CN109718332B - 一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途 - Google Patents
一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109718332B CN109718332B CN201910025205.8A CN201910025205A CN109718332B CN 109718332 B CN109718332 B CN 109718332B CN 201910025205 A CN201910025205 A CN 201910025205A CN 109718332 B CN109718332 B CN 109718332B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fibrous roots
- ethanol
- preparation
- bletilla striata
- rhizoma bletillae
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了白及须根中总芪类化合物的制备方法及其用途。包括以下步骤:(1)提取:取白及须根,加5~20倍量体积浓度30~95%的乙醇,提取1~3次,每次1~3 h,过滤,合并滤液,得提取液;(2)上样液制备:减压浓缩至浓度为0.2~0.8 g/ml作为上样液;(3)纯化:以0.3‑0.6 BV/h上样至大孔吸附树脂上,静态吸附2‑5 h后,依次用3~4BV水和4~5BV 10%乙醇除杂后,再用4~5BV 70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱,减压干燥得总芪类化合物。本发明不仅可以提高白及须根的经济价值,变废为宝,具有很好的环保价值,而且还可缓解目前白及资源短缺,提高白及资源利用率。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域,尤其是具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途。
背景技术
抑郁症以高患病率、高复发率、高致残率、高自杀率的特点成为严重影响人类生活质量的公共卫生和社会问题。目前,世界上约有3.5亿人患有抑郁症,我国抑郁症发病率为3.02%。随着生活节奏和压力增加,抑郁症发病率急剧上升。抑郁症以药物为主治疗,目前抑郁症的发病机制尚不明确,存在炎症反应学说、单胺假说、HPA轴功能亢进假说和神经营养因子学说等多种假说。目前上市的抗抑郁西药种类和机制有限,且存在较严重的副作用,在治疗抑郁症的同时也威胁着患者身体其他功能的健康。中药具有多成分、多靶点、多效应、毒副作用小、协同作用强和整体调节等特点,在抑郁症治疗中具有独特优势。
中药白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎,为我国传统名贵中药,具有收敛止血,消肿生肌的功效,广泛用于治疗咳血、吐血、外伤出血,疮疡肿毒、皮肤皲裂咳血等病症。白及是多种中成药的主要原料,已被列入国家保健食品和中药化妆品原料药目录,广泛应用于保健食品和化妆品行业中,其提取物还是一种优良的生物高分子材料和性能优良的药用辅料原料。随着应用范围的不断扩大,白及药材需求量不断增加,采收其药用部位的同时也产生了大量的白及须根等非药用部位,对其进行开发利用可减少资源浪费,提高白及植物资源利用效率。
研究表明白及须根和块茎化学成分基本一致,含有多糖和茋类(联苄类和菲类)等多种化学成分,白及须根中茋类成分含量高于块根,且抑菌活性也强于块茎,白及须根醇提物还可通过降低IL-1β等因子,提高IL-10、VEGF等因子水平发挥抗胃溃疡作用;能够明显抑制肺腺癌细胞的生长,具有明显的促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞转移的作用。
发明内容
本发明针对现有技术中的不足,提供了一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其通过大量动物实验证明其具有显著的抗抑郁的新功能,本发明不仅可以提高白及须根的经济价值,变废为宝,具有很好的环保价值,而且还可缓解目前白及资源短缺,提高白及资源利用率。
为解决上述技术问题,本发明通过下述技术方案得以解决:白及须根中总茋类化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)提取:取白及须根粉碎至120目细粉,加5~20倍量体积浓度30~95%的乙醇,提取1~3次,每次1~3h,过滤,合并滤液,得提取液;
(2)上样液制备:将步骤(1)所得提取液,减压浓缩至浓度为0.2~0.8g/ml,再加入1~10%白及须根生药量(W/V)的生姜汁(抗氧化,可防止白及须根中茋类成分发生氧化,除去白及须根中大量纯在的脂溶性色素,同时可以与白及须根协同发挥抗抑郁作用),充分振摇,混合均匀,作为上样液;
