CN109865145A - 一种放射性核素131i标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法，包括：制备纳米球PZS；在其表面修饰3‑(4‑羟基苯基)丙酸N‑羟基琥珀酰亚胺酯(HPAO)，形成PZS‑HPAO；将纳米球与1,3‑丙烷磺酸内脂(1,3‑PS)反应得到PZS‑HPAO‑PS；在上述溶液中加入三乙胺和乙酸酐，对PZS表面氨基做乙酰化处理，再进行¹³¹I标记，得到放射性核素¹³¹I标记的功能化纳米球。本发明具有良好的水分散性和生物相容性，具有良好的单光子发射计算机断层成像术(SPECT)成像效果和放疗效果，在诊疗一体化领域中具有潜在的应用价值。

Description

一种放射性核素131I标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法

技术领域

本发明属于SPECT成像领域，特别涉及一种放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法。

背景技术

在生物医学领域，诊疗一体化体系不仅能够实时、精确诊断病情并同步进行治疗，而且在治疗过程中能够监控疗效并随时调整给药方案，有利于达到最佳治疗效果，并减少毒副作用。随着纳米科学与技术的发展，开发一种集成像和治疗为一体的新型、高效、多功能纳米平台得到了科研工作者的广泛关注。

核医学治疗由于放射性治疗较高的灵敏度，较低的注射剂量等优点越来越普遍地应用到临床医学领域。核素造影剂主要用于正电子发射型计算机断层显像(PET)和单光子发射计算机断层成像术(SPECT)。这两种成像技术利用适当半衰期的放射性同位素作为造影剂，根据放射性衰变，释放γ射线而获得探测信号。SPECT成像作为一种重要的核医学成像技术，具有高灵敏性和功能成像的特点。SPECT成像常用的放射性核素有：锝-99m(^99mTc)，镓-67(⁶⁷Ga)、铟-111(¹¹¹In)、铊-201(²⁰¹Tl)、碘-131(¹³¹I)。由于¹³¹I具有较长的半衰期(t_1/2＝8.01天)，并且可同时放射出β射线(0.606MeV，89.9％)和γ射线(364KeV，81.7％)，其中β射线可用于放疗，γ射线可用于SPECT成像，该功能可实现肿瘤的诊疗一体化。但是由于放射性核素具有较短的体内循环时间，非特异性和病灶部位较低的累积量，很难实现有效的放疗。因此需要设计合适的纳米载体，可提高放射性核素在核医学领域的应用效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法，该功能化聚磷腈纳米球能稳定地分散于水溶液中，粒径分布均匀，具有良好的医用前景。

本发明提供了一种放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法，包括：

(1)将三乙胺加入到超支化聚乙烯亚胺PEI溶液中搅拌，再滴加六氯环三磷腈HCCP溶液，室温下搅拌2-3h，离心、洗涤，得到纳米球PZS，随后分散在溶剂中，得到PZS溶液；

(2)将3-(4-羟基苯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯HPAO分散在溶剂中，加入PZS溶液，25-35℃条件下搅拌12-24h，离心、洗涤，得到PZS-HPAO纳米球；

(3)将PZS-HPAO纳米球分散在超纯水中，加入1,3-丙烷磺酸内脂1,3-PS，25-35℃条件下搅拌12-24h，离心，洗涤，得到PZS-HPAO-PS纳米球；

(4)将PZS-HPAO-PS纳米球分散在超纯水中，加入三乙胺，室温下搅拌10-30min，充分混合后，加入乙酸酐，25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后透析，得到PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球；

(5)将PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球与氯胺-T ch-T共同分散在磷酸盐缓冲液中，充分混合后，加入Na¹³¹I溶液混合搅拌，在室温下孵化30-40min，最后柱层析分离纯化，得到¹³¹I标记的PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球，即放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球。

所述步骤(1)中的PEI的相对分子质量为25000g/mol。

所述步骤(1)中PEI溶液和HCCP溶液的溶剂为丙酮。

所述步骤(1)中HCCP与PEI的用量按照摩尔比[-NH₂]:[P-Cl]＝1:1-1:3。

所述步骤(1)中的PEI与三乙胺的摩尔比为1:1000-1:5000。

所述步骤(1)中的离心速率为3000rpm。

所述步骤(2)中的溶剂为二甲基亚砜。

所述步骤(2)中PZS与HPAO的摩尔比为1:10-1:30。

所述步骤(3)中PZS-HPAO纳米球中的PZS与1,3-PS的摩尔比为1:20-1:50。

所述步骤(2)和(3)中的离心速率为6000-8000rpm。

所述步骤(4)中PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球中的[-NH₂]与三乙胺和乙酸酐的摩尔比为1:1200:1000-1:2400:2000。

