CN109908145B - 防己诺林-7-丙酸酯与酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体的说，本发明公开一种防己诺林‑7‑丙酸酯(W6)与酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物及其治疗耐药肝癌的用途，特别是防己诺林‑7‑丙酸酯与索拉非尼或瑞戈非尼的组合物在治疗耐药性肝癌方面，具有协同增敏和耐药逆转作用，可显著提高治疗耐药性肝癌的疗效。

Description

防己诺林-7-丙酸酯与酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种防己诺林-7-丙酸酯与酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物及其治疗耐药肝癌的用途，特别是防己诺林-7-丙酸酯与索拉非尼或瑞戈非尼的药物组合物及其治疗耐药性肝癌的用途。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病之一，已成为人类第二大死因。以肺癌、胰腺癌、肝癌和胆管癌等为代表的部分肿瘤在治疗之初的原发性耐药的存在和多数肿瘤治疗过程中获得性耐药的出现，使得肿瘤进展、复发和转移，最终导致治疗失败，是肿瘤临床治疗失败的主要原因。肿瘤普遍存在耐药现象，耐药的作用机理十分复杂，主要包括：药物外排泵ABC转运蛋白的过度表达，药物作用靶点的改变，DNA修复机制活性增强，药物解毒、消除酶的活性增强或表达增多，肿瘤细胞凋亡水平的异常，肿瘤干细胞和免疫逃逸等。这些作用机制单独或者共同作用诱导肿瘤细胞对抗癌药物产生耐药性(Mimeault M等，Clin Pharmacol Ther.2008,83(5):673-91；Raguz S等，Br J Cancer.2008,9(3):387-91)。

肝癌的发病率在恶性肿瘤中位居世界第5位，死亡率位居第2位，在我国是第4位的常见恶性肿瘤及第3位的肿瘤致死病因(FERLAYJ等，Int J Cancer,2015,136(5):359-86.)。索拉非尼临床中用于治疗肾癌、甲状腺癌和肝癌，在2007年批准治疗晚期肝癌后的10年中，是治疗晚期肝癌唯一金标准药物，但大量患者在治疗中因出现耐药性或严重不良反应而须要停药或减量治疗，导致治疗失败(CHENGAL等，Lancet Oncol,2009,10(1):25-34；WOO HY等，Expert Opin Pharmacother,2017,18(1):35-44)。瑞格非尼是拜耳制药研发的索拉非尼一氟代衍生物，临床中用于治疗胃肠道基质瘤、结直肠癌和肝癌，是第一个在索拉非尼失败后，能显著改善晚期肝癌患者的总生存期，且安全性与索拉非尼相似的药物(BRUIX J等，Lancet,2017,389(10064):56-66)。

双苄基异喹啉生物碱汉防己甲素(Tetrandrine)是防己科汉防己根部的主要活性成分(结构式如下所示)，可抑制L型、T型、延迟型门控K(Ca)钙离子通道。自上世纪50年代起在临床中用于治疗高血压、心律失常和心绞痛等(Wang G等，Life Sci,1995,56(5):295-06)。

有研究报道汉防己甲素及其5-溴代衍生物在体内外抑制药物外排蛋白P糖蛋白(Pgp)和增加化疗药物阿霉素、长春新碱、紫杉醇诱导凋亡的敏感性(Tian H等，Yao XueXue Bao,1997,32:245–50；Liu XD等，Cancer Lett,2010，292(1):24-31)。通过对汉防己甲素的结构进行进一步的改造和修饰，获得新型汉防己甲素衍生物防己诺林-7-丙酸酯(结构式如下，本文简称为W6化合物)，

发明内容

本发明人在研究过程中发现，防己诺林-7-丙酸酯(即W6化合物)在低浓度如0.1μM～2.0μM单独使用时无抗肿瘤活性，但是经过进一步的深入研究，意外的发现W6化合物可通过抑制药物外排蛋白Pgp、影响凋亡信号通路，在与ω-羧芳基取代的二苯基脲类酪氨酸受体激酶类抗肝癌药物，如索拉非尼/瑞戈非尼(1.0μM～25μM)联用时，能显著增强索拉非尼和瑞戈非尼对耐药性肝癌细胞(内在耐药的肝癌Bel702细胞和获得性耐药的肝癌HepG2/sor细胞)的抗肿瘤活性。

为此本发明提供了一种治疗耐药性肿瘤的药物组合物，含有防己诺林-7-丙酸酯与酪氨酸激酶抑制剂。

上述本发明的药物组合物，所述酪氨酸激酶抑制剂选自索拉非尼、瑞戈非尼或其药物上可接受的盐。

上述本发明的药物组合物，所述防己诺林-7-丙酸酯的结构式如下：

上述本发明的药物组合物，所述索拉非尼的结构式如下:

