CN109608549A - 基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用 - Google Patents

基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用，所述嵌合抗原受体由人CD8a分子信号肽、人源间皮素单链抗体、人CD8a分子柔性片段、人CD28分子跨膜区与胞内区、人41BB分子胞内区、人CD3z分子胞内区依次串联构成。本发明制备的嵌合抗原受体能够靶向间皮素，提高CAR‑T细胞治疗效果。

Description

基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其 应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用。
背景技术
间皮素(mesothelin)在多种肿瘤中高表达，是一种较好的肿瘤治疗靶点。利用转基因技术，将识别间皮素的嵌合抗原受体(CAR) 序列转导入T细胞中，能够产生特异识别间皮素、杀伤肿瘤细胞的 CAR-T细胞。CAR-T细胞治疗在血液系统肿瘤中展示了良好效果，但在实体肿瘤中的效果却难以令人满意。CAR-T细胞在实体瘤治疗中出现的短板与以下3个问题有关：1、CAR-T细胞识别区的来源是人源或是其他物种；2、CAR中的连接片段是否能够高效将胞外识别区信号传递给胞内活化区以启动T细胞杀伤；3、CAR活化后是否会导致T细胞迅速无能乃至耗竭。
发明内容
本发明主要提供了一种基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用，所述嵌合抗原受体能够靶向间皮素，提高 CAR-T细胞治疗效果。其技术方案如下：
一种基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体由人CD8a分子信号肽、人源间皮素单链抗体、人CD8a分子柔性片段、人CD28分子跨膜区与胞内区、人41BB分子胞内区、人CD3z分子胞内区依次串联构成。
优选的，所述人CD8a分子信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示，所述人源间皮素单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述人CD8a分子柔性片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述人CD28分子跨膜区与胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述人41BB分子胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述人 CD3z分子胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
一种核酸序列，所述核酸序列用于编码上述嵌合抗原受体，所述核酸序列如SEQID NO.8所示。
一种慢病毒表达载体，所述载体载有上述嵌合抗原受体。
优选的，所述嵌合抗原受体为在pCDH-EF1-MSC质粒中表达，形成pCDH-EF1-CAR-meso28BBz制粒。
一种慢病毒，所述慢病毒为将上述慢病毒表达载体与包装制粒 psPAX2和pMD2.G共转染靶细胞得到。
上述嵌合抗原受体在制备靶向间皮素的CAR-T细胞中具有医学上的应用。
采用上述方案，本发明具有以下优点：
(1)CAR主要由3部分构成：胞外识别区、信号转导区和胞内信号区。其中，胞外识别区决定了CAR-T细胞杀伤的特异性，往往由scFv序列构成，但很多scFv序列是小鼠来源的，会造成较强的免疫排斥反应，导致CAR-T细胞治疗无效。而我们选择了高亲和性识别间皮素的人源scFv序列(anti-meso scFv)，既能够有效避免免疫排斥，又能够高效识别靶细胞。胞内信号区也是决定CAR-T细胞治疗效果的重要结构，我们通过加入CD28和41BB双信号分子，显著提高了CAR-T细胞的功能与扩增。信号转导区的结构选择也影响 CAR-T细胞功能。我们利用CD8铰链区保证胞外识别区与信号区之间有了很好的结合，保证了CAR-T细胞的功能。此外，我们还添加了CD28与41BB双刺激分子结构，既保证了T细胞杀伤能力，还能维持T细胞增殖。
(2)采用非人源scFv作为识别区时，CAR-T细胞往往受到机体排斥，导致治疗失败。本发明采用了完全人源的抗间皮素scFv作为 CAR-T细胞识别区，可以有效避免上述问题，有助于治疗效果改善。另外，我们采取了CD28与41BB双刺激信号，既能够提高T细胞杀伤活性，也能够改善T细胞增殖与生存。此类转基因修饰的CAR-T 细胞具备更强、更持久的杀伤能力，有望提高实体瘤治疗效果。
附图说明
图1为meso-CAR结构示意图；
图2为流式细胞术检测T细胞表达CAR表达情况图；
图3为CAR-T细胞增殖情况图；
图4为CAR-T细胞特异杀伤间皮素阳性细胞结果图；
图5为CAR-T细胞控制小鼠肿瘤生长情况图。
具体实施方式
以下实施例中的实验方法如无特殊规定，均为常规方法，所涉及的实验试剂及材料如无特殊规定均为常规生化试剂和材料。
一、CAR结构
meso-CAR基本结构由人CD8a分子信号肽(Leading signal)、人源间皮素单链抗体(scFv)、人CD8a分子柔性片段(CD8Hinge)、人CD28分子跨膜区与胞内区(CD28)、人41BB分子胞内区(41BB) 和人CD3z分子胞内区(CD3z)依次串联构成，串联形成的结构如图1所示。所述meso-CAR结构的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
其中，人CD8a分子信号肽(Leading signal)的氨基酸序列为：
MALPVTALLLPLALLLHAARP(SEQ ID NO.1)
人源间皮素单链抗体(Human scFv)的氨基酸序列为：
QVQLVQSGAEVKRPGASVQVSCRASGYSINTYYMQWVRQAPGAGLEWMGVINPSGVTSYAQKFQGRVTLTNDTSTNTVYMQLNSLTSADTAVYYCARWALWGDFGMDVWGKGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSTLSASIGDRVTITCRASEGIYHWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLASGAPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQ PDDFATYYCQQYSNYPLTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO.2)
人CD8a分子柔性片段(CD8Hinge)的氨基酸序列为：
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFA CD(SEQ ID NO.3)
人CD28分子跨膜区与胞内区(CD28)的氨基酸序列为：
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMN MTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(SEQ ID NO.4)
人41BB分子胞内区(41BB)的氨基酸序列为：
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO.5)
人CD3z分子胞内区(CD3z)的氨基酸序列为：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRR GKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.6)
二、CAR序列合成及载体构建
CAR编码序列由上海生工公司合成，获得的meso-CAR结构的 DNA序列(SEQ IDNO.8所示)通过酶切连接插入到pCDH-EF1-MSC 质粒中，构建慢病毒表达质粒pCDH-EF1-CAR-meso28BBz。
三、慢病毒包装
包装细胞293T铺板24小时后，将pCDH-EF1-CAR-meso28BBz 表达质粒与包装质粒(psPAX2与pMD2.G)混合，利用磷酸钙转染试剂进行293T细胞转染。转染48小时后，收集上清，准备用于T 细胞感染。
四、T细胞纯化与感染
人外周血经密度梯度离心后，分离外周血单个核细胞。利用德国美天旎公司的T细胞分离试剂盒获得纯化的CD3+ T细胞，再按照2 个细胞加入1个磁珠的比例，加入适量CD3/CD28磁珠活化2天。2 天后，加入病毒上清与polybrene(6μg/mL)孵育过夜。次日，离心清洗T细胞3次后，加入含1000U IL-2与5％胎牛血清的RPMI1640 培养基扩增T细胞。
五、T细胞CAR表达效率
T细胞感染3天后，利用流式细胞术对T细胞表面CAR的表达情况进行检测。结果如图2所示。图2显示CAR表达阳性率到达约 50％，证明CAR表达质粒构建及病毒包装成功。
六、CAR-T细胞体外扩增
计数1×106个T细胞进行感染，并在感染后3，7，10和14天时进行计数，检测CAR-T细胞增殖情况。如图3所示，CAR-T细胞具有较强的增殖能力(14天内扩增20-60倍)，说明双刺激信号能够高效促进T细胞扩增。
七、CAR-T细胞杀伤效果
T细胞感染14天后，计数T细胞与靶细胞，并利用细胞染料 (eFluor670)对靶细胞进行标记。然后按照效靶比(效应细胞:靶细胞，E:T)1:1，1:5，1:20的比例，将T细胞(效应细胞)与间皮素阳性靶细胞(A549，H460，KYSE70，TE-1，HeLa，OvCar3)或间皮素阴性靶细胞(293与Raji)共孵育6小时(图4)。共孵育结束后，离心收集细胞，利用凋亡染色试剂盒标记细胞，然后流式细胞术分析靶细胞凋亡情况。结果显示，CAR-T细胞对表达间皮素的肿瘤细胞具有很强的杀伤能力，而对间皮素阴性细胞的影响很小，说明该 CAR-T细胞具有很强的特异性杀伤能力。
八、动物实验验证CAR-T细胞功能
免疫缺陷小鼠经尾静脉接种5×106个HeLa细胞10天后，经尾静脉分别注射5×106个CAR-T细胞或T细胞(T cell)进行治疗。治疗0，3，7，14天时，利用小动物活体成像设备，观察肿瘤大小。如图5所示，在CAR-T细胞注射后7天(A)，肿瘤体积明显缩小，而且随着治疗时间的延长，CAR-T细胞治疗组的肿瘤体积越来越小 (B)，提示CAR-T细胞具有良好的肿瘤杀伤能力。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 郑州大学第一附属医院
<120> 基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 2
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Gln Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Val Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