所述步骤(4)中的透析使用截留分子量为8000-14000的透析袋。

所述步骤(5)中PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球与氯胺-T ch-T的质量比为1:1-1:5；与Na¹³¹I的活性比为1μL:3MBq-1μL:MBq。

所述步骤(5)中的磷酸盐溶液的pH为7.2-7.4。

本发明还提供了一种放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球的应用，包括：

(1)利用功能化聚磷腈纳米球(¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS)通过瘤内注射用于荷瘤鼠的SPECT成像；

(2)利用功能化聚磷腈纳米球(¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS)通过瘤内注射用于荷瘤鼠的放疗。

本发明制作的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球是由PEI和HCCP发生亲核取代反应交联形成微球后，再对其表面通过化学键合修饰HPAO，通过化学键合修饰1,3-PS并作乙酰化处理。最后标记放射性核素¹³¹I，用于SPECT成像和放疗。本发明制备的PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球具有均匀的粒径分布，能够稳定地分散在水溶液、磷酸盐溶液和生理盐水中，具有良好的化学稳定性和生物相容性。SPECT成像效果显示，制备的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球具有显著的成像效果。放疗效果显示，制备的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球对小鼠的肿瘤生长具有明显的抑制效果，在肿瘤的SPECT成像和放疗的诊疗一体化体系中具有潜在的应用前景。

本发明使用扫描电子显微镜(SEM)、电势粒径(DLS)、热重分析(TGA)、傅里叶转换红外光谱分析(FTIR)对本发明制备的材料进行了定性和定量表征。运用细胞活力分析(CCK-8测试)评价材料的细胞毒性。最后进行放射性纯度检测，裸鼠体内肿瘤模型的SPECT成像实验以及放疗实验，考察¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球的诊疗一体化效果。

有益效果

(1)本发明运用沉淀聚合法合成聚磷腈纳米球并对其进行表面功能化修饰，该方法制备工艺简单易行，易于操作分离，原料广泛易得；

(2)本发明制备的PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球具有均匀的粒径分布，具有良好的水分散性、生物相容性；标记放射性核素¹³¹I后，具有良好的放射稳定性，显著的SPECT成像和放疗效果，在肿瘤的诊疗一体化中具有潜在的应用价值。

附图说明

图1为本发明的制备流程示意图；

图2为本发明制备的PZS的SEM形貌图(a)、(b)和粒径分布图(c)；

图3为本发明制备的PZS和PZS.NHAc-HPAO-PS的水合粒径图；

图4为本发明制备的PZS、PZS-HPAO、PZS-HPAO-PS、PZS.NHAc-HPAO-PS的表面电势；

图5为本发明制备的PZS的FTIR图谱(a)和PZS-HPAO、PZS-HPAO-PS的FTIR图谱(b)；

图6为本发明制备的PZS、PZS-HPAO、PZS-HPAO-PS的热重分析图；

图7为本发明制备的PEI-HPAO的核磁共振氢谱图(a)、PEI-HPAO-PS的核磁共振氢谱图(b)；

图8为本发明制备的PZS.NHAc-HPAO-PS、PEI.NHAc-HPAO-PS与4T1细胞共培养24h后的细胞毒性分析图；

图9为本发明制备的PZS.NHAc-HPAO-PS与PZS.NHAc-HPAO与BSA共培育4h离心前后的紫外吸收峰差值；

图10为本发明制备的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS与¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS在PBS和FBS中孵育1,6,12和24h后的放射性纯度测试图；

图11为本发明制备的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS在肿瘤内SPECT成像图(a)和SPECT成像强度(b)；

图12为本发明制备的Na¹³¹I、¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS、¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS通过瘤内注射到裸鼠体内，观察25天记录小鼠的相对肿瘤体积；

图13为本发明制备的Na¹³¹I、¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS、¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS通过瘤内注射到裸鼠体内，观察25天记录小鼠的体重；

图14为本发明制备的Na¹³¹I、¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS、¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS通过瘤内注射到裸鼠体内，观察32天记录小鼠的生存率。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

