CN109644914A - 一种提高合浦绒螯蟹盒子循环水养殖成活率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于合浦绒螯蟹养殖技术领域，公开了一种通过杀灭有害致病菌、添加有益菌，再调节C/N至最佳点，快速繁殖养殖水体有益菌群降低氨氮、亚硝酸盐氮等有害物质浓度，提高合浦绒螯蟹盒子循环水养殖成活率的方法。本发明通过促进有益异养微生物的形成，改善蟹盒子循环水养殖系统水体的水质；提高循环水养殖系统水体中有益菌的含量，形成优势菌群，杀灭或抑制弧菌类致病菌的繁殖，降低致病菌导致的蟹类死亡，提高存活率；枯草芽孢杆菌，显著提高合浦绒螯蟹的存活率；在蟹盒子循环水养殖系统中，先使用1mg/L二氧化氯消毒，然后在添加有机碳源的同时施加芽孢杆菌不失为一种改善养殖水环境质量，提高合浦绒螯蟹存活率的方法。
Description
技术领域
本发明属于合浦绒螯蟹养殖技术领域，尤其涉及一种通过杀灭有害致病菌、添加有益菌，再调节C/N至最佳点，快速繁殖养殖水体有益菌群降低氨氮、亚硝酸盐氮等有害物质浓度，提高合浦绒螯蟹盒子循环水养殖成活率的方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
在集约化水产养殖系统中，养殖水体中通常残留着大量的剩余饵料，养殖动物粪便和生物残体等有机污染物，由于养殖系统生物链简单，营养级少，自我调节能力较弱，这些污染物不断累积代谢，导致NH4 +-N、NO2 --N等有毒物质的增加，当其含量超过养殖系统净化能力后，会导致养殖生态环境的恶化和水产病害的暴发，影响养殖动物的生长甚至致其死亡。异养细菌作为养殖生态系统中的主要分解者，承担着有机物分解和氮素循环的重要作用。在养殖生态环境中，养殖水体的C/N会对异养细菌的生长和繁殖以及无机氮的代谢方式产生重要影响，当养殖水体中C/N在8～10时，由自养细菌和异养细菌共同代谢水中无机氮，当C/N大于15时，主要靠异养细菌的同化作用去除水中无机氮[131]。但随着养殖的进行，无机氮会不断累积，养殖水体C/N降低，抑制异养细菌的生长繁殖。因此提高养殖水体中的C/N，促进异养细菌的繁殖，降低水中的NH4 +-N、NO2 --N等无机氮对稳定养殖环境可发挥重要调控作用。通过在养殖水环境中添加有机碳源，提高C/N是一种有效的方法改善养殖水环境，已被广泛应用于养殖业并取得相当的成就。
此外，以芽孢杆菌(Bacillus)为代表的微生态制剂能降解水体中有机物，降低NH4 +-N、NO2 --N，改善养殖水体环境质量。芽孢杆菌作为一种异养细菌，还可以与病原菌产生竞争性抑制作用，提高养殖对象的存活率和免疫力，促进养殖动物的健康生长。
蟹养殖盒循环水养殖系统是工厂化养殖模式之一，可防止动物间互相残杀，在一定程度上可提高养殖存活率。但国内外对于碳菌调控技术应用于蟹盒子循环水养殖的作用研究鲜有报道。本发明以蟹盒子循环水养殖合浦绒螯蟹(Eriocheir hepuensis)为研究对象，采用碳菌调控技术，通过检测养殖水中NH4 +-N、NO2 --N含量在时间序列上的变化及合浦绒螯蟹摄食状态、存活率，分析碳菌调控技术应用于循环水养殖合浦绒螯蟹的作用盒影响，为蟹盒子循环水养殖技术提供参考数据。
在水产养殖活动中，残饵、粪便和养殖动物的代谢物分解出的NH4 +-N、NO2 --N等有毒物质导致严重的水产养殖内源性污染，制约了水产养殖行业的健康发展。通过在养殖系统中添加有机碳源和微生物制剂可以有效降低养殖水体中的NH4 +-N、NO2 --N，提高养殖动物的存活率和产量。二氧化氯是一种在水产养殖业中广泛使用的消毒剂，具有快速持久、广谱灭菌、无刺激安全的优点。因其不污染环境又具有较好杀灭微生物的功能，因此在水产养殖领域被广泛使用。现有研究使用二氧化氯治疗欧洲鳗细菌性疾病中发现，二氧化氯对爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和柱状屈挠杆菌有很好的杀灭效果，且能改善养殖水环境质量。现有研究表明在循环水养殖系统中使用1mg/L二氧化氯可及显著降低异养菌总数，对大西洋鲑鱼的生长状态和摄食量无明显影响。
