacta gtagtctaat tttcctcttg atccaatatt 1620

cttgaaatct taagcttgga tttgcaaatg gatgtgcaga cccaacaaaa aagggtcagc 1680

tggactggac aagacggtac aacatcattg gagggattac acgagggctt ctctatcttc 1740

atcaagactc taggctcacc atcatacacc gtgacatcaa agcgagtaac attcttttag 1800

atgctgatat gaacccgaaa atagcggatt tcgggatggc taggaatttc agagatcatc 1860

aaactgaaga cagtacagga agagtcgttg gaaccttgtt agtattctcc ttattattta 1920

caatgggcac aattctctga tgaacggttt ttgttactga ctaacgtaaa cattgtcatg 1980

tatatatttg cagcggttac atgcctccag aatatgttgc gcatggccaa ttctctacca 2040

aatccgatgt ctatagcttc ggagtattga ttctagagat tgttagtggc aggaagaata 2100

gcagcttcta tcagatggat ggttctgttt gcaacttggt cacatatgtg agctgaaatc 2160

taaaatgctt tttttacttt ctaactgtga tcatcgattc tgaatacgag tttgtttgca 2220

ggtttggaga ctttggaaca ctgattcatc tttagagctc gtagatccgg cgattagcgg 2280

aagctatgag aaagatgaag tcactagatg catccatatc ggacttttat gcgttcaaga 2340

aaatcctgtg aatcgaccag cattgtctac aatattccaa atgctcacta atagctccat 2400

tactctaaat gtccctcaac cacctggatt tttcttcagg aacagacctg agtcagacac 2460

attacgccgt ggattggagc cagaccaata taacaatgaa tctgttactt gttctatcga 2520

caatgcaaca atcactacac tcctcggtaa aactcttgct tctgcactct gttgtattac 2580

ctcaactcta ttttcaaagt caatgtatag aaacactgag gattga 2626

Claims (2)

1.CRK30蛋白的应用，为如下（c7）和（c13）中的任意一种：

（c7）增加植物对脱落酸的敏感性；

（c13）通过和脱落酸共同作用抑制植物根系生长；

所述植物为拟南芥；

CRK30蛋白为序列表中序列1所示的蛋白质。

2.编码CRK30蛋白的基因的应用，为如下（c8）和（c14）中的任意一种：

（c8）选育对脱落酸的敏感性增加的植物品种；

（c14）选育在脱落酸作用下根系生长受到抑制的植物品种；

所述植物为拟南芥；

编码CRK30蛋白的基因为编码区如序列表中序列2第1至2100位核苷酸所示的DNA分子。

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