CN116983387B - 一种中华刀鲇催产用试剂盒及中华刀鲇的人工繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种中华刀鲇催产用试剂盒,其特征在于:包括催产试剂、中药提取物试剂;所述催产试剂包括绒毛膜促性腺激素HCG 250~400IU/kg、促黄体素释放激素类似物LHRH‑A2 5~10μg/kg、地血平4~8mg/kg;所述中药提取物试剂包括中药提取物60~90mg/kg,所述中药提取物的中药原料包括黑枸杞、白芍、山药、当归中的至少两种。本发明中,将中药提取物作为催产助剂与绒毛膜促性腺激素HCG、促黄体素释放激素类似物LHRH‑A2、地血平搭配使用,可以有效促进亲鱼对这几种催产素的吸收,提高中华刀鲇的催产质量和效率。
Description
技术领域
本发明属于鱼类养殖技术领域,具体涉及一种中华刀鲇催产用试剂盒及中华刀鲇的人工繁殖方法。
背景技术
中华刀鲇是澜沧江下游鱼类代表物种,为产地的重要经济鱼类。由于澜沧江干流大规模水电开发及人为滥捕,中华刀鲇栖息环境遭到破坏,种群繁衍受到干扰,种群数量持续降低,目前主要见于景洪以下澜沧江干流及支流补远江。同时,中华刀鲇为短距生殖洄游鱼类,虽已有部分研究对中华刀鲇的繁殖生物学进行了探讨,但实际应用于人工繁殖研究方面的资料仍不够充分。市面上有较多种类的催产剂是针对草鱼、鲤、鲫、鲂、鳊等鱼类,而针对于中华刀鲇的催产剂较少,因此,开发出一种针对中华刀鲇的催产试剂或催产试剂盒,以及研究出一种中华刀鲇的人工繁殖方法,对促进中华鲱鲇的人工繁殖及种质资源保护具有重大的意义。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题与不足,本发明提供一种中华刀鲇催产用试剂盒及中华刀鲇的人工养殖方法,以促进中华刀鲇的卵巢或精巢发育,提高卵子和精子质量,提高受精率和孵化率。
根据本发明的第一个方面,提供一种中华刀鲇催产用试剂盒,包括催产试剂、中药提取物试剂;催产试剂包括绒毛膜促性腺激素HCG 250~400IU/kg、促黄体素释放激素类似物LHRH-A2 5~10μg/kg、地血平4~8mg/kg;中药提取物试剂包括中药提取物60~90mg/kg;中药提取物的中药原料包括黑枸杞、白芍、山药、当归中的至少两种。
本发明中,将中药提取物作为催产助剂与绒毛膜促性腺激素HCG、促黄体素释放激素类似物LHRH-A2、地血平搭配使用,可以有效促进亲鱼对这几种催产素的吸收,提高中华刀鲇的催产质量和效率。造成上述结果的原因可能在于,上述几种中药原料制备得到的中药提取物有利于调节鱼体各项生理功能的平衡,特别是胃肠道的微生态平衡,有利于促进鱼体对催产试剂的吸收,促进性腺的发育,且鱼体各项生理功能以及胃肠道的微生态平衡可以促进鱼体的营养吸收,提高鱼体的健康状态,进一步促进性腺的健康发育,提高亲鱼卵子和精子的质量以及数量,从而提高亲鱼的人工繁殖成功率和效率。
优选地,在制备中药提取物时,中药原料与溶剂的料液比为1:7~10g/mL。
优选地,制备中药提取物的具体操作如下:将中药原料洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,将中药粉置于水中浸泡8~12h,随后将由此得到的混合体系加热至60~80℃提取3~5h,过滤,收集滤液,将得到的滤渣重复提取2~3次,合并滤液,浓缩、干燥,得到中药提取物。
优选地,中药原料与水的料液比为1:8g/mL。
优选地,中药提取物的原料包括黑枸杞、白芍、山药、当归,在制备中药提取物时,黑枸杞、白芍、山药、当归的投料质量比为10~15:3~6:2~4:1~3。上述这几种中药原料搭配使用,可以很好的发挥出各中药的功效,并能相互协同作用,有效促进亲鱼性激素与靶器官的的结合,增强性腺的发育,提高亲鱼卵子和精子的质量。经长期实验表明,上述四种中药原料的联合使用,可以更有效地提高对中华刀鲇的催产效果。