生物絮团技术的优势之一就是能够有效地改善养殖水体质量，降低养殖水环境中的无机氮的浓度。在生物絮团系统内，当养殖水体水环境中的碳氮比大于10时，水体中的异养微生物就回优先利用有机碳源吸收水体中的氨氮、亚硝酸盐氮，转化为自身蛋白质，从而起到调节水质、降低养殖耗水量，实现循环水养殖的目的。
采用碳菌调控技术，通过提高C/N，诱导异养菌大暴发，可以快速降低养殖水体的氨氮等氮素的含量，这是不容质疑的。但是，由于水体中添加葡萄糖等碳源，提高C/N，能明显提高异养菌，弧菌数量也会增加，尤其是在C/N低于10以下的时候。弧菌，特别是创伤弧菌等致病弧菌的增加，是造成高密度养殖虾、蟹类大量死亡，存活率下降的重要原因。这也许就是为什么提高C/N，会导致养殖存活率下降，常常导致生物絮团技术失败的重要原因之一。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)现有的养殖系统中杂菌含量较多，养殖的蟹易受到杂菌污染，影响蟹的存活率和摄食率；
(2)现有技术汇中在养殖过程中蟹的免疫力较弱和抗病害能力较差。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种通过控制碳菌提高合浦绒螯蟹盒子循环水成活率的方法。
本发明是这样实现的，一种合浦绒螯蟹循环水养殖系统的碳菌调控方法，具体包括以下步骤：
步骤一：将合浦绒螯蟹在养殖蟹盒内暂养7d，用饲料驯食完成后方可用于实验；经预备实验，实验设置对照组、碳源组和碳菌组3个实验组。
步骤二：对照组在实验开始时投加2mg/LNH4 +-N，每隔12h补充1mg/LNH4 +-N；
步骤三：碳源组在实验开始时投加2mg/LNH4 +-N，每隔12h补充1mg/LNH4 +-N，并在添加NH4 +-N时按照C/N为15的比例施加有机碳源；
步骤四：碳菌组在实验开始前2d使用1mg/L二氧化氯对养殖系统进行消毒，实验开始后，除按照碳源组处理方式外，并每隔36h施加1次枯草芽孢杆菌，每次添加量为2.0×107cfu/L；
步骤五：计算存活率和摄食率，测定水质指标。
进一步，步骤四中，枯草芽孢杆菌按照说明书激活方式活化后均匀泼洒。
进一步，步骤一中，每个实验组内养殖180只经驯养的合浦绒螯蟹，一盒一蟹，分成3个平行，每个平行60只。
进一步，C/N指所添加有机碳源中碳元素质量与NH4 +-N中氮元素之比。
进一步，实验共进行7d，其中第6～7d为毒性恢复期，期间只喂食，不添加其他物质。
进一步，实验期间全程不换水，补充少量蒸发水。
进一步，通过恒温机和制氧机调节养殖系统温度和溶解氧。
进一步，实验期间，每天22:00投喂饵料，每个蟹盒内投喂20粒(1.5±0.15g)，于第二天8:00清理残饵并统计数量。
进一步，实验期间，投喂饲料和清理饲料时观察蟹存活情况，若有死蟹及时取出。
本发明的另一目的在于提供在蟹盒子循环水养殖系统中合浦绒螯蟹的养殖方法，包括以下内容：
(1)先使用1mg/L二氧化氯消毒；
(2)然后在添加有机碳源(C/N＝15:1)的同时施加芽孢杆菌改善养殖水环境质量。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明的碳源组和碳菌组均按照C:N为15添加有机碳源，促进了异养微生物的形成，相比对照组能快速有效的降低水中的NH4 +-N，改善养殖水体的水质。
本发明碳菌组存活率高，有显著差异(p<0.05)，这是由于碳菌组在实验前使用质量浓度为1mg/L的二氧化氯对养殖系统进行消毒，去除养殖水体中部分弧菌等病原菌，然后在养殖系统中施加枯草芽孢杆菌，提高了养殖水体中有益菌的含量，形成优势菌群，在降低水中NH4 +-N、NO2 --N含量的同时，抑制弧菌类致病菌的繁殖，降低致病菌导致的蟹类死亡，提高存活率。相比对照组，碳菌组和碳源组均添加有机碳源，NH4 +-N在短时间内能被异养细菌合成代谢为自身蛋白质。
