CN109673544B - 昆明裂腹鱼人工繁殖技术 - Google Patents
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Abstract
本发明提供昆明裂腹鱼人工繁殖技术，属于淡水鱼繁殖技术领域，包括亲鱼驯养，亲鱼选择，催产，人工授精，鱼卵孵化，鱼苗饲养，同时还提供一种亲鱼驯养用配合饲料，该配合饲料中含有在酸性环境中制备的抗性淀粉；上述抗性淀粉制备步骤如下：提供淀粉与一种水溶性有机酸溶液、6‑氯代烟酸和1,3‑二甲基脲接触后，在干燥空气中加热反应，洗涤，干燥即得。本发明提供的人工繁殖技术过程稳定可控，生产成本低，亲鱼驯养成功率高且生产损害小，受精率和孵化率高，鱼苗畸形率低，药物利用率高；配合饲料具有优良溶胀度和缓释性，消化转化速率和生物有效利用率高，能增益亲鱼性腺成熟和繁殖能力，提高精液和卵粒质量，减少胚胎发育畸形率。
Description
技术领域
本发明属于淡水鱼繁殖技术领域，具体涉及昆明裂腹鱼人工繁殖技术。
背景技术
昆明裂腹鱼，又称细鳞鱼，在分类上隶属鲤形目、裂腹鱼亚科，是我国特有的高原鱼类，该鱼是以植物性饵料为主的杂食性鱼类，具有食物性广、肉质细嫩、味道鲜美等特点，对其进行研究和保护的意义重大。昆明裂腹鱼具有抗病率强、含肉率高、肌肉营养成分含量丰富等特点，其肉质细嫩，味道鲜美，蛋白质含量高，脂肪含量低，富含多种不胞和脂肪酸。昆明裂腹鱼主要分布于贵州的乌江上游支流以及北盘江上游支流，是一种较大型的经济鱼类，也是乌江上游野生鱼类产量最大的一个类群。
目前裂腹鱼市场价是传统产品的10倍以上，市场前景可观，经济效益丰厚，投资回报率高。但由于酷渔滥捕，及外来物种大量吞食其鱼卵，造成资源破坏极其严重，目前已濒临灭绝，人工繁殖裂腹鱼已成为一种必然趋势。昆明裂腹鱼实现人工繁殖，在实现昆明裂腹鱼的规模化养殖、产业化经营、提供充足鱼苗鱼种、实现人工增殖放流、保护地方鱼类资源等方面，都具有积极作用和重要意义。
国内对裂腹鱼类的人工繁殖的研究，多是直接从天然河流中采集性成熟的野生裂腹鱼进行人工繁殖试验。直接从天然河流中采集性成熟的野生裂腹鱼进行人工繁殖存在以下问题：1、由于江河污染、水利工程建设、酷鱼滥捕等原因，致使该鱼类的野生资源量急剧减少，渔获物趋于低龄化、小型化和低质化，性成熟的鱼难以找到，限制了研究材料的来源；2、从天然河流中采集的野生裂腹鱼除难以找到性成熟的鱼外，要同时找到成熟的雌鱼和成熟的雄鱼就更难；3、由于捕捞野生性成熟的鱼有限，繁殖的鱼苗也有限，养殖的规模和数量也受到限制。因此对昆明裂腹鱼这一稀有品种进行人工繁殖技术的研究，具有重要意义。
虽然淡水鱼类人工繁殖技术具有悠久的历史，但仍未解决野生鱼类从野生环境进入塘养环境后所出现的一系列问题，这些问题中首当其冲的当属生殖功能紊乱，塘养环境下很难观察到许多珍稀鱼类产卵前相互发情追逐和自然产卵的现象，因此野生珍稀鱼类在塘养环境下很难实现自我繁衍。而对于许多鱼类而言，不可能完全模仿鱼类繁殖季节的生态环境，因此，本发明中人工繁殖技术是利用野生昆明裂腹鱼通过人工驯化饲养后，注射高效鱼类催产剂诱导鱼类产卵产精，最终使受精卵孵化成苗，经过多项技术组合形成的昆明裂腹鱼人工繁殖技术，其中催产剂的使用在很大程度上解决了鱼类人工繁殖的问题，可使鱼类产卵产精并能正常受精，获得正常后代。
发明内容
本发明的目的在于提供一种过程稳定可控、生产成本低、亲鱼驯养成功率高且生产损害小、受精率和孵化率高、鱼苗畸形率低、药物利用率高的昆明裂腹鱼人工繁殖技术。
本发明的目的还在于提供一种具有优良溶胀度和缓释性、消化转化速率和生物有效利用率高、能促进亲鱼性腺成熟、提升亲鱼繁殖力、提高精液和卵粒质量、减少胚胎发育畸形率的昆明裂腹鱼驯养用配合饲料。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种昆明裂腹鱼驯养用配合饲料，该配合饲料中含有在酸性环境中制备的、取代度为0.18～0.21的抗性淀粉；上述抗性淀粉的制备方法包含以下步骤：