优选地,黑枸杞、白芍、山药、当归的投料质量比为12:4:3:2。
优选地,催产试剂中还包括抗氧化剂10~20mg/kg。抗氧化剂可以提高催产试剂的稳定性,使其在长时间的储存下仍能保持较高的活性。另外,鱼在产卵生殖过程中体能消耗大,加上催产药物的副作用,使亲鱼机体抵抗能力下降,若鱼体受伤,病原体侵染,容易引发疾病;二是亲鱼的体质差,或是催产时水温变化幅度大,以及催产药物的剂量不当等,亲鱼不能正常产卵,并由此引起其自身生理活动失调而致死亡。而抗氧化剂的存在,可以提高鱼体的机体免疫能力,减少在催产过程中引发的疾病,促进亲鱼性腺能够顺利发育正常成熟并有健壮的体质。
优选地,抗氧化剂包括水溶性维生素E、超氧化歧化酶中的至少一种。
优选地,抗氧化剂为超氧化歧化酶。超氧化歧化酶能够有效清除鱼体内自由基,减少超氧自由基对细胞的损害,能够更好的调节鱼体的免疫性能,促进性腺发育以及提高健康状态。
根据本发明的第二个方面,提供一种中华刀鲇的人工繁殖方法,包括如下步骤:
(1)亲鱼选取
选取人工养殖2~3龄的雌、雄中华刀鲇作为亲鱼,雌鱼与雄鱼的数量比例为2.1~2.5:1;
(2)强化培养
将亲鱼置于水体中进行强化培养28~40天,水体的温度为21~25℃、pH为7.8~8.3,溶氧量为8~10mg/L;水体采用循环水,水体的流速为0.7~0.8m/s;每2~3天换水一次,换水量为水体总量的50%~60%;
每日分3~4次对亲鱼投喂强化饵料,每日投喂量为亲鱼体重的3~6%;
每日对亲鱼进行光照照射,光照强度为800Lux~1200Lux;
(3)人工催产
分两次对亲鱼注射按顺序注射催产试剂、中药提取物试剂以及微生物菌试剂,注射过程中保持温度为25~27℃;
(4)人工授精、孵化
在第二次催产注射后的第6~8天,分别从雌鱼和雄鱼中采集卵子和精液,人工授精、孵化,得到中华刀鲇鱼苗。
在上述中华刀鲇的人工繁殖方法中,首先,在人工催产前对亲鱼先进行强化培养,通过调控适合中华刀鲇的培养环境,并投喂相应的强化饵料,有利于在进行人工催产前给亲鱼提供充足的营养需求,促进性腺的发育,同时适合的培养环境有利于亲鱼的健康生长,促进亲鱼对饵料的摄入,保证亲鱼在进行人工催产前有一个健壮的体质,提高人工催产效果。值得注意的是,在提供的强化饵料中,海藻粉除了和其它物料可以提供一定的营养物质外,还能够调节鱼体的机体代谢,提高鱼体免疫力与抗病力,可以与其他饵料原料共同促进鱼体的生长。其次,在人工催产阶段,在每次进行催产注射后,对亲鱼进行特定功率、特定时间的红外照射,有利于促进亲鱼对中药提取物的吸收,从而进一步促进中药提取物对催产药物的辅助效果,提高亲鱼的催产效果。且对亲鱼分两次进行催产注射和红外照射,有利于亲鱼对催产药物的充分吸收和转化。
优选地,在(3)人工催产阶段,在第一次催产注射后,采用功率密度为0.5~2mW/mm2的远红外线对亲鱼进行第一次远红外线照射,照射时间为30~50min;随后间隔28~32h后进行第二次催产注射,注射完后,采用功率密度为3~4mW/mm2的远红外线对亲鱼进行第二次远红外线照射,照射时间为25~40min;远红外线的波长为8~14μm。第一次远红外线照射采用较小的功率,可以避免刚开始外部光源刺激对亲鱼造成不适,引起亲鱼产生紧张情绪,使亲鱼在催产前能够保持稳定的情绪,而经过第一次远红外线照射后,亲鱼有了一定的适应性,在第二次远红外线照射时适当提高照射功率,有利于促进亲鱼对中药提取物的吸收,缩短第二次的远红外线照射时间,增强对亲鱼的催产效果。