(3)纯化:将步骤(2)所得上样液,以0.3-0.6BV/h上样至大孔吸附树脂上,静态吸附2-5h后,依次用3~4BV水和4~5BV 10%乙醇除杂后,再用4~5BV 70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱,减压干燥得总茋类化合物。
上述技术方案中,优选的,所述总茋类化合物为淡黄色粉末或浸膏。
本发明白及须根中茋类化合物经动物实验结果证明,具有以下抗抑郁作用:
(1)拮抗5-HTP诱导的小鼠甩头次数。
(2)抑制利血平诱发的小鼠眼睑下垂和或活动较少。
(3)显著降低慢性应激抑郁小鼠悬尾和强迫游泳不动时间,增加其糖水偏好度、水平穿格次数和直立穿格次数。
本发明的有益效果是:本发明白及须根中总茋类化合物可作为药物制剂的原料,进一步制备成治疗和或预防抑郁的药物,不仅可以提高白及须根的经济价值,变废为宝,具有很好的环保价值,而且还可缓解目前白及资源短缺,提高白及资源利用率。
附图说明
图1为本发明的AB-8大孔树脂吸附白及须根中总茋类成分的泄露曲线。
图2为本发明的不同浓度乙醇洗脱曲线。
图3为本发明的不同体积乙醇洗脱曲线。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细描述:
实施例1:白及须根中总茋类化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)供试液制备:取白及须根药材5kg,粉碎过筛,加8倍量,95%的乙醇,提取2次,每次1.5h,减压过滤,合并滤液,减压浓缩至无醇味,加水调节浓度为0.5g/ml,再加入2%白及须根生药量(W/V)的生姜汁,充分振摇,混合均匀,作为上样液。
(2)大孔树脂型号筛选:采用静态吸附法,筛选白及须根中总茋类化合物纯化的最适树脂。精密称取预处理过的D101、AB-8、HPD-100、S-8、ADS-7树脂各2.0g,置于具塞磨口三角烧瓶中,装入150mL具塞磨口三角瓶中,精密加入已知含量的粗提液50mL,25℃恒温振荡24h(60r/·min),充分吸附后,过滤,测定滤液(吸附液)中剩余总茋类化合物的含量。取过滤后的树脂,加蒸馏水50mL,25℃恒温振荡120min后,精密加入100m L体积分数为95%的乙醇,25℃恒温振24h,过滤,测定滤液(解吸液)中总茋类化合物含量,按下列公式计算比吸附量及总解吸率,根据比吸附量及解吸率确定树脂型号。
比吸附量(mg/g)=(吸附液初始质量浓度-吸附液剩余质量浓度)×溶液体积/树脂质量×100%
解吸率(%)=(解吸液体积×解吸液质量浓度)/(树脂质量×比吸附量)×100%
表1不同型号树脂静态吸附的比吸附量和解析率测定结果
树脂型号 | 比吸附量mg/g | 解吸率(%) |
D101 | 8.95 | 62.41 |
AB-8 | 9.38 | 78.70 |
HPD-100 | 9.29 | 66.92 |
S-8 | 5.31 | 75.31 |
ADS-7 | 7.16 | 70.42 |
结果表明,AB-8树脂的静态吸附的比吸附量及解吸率均较好,因此选择AB-8型大孔吸附树脂。
(3)最大上样量的确定
取AB-8大孔树脂10g,湿法装入直径1cm的色谱柱中,取供试品溶液(0.5g/ml)以每小时1倍量柱床体积的流速上柱,每5ml分段收集过柱流出液,测定其中总茋类成分含量,按(流出液质量浓度/上柱液质量浓度)×100%计算未吸附率(%)。以流出液体积(mL)为横坐标,茋类成分的未吸附率(%)为纵坐标,绘制泄漏曲线,根据泄漏点确定最大上样量。结果表明(见图1),第3份流出液时开始泄漏,故确定每克树脂上样量应小于等于0.5g生药。
(4)洗脱溶剂体积分数的确定
按上述确定的工艺条件,取供试品溶液6份,按上述工艺装柱、上样、4BV水洗脱后,再分别用4BV体积分数为10%、30%、50%、70%、85%、95%的乙醇洗脱,每份收集0.5BV,测定每份洗脱液中总茋类成分的含量和洗脱率,绘制洗脱曲线见图2,结果表明10%乙醇基本不能将茋类成分洗脱下来,随着乙醇浓度增加,洗脱率增加,当乙醇浓度为70%时,洗脱率较高,同时洗脱液中的含量也较高,因此,确定先用10%乙醇洗脱除杂后再用70%乙醇洗脱,即得总茋类成分。
按上述确定的工艺条件,取供试品溶液按上述工艺装柱、上样、依次用4BV水和10%乙醇洗脱后,用70%乙醇洗脱,按份收集,每份1BV,测定每份洗脱液中总茋类成分的含量,绘制洗脱曲线见图3,结果表明4BV乙醇已基本将总茋类成分洗脱完全,因此洗脱体积为4BV。
最后减压干燥得淡黄色粉末或浸膏,即为白及须根中总茋类化合物。
实施案例2、白及须根中茋类化合物对5-HTP诱导的小鼠甩头行为影响:小鼠随机分为6组,即正常组、模型组、阳性对照组和白及高、中、低剂量组,每组10只。给药组分别灌胃给予白及药物,阳性对照组给予氟西汀(10mg/kg),正常组、模型组灌胃给予等体积0.5%CMC-Na溶液,连续14d,最后一次给药1h后,腹腔注射5-HTP(150mg/kg),并立即开始观察,计数30min内各组小鼠的甩头次数。