a，提供淀粉；
b，基于淀粉的重量，提供22～27wt％的一种水溶性有机酸溶液；
c，基于淀粉的重量，提供0.5～1.1wt％的6-氯代烟酸和0.3～0.7wt％的1,3-二甲基脲；
d，使淀粉与步骤b、c中的物质接触后，在干燥空气中加热反应后，洗涤，干燥即得。该配合饲料中加入抗性淀粉，可在机体内发酵产生更易被吸收的短链脂肪酸，降低胆固醇水平，还可促进肠道内有益菌群的生长和繁殖，优化菌群结构，并降低肠道pH值，促进钙、镁离子的吸收，从而抑制腐生菌的生长，达到促进机体生长发育、维护机体健康的效果。
作为优选，淀粉选自甘薯淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉或玉米淀粉，最优选的，选择甘薯淀粉。
作为优选，水溶性有机酸溶液的质量浓度为50～55％，pH为1～2。
作为优选，加热反应温度为135～145℃，反应时间为3～3.5h，干燥温度为55～60℃，时间为20～30min。
进一步优选，抗性淀粉的具体制备步骤如下：取水溶性有机酸柠檬酸加水配制成质量浓度为50～55％的溶液，通过加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至1～2，然后按比例向柠檬酸溶液中加入6-氯代烟酸、1,3-二甲基脲和甘薯淀粉，充分混匀，室温下放置13～14h，然后将上述混合体系置于温度为135～145℃的烘箱中，加热反应3～3.5h后取出，用蒸馏水抽滤洗涤2～3次，再置于温度为55～60℃的干燥箱中烘干20～30min，粉碎过筛即得。在加热反应中，淀粉由长链变为短链，并与柠檬酸脱水形成的酸酐发生酯化交联作用，柠檬酸溶液中的6-氯化烟酸和1,3-二甲基脲则可以在高温中利用氨基、羰基和羧基的键间作用力结合在一起，并插入抗性淀粉引入的柠檬酸酰基的结晶结构之间，使得抗性淀粉颗粒内部的键合作用减弱，从而增加抗性淀粉颗粒的溶胀度，使得配合饲料在机体内具有缓释性，也使得抗性淀粉发酵细菌更易进入抗性淀粉分子内部，转化为短链脂肪酸的速率因此增加，也提高了生物有效利用率。
作为优选，抗性淀粉在配合饲料中的重量占比为5～10％。
进一步优选，配合饲料还包含以下重量份的原料：3～7份虾粉、7～9份鸡肉粉、鱿鱼膏3～5份、鱼油4～5份、大豆磷脂2～3份、磷酸二氢钙1～1.5份、氯化胆碱0.3～0.5份、维生素及矿物元素预混料1～2份、紫河车2～3份、保肝利胆素0.03～0.06份。该配合饲料中富含蛋白质和脂质，尤其是针对亲鱼在性腺发育成熟过程中需求大量蛋白质和脂质的特点，进行合理配比，增强肝组织中胆固醇的代谢，增加短链脂肪酸的含量，促进亲鱼的性成熟发育，保证亲鱼性腺发育成熟，提升亲鱼的繁殖力，提高精液和卵粒的质量，从而减少胚胎发生畸形化的几率。
本发明还公开了一种使用上述配合饲料的昆明裂腹鱼人工繁殖技术，包括亲鱼驯养，亲鱼选择，催产，人工授精，鱼卵孵化，鱼苗饲养，其中催产步骤中采用己酮可可碱、咖啡因和羟苯磺酸钙作为催产助剂。催产助剂可以促进亲鱼血管扩张，缩短了催产药物及垂体分泌的促性腺激素作用于靶器官的时间，加速了药物效能的发挥，缩短了效应时间，提高催产效果，同时也添加能量物质、镇定剂可减少了挤卵过程中对亲鱼的损伤，加速了产后亲鱼的康复，预防产后综合症，提高了产后亲鱼成活率。
作为优选，催产助剂分两次注射，时间间隔为49～54h，第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，第二次注射剂量为33～35mg/kg；催产助剂中各原料的重量份如下：己酮可可碱1～2份、羟苯磺酸钙1.5～2.5份和咖啡因0.03～0.05份。