50 55 60
Gly Arg Val Thr Leu Thr Asn Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr Met
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Trp Ala Leu Trp Gly Asp Phe Gly Met Asp Val Trp Gly Lys Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Ile Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Ala Ser Glu Gly Ile Tyr His Trp Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Ser
180 185 190
Leu Ala Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 3
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 4
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
20 25 30
Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly
35 40 45
Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala
50 55 60
Ala Tyr Arg Ser
65
<210> 5
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 6
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
50 55 60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
100 105 110
Arg
<210> 7
<211> 535
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
20 25 30
Lys Arg Pro Gly Ala Ser Val Gln Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr
35 40 45
Ser Ile Asn Thr Tyr Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Met Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Val Thr Ser Tyr
65 70 75 80
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Asn Asp Thr Ser Thr
85 90 95
Asn Thr Val Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Ala Leu Trp Gly Asp Phe Gly Met Asp
115 120 125
Val Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145 150 155 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Ile Gly
165 170 175
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Gly Ile Tyr His Trp
180 185 190
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Ala Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
225 230 235 240
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Leu
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala
260 265 270
Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser
275 280 285
Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr
290 295 300
Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
305 310 315 320
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
325 330 335
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
340 345 350
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
355 360 365
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg
370 375 380
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
385 390 395 400
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
405 410 415
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
420 425 430
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
435 440 445
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
450 455 460
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
465 470 475 480
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
485 490 495
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
500 505 510
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
515 520 525
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
530 535
<210> 8
<211> 1605
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaagc ggcctggggc ctcagtgcag 120
gtttcctgca gggcatctgg atactccatc aacacctact atatgcaatg ggtgcgacag 180
gcccctggag cagggcttga gtggatggga gtaatcaacc ctagtggtgt cacaagctac 240
gcacagaagt tccagggcag agtcaccttg accaatgaca cgtccacgaa cacagtctac 300
atgcagctga acagcctgac atctgcagac acggccgtgt attactgtgc gagatgggca 360
ttgtgggggg atttcgggat ggacgtctgg ggcaagggaa ccctggtcac cgtctcctca 420
ggtggtggtg gttctggtgg tggtggttct ggtggtggtg gttccggtgg tggtggttcc 480
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctattggaga cagagtcacc 540
atcacctgcc gggccagtga gggtatttat cactggttgg cctggtatca gcagaagcca 600
gggaaagccc ctaaactcct gatctataag gcctctagtt tagccagtgg ggccccatca 660
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 720
gatgattttg caacttatta ctgccaacaa tatagtaatt atccgctcac tttcggcgga 780
gggaccaagc tggagatcaa aaccacgacg ccagcgccgc gaccaccaac accggcgccc 840
accatcgcgt cgcagcccct gtccctgcgc ccagaggcgt gccggccagc ggcggggggc 900
gcagtgcaca cgagggggct ggacttcgcc tgtgattttt gggtgctggt ggtggttggt 960
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 1020
agtaagagga gcaggctcct gcacagtgac tacatgaaca tgactccccg ccgccccggg 1080
cccacccgca agcattacca gccctatgcc ccaccacgcg acttcgcagc ctatcgctcc 1140
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 1200
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 1260
gaactgagag tgaagttcag caggagcgca gacgcccccg cgtaccagca gggccagaac 1320
cagctctata acgagctcaa tctaggacga agagaggagt acgatgtttt ggacaagaga 1380
cgtggccggg accctgagat ggggggaaag ccgcagagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1440
ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1500
ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1560
aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc 1605