实验结果显示(见表2):与正常组比较,注射5-HTP后,模型组能显著减少小鼠甩头次数,表明造模成功;与模型组比较,氟西汀和白及中、高剂量组均可显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数(P<0.01);提示其抗抑郁的作用可能与增加脑内5-HT水平有关。
表2白及须根中茋类成分对5-HTP诱导的小鼠甩头行为影响(n=10)
组别 | 剂量mg/kg | 甩头数/次 |
正常组 | - | 36.51±10.48 |
模型组 | - | 5.79±4.09** |
氟西汀组 | 10 | 35.40±9.85## |
白及须根 | 50 | 13.02±7.89 |
100 | 24.86±10.73## | |
200 | 32.59±11.51## |
注:**与正常组比较P<0.01,##与模型组比较P<0.01。
实施案例3、白及须根中茋类化合物对利血平诱导小鼠眼睑下垂和活动的影响:
小鼠按体重随机分为6组,分别为正常组、模型对照组、阳性药组和白及须根中茋类成分高、中、低剂量组,每组10只。各组小鼠均ip 2mg/kg的利血平,连续14d,每日给予利血平0.5h后,对照组ig给予等体积的0.5%CMC-Na溶液,阳性药组ig给予10mg/kg的盐酸氟西汀,白及须根中茋类成分低、中、高剂量组分别ig 50、100、200mg/kg。末次给药1h后观察:(1)上睑下垂:将动物放于支架上观察15s,上睑下垂评分标准:闭眼为4分,3/4闭眼为3分,1/2闭眼为2分,不闭眼为0分;(2)运动不能:末次给药1h后,将动物放于直径7.5cm的圆形白纸的中央观察20s,记录留在圈内的动物个数。
结果表明(表3):注射利血平后,能显著诱发小鼠眼睑下垂和活动较少,抗抑郁药物盐酸氟西汀和白及须根中茋类化合物可显著拮抗利血平诱发的小鼠眼睑下垂和活动不能。
表3白及须根中茋类成分对利血平诱导小鼠抑郁模型的影响(n=10)注:**与正常组比较P<0.01,与模型组比较#P<0.05,##P<0.01。
实施案例4、白及须根中茋类化合物对慢性应激抑郁小鼠行为学的影响:
(1)分组、模型制备及给药:
小鼠按体重随机分为6组,每组10只,所有大鼠均自由饮水和进食,在光暗周期为12h的安静环境适应性饲养一周后,采用慢性轻度不可预见应激刺激造成小鼠(CUMS)模型。除正常对照组外,其它组小鼠在3周内接受各种不同的应激。系列的刺激包括:禁食(24h),禁水(24h),倾斜鼠笼(45°,8h),单笼饲养(1h),照明过夜(8h),强迫游泳(8℃,6min),潮湿垫料(24h),束缚(2h),异物(24h)。模型组、阳性药组和给药组小鼠持续接受上述慢性温和应激3周,每天随机接受其中一种刺激,相邻两天不能接受相同刺激。造模同时给药3周。对照组和模型组ig给予等体积的0.5%CMC-Na溶液,阳性药组ig给予10mg/kg的盐酸氟西汀片,白及须根中茋类化合物低、中、高剂量组分别ig给予50、100、200mg/kg白及须根中茋类化合物,每天1次。
(2)悬尾实验
当天灌胃给药1h后,将小鼠倒置,尾端2cm的部位贴在一根水平木棍上,使其头部距离台面约15cm。观察6min,记录后4min内小鼠的累积不动时间。不动时间的判定标准:小鼠被悬挂期间,无任何的活动,结果见表4,模型组与正常组比较小鼠悬尾不动时间显著增加(P<0.01),表明造模成功,同时阳性药组和白及须根中茋类化合物中、高剂量组均可显著降低小鼠悬尾不动时间,表明具有一定的抗抑郁作用。
(3)开野实验
当天灌胃给药1h后,将实验小鼠单独置于圆筒状的开野实验箱中(直径30cm,高20cm),笼子底部采用红线划分为36等份。每只小鼠在开始实验时均被置于中心位置,在安静的环境下进行此项实验观察,共观察4min,记录后2min内小鼠水平得分(穿格次数)、垂直得分(小鼠双前肢向上抬举次数)。结果见表4,模型组与正常组比较,小鼠水平得分和垂直得分均显著降低(P<0.01),表明造模成功,同时阳性药和白及须根中茋类化合物低、中、高剂量干预后,小鼠水平得分和垂直得分均显著增加,表明具有良好的抗抑郁作用。
(4)强迫游泳实验
末次给药1h后,将每只小鼠单独置于水深10cm,水温25℃的玻璃圆筒中(高20cm,直径14cm),小鼠初放入水中时剧烈挣扎,一段时间后,因绝望心理而导致活动减弱,表现为身体微曲,鼻孔露出水面,四肢不动呈漂浮状态。观察6min,记录小鼠在后4min内的累积不动时间。不动时间的判定标准:小鼠呈漂浮在水面的状态,没有明显的挣扎动作,仅作一些必须保持头部在水面、维持身体平衡的动作。结果表明(表4),白及须根中茋类化合物的中、高剂量组,游泳不动时间分均显著降低,表明具有良好的抗抑郁作用。
(5)糖水偏好实验