作为优选，亲鱼驯养步骤为：将消毒后的亲鱼放入驯养池中，并在池上加盖黑色遮光网，每天除投喂天然饵料外，投喂配合饲料2～3次，控制池内的水流速度为30～35m/min，水质透明度为110～115cm，溶解氧含量为6.9～7.8mg/L，pH为6.0～7.5，渗透压为2.7～4.9mOsm/L，池水温度为12～19℃。在驯养期间使用配合饲料可以增加野生鱼的驯养成活率，同时促进鱼体的生长发育，尤其是促进亲鱼的性腺发育成熟化，繁殖能力增加，能提供更多、更优质的受精卵。
作为优选，亲鱼选择步骤为：选取驯养池中形态正常、生长良好、无疾病的雌雄亲鱼，待繁殖季节前2～3个月，每周在驯养池中拉网检查一次亲鱼的性成熟情况，以便适时进行催产，检查方法：将成熟的雌鱼鱼体向上，稍露水面，两侧明显看到卵巢轮廓，用手轻压腹部，柔软富有弹性，雄鱼“珠星”明显，并有很强的粗糙感，鱼体腹部向上，轻压腹部两侧，有乳白色的浓稠精液流出，遇水迅速散开者为最好。
作为优选，催产步骤为：选出性成熟的雌鱼在其胸鳍基部同时注射催产剂和催产助剂，分两次注射，第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，两次注射时间间隔为49～54h，雄鱼催产剂用量为雌鱼的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂。
进一步优选，催产剂选自鱼用PG、LRH、HCG、DOM中的至少两种，各催产剂第二次注射剂量分别为PG7～8mg/kg、LRH18～23μg/kg、HCG1600～2200单位/kg、DOM13～16mg/kg。
作为优选，人工授精步骤为：从驯养池中挑选出性成熟的亲鱼进行人工授精，将鱼体上的水分擦掉后，采用轻压腹部法，使成熟的精液和卵粒流入干净容器中，并用羽毛搅拌精卵混合物25～35s后，再静置1～2min，然后用渗透压为285～305mOsm/L、温度为15～20℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物后，加入浓度为26～30％的滑石粉悬浮液进行脱粘处理，然后将精卵混合物放置于孵化缸中。
进一步优选，完成产卵排精的亲鱼放回驯养池后，向配合饲料中添加8～9重量份的中药组合物后再进行投喂。上述中药组合物的制备如下：按重量份取3～4份当归、2～3份桃仁、1～2份红花、4～6份益母草、2～4份灸甘草、2～3份连翘、1～3份败酱草、2～5份枳壳、2～3份厚朴、2～5份生地、3～4份玄参、2～3份麦冬分别粉碎至80～100目后混匀，加入0.5～0.8倍量的蒸馏水，加热至85～95℃，在压力0.12～0.22MPa、速度30～40m/min的条件下研磨60～120min，即得。采用机械研磨对中药组合物中各原料起到了活化的效果，在研磨过程中，颗粒内部发生一系列变形行为、内部组织结构变化和热效应，最大化释放药性，产生的组合物可以滋阴养血、活血化瘀、清热解毒、理气通下，改善亲鱼产后机体的微循环，增强体质，尤其是促进雌鱼子宫收缩，促进肠胃功能，恢复及预防产后感染，增加亲鱼产后的成活率。
作为优选，鱼卵孵化步骤为：将精卵混合物放置于孵化缸中，孵化缸采用长50cm×宽40cm×高40cm的钢化玻璃缸，每缸放精卵4500～5000粒，注入清水，水面在鱼卵上方5～7cm，孵化缸内无强光源照射，孵化期间水温保持为10～22℃，水流速度为3～5m/s，pH为6.5～7.5，溶解氧含量为6.5～7.9mg/L，渗透压为2.7～3.8mOsm/L。
作为优选，鱼苗饲养步骤为：待初孵鱼苗经7～8d培育后，用蛋黄和红线虫作混合营养期鱼苗开口饵料，搅碎后投喂，日投喂量为11～13ml/m2，每日投喂3～4次；出膜19～21d后转入鱼苗培育池培育，投喂鲤鱼幼鱼配合饲料，日投喂量为鱼苗体重的8～10％；待鱼苗体重增长为30g/尾后，投喂江团育成料，日投喂量为鱼苗体重的6～8％。