(1)取相对分子量为25000g/mol的超支化聚乙烯亚胺(PEI)100mg溶于20mL丙酮中，在25-35℃搅拌条件下，将1mL三乙胺快速加到溶解的PEI溶液中，剧烈搅拌1-10min至充分混合。取六氯环三磷腈(HCCP)50mg溶解在5mL丙酮中，将溶解在丙酮中的六氯环三磷腈溶液缓慢滴加到上述PEI溶液中。室温下搅拌2-3h,反应结束后，3000rpm离心收集沉淀物，将沉淀物在水中超声分散15min-1h后，6000-8000rpm离心洗涤3次，即得到PEI与HCCP高度交联的纳米球PZS。

(2)取50mg PZS纳米球超声分散于20mL DMSO中，取HPAO 10.52mg溶于5mL DMSO中，边搅拌边滴加入上述PZS溶液中。25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后，用超纯水在6000-8000rpm条件下离心洗涤三次，得到PZS-HPAO纳米球。

(3)取PZS-HPAO纳米球50mg超声分散在10mL超纯水中，取59μL 1,3-丙烷磺酸内脂(1,3-PS)稀释在1mL超纯水中，在室温条件下，边搅拌边取稀释后的1,3-PS 100μL逐滴加入PZS-HPAO纳米球水溶液中。在25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后，用超纯水在6000-8000rpm离心洗涤三次，得到PZS-HPAO-PS纳米球。

(4)取(3)所得的PZS-HPAO-PS纳米球50mg超声分散在10mL超纯水中，室温条件下，边搅拌边加入359μL三乙胺，室温下搅拌30min，充分混合后，加入203μL乙酸酐。25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后，将反应液在分子量截留为8000-14000的透析袋中用超纯水中透析3d，即得到PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球。

(5)将(4)所得的PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球与氯胺-T(ch-T)共同分散在磷酸盐缓冲液中。充分混合后，加入无菌的Na¹³¹I溶液混合搅拌。反应混合物在室温下孵化30min。随后用PD-10脱盐层析柱分离纯化¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS。

实施例2

取实施例1中的PZS纳米球稀释100倍后，通过SEM观察材料形貌，说明PZS纳米球具有规整的球形结构，尺寸分布均匀，平均粒径为179.9nm(图2)。接着通过DLS对PZS纳米球及其修饰后材料的水合粒径和表面电势进行表征，结果表明，PZS纳米球和PZS.NHAc-HPAO-PS水合粒径分别为426.1nm和474.5nm(图3)。表面电势结果表明，PZS的表面电势为37.5mV，PZS.NHAc-HPAO-PS的表面电势为11.9mV，从而通过表面修饰有效避免了PZS材料表面氨基的毒性，材料的表面电势有了明显的下降，提高了材料的生物相容性(图4)。图5(a)表明：制备的PZS聚磷腈纳米球在3250-3600cm^-1处存在N-H的特征吸收峰，在2950-2800cm^-1处存在烷基的特征吸收峰，在1175cm^-1处存在环内P-N键的特征吸收峰，在1110cm^-1处存在环外P-N键的特征吸收峰。红外数据的特征吸收峰定性的表征了HCCP和PEI的成功交联。图5(b)表明：制备的PZS.NHAc-HPAO-PS在1640cm^-1存在酰胺Ⅰ带特征峰，在1515cm^-1、1557cm^-1处存在酰胺Ⅱ带的两个特征峰，在1378cm^-1处出现O-H的面内弯曲振动特征峰，证明HPAO在PZS聚磷腈纳米球表面的成功修饰。在1168cm^-1处的S-O特征吸收峰，1034cm^-1处的S＝O特征吸收峰，证明1,3-PS的成功修饰。然后通过热重分析仪对材料进行了定量分析(图6)，结果显示，PZS纳米球表面修饰HPAO的含量为5.95％，修饰1,3-PS的含量为9.57％。图7为通过核磁共振氢谱对合成的材料PEI-HPAO和PEI-HPAO-PS进行表征。从图7(a)可见，在6.7ppm和7.0ppm处的质子峰对应为HPAO上苯酚基团上质子特征峰。通过积分可知，每个PEI上连有14.6个HPAO。从图7(b)可见，在1.9ppm处的质子峰对应为1,3-PS上的质子特征峰，通过积分计算，每个PEI上连有29个1,3-PS。