Claims (7)

1.一种基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体由人CD8a分子信号肽、人源间皮素单链抗体、人CD8a分子柔性片段、人CD28分子跨膜区与胞内区、人41BB分子胞内区、人CD3z分子胞内区依次串联构成。
2.根据权利要求1所述的基于人源间皮素抗体的嵌合抗原受体，其特征在于：所述人CD8a分子信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述人源间皮素单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述人CD8a分子柔性片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述人CD28分子跨膜区与胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述人41BB分子胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述人CD3z分子胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
3.一种核酸序列，其特征在于：所述核酸序列用于编码权利要求1所述的嵌合抗原受体，所述核酸序列如SEQ ID NO.8所示。
4.一种慢病毒表达载体，其特征在于：所述载体载有权利要求1所述的嵌合抗原受体。
5.根据权利要求4所述的慢病毒表达载体，其特征在于：所述嵌合抗原受体为在pCDH-EF1-MSC质粒中表达，形成pCDH-EF1-CAR-meso28BBz制粒。
6.一种慢病毒，其特征在于：所述慢病毒为将权利要求4或5中的慢病毒表达载体与包装制粒psPAX2和pMD2.G共转染靶细胞得到。
7.权利要求1或2所述的嵌合抗原受体在制备靶向间皮素的CAR-T细胞中的应用。
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