本发明的有益效果为：
1)本发明中在裂腹鱼进行亲鱼驯养时，采用了含有抗性淀粉的配合饲料，针对亲鱼在性腺发育成熟过程中的需求，进行合理配比，具有优良的溶胀度和缓释性，消化转化速率和生物有效利用率高，能有效促进亲鱼的性成熟发育，保证亲鱼性腺发育成熟，提升亲鱼的繁殖力，提高精液和卵粒的质量，减少胚胎发生畸形化的几率；
2)本发明中裂腹鱼亲鱼驯养的成功，从根本上解决了塘养环境下野生鱼类雌雄不发育或发育不同步的问题，提高驯养成功率的同时，对亲鱼的繁殖能力也有所增益，为裂腹鱼的繁育创造了有利条件；
3)本发明中催产剂和催产助剂的配合使用，减少了对裂腹鱼亲鱼的损害，可获得较高的受精率和孵化率，减少了鱼卵资源的浪费，也降低了养殖时间成本，操作更为简便快捷；
4)本发明中人工授精后的饲养、鱼卵孵化和鱼苗饲养是根据裂腹鱼亲鱼及鱼苗的生长特点而设计，不仅使得药物利用率达到最佳，降低了药物使用量和成本，同时提高了亲鱼产后的恢复和健康，增加其存活率，进而降低了繁殖成本。
本发明采用了上述技术方案提供昆明裂腹鱼人工繁殖技术，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种昆明裂腹鱼驯养用配合饲料，该配合饲料中含有在酸性环境中制备的抗性淀粉；上述抗性淀粉的制备方法包含以下步骤：
a，提供淀粉；
b，基于淀粉的重量，提供23wt％的一种水溶性有机酸溶液；
c，基于淀粉的重量，提供0.75wt％的6-氯代烟酸和0.43wt％的1,3-二甲基脲；
d，使淀粉与步骤b、c中的物质接触后，在干燥空气中加热反应后，洗涤，干燥即得。该配合饲料中加入抗性淀粉，可在机体内发酵产生更易被吸收的短链脂肪酸，降低胆固醇水平，还可促进肠道内有益菌群的生长和繁殖，优化菌群结构，并降低肠道pH值，促进钙、镁离子的吸收，从而抑制腐生菌的生长，达到促进机体生长发育、维护机体健康的效果。
抗性淀粉的具体制备步骤如下：取水溶性有机酸柠檬酸加水配制成质量浓度为52％的溶液，通过加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至2，然后按比例向柠檬酸溶液中加入6-氯代烟酸、1,3-二甲基脲和甘薯淀粉，充分混匀，室温下放置13h，然后将上述混合体系置于温度为135℃的烘箱中，加热反应3h后取出，用蒸馏水抽滤洗涤2次，再置于温度为55℃的干燥箱中烘干20min，粉碎过筛即得。在加热反应中，淀粉由长链变为短链，并与柠檬酸脱水形成的酸酐发生酯化交联作用，柠檬酸溶液中的6-氯化烟酸和1,3-二甲基脲则可以在高温中利用氨基、羰基和羧基的键间作用力结合在一起，并插入抗性淀粉引入的柠檬酸酰基的结晶结构之间，使得抗性淀粉颗粒内部的键合作用减弱，从而增加抗性淀粉颗粒的溶胀度，使得配合饲料在机体内具有缓释性，也使得抗性淀粉发酵细菌更易进入抗性淀粉分子内部，转化为短链脂肪酸的速率因此增加，也提高了生物有效利用率。
抗性淀粉在配合饲料中的重量占比为7％。
配合饲料还包含以下重量份的原料：4份虾粉、7份鸡肉粉、鱿鱼膏3份、鱼油4份、大豆磷脂3份、磷酸二氢钙1.5份、氯化胆碱0.3份、维生素及矿物元素预混料1份、紫河车2份、保肝利胆素0.04份。该配合饲料中富含蛋白质和脂质，尤其是针对亲鱼在性腺发育成熟过程中需求大量蛋白质和脂质的特点，进行合理配比，增强肝组织中胆固醇的代谢，增加短链脂肪酸的含量，促进亲鱼的性成熟发育，保证亲鱼性腺发育成熟，提升亲鱼的繁殖力，提高精液和卵粒的质量，从而减少胚胎发生畸形化的几率。