优选地,在(3)人工催产阶段,在利用远红外线对亲鱼进行照射的同时,对亲鱼施加流水刺激;第一次远红外线照射时,流水刺激的流速为0.2~0.4m/s;第二次远红外线照射时,流水刺激的流速为0.5~0.7m/s。对亲鱼进行远红外线照射的同时施加流水刺激,有利于提高亲鱼的活跃性,促进亲鱼的新陈代谢,从而有利于亲鱼对中药提取物以及其它催产药物的吸收和转化,进一步促进亲鱼的催产效果。
优选地,在(2)强化培养阶段,强化饵料包括微生物菌复合物,微生物菌复合物包括乳酸杆菌、酵母菌、光合菌,总菌量为108~109CFU/kg;在配制微生物菌试剂时,乳酸杆菌菌液、酵母菌菌液、光合菌菌液的体积比为2~4:3~6:1~3。在对亲鱼进行催产前,在强化培养阶段先适当给亲鱼喂养的过程中添加一定量的微生物菌复合物,有利于在对亲鱼催产前调整亲鱼的肠道环境,促进调节鱼体的各项生理指数的平衡以及肠道微生态平衡,为后续亲鱼的催产提供一个健康基础,有利于促进在后续催产过程中亲鱼对催产素的吸收,进而促进亲鱼性腺的健康、有效发育。且这三种微生物菌种在特定的比例搭配下,能够与其他强化饵料成分共同调节鱼体的肠道健康以及各向生理指数的平衡,促进催产药物的吸收,提高催产效果。
优选地,在配制微生物菌复合物时,乳酸杆菌菌液、酵母菌菌液、光合菌菌液的体积比为2:4:2。
优选地,在(2)强化培养阶段,按重量份数计算,强化饵料还包括鱼粉20~30份、虾粉10~20份、豆粕15~20份、海藻粉5~10份、玉米蛋白粉15~30份、蚕蛹粉20~30份;
优选地,在(2)强化培养阶段,亲鱼的养殖密度为5~7尾/10m3。
优选地,在(3)人工催产阶段,第一次催产注射时,时间为中午12:30~13:30;在第二次催产注射时,时间为第二天12:30~13:30。
优选地,在(3)人工催产阶段,在进行第一次催产注射以及第二次催产注射时,注射部位为胸腔,注射时以针头朝鱼体前方与体轴呈45~60度角刺入,注射深度为1~1.5cm。
优选地,进行(3)人工催产阶段的时间为5~8月。
优选地,在(4)人工授精、孵化阶段,进行人工受精的时间为21:00~23:00。
优选地,在(3)人工催产阶段,第一次催产注射与第二次催产注射的剂量比为1:1~2;每次进行催产注射时,对雄鱼注射的剂量为雌鱼的1/2。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例,而不是全部的实施例。
实施例1
本实施例采用的催产用试剂盒的组成如下:催产试剂、中药提取物试剂;催产试剂包括绒毛膜促性腺激素HCG 350IU/kg、促黄体素释放激素类似物LHRH-A2 8μg/kg、地血平5mg/kg、超氧化歧化酶15mg/kg;中药提取物试剂包括中药提取物75mg/kg。
本实施例的中药提取物的原料为黑枸杞、白芍、山药和当归,在制备中药提取物时,黑枸杞、白芍、山药和当归的投料质量比为12:4:3:2。按照如下方法制备中药提取物:将中药原料洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,将中药粉置于水中浸泡10h,料液比为1:8g/mL,随后将由此得到的混合体系加热至75~80℃提取4h,过滤,收集滤液,将得到的滤渣重复提取3次,合并滤液,浓缩、干燥,得到中药提取物。
本实施例提供如下的人工繁殖方法对中华刀鲇进行人工繁殖,具体包括如下步骤:
(1)亲鱼选取
选取人工养殖2~3龄的雌、雄中华刀鲇作为亲鱼,雌鱼与雄鱼的数量比例为2.3:1;
(2)强化培养
将亲鱼置于水体中进行强化培养35天,水体的温度为21~25℃、pH为7.8~8.3,溶氧量为8~10mg/L;水体采用循环水,水体流速为0.7~0.8m/s;每2~3天换水一次,换水量为水体总量的50%~60%;