各组小鼠在慢性应激结束的第二天进行糖水偏好的测定。开始测定前各组小鼠禁水、禁食24h,然后给予1%(w/v)的蔗糖水溶液,蔗糖水溶液分别置于2个相同的饮水瓶中,24h后进行糖水偏好的测定。测定时将实验小鼠单笼饲养,2只相同的饮水瓶中分别装有普通饮用水和1%(w/v)蔗糖水溶液,称量记重,24h后再次称量记重。计算每只小鼠的普通饮用水和蔗糖水溶液的消耗量及糖水偏好率。
糖水偏好率(Sucrose Preference,SP)=蔗糖水溶液的消耗量(g)/总饮用水的消耗量(g)×100%。
结果表明:模型组小鼠糖水偏好率显著降低,白及须根中茋类化合物的中、高剂量干预后糖水偏好率显著增加。
表4白及须根中茋类成分对小鼠悬尾不动时间、开野实验、强迫游泳和糖水偏好实验的影响(n=10)
注:**与正常组比较P<0.01,与模型组比较#P<0.05,##P<0.01。
加入大蒜提取液,进行充分混合。(两者中和不但降低了气味,而且使得白及中的苦味得以大幅度降低,而且大蒜的辣味也不明显,大大增加了口感)。加入单甘酯的二乙酰酒石酸酯,白及中的黏性口感就会变得乳化,产生一种沙拉的感觉。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取:取白及须根粉碎后,然后加入亲水性溶剂提取,其中亲水性溶剂为30~95%的乙醇,过滤后将滤液合并,得提取液;
(2)上样液制备:对步骤(1)所得提取液进行浓缩,再加入生姜汁,充分振摇,混合均匀,作为上样液;
(3)纯化:将步骤(2)所得上样液,选择AB-8型大孔吸附树脂,静态吸附后依次用水和10%乙醇洗脱除杂,再用70%乙醇洗脱,洗脱溶剂乙醇的体积为4~5BV,干燥后得总茋类化合物。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的白及须根粉碎至100~120目细粉。
3.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的亲水性溶剂为5~20倍量体积浓度30~95%的乙醇,提取1~3次,每次1~3 h。
4.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的生姜汁加入量1~10%白及须根生药量。
5.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的浓缩为减压浓缩至浓度为0.2~0.8 g/ml。
6.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的上样液以0.3-0.6 BV/h 上样至大孔吸附树脂上;所述的静态吸附时间为2-5 h。
7.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的除杂试剂为3~4BV水和4~5BV10%乙醇。
8.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的洗脱是用4BV 70%乙醇洗脱,再收集70%乙醇洗脱液。
9.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法,其特征在于:所述的总茋类化合物为淡黄色粉末或浸膏。
10.根据权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物在制备抗抑郁药物中的用途。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910025205.8A CN109718332B (zh) | 2019-01-11 | 2019-01-11 | 一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910025205.8A CN109718332B (zh) | 2019-01-11 | 2019-01-11 | 一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109718332A CN109718332A (zh) | 2019-05-07 |
CN109718332B true CN109718332B (zh) | 2021-05-04 |
Family
ID=66298212
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910025205.8A Active CN109718332B (zh) | 2019-01-11 | 2019-01-11 | 一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109718332B (zh) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103505467A (zh) * | 2012-06-15 | 2014-01-15 | 昆明制药集团股份有限公司 | 一种茋类化合物在制备预防和治疗抑郁症药物中的用途 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7750167B2 (en) * | 2006-07-05 | 2010-07-06 | N.V. Organon | Process for the preparation of asenapine and intermediate products used in said process |
