CN109612767A - 一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，本发明采用十字交叉切割后可使后续头骨完全劈裂开，而不破坏脑组织。本发明能快速将猪头骨劈开后获得完整、较低污染和较低降解的脑垂体及下丘脑组织样本，保证了脑部组织样本的采集效率，且克服了现有技术中脑垂体及下丘脑等组织污染程度高、较易丢失等缺陷，并适用于大量样本采集，且操作简单快捷。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法。
背景技术
脑垂体是机体最重要的内分泌腺，它分泌多种激素对机体代谢、生长、发育和生殖等有重要作用；下丘脑是大脑皮层下调节内脏活动的高级中枢，调节着体温、摄食、水平衡、血糖和内分泌腺活动等重要的生理功能；采集完整无污染的脑垂体及下丘脑，进行总RNA提取，对其后续研究有着至关重要的意义。现有的猪脑部组织样品的采集方法，特别是对猪脑垂体及下丘脑的采集方法，主要是用电锯或斧头等纵向劈开头颅为平均的两部分，在劈开部分内，寻找脑部组织如脑垂体、下丘脑等。此方法所获得的脑垂体及下丘脑由于受到机械损伤较大，收集到的脑垂体及下丘脑完整性较差，且劈半过程中极易将脑部组织混杂（如大脑、下丘脑、小脑、脑垂体等易碎组织），在劈半中寻找样本由于耗时较长，样本长时间暴露于空气中导致污染严重和RNA的降解严重，对于如提取脑部组织RNA进行后续试验等研究有着毁灭性的影响。
发明内容
为了克服以上现有技术中存在的问题，本发明提供一种快速的采集猪脑垂体及下丘脑的方法，（作用于死猪脑部），包括以下步骤：
1)取猪头部，在平行于鼻骨方向的中间位置将皮肤切开，从鼻骨前缘，至头骨后缘，向两边剥离皮肤，完全暴露头骨;
2)用工具垂直和平行鼻骨方向十字交叉切割，劈入骨头，刚能看见头内脑组织即可，不能破坏大脑皮层；
3)再沿劈口将两边的骨头劈开使头骨盖完全反转180°，将劈开的部分分离，直接暴露脑部组织；
4)拨开小脑，暴露脑干与大脑结合处，使猪下丘脑可见，沿根部剪取下丘脑；
5)沿脑垂体与漏斗的相连处即头骨相连的位置剪下，即得到完整猪脑垂体。
本发明的十字交叉切割后可使后续头骨完全劈裂开，而不破坏脑组织。目前大多采用均分头骨，即从两耳中点，平行于鼻骨的方向，切割均分头骨，该种方法会破坏污染下丘脑和垂体。
优选的是，所述步骤（2）中20日龄小猪劈入骨头深度为0.2-0.4cm。
在上述任一方案中优选的是，所述步骤（2）中工具包括剪刀、电锯或者钢锯中的任意一种。
在上述任一方案中优选的是，所述步骤（3）暴露脑部组织后可采集大脑皮层和大脑组织。
在上述任一方案中优选的是，其特征在于:步骤（5）之后将取下的脑垂体或下丘脑用DEPC处理水洗涤后，用灭菌锡箔纸包裹，立即放入液氮保存;或在洗涤后用装有RNA保存液的EP管盛装后立即放入冰盒。
本发明提供一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，本发明采用十字交叉切割后可使后续头骨完全劈裂开，而不破坏脑组织。目前大多采用均分头骨，即从两耳中点，平行于鼻骨的方向，切割均分头骨，该种方法会破坏污染下丘脑和垂体。
本发明能快速将猪头骨劈开后获得完整、较低污染和较低降解的脑垂体及下丘脑组织样本，保证了脑部组织样本的采集效率，且克服了现有技术中脑垂体及下丘脑等组织污染程度高、较易丢失等缺陷，并适用于大量样本采集，且操作简单快捷。本发明方法简单，使用效果好。
附图说明
图1为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的一过程图；
图2为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的另一过程图；
图3为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的另一过程图；
图4为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的另一过程图；
图5为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的另一过程图；
图6为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的另一过程图；
图7为按照本发明采集猪脑垂体及下丘脑的方法具体实施时的另一过程图。
具体实施方式
为了更好理解本发明的技术方案和优点，以下通过具体实施方式，并结合附图对本发明做进一步说明。
实施例一
本发明提供一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，
一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，包括如下步骤:
1)取已屠宰的猪头部，用手术刀在平行于鼻骨方向的中间位置用手术刀片将皮肤切开，（该位置是左右头颅的对称位置，其本身在发育过程中具有一条没有完全愈合的骨缝，在这个位置切开皮肤有助于后续的左右头骨的分离）向两边剥离皮肤，暴露头骨，如图1所示。
2)用小猪可用剪刀，大猪用电锯或者钢锯垂直和平行鼻骨方向十字交叉切割，切割长度从鼻骨前缘，至头骨后缘，垂直鼻的方向至左右眼窝处，此方法便于后续的180°打开头盖骨，20日龄小猪劈入骨头0.2-0.4cm，刚能看见头内脑组织，不能破坏大脑皮层，如图2所示。
3)再沿劈口将两边的骨头劈开，根据其猪日龄不同其暴露面积不确定，总之需完全暴露大脑，完全，可方便后续分离大脑，小脑，下丘脑和垂体，将劈开的部分分离，直接暴露脑部组织；此时可采集大脑皮层和大脑组织，如图3和图4所示。
4)用眼科镊拨开小脑，暴露脑干与大脑结合处，使猪下丘脑可见，用眼科剪沿根部剪取下丘脑，如图5所示。
5)采集用眼科剪沿脑垂体与漏斗的相连处剪下，即得到完整猪脑垂体，如图6和图7所示。
6）之后将取下的脑垂体或下丘脑用DEPC处理水洗涤后，用灭菌锡箔纸包裹，立即放入液氮保存;或在DEPC处理水洗涤后用装有RNA保存液或者RNA稳定剂的EP管盛装后立即放入冰盒。
需要说明的是，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (5)
1.一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)取猪头部，在平行于鼻骨方向的中间位置将皮肤切开，从鼻骨前缘，至头骨后缘，向两边剥离皮肤，完全暴露头骨;
2)用工具垂直和平行鼻骨方向十字交叉切割，劈入骨头，刚能看见头内脑组织即可，不能破坏大脑皮层；
3)再沿劈口将两边的骨头劈开，使头骨盖完全反转180°，将劈开的部分分离，直接暴露脑部组织；
4)拨开小脑，暴露脑干与大脑结合处，使猪下丘脑可见，沿根部剪取下丘脑；
5)沿脑垂体与漏斗的相连处即头骨相连的位置剪下，即得到完整猪脑垂体。
2.如权利要求1所述的一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，其特征在于：所述步骤（2）中20日龄小猪劈入骨头深度为0.2-0.4cm。
3.如权利要求1所述的一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，其特征在于：所述步骤（2）中工具包括剪刀、电锯或者钢锯中的任意一种。
4.如权利要求1所述的一种采集猪脑垂体及下丘脑的方法，其特征在于：所述步骤（3）暴露脑部组织后可采集大脑皮层和大脑组织。
5.根据权利要求1所述的采集猪脑垂体及下丘脑的方法，其特征在于:步骤（5）之后将取下的脑垂体或下丘脑用DEPC处理水洗涤后，用灭菌锡箔纸包裹，立即放入液氮保存;或在洗涤后用装有RNA保存液的EP管盛装后立即放入冰盒。
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