实施例3

取实施例1中(4)和对比例1中步骤(3)所得产品用无菌生理盐水配置成浓度为1mg/mL的母液，之后梯度稀释为100、50、20、10、5、2、1μg/mL的材料。取培养好的4T1细胞种于96孔板中，按照1万细胞/孔的密度接种，每孔体积100μL。培养过夜后，用生理盐水清洗3次，之后加入上述各稀释梯度的材料，与细胞共培养24h。每个梯度做6个平行孔，以生理盐水作为空白对照。培养结束后用100μL生理盐水清洗3次，之后每孔加90μL无血清培养基和10μL CCK-8溶液，37℃孵化2h，用酶标仪检测450nm处吸光度值。CCK-8法检测细胞活力结果表明，PZS.NHAc-HPAO-PS和PEI.NHAc-HPAO-PS没有显示出明显的细胞毒性，表现出良好的细胞相容性(图8)。

实施例4

用无菌PBS将BSA溶液配置为1mg/mL，将实施例1(2)和对比例3中所得产品用无菌PBS分别配置成浓度为2mg/mL的溶液，再将其稀释为1mg/mL、0.5mg/mL和0.25mg/mL。将配好的材料分别与1mL BSA溶液混合，充分混合后，每组取100μL稀释至1mL，测278nm处的紫外吸收。将剩余材料/BSA混合溶液在37℃摇床中共培养4h，5000rpm离心后取上清溶液100μL稀释至1mL后，测量278nm处的紫外吸收。比较材料与BSA溶液共培养前后的紫外吸收峰差，峰差越小，说明材料抗蛋白吸附能力越强。从实验结果图9可知，材料在修饰了1,3-PS之后具有更优良的抗蛋白吸附能力。

实施例5

为了检测放射性核素¹³¹I标记纳米球后的放射稳定性，先以薄层色谱法对所得的产物¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS进行体外稳定性检测。将¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS(100μL)和¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS(100μL)分别与1mL 0.9％的生理盐水与胎牛血清混合，之后用薄层色谱法测试37℃下¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球在1,6,12和24h时的放射性化学纯度。从实验结果图10可知，在不同的时间点下，¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS和¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS在FBS和PBS中放射性化学纯度均在90％以上，未有大量¹³¹I从载体上脱落下来。说明材料均具有良好的放射稳定性。

实施例6

为了评价¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS的SPECT成像能力，以20g左右的雌性裸鼠作为动物模型，接种4T1肿瘤，待肿瘤长至1.0cm³左右，将本发明制备的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS(200μL,7.4MBq)通过瘤内注射到小鼠肿瘤内。于不同时间点(5min，1h，2h，4h，8h，12h)用SPECT成像系统扫描荷瘤鼠。参照图11(a)可知，在注射¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS后可以实现荷瘤鼠模型的肿瘤SPECT成像。参照图11(b)可知，注射¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS 12h内，荷瘤鼠肿瘤部位SPECT成像信号明显。

实施例7

按照实施例6所述建立肿瘤模型，待肿瘤长至0.5-1.2cm³后，进行第一次放疗。通过瘤内注射生理盐水(200μL)、Na¹³¹I(200μL，7.4MBq)、¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS(200μL，7.4MBq)及¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS(200μL，7.4MBq)至裸鼠瘤内。注射后第十天，各组裸鼠接受第二次瘤内治疗。每三天用游标卡尺测量肿瘤尺寸，并按照(肿瘤长径×(肿瘤短径)²)/2计算肿瘤体积，按照V/V₀(V为测量的肿瘤体积，V₀为第1天测量的肿瘤体积)计算肿瘤的相对体积。参照图12，可以看出，经¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS处理的小鼠肿瘤体积增长得到了有效的抑制。每三天测量裸鼠体重，从图13可以看出，经¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS、¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS组处理的小鼠体重无明显变化，说明材料对荷瘤鼠没有潜在的毒性。参照图14可以看出，经¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS处理的荷瘤鼠在32天后依然有100％的存活率，经¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS处理的荷瘤鼠在32天后有60％的存活率，而经生理盐水组处理的荷瘤鼠在29天后全部死亡，经Na¹³¹I处理的小鼠在30天后全部死亡。该结果说明¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球能有效的延长荷瘤鼠的存活时间。证明合成的¹³¹I-PZS.NHAc-HPAO-PS是集SPECT成像和放疗为一体的多功能诊疗一体化平台。

对比例1

(1)取50mg PEI溶于20mL DMSO中，取HPAO 10.52mg溶于5mLDMSO中，边搅拌边滴加入上述PEI溶液中。25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后，6000-8000rpm条件下超纯水离心洗涤三次,得到高分子材料PEI-HPAO。