上述本发明的药物组合物，所述瑞戈非尼的结构式如下:

上述本发明的药物组合物，其中防己诺林-7-丙酸酯与索拉非尼、瑞戈非尼、或其药学上可接受的盐的摩尔比为0.1～2.0：1～25。

上述本发明的药物组合物，所述的肿瘤为肝癌、肾癌、胃癌、甲状腺癌、结直肠癌。

上述本发明的药物组合物，还包括药学上可接受的药用辅料。

上述本发明的药物组合物，其制剂形式为口服片剂、颗粒剂、胶囊、注射剂。

所述药用辅料为本领域常用辅料，填充剂如磷酸氢钙、淀粉、微晶纤维素、乙基纤维素、甘露醇、乳糖等，崩解剂如预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮，粘合剂如低取代羟丙纤维素、乙醇、水、聚维酮等，润滑剂如滑石粉、硬脂酸镁等。

本发明还提供一种防己诺林-7-丙酸酯和酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗耐药性肿瘤药物中的用途，所述酪氨酸激酶抑制剂选自索拉非尼、瑞戈非尼、或其药物上可接受的盐。

本发明提供防己诺林-7-丙酸酯(W6化合物)和酪氨酸激酶抑制剂，如索拉非尼、瑞格非尼或其药学上可接受的盐联合使用时，产生了明显的协同增敏作用，增强酪氨酸激酶抑制剂的抗肿瘤活性和作用，特别是对耐药性肝癌细胞协同增敏作用最显著。

具体实施方式

以下实施例用于进一步理解本发明的协同增敏作用效果，但不应以此限制本发明的范围。

实施例1

W6与索拉非尼联用对内在耐药肝癌Bel7402细胞毒性的协同增敏作用

对数生长期的Bel7402细胞胰酶消化后，混匀，接种于96孔培养板内，接种浓度1200个/孔。培养24h细胞贴壁后，加入索拉非尼(1.0μM、10μM、25μM)、或W6(0.1μM、0.5μM、1.0μM、2.0μM)、或两药联合，每个药物浓度设3平行孔。继续培养72h后，弃去培养液，每孔加入0.5mg/ml MTT 100μl(无血清的RPMI1640培养液溶解)，继续培养4h，弃去MTT，每孔加入DMSO 150μl，混和振荡器振荡，酶标仪570nm波长处测定吸光度值，用如下公式计算对细胞毒性(抑制率)：抑制率(％)＝(1-样品化合物细胞的OD平均值/正常对照细胞OD值平均值)×100％，三次独立实验结果(均值±SD)如下表1：

表1.W6和索拉非尼单用、或联用对Bel7402细胞的细胞毒性(抑制率％)

*P<0.05,**P<0.01vs.索拉非尼(1.0μM)；^#P<0.05,^##P<0.01vs.索拉非尼(10μM)；^△P<0.05,^△△P<0.01vs.索拉非尼(25μM)

表1的结果表明，W6在低剂如小于2.0μM时，单独作用对肝癌Bel7402细胞无抗肿瘤活性，但与索拉非尼联用后显著增强索拉非尼对耐药肝癌细胞的细胞毒性，具有协同增效的作用。

实施例2

W6与瑞戈非尼联用对获得性耐药肝癌HepG2/sor细胞毒性的协同增敏作用

对数生长期的HepG2/sor细胞胰酶消化后，混匀，接种于96孔培养板内，接种浓度2000个/孔。培养24h细胞贴壁后，加入瑞戈非尼(1.0μM、10μM、25μM)、或W6(0.1μM、0.5μM、1.0μM、2.0μM)、或两药联合，每个药物浓度设3平行孔。继续培养72h后，弃去培养液，每孔加入0.5mg/ml MTT 100μl(无血清的RPMI1640培养液溶解)，继续培养4h，弃去MTT，每孔加入DMSO 150μl，混和振荡器振荡，酶标仪570nm波长处测定吸光度值，用如下公式计算对细胞毒性(抑制率)：抑制率(％)＝(1-样品化合物细胞的OD平均值/正常对照细胞OD值平均值)×100％，三次独立实验结果(均值±SD)如下：

表2.W6和瑞戈非尼单用、或联用对HepG2/sor细胞的细胞毒性(抑制率％)

*P<0.05,**P<0.01vs.瑞戈非尼(1.0μM)；^#P<0.05,^##P<0.01vs.瑞戈非尼(10μM)；^△P<0.05,^△△P<0.01vs.瑞戈非尼(25μM)

