CN109575111B

CN109575111B - 一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因及应用

Info

Publication number: CN109575111B
Application number: CN201811578974.2A
Authority: CN
Inventors: 姜福星; 黄远祥; 周鹏; 李西; 何伟; 王丽娜
Original assignee: Sichuan Tianyi Youjing Environment Technology Co ltd; Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Tianyi Youjing Environment Technology Co ltd; Sichuan Agricultural University
Priority date: 2018-12-24
Filing date: 2018-12-24
Publication date: 2022-02-08
Anticipated expiration: 2038-12-24
Also published as: CN109575111A

Abstract

本发明公开了一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因及应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明在建立白花虎眼万年青叶上珠芽高效再生体系和转录组分析基础上，从中克隆出了QtHIPP37基因及构建了超量表达载体，并将其转入模式植物烟草中，转基因烟草对干旱胁迫的抗逆性显著提高，证明了QtHIPP37基因能从分子水平提高植物的抗干旱、抗盐碱等抗逆性能，在植物生物技术应用中具有很好的应用前景。

Description

一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因及应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体地说，涉及一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因及应用。

背景技术

干旱和盐碱是目前严重制约农业生产的全球性问题，我国本身又是一个严重缺水，淡水资源非常匮乏的国家，以及受到气候变暖和化学肥料使用过多的影响，干旱缺水和土壤板结盐碱化等问题日益严重，对农林园艺生产构成极大威胁，尤其是许多花卉园艺植物是在保护地和温室中周年栽培，浇水灌溉耗费了大量的资源和人力物力，水资源亟需高效利用，同时栽培土壤盐碱化等问题更加加剧；更有许多工矿废弃的土地、重金属污染的土壤、盐碱滩地以及半干旱和干旱的土壤等尚需进行绿化美化，以及利用植物进行生态修复以实现土壤改良的目的，同时进行了生态文明和美丽中国建设、以及乡村振兴战略；均迫切需要培育出能适应半干旱甚至较严重的干旱及盐碱的恶劣环境的植物品种，为农林园艺园林生产，以及生态修复、生态文明和乡村振兴战略提供植物材料来源。

已有研究表明，从对干旱和盐碱以及重金属等耐受性强的植物中寻找分离与之相关的重要功能基因，并将其应用到植物的分子育种中从分子水平提高其对干旱等非生物胁迫的耐受性能是简约有效的途径。

鳞茎球根花卉是指其植株地下部分的茎或根变态、膨大并贮藏大量养分的一类多年生草本植物，包括百合、郁金香、风信子和番红花等，多数均具有较高的观赏、药用、经济和生态价值，具有抗逆性强、适应范围广、易栽培、好管理等优点，在园林绿化和生态园林建设中得到了较为广泛的应用，并在对工矿废弃土地、重金属污染的土地、盐碱地、半干旱和严重干旱的土地进行植物生态修复和生态文明建设中展示了巨大的发展潜力和应用前景。

白花虎眼万年青(Ornithogalum thyrsoides)是百合科虎眼万年青属多年生鳞茎球根花卉，具有生命力旺盛、适应范围广、繁殖能力强、易栽培等优点，尤其是对干旱、盐碱等逆境胁迫表现出很强的抗逆性能，但是其分子机制亟需深入研究。

分子伴侣蛋白是调控金属离子在细胞内安全运输的关键蛋白，与植物的抗性密切相关；而重金属相关的异戊二烯化植物蛋白(Heavy metal-associated isoprenylatedplant protein，HIPP)是植物特有的同时含有金属结合位点(HMA)和C末端异戊二烯化位点(Caax)的两个保守位点的分子伴侣蛋白，在拟南芥和小麦中研究表明，在重金属、干旱、寒冷、盐碱和病害等逆境胁迫条件下，该基因的表达量显著提高，特别是该基因可通过其重金属相关的结合位点(HMA)与逆境相关的锌指蛋白转录因子ATHB29互相作用，在植物的受到干旱威胁时候而产生的脱水胁迫中发挥重要作用，能从分子水平提高植物对脱水胁迫和干旱的抗性；但是HIPP基因仅在拟南芥和小麦等极少数植物中见到过报道，而在白花虎眼万年青中，乃至于百合科和鳞茎球根花卉以及其他植物中尚未见到报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因及应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因的表达蛋白，是如下(a1)或(a2)：

(a1)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(a2)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与具有相同功能的由SEQ ID NO.2衍生的蛋白质。

本发明还公开了一种上述的表达蛋白编码的基因。

可选地，所述基因为如下(b1)-(b3)中任一所述的DNA分子：

(b1)编码区如SEQ ID NO.1所示的DNA分子；

(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA序列杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；