(2)取PEI-HPAO 50mg溶解在10mL超纯水中，取59μL 1,3-丙烷磺酸内脂(1,3-PS)稀释在1mL超纯水中，在室温条件下，边搅拌边取稀释后的1,3-PS 100μL逐滴加入PEI-HPAO水溶液中。在25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后，6000-8000rpm超纯水离心洗涤三次,得到高分子材料PEI-HPAO-PS。

(3)取(2)所得的PEI-HPAO-PS 50mg溶解在10mL超纯水中，室温条件下，边搅拌边加入359μL三乙胺，室温下搅拌30min，加入203μL乙酸酐。搅拌12-24h，将反应液在载流分子量为8000-14000的透析袋中用超纯水中透析3d(2L/次，3次/天)，即得到PEI.NHAc-HPAO-PS。

(4)将(3)所得的PEI.NHAc-HPAO-PS与氯胺-T(ch-T)共同溶解在磷酸盐缓冲液中。充分混合后，加入无菌的Na¹³¹I溶液混合搅拌。反应混合物在室温下孵化30min。随后用PD-10脱盐层析柱分离纯化，得到¹³¹I-PEI.NHAc-HPAO-PS。

对比例2

利用核磁共振氢谱表征本发明制备得到的PEI-HPAO和PEI-HPAO-PS，¹H NMR图参见图7。从图7(a)可见，在6.7ppm和7.0ppm处的质子峰对应为HPAO上苯酚基团上质子特征峰。通过积分可知，每个PEI上连有14.6个HPAO。从图7(b)可见，在1.9ppm处的质子峰对应为1,3-PS上的质子特征峰，通过积分计算，每个PEI上连有29个1,3-PS。

对比例3

取实施例1步骤(2)所得的PZS-HPAO纳米球50mg超声分散在10mL超纯水中，室温条件下，边搅拌边加入359μL三乙胺，室温下搅拌30min，充分混合后，加入203μL乙酸酐。25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后，将反应液在分子量截留为8000-14000的透析袋中用超纯水中透析3d，即得到PZS.NHAc-HPAO纳米球。该PZS.NHAc-HPAO纳米球主要用于和实施例1步骤(4)所得材料进行蛋白质吸附的对比。

Claims (10)

1.一种放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球的制备方法，包括：

(1)将三乙胺加入到超支化聚乙烯亚胺PEI溶液中搅拌，再滴加六氯环三磷腈HCCP溶液，室温下搅拌2-3h，离心、洗涤，得到纳米球PZS，随后分散在溶剂中，得到PZS溶液；

(2)将3-(4-羟基苯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯HPAO分散在溶剂中，加入PZS溶液，25-35℃条件下搅拌12-24h，离心、洗涤，得到PZS-HPAO纳米球；

(3)将PZS-HPAO纳米球分散在超纯水中，加入1,3-丙烷磺酸内脂1,3-PS，25-35℃条件下搅拌12-24h，离心，洗涤，得到PZS-HPAO-PS纳米球；

(4)将PZS-HPAO-PS纳米球分散在超纯水中，加入三乙胺，室温下搅拌10-30min，充分混合后，加入乙酸酐，25-35℃条件下搅拌12-24h，反应完全后透析，得到PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球；

(5)将PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球与氯胺-T ch-T共同分散在磷酸盐缓冲液中，充分混合后，加入Na¹³¹I溶液混合搅拌，在室温下孵化30-40min，最后柱层析分离纯化，得到¹³¹I标记的PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球，即放射性核素¹³¹I标记的功能化聚磷腈纳米球。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的PEI的相对分子质量为25000g/mol。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中PEI溶液和HCCP溶液的溶剂为丙酮。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中HCCP与PEI的用量按照摩尔比[-NH₂]:[P-Cl]＝1:1-1:3。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的PEI与三乙胺的摩尔比为1:1000-1:5000。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的溶剂为二甲基亚砜。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中PZS与HPAO的摩尔比为1:10-1:30。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中PZS-HPAO纳米球中的PZS与1,3-PS的摩尔比为1:20-1:50。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球中的[-NH₂]与三乙胺和乙酸酐的摩尔比为1:1200:1000-1:2400:2000。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中PZS.NHAc-HPAO-PS纳米球与氯胺-T ch-T的质量为1:1-1:5；与Na¹³¹I的活性比为1μL:3MBq-1μL:5MBq。