每日分3~4次对亲鱼投喂强化饵料,按重量份数计算,强化饵料包括鱼粉25份、虾粉15份、豆粕18份、海藻粉8份、玉米蛋白粉20份、蚕蛹粉25份;强化饵料还包括微生物菌复合物,微生物菌试剂总菌量为109CFU/kg,微生物菌复合物中含有乳酸杆菌、酵母菌和光合菌,在配制微生物菌复合物时,乳酸杆菌菌液、酵母菌菌液、光合菌菌液的体积比为2:4:2;每日投喂量为亲鱼体重的3~6%;
每日对亲鱼进行光照照射,光照强度为1000Lux;
亲鱼的养殖密度为5~7尾/10m3;
(3)人工催产
分两次对所述亲鱼按顺序注射催产试剂、中药提取物试剂以及微生物菌试剂,注射过程中保持温度为25~27℃,中午13:00,对亲鱼进行第一次催产注射,第一次催产注射后,采用功率密度为1mW/mm2的远红外线对亲鱼进行第一次远红外线照射,照射时间为40min,在远红外线照射的时候施加流水刺激,流速为0.3m/s;随后间隔24h后进行第二次催产注射,注射完后,采用功率密度为3.5mW/mm2的远红外线对亲鱼进行第二次远红外线照射,照射时间为30min,在远红外线照射的时候施加流水刺激,流速为0.6m/s;
在本步骤中,第一次催产注射时,对雌鱼依次注射催产试剂1.4mL、中药提取物试剂0.4mL,对雄鱼依次注射催产试剂0.7mL、中药提取物试剂0.2mL;第二次催产注射时,对雌鱼依次注射催产试剂2.1mL、中药提取物试剂0.6mL,对雄鱼依次注射催产试剂1.4mL、中药提取物试剂0.3mL;两次的注射部位皆为胸腔,注射时以针头朝鱼体前方与体轴呈45度角刺入,注射深度为1cm;远红外线的波长为8~14μm;
(4)人工授精、孵化
在第二次催产注射后的第7天,分别从雌鱼和雄鱼中采集卵子和精液,人工授精、孵化,得到中华刀鲇鱼苗。
实施例2
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为黑枸杞、白芍、山药,在制备中药提取物时,黑枸杞、白芍、山药的投料质量比为14:3:3;其余与实施例1一致。
实施例3
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为白芍、山药、当归,在制备中药提取物时,白芍、山药、当归的投料质量比为6:3:2;其余与实施例1一致。
实施例4
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为黑枸杞、山药,在制备中药提取物时,黑枸杞、山药的投料质量比为11:5;其余与实施例1一致。
实施例5
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为黑枸杞、当归,在制备中药提取物时,黑枸杞、当归的投料质量比为10:2;其余与实施例1一致。
实施例6
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为黑枸杞、白芍,在制备中药提取物时,黑枸杞、白芍的投料质量比为15:3;其余与实施例1一致。
实施例7
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为白芍、山药,在制备中药提取物时,白芍、山药的投料质量比为5:3;其余与实施例1一致。
实施例8
本实施例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为山药、当归,在制备中药提取物时,山药、当归的投料质量比为4:3;其余与实施例1一致。
实施例9
本实施例与实施例1不同的在于,所采用的催产用试剂盒中,催产试剂中所采用的抗氧化剂为水溶性维生素E,即将超氧化歧化酶替换为水溶性维生素E;其余与实施例1一致。
实施例10
本实施例与实施例1不同的在于,所采用的催产用试剂盒中,催产试剂中不含有抗氧化剂,即不加入超氧化歧化酶;其余与实施例1一致。
实施例11