本发明碳源组和碳菌组有亚硝酸盐氮短暂积累。碳菌组与碳源组相比，额外施加了枯草芽孢杆菌，显著提高合浦绒螯蟹的存活率(p<0.05)，这是因为枯草芽孢杆菌提高合浦绒螯蟹免疫力和抗病害能力。
本发明在蟹盒子循环水养殖系统中，先使用1mg/L二氧化氯消毒，然后在添加有机碳源(C/N＝15:1)的同时施加芽孢杆菌不失为一种改善养殖水环境质量，提高合浦绒螯蟹存活率的方法。
附图说明
图1是本发明实施例提供的合浦绒螯蟹循环水养殖系统的碳菌调控方法流程图。
图2是本发明实施例提供的各组氨氮的变化示意图。
图3是本发明实施例提供的各组亚硝酸盐氮的变化示意图。
图4是本发明实施例提供的各组合浦绒螯蟹的存活率示意图。
图5是本发明实施例提供的各组合浦绒螯蟹的摄食率示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理做详细描述。
如图1所示，本发明实施例提供的合浦绒螯蟹循环水养殖系统的碳菌调控方法，具体包括以下步骤：
S101：将合浦绒螯蟹在养殖蟹盒内暂养7d，用饲料驯食完成后方可用于实验；经预备实验，实验设置对照组、碳源组和碳菌组3个实验组。
S102：对照组在实验开始时投加2mg/LNH4 +-N，每隔12h补充1mg/LNH4 +-N；
S103：碳源组在实验开始时投加2mg/LNH4 +-N，每隔12h补充1mg/LNH4 +-N，并在添加NH4 +-N时按照C/N为15的比例施加有机碳源；
S104：碳菌组在实验开始前2d使用1mg/L二氧化氯对养殖系统进行消毒，实验开始后，除按照碳源组处理方式外，并每隔36h施加1次枯草芽孢杆菌，每次添加量为2.0×107cfu/L；
S105：计算存活率和摄食率，测定水质指标。
步骤S101中，本发明实施例提供的每个实验组内养殖180只经驯养的合浦绒螯蟹，一盒一蟹，分成3个平行，每个平行60只。
步骤S104中，本发明实施例提供的枯草芽孢杆菌按照说明书激活方式活化后均匀泼洒。
本发明实施例提供的C/N指所添加有机碳源中碳元素质量与NH4 +-N中氮元素之比。
本发明实施例提供的实验共进行7d，其中第6～7d为毒性恢复期，期间只喂食，不添加其他物质。
本发明实施例提供的实验期间全程不换水，补充少量蒸发水。
本发明实施例提供的通过恒温机和制氧机调节养殖系统温度和溶解氧。
本发明实施例提供的实验期间，每天22:00投喂饵料，每个蟹盒内投喂20粒(1.5±0.15g)，于第二天8:00清理残饵并统计数量。
本发明实施例提供的实验期间，投喂饲料和清理饲料时观察蟹存活情况，若有死蟹及时取出。
本发明实施例提供的在蟹盒子循环水养殖系统中合浦绒螯蟹的养殖方法，包括以下内容：
(1)先使用1mg/L二氧化氯消毒；
(2)然后在添加有机碳源(C/N＝15:1)的同时施加芽孢杆菌改善养殖水环境质量。
下面结合具体实验对本发明的应用原理作详细说明；
实验1；
1、实验材料
选取肢体健全、活力良好、体重在40～50g的个体用于实验，各组合浦绒螯蟹。配合饲料为连云港市仁通饲料有限公司生产的渔鑫阁牌大闸蟹饲料，粗蛋白含量为36％。有机碳源为食用红糖，购于广西农糖业集团良垶制糖有限公司，含糖量95％。枯草芽孢杆菌(总菌数1.0×1010cfu/g)，购于武汉兴旺生物技术发展有限公司。二氧化氯(ClO2)购于北京中大安特生化科技有限公司，有效成分8％。
2、实验方法
步骤一：将合浦绒螯蟹在养殖蟹盒内暂养7d，用饲料驯食完成后方可用于实验；经预备实验，实验设置对照组、碳源组和碳菌组3个实验组。
步骤二：对照组在实验开始时投加2mg/LNH4 +-N，每隔12h补充1mg/LNH4 +-N；
步骤三：碳源组在实验开始时投加2mg/LNH4 +-N，每隔12h补充1mg/LNH4 +-N，并在添加NH4 +-N时按照C/N为15的比例施加有机碳源；
步骤四：碳菌组在实验开始前2d使用1mg/L二氧化氯对养殖系统进行消毒，实验开始后，除按照碳源组处理方式外，并每隔36h施加1次枯草芽孢杆菌，每次添加量为2.0×107cfu/L；
步骤五：计算存活率和摄食率，测定水质指标。