一种使用上述配合饲料的昆明裂腹鱼人工繁殖技术，包括亲鱼驯养，亲鱼选择，催产，人工授精，鱼卵孵化，鱼苗饲养，其中催产步骤中采用己酮可可碱、咖啡因和羟苯磺酸钙作为催产助剂。催产助剂可以促进亲鱼血管扩张，缩短了催产药物及垂体分泌的促性腺激素作用于靶器官的时间，加速了药物效能的发挥，缩短了效应时间，提高催产效果，同时也添加能量物质、镇定剂可减少了挤卵过程中对亲鱼的损伤，加速了产后亲鱼的康复，预防产后综合症，提高了产后亲鱼成活率。
催产助剂分两次注射，时间间隔为49h，第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，第二次注射剂量为33mg/kg；催产助剂中各原料的重量份如下：己酮可可碱1份、羟苯磺酸钙1.8份和咖啡因0.03份。
亲鱼驯养步骤为：将消毒后的亲鱼放入驯养池中，并在池上加盖黑色遮光网，每天除投喂天然饵料外，投喂配合饲料2次，控制池内的水流速度为30m/min，水质透明度为110cm，溶解氧含量为7.2mg/L，pH为6.5，渗透压为3.4mOsm/L，池水温度为14℃。在驯养期间使用配合饲料可以增加野生鱼的驯养成活率，同时促进鱼体的生长发育，尤其是促进亲鱼的性腺发育成熟化，繁殖能力增加，能提供更多、更优质的受精卵。
亲鱼选择步骤为：选取驯养池中形态正常、生长良好、无疾病的雌雄亲鱼，待繁殖季节前2～3个月，每周在驯养池中拉网检查一次亲鱼的性成熟情况，以便适时进行催产，检查方法：将成熟的雌鱼鱼体向上，稍露水面，两侧明显看到卵巢轮廓，用手轻压腹部，柔软富有弹性，雄鱼“珠星”明显，并有很强的粗糙感，鱼体腹部向上，轻压腹部两侧，有乳白色的浓稠精液流出，遇水迅速散开者为最好。
催产步骤为：选出性成熟的雌鱼在其胸鳍基部同时注射催产剂和催产助剂，分两次注射，第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，两次注射时间间隔为49h，雄鱼催产剂用量为雌鱼的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂。
催产剂选自鱼用PG和DOM，各催产剂第二次注射剂量分别为PG7mg/kg、DOM14mg/kg。
人工授精步骤为：从驯养池中挑选出性成熟的亲鱼进行人工授精，将鱼体上的水分擦掉后，采用轻压腹部法，使成熟的精液和卵粒流入干净容器中，并用羽毛搅拌精卵混合物25s后，再静置1min，然后用渗透压为290mOsm/L、温度为15℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物后，加入浓度为26％的滑石粉悬浮液进行脱粘处理，然后将精卵混合物放置于孵化缸中。
完成产卵排精的亲鱼放回驯养池后，向配合饲料中添加8重量份的中药组合物后再进行投喂。上述中药组合物的制备如下：按重量份取3份当归、2份桃仁、2份红花、6份益母草、2份灸甘草、2份连翘、3份败酱草、5份枳壳、2份厚朴、2份生地、4份玄参、3份麦冬分别粉碎至80目后混匀，加入0.5倍量的蒸馏水，加热至85℃，在压力0.15MPa、速度30m/min的条件下研磨60min，即得。采用机械研磨对中药组合物中各原料起到了活化的效果，在研磨过程中，颗粒内部发生一系列变形行为、内部组织结构变化和热效应，最大化释放药性，产生的组合物可以滋阴养血、活血化瘀、清热解毒、理气通下，改善亲鱼产后机体的微循环，增强体质，尤其是促进雌鱼子宫收缩，促进肠胃功能，恢复及预防产后感染，增加亲鱼产后的成活率。
鱼卵孵化步骤为：将精卵混合物放置于孵化缸中，孵化缸采用长50cm×宽40cm×高40cm的钢化玻璃缸，每缸放精卵4500粒，注入清水，水面在鱼卵上方5cm，孵化缸内无强光源照射，孵化期间水温保持为12℃，水流速度为3m/s，pH为6.5，溶解氧含量为6.8mg/L，渗透压为2.9mOsm/L。