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖的过程中,在(2)强化培养阶段,强化饵料中的微生物菌复合物中仅含有乳酸杆菌和光合菌,在配制微生物菌复合物时,乳酸杆菌菌液、光合菌菌液的体积比为3:2;其余与实施例1一致。
实施例12
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(2)强化培养中,强化饵料中的微生物菌复合物中仅含有酵母菌和光合菌,在配制微生物菌复合物时,酵母菌菌液、光合菌菌液的体积比为5:2;其余与实施例1一致。
实施例13
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(2)强化培养中,强化饵料中的微生物菌复合物中仅含有乳酸菌;其余与实施例1一致。
实施例14
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(2)强化培养中,强化饵料中的微生物菌复合物中含有乳酸菌、酵母菌和光合菌,在配制微生物复合物时,乳酸杆菌菌液、酵母菌菌液和光合菌菌液的体积比为6:2:3;其余与实施例1一致。
实施例15
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(2)强化培养中,强化饵料中不含有微生物菌复合物,即对亲鱼的饵料喂养中不添加微生物菌复合物;其余与实施例1一致。
实施例6
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(2)强化培养中,强化饵料中不含有海藻粉;其余与实施例1一致。
实施例17
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(3)人工催产中,第一次催产注射后,不进行第一次远红外线照射;其余与实施例1一致。
实施例18
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(3)人工催产中,第二催产注射后,不进行第二次远红外线照射;其余与实施例1一致。
实施例19
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(3)人工催产中,第一次催产注射和第二次催产注射后,均不进行远红外线照射;其余与实施例1一致。
实施例20
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(3)人工催产中,第一次催产注射后,采用功率密度为3.5mW/mm2的远红外线对所述亲鱼进行第一次远红外线照射,照射时间为30min;第二次催产注射后,采用功率密度为1mW/mm2的远红外线对亲鱼进行第二次远红外线照射,照射时间为40min;其余与实施例1一致。
实施例21
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(3)人工催产中,所采用的远红外线波长为1.5~4μm;其余与实施例1一致。
实施例22
本实施例与实施例1不同的在于,在对中华刀鲇进行人工繁殖时,(3)人工催产中,在第一次远红外线照射和第二次远红外线照射时,均不施加流水刺激。
对比例1
本对比例与实施例1不同的在于,中药提取物的原料为仅为黑枸杞;其余与实施例1一致。
对比例2
本对比例与实施例1不同的在于,中药提取物仅为白芍,其余与实施例1一致。
对比例3
本对比例与实施例1不同的在于,中药提取物仅为山药,其余与实施例1一致。
对比例4
本对比例与实施例1不同的在于,中药提取物仅为当归,其余与实施例1一致。
对比例5
本对比例与实施例1不同的在于,对亲鱼不采用中药提取物试剂,其余与实施例1一致。
对比例6