实验中C/N指所添加有机碳源中碳元素质量与NH4 +-N中氮元素之比。实验共进行7d，其中第6～7d为毒性恢复期，期间只喂食，不添加其他物质。实验期间全程不换水，补充少量蒸发水。通过恒温机和制氧机调节养殖系统温度和溶解氧。
3实验结果
(1)水质指标
如表1所示，对照组、碳源组和碳菌组的温度、DO都维持在较稳定的状态，且各组间差异不显著(p>0.05)；实验期间，各组的pH都有一定程度降低，其中，对照组的下降幅度最大，最低为5.36，相比对照组，碳源组和碳菌组的下降幅度较小；碳源组和碳菌组的浊度均显著高于对照组(p<0.05)。
表1水质指标
注：括号内表示最大值和最小值。
如图2所示，实验初期，各组均添加2mg/L氨氮，相比对照组，碳源组和碳菌组能快速水体中的降解氨氮，8h内氨氮降解率高达98％，而对照组仅为40％，组间差异显著(p<0.05)。在实验中期和后期(12～120h)，各组补充1mg/L氨氮后，碳源组和碳菌组氨氮的变化规律均与实验初期相似，对照组氨氮出现累积现象，这可能是由于氨氮负荷增加，生物滤池净化效率减小。(注：箭头代表添加1mg/L氨氮。)
如图3所示，亚硝酸盐氮含量变化示意图，在实验初期(0～12h)，碳源组和碳菌组亚硝酸盐氮含量出现短暂累积后被降解，实验中期和后期，亚硝酸盐氮变化规律与实验初期相似。在实验期间(0～120h)内，对照组亚硝酸盐氮含量一直维持在较低水平，且波动不大。
(2)合浦绒螯蟹的存活率和摄食率
如图4所示，合浦绒螯蟹的存活率情况示意图，实验进行5d后，对照组、碳源组和碳菌组的存活率分别为84.44％、81.11％、89.44％，组间差异不显著(p>0.05)；经过2d毒性恢复实验后，碳菌组合浦绒螯蟹的存活率最高，为87.78％，显著高于对照组(76.67％)和碳源组(72.22％)。
如图5所示，各组合浦绒螯蟹的日均摄食率示意图，从5d总体来看，各组间差异不显著(p>0.05)。
4、结论
本实验中碳源组和碳菌组均按照C:N为15添加有机碳源，促进了异养微生物的形成，相比对照组能快速有效的降低水中的NH4 +-N，改善养殖水体的水质。这是由于不同的养殖系统，养殖过程中适宜的C/N不同。
实验中，碳菌组存活率高，有显著差异(p<0.05)，这可能是由于碳菌组在实验前使用质量浓度为1mg/L的二氧化氯对养殖系统进行消毒，去除养殖水体中部分弧菌等病原菌，然后在养殖系统中施加枯草芽孢杆菌，提高了养殖水体中有益菌的含量，形成优势菌群，在降低水中NH4 +-N、NO2 --N含量的同时，抑制弧菌类致病菌的繁殖，降低致病菌导致的蟹类死亡，提高存活率。相比对照组，碳菌组和碳源组均添加有机碳源，NH4 +-N在短时间内能被异养细菌合成代谢为自身蛋白质。
在本实验中发现碳源组和碳菌组有亚硝酸盐氮短暂积累。碳菌组与碳源组相比，额外施加了枯草芽孢杆菌，显著提高了合浦绒螯蟹的存活率(p<0.05)，这是因为枯草芽孢杆菌提高合浦绒螯蟹免疫力和抗病害能力。
综上，在蟹盒子循环水养殖系统中，先使用1mg/L二氧化氯消毒，然后在添加有机碳源(C/N＝15:1)的同时施加芽孢杆菌不失为一种改善养殖水环境质量，提高合浦绒螯蟹存活率的方法。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种通过杀灭或抑制有害致病菌、添加有益菌，再调节C/N至最佳点，快速繁殖养殖水体有益菌群降低氨氮、亚硝酸盐氮等有害物质浓度，提高合浦绒螯蟹盒子循环水养殖成活率的方法，其特征在于，所述通过杀灭或抑制有害致病菌、添加有益菌，再调节C/N至最佳点，快速繁殖养殖水体有益菌群降低氨氮、亚硝酸盐氮等有害物质浓度，提高合浦绒螯蟹循环水养殖成活率的方法，使用1mg/L二氧化氯消毒，或其他消毒剂，杀灭或抑制有害致病菌，再添加有益菌，形成优势种群；然后在添加有机碳源C/N＝15:1的同时施加芽孢杆菌等有益菌，快速改善循环水养殖水环境质量。
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