鱼苗饲养步骤为：待初孵鱼苗经7d培育后，用蛋黄和红线虫作混合营养期鱼苗开口饵料，搅碎后投喂，日投喂量为11ml/m2，每日投喂3次；出膜19d后转入鱼苗培育池培育，投喂鲤鱼幼鱼配合饲料，日投喂量为鱼苗体重的8.5％；待鱼苗体重增长为30g/尾后，投喂江团育成料，日投喂量为鱼苗体重的6.5％。
实施例2：
一种昆明裂腹鱼人工繁殖技术，包括亲鱼驯养，亲鱼选择，催产，人工授精，鱼卵孵化，鱼苗饲养，具体步骤如下：
1)亲鱼驯养：将消毒后的亲鱼放入驯养池中，并在池上加盖黑色遮光网，每天除投喂天然饵料外，投喂配合饲料3次，控制池内的水流速度为33m/min，水质透明度为115cm，溶解氧含量为7.6mg/L，pH为7.5，渗透压为4.5mOsm/L，池水温度为17℃；
2)亲鱼选择：选取驯养池中形态正常、生长良好、无疾病的雌雄亲鱼，待繁殖季节前2～3个月，每周在驯养池中拉网检查一次亲鱼的性成熟情况，以便适时进行催产，检查方法：将成熟的雌鱼鱼体向上，稍露水面，两侧明显看到卵巢轮廓，用手轻压腹部，柔软富有弹性，雄鱼“珠星”明显，并有很强的粗糙感，鱼体腹部向上，轻压腹部两侧，有乳白色的浓稠精液流出，遇水迅速散开者为最好；
3)催产：选出性成熟的雌鱼在其胸鳍基部同时注射催产剂和催产助剂，分两次注射，第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，两次注射时间间隔为52h，雄鱼催产剂用量为雌鱼的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂，催产剂选自鱼用PG、LRH和DOM，各催产剂第二次注射剂量分别为PG7mg/kg、LRH21μg/kg、DOM14mg/kg，催产助剂采用己酮可可碱、咖啡因和羟苯磺酸钙，催产助剂第二次注射剂量为35mg/kg，催产助剂中各原料的重量份如下：己酮可可碱1.5份、羟苯磺酸钙2.2份和咖啡因0.05份；
4)人工授精：从驯养池中挑选出性成熟的亲鱼进行人工授精，将鱼体上的水分擦掉后，采用轻压腹部法，使成熟的精液和卵粒流入干净容器中，并用羽毛搅拌精卵混合物35s后，再静置2min，然后用渗透压为300mOsm/L、温度为18℃的生理盐水轻轻冲洗精卵混合物后，加入浓度为28％的滑石粉悬浮液进行脱粘处理，然后将精卵混合物放置于孵化缸中；
5)鱼卵孵化：将精卵混合物放置于孵化缸中，孵化缸采用长50cm×宽40cm×高40cm的钢化玻璃缸，每缸放精卵5000粒，注入清水，水面在鱼卵上方7cm，孵化缸内无强光源照射，孵化期间水温保持为18℃，水流速度为5m/s，pH为7.0，溶解氧含量为7.3mg/L，渗透压为3.5mOsm/L；
6)鱼苗饲养：待初孵鱼苗经8d培育后，用蛋黄和红线虫作混合营养期鱼苗开口饵料，搅碎后投喂，日投喂量为13ml/m2，每日投喂4次；出膜21d后转入鱼苗培育池培育，投喂鲤鱼幼鱼配合饲料，日投喂量为鱼苗体重的9.5％；待鱼苗体重增长为30g/尾后，投喂江团育成料，日投喂量为鱼苗体重的7.5％。
上述亲鱼驯养步骤中所用配合饲料包含以下重量份的原料：6份虾粉、8份鸡肉粉、鱿鱼膏5份、鱼油5份、大豆磷脂3份、磷酸二氢钙1份、氯化胆碱0.5份、维生素及矿物元素预混料2份、紫河车3份、保肝利胆素0.06份，该配合饲料中还包含重量占比为8.5％的抗性淀粉。
上述抗性淀粉的具体制备步骤如下：取水溶性有机酸柠檬酸加水配制成质量浓度为54％的溶液，通过加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至1.5，然后向甘薯淀粉中加入占淀粉重量26wt％的柠檬酸溶液，再加入占淀粉重量0.9wt％的6-氯代烟酸和0.55wt％的1,3-二甲基脲，充分混匀，室温下放置14h，然后将上述混合体系置于温度为145℃的烘箱中，加热反应3.5h后取出，用蒸馏水抽滤洗涤3次，再置于温度为60℃的干燥箱中烘干25min，粉碎过筛即得。
上述人工授精步骤中，完成产卵排精的亲鱼放回驯养池后，向配合饲料中添加9重量份的中药组合物后再进行投喂。上述中药组合物的制备如下：按重量份取4份当归、3份桃仁、1.5份红花、5份益母草、3份灸甘草、3份连翘、2份败酱草、3份枳壳、3份厚朴、5份生地、3份玄参、3份麦冬分别粉碎至100目后混匀，加入0.8倍量的蒸馏水，加热至95℃，在压力0.20MPa、速度40m/min的条件下研磨90min，即得。
实施例3：
一种昆明裂腹鱼人工繁殖技术，包括亲鱼驯养，亲鱼选择，催产，人工授精，鱼卵孵化，鱼苗饲养，其中对人工授精步骤进一步优化，具体步骤如下：将完成产卵排精的亲鱼放回驯养池后，向配合饲料中添加9重量份的中药组合物后再进行投喂。上述中药组合物的制备如下：按重量份取4份当归、3份桃仁、1.5份红花、5份益母草、3份灸甘草、3份连翘、2份败酱草、3份枳壳、3份厚朴、5份生地、3份玄参、3份麦冬分别粉碎至100目后混匀，加入0.8倍量的蒸馏水，蒸馏水中含有0.035mM的对羟基苯乙酸和0.047mM的3-甲基戊二醛，然后将体系加热至95℃，在压力0.20MPa、速度40m/min的条件下研磨90min，即得。对羟基苯乙酸和3-甲基戊二醛利用研磨的机械活化能，快速渗透进植物细胞壁上的纹孔中，并破坏从纹孔中穿过的胞间连丝，将细胞间的物质运输打断，从而破坏整个细胞结构的完整性，进而将细胞中的各种分子彻底释放出来，使得中药组合物的药效达到最佳，增大了原料利用率，也降低了药物使用量和成本。
本实施例是在实施例2的基础上进行优化，其他原料及步骤与实施例2中一致，进行昆明裂腹鱼人工繁殖。
实施例4：
一种昆明裂腹鱼人工繁殖技术，包括亲鱼驯养，亲鱼选择，催产，人工授精，鱼卵孵化，鱼苗饲养，其中亲鱼驯养步骤中所用配合饲料中还包含重量占比为8.5％的抗性淀粉，上述抗性淀粉的具体制备步骤如下：取水溶性有机酸柠檬酸加水配制成质量浓度为54％的溶液，通过加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至1.5，然后向甘薯淀粉中加入占淀粉重量26wt％的柠檬酸溶液，再加入占淀粉重量0wt％的6-氯代烟酸和0wt％的1,3-二甲基脲，充分混匀，室温下放置14h，然后将上述混合体系置于温度为145℃的烘箱中，加热反应3.5h后取出，用蒸馏水抽滤洗涤3次，再置于温度为60℃的干燥箱中烘干25min，粉碎过筛即得，即制备过程中未添加6-氯代烟酸和1,3-二甲基脲。
本实施例是在实施例2的基础上进行对比试验，其他原料及步骤与实施例2中一致，进行昆明裂腹鱼人工繁殖。
实施例5：
抗性淀粉性能测定
取代度测定采用酸碱滴定法，具体测定方法如下：称取制得的抗性淀粉样品5g(即为W1)，加入50ml蒸馏水混匀，滴入3滴1％酚酞指示剂，然后用0.1mol/L的氢氧化钠滴定至微红色不消失为终点，再加入25ml 0.5mol/L的氢氧化钠标准溶液，机械震荡30min，进行皂化作用，再将皂化过的溶液用0.5mol/L的盐酸标准溶液滴定至粉红色消失为终点，所用盐酸溶液的体积为V1(ml)。
A＝(V2/W2-V1/W1)×M×0.158×100
DS＝162A/15800-156A
式中：A为样品中柠檬酸酰基质量分数，％；M为盐酸标准溶液浓度，0.5mol/L；162为淀粉相对分子质量；W2为纯甘薯淀粉样品质量，5g；V2为纯甘薯淀粉测定用去的盐酸标准溶液的体积，23ml。
按照上述酸碱测定法，取实施例1、2、4所制得的抗性淀粉分别进行了取代度测定、反应效率及抗性含量的测定，其具体结果如下表1。
表1抗性淀粉性能测试
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例4 | |
| 取代度 | 0.1847 | 0.2011 | 0.1639 |