本对比例与实施例1不同的在于,所采用的亲鱼为黄颡鱼,且本对比例共设置两个处理组,分别记为处理组A和处理组B;处理组A中的黄颡鱼亲鱼依次注射催产试剂、中药提取物试剂、微生物菌试剂,其余与实施例1一致;处理组B中的黄颡鱼亲鱼皆不注射催产试剂、中药提取物试剂、微生物菌试剂,其余与实施例1一致。
对比例7
本对比例共设置两个处理组,分别记为处理组C和处理组D;其中,处理组C中所采用的催产试剂、中药提取物试剂、微生物菌试剂的成分与实施例1一致,且催产试剂经过老化处理,对中华刀鲇亲鱼的人工繁殖方法也与实施例1一致;处理组D中所采用的中药提取物试剂、微生物菌试剂的成分与实施例1一致,
催产试剂中不含有抗氧化剂且催产试剂经过老化处理,对中华刀鲇亲鱼的人工繁殖方法也与实施例1一致。
本对比例处理组D和处理组E中,对催产试剂进行老化处理的操作为:使催产试剂在35~40℃,湿度为75~80%的条件下放置2个月。
测试例1
1.实验构建方式
(1)卵子质量分析
收集鱼卵的方法如下:用鱼夹固定雌鱼,一手指堵住泄殖孔,再用柔软干净的毛巾擦干鱼腹;雌鱼的腹部朝下呈45度角,放开手指,轻轻挤压腹部,让卵子自动落入事先准备好的干净玻璃皿中,避光于冰箱低温保存,待用。
卵子质量的鉴别方法如下:观察卵子颜色鉴别,若卵子鲜明透亮、晶莹饱满、很有质感,为质量好的卵子;若卵子颜色暗淡,则为质量不好的卵子。
(3)精子活力测试
收集精液的方法如下:用鱼夹固定雄鱼,将鱼的腹部朝上平放,用柔软干净的毛巾擦干鱼腹,轻按腹部,白色精液随之流出,用吸管或针管吸取精液放入贮精瓶,避光于冰箱低温保存,待用。
在1块干净载玻片上的3个位置滴加等量pH=8的溶液作为3个平行,然后用干净的注射器针头蘸取等量精液与载玻片上的溶液混合,用针头搅散,显微镜下观察精子运动情况,同时开始计时。
精子在水中的运动状态,可以分为激烈运动、缓慢运动和摇尾运动3个连续的阶段,这3个阶段时间的总和即是精子的寿命,以精液与溶液接触的瞬间开始启动秒表来计算精子活动的时间。当视野中70%以上的精子从激烈运动转入缓慢运动,即认为精子激烈运动时间结束,当90%以上的精子停止颤动,即认为精子寿命终止。每个处理重复3次,结果取平均值。
(3)受精率统计
在注射完催产试剂盒的第7天之后,将实施例1~22和对比例1~5中的雌鱼和上述雄鱼放到一起,经过18~32h后,雌雄鱼自行产卵、排精,卵子在水体完成人工授精,得到受精卵,统计雌鱼卵子的受精率。
(4)孵化率计算
人工授精成功后,将受精卵进行孵化,并计算孵化率。
2.实验结果
对实施例1~22、对比例1~5中亲鱼卵子、精子的质量情况以及受精率、孵化率的分析结果如表1所示。
表1实施例1~22、对比例1~5中亲鱼卵子与精子质量情况以及受精率、孵化率分析
从表1可以看出,利用本发明所提供的催产试剂盒,可以有效促进中华刀鲇性腺的发育,提高雌雄亲鱼的卵子和精子质量,进而提高对中华刀鲇的催产效果以及人工繁殖的成功率和效率。
比较实施例1~8和对比例1~5,可以得知,利用黑枸杞、白芍、山药和当归中的至少两种中药原料制备中药提取物时,利用中药提取物制备得到的催产用试剂盒用于对中华刀鲇雌雄亲鱼进行催产时,得到的卵子和精子的质量都较为优异,且受精率达到80%以上,孵化率达到72%以上,这说明本发明中的中药提取物可以对催产药物起到较为有效的辅助效果,可以有效提高对中华刀鲇的催产效果和人工繁殖成功率。而进一步,实施例1中的卵子质量、精子质量、受精率以及孵化率明显较好,说明当使用特定比例的黑枸杞、白芍、山药和当归四种中药原料时,更有利于中华刀鲇的催产效果和人工繁殖。
比较实施例1、9、10,可以看出,抗氧化剂的加入是有利于提高催产试剂盒对中华刀鲇的催产效果的,且当抗氧化剂为超氧化歧化酶的时候,对中华刀鲇的催产效果更好,原因在于,超氧化歧化酶能够有效清除鱼体内自由基,减少超氧自由基对细胞的损害,能够更好的调节鱼体的免疫性能,促进性腺发育以及提高健康状态,从而促进催产效果。