CN102557998A (zh) * | 2010-12-17 | 2012-07-11 | 东北林业大学 | 一种合成反式芪类化合物的方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用 |
-
2019
- 2019-01-11 CN CN201910025205.8A patent/CN109718332B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103505467A (zh) * | 2012-06-15 | 2014-01-15 | 昆明制药集团股份有限公司 | 一种茋类化合物在制备预防和治疗抑郁症药物中的用途 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
白及茋类化学成分及其抗人肺癌细胞A549活性研究;仰莲;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20170515(第5期);E057-111 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109718332A (zh) | 2019-05-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1236792C (zh) | 防治脑病和益智的脑活性作用物质及其制备方法 | |
CN101181317B (zh) | 马齿苋提取物及其制备方法和用途 | |
JP2020537683A (ja) | 苦味霊芝胞子粉及びその調製方法 | |
CN1349820A (zh) | 文冠果果壳提取物在制备提高脑功能食品和药品中的应用 | |
CN110283220B (zh) | 西红花苷-1的分离纯化方法及其应用 | |
CN105878803B (zh) | 一种具有防治酒精性肝损伤的人参竹叶组合物 | |
KR101282708B1 (ko) | MeJA 처리된 메밀새싹을 함유하는 항비만 또는 체지방감소용 조성물 | |
CN109718332B (zh) | 一种具有抗抑郁作用的白及须根中总茋类化合物的制备方法及其制药用途 | |
CN112439018A (zh) | 具有减肥降脂的组合物及其制备方法和应用 | |
CN111150754B (zh) | 板栗花提取物在制备食品或抗炎药物中的应用 | |
KR20130088783A (ko) | 다발성 경화증의 예방 또는 치료용 조성물 | |
CN101361932B (zh) | 青稞黄酮高含量提取物的制备方法及其在保健品中的应用 | |
CN101125154A (zh) | 泰山白首乌苷颗粒制剂及其制备方法 | |
CN1261111C (zh) | 一种治疗抑郁症口服药的制备方法 | |
CN109172757B (zh) | 一种润肠通便颗粒剂 | |
EA012065B1 (ru) | Способ получения экстракта из листьев плюща и полученный этим способом экстракт | |
CN110123859B (zh) | 具有防治肝损伤的菊叶提取物及其应用 | |
RU2452242C1 (ru) | Способ получения биологически активной пищевой добавки | |
CN112168848A (zh) | 一种海蓬子降血糖组分的制备方法及应用 | |
KR20200027308A (ko) | 침향공녹단의 제조방법 | |
CN110101732A (zh) | 具有改善肠道功能的菊茎叶多成分颗粒剂及其制备方法与应用 | |
CN1150839C (zh) | 一种具有调节血压、调节血脂作用的保健食品及其制备方法 | |
CN109528819B (zh) | 香青兰提取物在制备降尿酸药物中的用途 | |
CN109223739A (zh) | 一种组合物及其制备方法和应用 | |
RU2783234C1 (ru) | Биологически активная добавка на основе экстрактов растительного сырья |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |