CN109799307A - 一种阿德福韦酯片的有关物质检测方法 - Google Patents
一种阿德福韦酯片的有关物质检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于药物分析技术领域，具体来说，涉及到一种阿德福韦酯片的有关物质检测方法。所述检测方法具体步骤如下：采用高效液相色谱法进行检测，采用C30为填料的色谱柱，取磷酸二氢钾0.34g，加1000ml水溶解后，用磷酸调pH至3.0，配制成磷酸盐缓冲液，以乙腈‑磷酸盐缓冲液(40:60)为流动相，等度洗脱，检测波长为250‑280nm，柱温为10‑30℃，流速为0.8‑3ml/min，进样量为10‑70uL。与现有技术相比，本发明所述阿德福韦酯片有关物质的检测方法具有操作简单、稳定性好、灵敏度与分离度高、专属性强的优点，并且，能减少流动相中盐的用量。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体来说，涉及到一种阿德福韦酯片的有关物质检测方法。
背景技术
阿德福韦酯是一种单磷酸腺苷的无环核苷类似物，在体内细胞激酶作用下磷酸化,成为二磷酸阿德福韦,通过与细胞激酶底物三磷酸脱氧腺苷的竞争性作用抑制病毒DNA逆转录酶活性,且通过植入病毒DNA链导致病毒DNA链断裂。
阿德福韦酯片由Gilead于2002年09月在美国首次上市，2003年03月在英国上市，2003年04月在德国上市，2004年12月由GlaxoSmithKline在日本上市，国外上市的商品名均为Hepsera。本品临床适用于治疗有乙型肝炎病毒活动复制证据，并伴有血清氨基酸转移酶(ALT或AST)持续升高或肝脏组织学活动性病变的肝功能代偿的成年慢性乙型肝炎患者。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种简单稳定、灵敏度高的减少流动相盐用量的阿德福韦酯片有关物质的检测方法。
本发明所述的一种阿德福韦酯片有关物质的检测方法，所述检测方法具体步骤如下：采用高效液相色谱法进行检测，采用C30为填料的色谱柱，取磷酸二氢钾0.34g，加1000ml水溶解后，用磷酸调pH至3.0，配制成磷酸盐缓冲液，以乙腈-磷酸盐缓冲液(40:60)为流动相，等度洗脱，检测波长为250-280nm，柱温为10-30℃，流速为0.8-3ml/min，进样量为10-70uL。
本发明所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，所述检测波长为261nm。
本发明所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，所述流速为：调节阿德福韦酯出峰时间为9.5-10.5min。
本发明所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，所述进样量为20uL。
本发明所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，所述流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液，比例为40:60。
本发明所述的一种阿德福韦酯片有关物质的检测方法，所述检测方法具体步骤如下：
1)取本品细粉适量，相当于阿德福韦酯10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相适量，超声20分钟使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
2)另取阿德福单酯适量，加流动相稀释制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
3)精密量取供试品溶液和杂质对照品溶液各1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀，作为对照溶液；精密称取空白辅料作为空白溶液；
4)精密量取对照品溶液、对照溶液、空白溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；
5)计算公式
式中：S单、S杂分别为样品中阿德福韦单酯峰面积、各杂质峰面积总和；S单对、S对：分别为对照溶液中阿德福韦单酯的峰面积﹑阿德福韦酯的峰面积；W对，P％,W样分别为对照品称重(g)及含量，样品称重(g)。
与现有技术相比，本发明所述阿德福韦酯片有关物质的检测方法具有操作简单、稳定性好、灵敏度高、专属性强的优点，并且，采用C30柱进行分离，使阿德福韦酯与主要降解产物分离度良好，能减少流动相盐用量。
附图说明
图1为阿德福韦酯对照溶液线性关系图；图2为阿德福韦单酯对照溶液线性关系图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述阿德福韦酯片有关物质的检测方法作进一步说明，但是本发明的保护范围并不限于此。
实施例1：分析方法确证试验
(1)波长的选择
取阿德福韦酯对照品适量，加流动相溶解并制成每1ml中含20ug/ml的溶液，另取阿德福韦单酯适量，以流动相溶解并制成每1ml中约含20μg的溶液，分别在200～400nm进行紫外扫描，阿德福韦酯对照品溶液再261nm波长处有最大吸收，阿德福韦单酯在此波长处亦有较强吸收，故选择261nm作为检测波长。
基本色谱条件：采用高效液相色谱法进行检测，采用C30为填料的色谱柱，取磷酸二氢钾0.34g，加1000ml水溶解后，用磷酸调pH至3.0，配制成磷酸盐缓冲液，以乙腈-磷酸盐缓冲液(40:60)为流动相，等度洗脱，检测波长为261nm，柱温为30℃，流速为1ml/min，进样量为20uL。针对阿德福韦酯及其相关物质，采用C30为填料的色谱柱，相比于常规的C18，对结构相似的化合物也能达到相同甚至更好的分离效果，却可以减少盐的用量，减免对液相系统的危害。
(2)专属性试验
取本品研细，称取适量(约相当于阿德福韦酯10mg),置100ml量瓶中，按本品处方另取相当于1片的空白辅料，置另一100ml量瓶中，各加流动相适量，超声20分钟使溶剂，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液和空白辅料溶液；另取阿德福韦单酯适量，加流动相稀释制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液和杂质对照品溶液各1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10-25％；再精密量取对照品溶液、空白溶液和供试品溶液各20uL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。试验结果表明，辅料及溶剂峰不影响本品中有关物质的检出，阿德福韦单酯和阿德福韦酯分离度符合要求。各相邻检测物质之间的最小分离度能达到1.91。
(3)线性与范围
称取阿德福韦酯对照品和阿德福韦单酯各约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，依次精密吸取0.6、0.8、1、1.2、1.4ml，分别置100ml量瓶中，均用流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液各20uL，注入色谱仪，记录色谱图，结果见表1。
表1有关物质对照溶液线性关系测定结果
以阿德福韦酯峰面积(A)对其浓度(C)作线性回归，得图1和图2。试验结果表明，阿德福韦酯在0.65-1.5ug/ml，峰面积与浓度呈良好的线性关系；阿德福韦单酯在0.61-1.4ug/ml，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
(4)进样精密度试验
分别精密吸取上述阿德福韦酯浓度为1.08ug/ml的溶液和阿德福韦单酯浓度为1.02ug/ml的溶液20uL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样6次。结果见表2。
表2进样精密度试验测定结果
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均 | RSD％ |
| 阿德福韦酯 | 40276 | 40785 | 40412 | 39906 | 40164 | 39643 | 40198 | 0.989 |
| 阿德福韦单酯 | 36955 | 37009 | 37216 | 37556 | 37401 | 37189 | 37221 | 0.614 |
结果表明，有关物质检查对照溶液进样精密度较高。
(5)定量限
取上述对照溶液5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，此时信噪比(S/N)约为10，在该色谱条件下，阿德福韦酯的定量限为1ng，相对于供试品溶液中阿德福韦酯的定量限为0.05％，阿德福韦单酯的定量限为0.9ng，相对于供试品溶液中阿德福韦酯的定量限为0.045％，测定液连续进样6次的标准偏差RSD小于2.0％。
(6)检测限
取上述对照溶液1.5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，此时信噪比(S/N)约为3，在该色谱条件下，阿德福韦酯的定量限为0.3ng，相对于供试品溶液中阿德福韦酯的定量限为0.015％，阿德福韦单酯的定量限为0.28ng，相对于供试品溶液中阿德福韦酯的定量限为0.014％，测定液连续进样6次的标准偏差RSD小于2.0％。
(7)有关物质测定溶液的稳定性试验
于0、1、2、3、5、6小时分别精密吸取上述(2)中供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表3。
表3有关物质供试品溶液的稳定性试验测定结果
| 时间 | 0小时 | 1小时 | 2小时 | 3小时 | 5小时 | 6小时 | 平均 | RSD％ |
| 峰面积 | 3985439 | 4000160 | 3942839 | 4064090 | 3970000 | 4023169 | 3997616 | 1.06 |
结果表明，有关物质测定溶液在室温条件下，6小时内稳定。
(8)破坏性试验
酸破坏取阿德福韦酯片，研细，称取适量(约相当于阿德福韦酯10mg)，至100ml量瓶中，加入0.5N盐酸溶液5ml，100℃水浴加热1小时，冷后用0.5N氢氧化钠溶液调节pH值至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
碱破坏取阿德福韦酯片，研细，称取适量(约相当于阿德福韦酯10mg)，至100ml量瓶中，加入0.5N氢氧化钠溶液5ml，100℃水浴加热1小时，冷后用0.5N盐酸溶液调节pH值至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
氧化破坏取阿德福韦酯片，研细，称取适量(约相当于阿德福韦酯10mg)，至100ml量瓶中，加流动相适量超声20分钟使溶解后，加2ml30％过氧化氢溶液，混匀，100℃水浴加热10min，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
热破坏取阿德福韦片，置200℃烘箱中放置4小时，冷后研细，称取适量(约相当于阿德福韦酯10mg)，置100ml量瓶中，加流动性适量超声20分钟使溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
光破坏取阿德福韦片，置5000lx光照箱中放置72小时，研细，称取适量(约相当于阿德福韦酯10mg)，置100ml量瓶中，加流动性适量超声20分钟使溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
分别精密称取上述各破坏性样品溶液20μl注入色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。试验结果表明，该系统能够检出阿德福韦酯的主要分解产物，且阿德福韦酯与主要降解产物分离度良好，各相邻检测物质之间的最小分离度能达到1.97。
Claims (5)
1.一种阿德福韦酯片有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体步骤如下：采用高效液相色谱法进行检测，采用C30为填料的色谱柱，取磷酸二氢钾0.34g，加1000ml水溶解后，用磷酸调pH至3.0，配制成磷酸盐缓冲液，以体积比为40:60的乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，等度洗脱，检测波长为250-280nm，柱温为10-30℃，流速为0.8-3mL/min，进样量为10-70μL。
2.根据权利要求1所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测波长为261nm。
3.根据权利要求1所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，其特征在于，所述流速为：调节阿德福韦酯出峰时间为9.5-10.5min。
4.根据权利要求1所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，其特征在于，所述进样量为20μL。
5.根据权利要求1所述的阿德福韦酯片有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体步骤如下：
1)取阿德福韦酯片细粉精密称定，其中含阿德福韦酯10mg，置100mL量瓶中，加流动相适量，超声20分钟使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液；
2)另取阿德福韦单酯适量，加流动相稀释制成每1mL含0.1mg的溶液，作为杂质对照品溶液；
3)精密量取供试品溶液和杂质对照品溶液各1mL，置100ml量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀；精密称取空白辅料作为空白溶液；
4)精密量取稀释后的对照品溶液、空白溶液和供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；
5)计算公式
式中：S单、S杂分别为样品中阿德福韦单酯峰面积、各杂质峰面积总和；S单对、S对：分别为对照溶液中阿德福韦单酯的峰面积﹑对照溶液中阿德福韦酯的峰面积；W对为对照品质量，单位g，P％为对照品的含量，W样为样品质量，单位g。
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|---|---|
| CN (1) | CN109799307A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111007168A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-04-14 | 湖南方盛制药股份有限公司 | 超高效液相色谱分析阿德福韦酯n3-异构体的方法 |
| CN114324665A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-12 | 辰欣药业股份有限公司 | 一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1799550A (zh) * | 2005-01-04 | 2006-07-12 | 沈阳药科大学 | 阿德福韦酯高效制剂及其制备方法 |
| CN101504394A (zh) * | 2007-06-28 | 2009-08-12 | 福建广生堂药业有限公司 | 一种阿德福韦单酯的含量检测方法 |
| WO2011016611A2 (ko) * | 2009-08-03 | 2011-02-10 | 제일약품주식회사 | 새로운 결정형을 갖는 아데포비어 디피복실, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 만성 ｂ형 간염의 예방 또는 치료용 조성물 |
| EP2084519B1 (en) * | 2006-10-10 | 2012-08-01 | Los Alamos National Security, LLC | X-ray fluorescence analysis method |
| CN103293123A (zh) * | 2013-04-19 | 2013-09-11 | 悦康药业集团有限公司 | 阿德福韦酯片剂的质量控制方法 |
| CN106167503A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-11-30 | 福建广生堂药业股份有限公司 | 一种阿德福韦酯羟甲基杂质的制备方法 |
| WO2018045150A1 (en) * | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Gilead Sciences, Inc. | 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine derivaties as toll like receptor modulators |
-
2018
- 2018-12-31 CN CN201811650304.7A patent/CN109799307A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1799550A (zh) * | 2005-01-04 | 2006-07-12 | 沈阳药科大学 | 阿德福韦酯高效制剂及其制备方法 |
| EP2084519B1 (en) * | 2006-10-10 | 2012-08-01 | Los Alamos National Security, LLC | X-ray fluorescence analysis method |
| CN101504394A (zh) * | 2007-06-28 | 2009-08-12 | 福建广生堂药业有限公司 | 一种阿德福韦单酯的含量检测方法 |
| WO2011016611A2 (ko) * | 2009-08-03 | 2011-02-10 | 제일약품주식회사 | 새로운 결정형을 갖는 아데포비어 디피복실, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 만성 ｂ형 간염의 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN103293123A (zh) * | 2013-04-19 | 2013-09-11 | 悦康药业集团有限公司 | 阿德福韦酯片剂的质量控制方法 |
| CN106167503A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-11-30 | 福建广生堂药业股份有限公司 | 一种阿德福韦酯羟甲基杂质的制备方法 |
| WO2018045150A1 (en) * | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Gilead Sciences, Inc. | 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine derivaties as toll like receptor modulators |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 何晓艳 等: "HPLC法测定阿德福韦酯口腔崩解片中阿德福韦酯降解产物的含量", 《中国药师》 * |
| 杨红 等: "反相高效液相色谱法测定阿德福韦酯的含量及有关物质 ", 《中国抗生素杂志》 * |
| 汪正宇: "阿德福韦酯片质量控制方法研究 ", 《安徽医药》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111007168A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-04-14 | 湖南方盛制药股份有限公司 | 超高效液相色谱分析阿德福韦酯n3-异构体的方法 |
| CN111007168B (zh) * | 2019-12-11 | 2022-04-12 | 湖南方盛制药股份有限公司 | 超高效液相色谱分析阿德福韦酯n3-异构体的方法 |
| CN114324665A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-12 | 辰欣药业股份有限公司 | 一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法 |
| CN114324665B (zh) * | 2021-12-30 | 2023-02-24 | 辰欣药业股份有限公司 | 一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法 |
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