比较实施例1、11~15,可以看出,在强化培养阶段,在强化饵料中添加一定量的微生物复合物对亲鱼的催产效果也有一定的影响,且当同时使用三种特定比例的乳酸菌、酵母菌、光合菌配制的微生物菌复合物时,才能够充分发挥微生物菌复合物的作用,能够在对亲鱼催产前充分调节鱼体的肠道微生态平衡以及健康状态,促进后续催产过程中亲鱼对催产药物的吸收和转化,在提高亲鱼身体素质的同时进一步提高亲鱼卵子和精子的质量,促进催产效果和提高人工繁殖成功率。
另外,在本发明还提供了一种适用于中华刀鲇的人工繁殖方法,从实施例1和实施例16中可以看出,强化饵料的成分对亲鱼的催产效果也是有一定的影响,而本发明使用海藻粉与其他多种物料制备的强化饵料,可以保证亲鱼在人工催产前有充足的营养物质,有利于促进性腺的健康生长。
比较实施例1、17~22,可以看出,分别在两次催产注射后进行一定功率、时间的远红外线照射,有利于中华刀鲇对中药提取物的吸收,促进亲鱼各项生理功能以及肠道健康,提高亲鱼对营养物质以及催产药物的吸收,有利于亲鱼性腺的健康发育以及良好的身体状态,提高亲鱼卵子和精子质量,提高催产效果。另外,还可以看出,在对亲鱼进行远红外线照射时同时施加流水刺激,也有利于增强对亲鱼的催产效果。
测试例2
对对比例6处理组A的黄颡鱼亲鱼进行第一次催产注射以及第二次催产注射后,雌鱼无不良反应,而雄鱼皆出现食欲不佳的表现,在后续的卵子和精子质量的测试(参照测试例1中的方法)中,雌鱼有较少数卵子些许暗淡且卵子粒径减少,雄鱼精子活力明显下降,精子激烈运动时间为仅为42s,精子寿命为308s。
对对比例6处理组B的黄颡鱼亲鱼进行卵子和精子质量的测试(参照测试例1中的方法)中,雌鱼有较少数卵子些许暗淡且卵子粒径减少,雄鱼精子激烈运动时间为50s,精子寿命为344s。
通过比较对比例6处理组A以及处理组B的测试结果,可以得知,本发明的催产试剂盒对黄颡鱼并不适用,对黄颡鱼亲鱼进行催产注射后雄鱼会出现明显的食欲不佳,影响雄鱼对营养物质的吸收以及各项生理功能的平衡,从而影响雄鱼的健康状态以及性腺发育,降低雄鱼精子质量,而对于雌鱼,是否对其使用本发明中的催产试剂盒对雌鱼的卵子质量影响不大。
测试例3
对对比例7中处理组C以及处理组D中的亲鱼进行卵子、精子质量的测试后(参照测试例1中的方法),发现处理组D中的雌鱼与雄鱼的卵子质量与精子质量比处理组C的差;其中,处理组C中雌鱼有较少数卵子些许暗淡,雄鱼精子激烈运动时间为62s,精子寿命为373s;其中,处理组D中雌鱼有少数卵子明显暗淡且卵径较小,雄鱼精子激烈运动时间为53s,精子寿命为351s。由此可以说明,抗氧化剂可以有效提高催产试剂的储存稳定性,使本发明中的催产助剂可以在较长时间的储存下仍能够保持较好的稳定性,仍能对中华刀鲇亲鱼起到很好的催产效果。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明,所属领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,但这些修改或替换均在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种中华刀鲇催产用试剂盒,其特征在于:包括催产试剂、中药提取物试剂;
所述催产试剂包括绒毛膜促性腺激素HCG 250~400IU/kg、促黄体素释放激素类似物LHRH-A2 5~10μg/kg、地血平4~8mg/kg;
所述中药提取物试剂包括中药提取物60~90mg/kg,在制备所述中药提取物时,所述中药提取物的中药原料包括黑枸杞、白芍、山药,且所述黑枸杞、所述白芍、所述山药的投料质量比为14:3:3,
或,所述中药原料包括所述白芍、所述山药、当归,且所述白芍、所述山药、所述当归的投料质量比为6:3:2;