表2的结果表明，W6在低剂如小于2.0μM时，单独作用对肝癌HepG2/sor细胞无抗肿瘤活性，但与瑞戈非尼联用后显著增强瑞戈非尼对耐药肝癌细胞的细胞毒性，具有协同增效的作用。

实施例3

W6与索拉非尼联用对Bel7402单细胞增殖能力的协同抑制作用

对指数生长期Bel7402细胞，制成细胞悬液。细胞记数，并用培养基调节细胞浓度，待用。将细胞悬液倍比稀释，按照每皿含200个细胞的浓度分别接种5ml细胞悬液到培养皿(直径60mm)中，十字方向轻轻晃动培养皿，使细胞分散均匀。培养皿置37℃、5％CO₂培养24h细胞贴壁后，加入索拉非尼(1.0μM、10μM、25μM)、或W6(0.1μM、0.5μM、1.0μM、2.0μM)、或两药联合，再培养2～3周，当培养皿中出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养液，PBS液小心浸洗2次，空气干燥。甲醇固定15min，弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10min，流水缓慢洗去染液，空气干燥。显微镜下计数大于50个细胞克隆数，按下式计算集落形成率：集落形成率(％)＝(集落数/接种细胞数)×100％，三次独立实验结果(均值±SD)如下：

表3.W6和索拉非尼单用、或联用对Bel7402细胞集落形成率(％)的影响

*P<0.05,**P<0.01vs.索拉非尼(1.0μM)；^#P<0.05,^##P<0.01vs.索拉非尼(10μM)；^△P<0.05,^△△P<0.01vs.索拉非尼(25μM)

表3的结果表明，W6在低剂如小于2.0μM时，单独作用对肝癌Bel7402细胞增值能力(集落形成率％)无影响，但与索拉非尼联用后显著增强索拉非尼对耐药肝癌细胞增殖的抑制作用，具有协同增效的作用。

实施例4

W6与瑞戈非尼联用对HepG2/sor单细胞增殖能力的协同抑制作用

对指数生长期HepG2/sor细胞，制成细胞悬液。细胞记数，并用培养基调节细胞浓度，待用。将细胞悬液倍比稀释，按照每皿含200个细胞的浓度分别接种5ml细胞悬液到培养皿(直径60mm)中，十字方向轻轻晃动培养皿，使细胞分散均匀。培养皿置37℃、5％CO₂培养24h细胞贴壁后，加入瑞戈非尼(1.0μM、10μM、25μM)、或W6(0.1μM、0.5μM、1.0μM、2.0μM)、或两药联合，再培养2～3周，当培养皿中出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养液，PBS液小心浸洗2次，空气干燥。甲醇固定15min，弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10min，流水缓慢洗去染液，空气干燥。显微镜下计数大于50个细胞克隆数，按下式计算集落形成率：集落形成率(％)＝(集落数/接种细胞数)×100％，三次独立实验结果(均值±SD)如下：

表4.W6和瑞戈非尼单用、或联用对HepG2/sor细胞集落形成率(％)的影响

*P<0.05,**P<0.01vs.瑞戈非尼(1.0μM)；^#P<0.05,^##P<0.01vs.瑞戈非尼(10μM)；^△P<0.05,^△△P<0.01vs.瑞戈非尼(25μM)

表4的结果表明，W6在低剂如小于2.0μM时，单独作用对肝癌HepG2/sor细胞增值能力(集落形成率％)无影响，但与瑞戈非尼联用后显著增强瑞戈非尼对耐药肝癌细胞增殖的抑制作用，具有协同增效的作用。

Claims (5)

1.一种治疗耐药性肿瘤的药物组合物，其特征在于，含有防己诺林-7-丙酸酯与酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自索拉非尼、瑞戈非尼、或其药物上可接受的盐，

所述防己诺林-7-丙酸酯的结构式为：：

所述索拉非尼的结构式为：

所述瑞戈非尼的结构式为：

防己诺林-7-丙酸酯与索拉非尼、瑞戈非尼、或其药物上可接受的盐的摩尔比为0.1～2.0：1～25。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤为肝癌、肾癌、胃癌、甲状腺癌或结直肠癌。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，还包括药学上可接受的药用辅料。

4.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，其制剂形式为口服片剂、颗粒剂、胶囊或注射剂。

5.一种防己诺林-7-丙酸酯和酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗耐药性肿瘤药物中的用途，所述酪氨酸激酶抑制剂选自索拉非尼、瑞戈非尼或它们药物上可接受的盐，其特征在于，防己诺林-7-丙酸酯与索拉非尼、瑞戈非尼、或其药物上可接受的盐的摩尔比为0.1～2.0：1～25。