| 反应效率％ | 40.22 | 41.13 | 39.55 |
| 抗性含量％ | 71.1 | 73.8 | 65.3 |
由上表可知，实施例1和2中所制得抗性淀粉中柠檬酸的取代度、反应效率和抗性含量都明显高于实施例4所制抗性淀粉，取代度和抗性含量正相关，而与反应效率应该负相关，但由于实施例1和2在制备过程中添加有6-氯代烟酸和1,3-二甲基脲，两者对反应效率有促进作用，使得反应效率有所增益，制得品质更优的抗性淀粉。
实施例6：
昆明裂腹鱼人工繁殖试验
在某昆明裂腹鱼繁殖生产基地，以实施例1～4中的人工繁殖技术为试验组1～4，以某市售鲤鱼饲料作驯养期及产后恢复期饲料为对照组，选取雌鱼75尾，雄鱼150尾，平均分为5组，分别用上述试验组和对照组的方法进行人工繁殖。鱼苗培育期间禁用消毒剂，使用硝化细菌调节水质，直至所有受精卵完成孵化，试验结果如下表2、3。
表2昆明裂腹鱼驯养情况
表3昆明裂腹鱼人工繁殖情况
| 试验组1 | 试验组2 | 试验组3 | 试验组4 | 对照组 | |
| 投放雌鱼/尾 | 13 | 13 | 13 | 13 | 13 |
| 产卵数/粒 | 17563 | 17854 | 18065 | 16121 | 13558 |
| 受精卵/粒 | 15626 | 15895 | 16389 | 14236 | 11335 |
| 产卵亲鱼/尾 | 10 | 11 | 11 | 10 | 9 |
| 催产率/％ | 76.9 | 84.6 | 84.6 | 76.9 | 69.2 |
| 受精率/％ | 89.0 | 89.0 | 90.7 | 88.3 | 83.6 |
| 孵化率/％ | 85.75 | 85.68 | 86.59 | 87.25 | 82.81 |
| 畸形率/％ | 10.8 | 10.4 | 10.1 | 12.1 | 16.5 |
| 亲鱼产后成活率/％ | 80.0 | 81.8 | 90.9 | 80.0 | 66.7 |
由上表2可知，实施例中所制得配合饲料较普通市售的饲料效果驯养更好，驯养成活率更高，有效地解决了野生鱼难驯养的问题，也降低了生产成本。由表3可知，实施例中所制得配合饲料能促进亲鱼的性成熟发育，提升亲鱼的繁殖力，提高精液和卵粒的质量，受精卵的孵化率明显升高，胚胎发生畸形化的几率也显著减少，并且由于在亲鱼产卵排精后的配合饲料中添加了针对性的中药组合物，使得亲鱼产后的成活率也大大增加，进一步降低了生产成本。
由试验结果分析可知，本发明中所提供的昆明裂腹鱼人工繁殖技术，通过人工化控制操作，使得繁殖过程稳定可控，简便高效，能提高野生鱼的驯养成功率，同时对亲鱼的繁殖能力也有所增益，可获得较高的受精率和孵化率，减少了鱼卵资源的浪费，有效减少了胚胎发育的畸形率，增加了鱼苗的存活率，也降低了养殖成本。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (1)
1.一种昆明裂腹鱼驯养用配合饲料，其特征在于：配合饲料中含有在酸性环境中制备、取代度为0.18~0.21的抗性淀粉；所述抗性淀粉的制备方法包含以下步骤：
a，提供淀粉；
b，基于淀粉的重量，提供22~27wt%的一种水溶性有机酸溶液；所述水溶性有机酸溶液的质量浓度为50~55%，pH为1~2；
c，基于淀粉的重量，提供0.5~1.1wt%的6-氯代烟酸和0.3~0.7wt%的1,3-二甲基脲；
d，使淀粉与步骤b、c中的物质接触后，在干燥空气中加热反应后，洗涤，干燥即得；
所述加热反应温度为135~145℃，反应时间为3~3.5h；所述干燥温度为55~60℃，时间为20~30min；
所述抗性淀粉在配合饲料中的重量占比为5~10%。
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