或,所述中药原料包括所述黑枸杞、所述山药,且所述黑枸杞、所述山药的投料质量比为11:5;
或,所述中药原料包括所述黑枸杞、所述白芍,且所述黑枸杞、所述白芍的投料质量比为15:3;
或,所述中药原料包括所述白芍、所述山药,且所述白芍、所述山药的投料质量比为5:3;
或,所述中药原料包括所述山药、所述当归,且所述山药、所述当归的投料质量比为4:3;
或,所述中药原料包括所述黑枸杞、所述白芍、所述山药、所述当归,且所述黑枸杞、所述白芍、所述山药、所述当归的投料质量比为10~15:3~6:2~4:1~3;
其中,制备所述中药提取物的具体操作如下:将所述中药原料洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,将所述中药粉置于水中浸泡8~12h,随后将由此得到的混合体系加热至60~80℃提取3~5h,过滤,收集滤液,将得到的滤渣重复提取2~3次,合并滤液,浓缩、干燥,得到所述中药提取物。
2.如权利要求1所述中华刀鲇催产用试剂盒,其特征在于:在制备所述中药提取物时,所述中药原料与溶剂的料液比为1:7~10g/mL。
3.如权利要求1所述中华刀鲇催产用试剂盒,其特征在于:所述催产试剂中还包括抗氧化剂10~20mg/kg;所述抗氧化剂为水溶性维生素E或超氧化歧化酶。
4.一种中华刀鲇的人工繁殖方法,其特征在于,利用如权利要求1所述中华刀鲇催产用试剂盒对中华刀鲇进行人工繁殖,具体包括如下步骤:
(1)亲鱼选取
选取人工养殖2~3龄的雌、雄中华刀鲇作为亲鱼,雌鱼与雄鱼的数量比例为2.1~2.5:1;
(2)强化培养
将所述亲鱼置于水体中进行强化培养28~40天,所述水体的温度为21~25℃、pH为7.8~8.3,溶氧量为8~10mg/L;
所述水体采用循环水,所述水体的流速为0.7~0.8m/s;每2~3天换水一次,换水量为所述水体总量的50%~60%;每日分3~4次对所述亲鱼投喂强化饵料,每日投喂量为所述亲鱼体重的3~6%;每日对所述亲鱼进行光照照射,光照强度为800Lux~1200Lux;
(3)人工催产
分两次对所述亲鱼按顺序注射所述催产试剂、所述中药提取物试剂,注射过程中保持温度为25~27℃;
(4)人工授精、孵化
在第二次催产注射后的第6~8天,分别从所述雌鱼和所述雄鱼中采集卵子和精液,人工授精、孵化,得到中华刀鲇鱼苗。
5.如权利要求4所述中华刀鲇的人工繁殖方法,其特征在于:在(2)强化培养阶段,所述强化饵料包括微生物菌复合物,所述微生物菌复合物包括乳酸杆菌、酵母菌、光合菌,总菌量为108~109CFU/kg;
在配制所述微生物菌复合物时,乳酸杆菌菌液、酵母菌菌液、光合菌菌液的体积比为2~4:3~6:1~3。
6.如权利要求5所述中华刀鲇的人工繁殖方法,其特征在于:在(3)人工催产阶段,第一次催产注射后,采用功率密度为0.5~2mW/mm2的远红外线对所述亲鱼进行第一次远红外线照射,照射时间为30~50min;随后间隔28~32h后进行第二次催产注射,注射完后,采用功率密度为3~4mW/mm2的远红外线对所述亲鱼进行第二次远红外线照射,照射时间为25~40min;
所述远红外线的波长为8~14μm。
7.如权利要求6所述中华刀鲇的人工繁殖方法,其特征在于:在(3)人工催产阶段,在利用所述远红外线对所述亲鱼进行照射的同时,对所述亲鱼施加流水刺激;第一次远红外线照射时,流水刺激的流速为0.2~0.4m/s;第二次远红外线照射时,流水刺激的流速为0.5~0.7m/s。
8.如权利要求5所述中华刀鲇的人工繁殖方法,其特征在于:在(3)人工催产阶段,第一次催产注射与第二次催产注射的剂量比为1:1~2;每次进行催产注射时,对所述雄鱼注射的剂量为所述雌鱼的1/2。
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