(b3)来源于白花虎眼万年青并且与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有90％以上同源性的DNA分子。

本发明还公开了一种含有上述的基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

本发明还公开了一种上述的蛋白或者基因在鳞茎球根花卉育种中的应用。

可选地，所述鳞茎球根花卉为虎眼万年青或百合。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)本发明是建立在稳定成熟的白花虎眼万年青叶上珠芽高效再生体系及其三代与二代转录组(3+2)联合分析的基础上的，克隆了HIPP基因在白花虎眼万年青中的同源基因QtHIPP37，并将其置于双35启动子下构建了组成型的植物表达载体，将其导入模式植物烟草中并成功获得转基因烟草，随后将转基因烟草与野生型同时进行干旱等逆境胁迫处理。

2)研究结果表明，野生型烟草植株出现了较多叶片枯萎发黄，甚至生长不良和死亡等现象；而转基因烟草对干旱、盐碱和寒冷等非生物逆境胁迫显著增强，在较长时间受到干旱胁迫的情况下，转QtHIPP37基因烟草的正常生长发育受到影响较少，多数叶片仍然保持绿色甚至浓绿，园艺性状基本正常。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明白花虎眼万年青叶上珠芽总RNA的1％琼脂糖凝胶电泳图；其中，1和2均为相同的样本；

图2是本发明是白花虎眼万年青QtHIPP37基因完整编码区经PCR扩增后的产物的1％琼脂糖凝胶电泳图；其中，1:DL2000Marker；2:扩增出的QtHIPP37基因；

图3是本发明PHBYFP+QtHIPP37植物表达载体构建过程示意图；

图4是本发明PHBYFP+QtHIPP37植物表达载体经双酶切检测的凝胶电泳图；其中，1:10000bp Marker；2:PHBYFP+QtHIPP37植物表达载体双酶切检测；

图5是本发明转基因烟草的幼苗移栽图；

图6是本发明转基因烟草的PCR检测分析图；其中，1:野生型烟草为空白；M为DL2000Marker；2-11为经过潮霉素和除草剂双筛选后的转基因阳性烟草；

图7是本发明野生型烟草叶片与转基因烟草叶片形态特征比较；其中，A:野生型烟草叶片椭圆形；B:转基因烟草叶片倒卵形且边缘皱缩；C:转基因烟草叶片圆形且前端浅裂；

图8是本发明经过30-40天的干旱胁迫处理后，转基因烟草与野生型烟草的表型差异分析，其中，A:转基因烟草植株生长发育基本正常，多数叶片浓绿；B:野生型烟草叶片大多发黄且植株生长缓慢；

图9是本发明经过60-80天的干旱胁迫处理后，转基因烟草与野生型烟草的表型差异，其中，A:转基因烟草植株；B:野生型烟草植株。

具体实施方式

以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1白花虎眼万年青QtHIPP37基因的提取：

在经过灭菌的超净工作台上剪切白花虎眼万年青无菌组培苗的叶片并转接到含有细胞分裂素的培养基上，经过20～30天后，叶片表面逐渐长出多个绿色的小球，叶上珠芽开始形成，以白花虎眼万年青叶上珠芽为材料，提取RNA，并反转录成cDNA，设计相应引物进行PCR，琼脂糖凝胶电泳后，回收目的条带，与pMD19-T载体连接，转入大肠杆菌，测序并分析。挑取阳性克隆进行质粒抽提，根据PHBYFP植物表达载体的序列信息设计两条无缝融合的引物并对阳性质粒采用高保真酶进行PCR扩增，与进过线性化处理的PHBYFP植物表达载体进行无缝融合来进行植物表达载体构建，将构建好的植物表达载体用冻融法导入根瘤农杆菌LBA4404中，用叶盘法对烟草叶片进行侵染，在含有潮霉素的培养基上进行筛选，获得的抗性植株进行PCR鉴定后，观察其表型，并拍照记录。

(1)总RNA提取

在经过灭菌的超净工作台上剪切白花虎眼万年青无菌组培苗的叶片并转接到含有细胞分裂素的培养基上，经过20～30天后，叶片表面逐渐长出多个绿色的小球，叶上珠芽开始形成，以白花虎眼万年青叶上珠芽为材料，采用大连宝生物的总RNA提取试剂盒(RNAiso Plus)的操作步骤进行RNA的提取，所使用的试剂盒耗材均处理使其无RNA酶。白花虎眼万年青总RNA经过1％琼脂糖电泳检测结果如图1所示，条带清晰明亮；经过紫外分光光度计检测，其OD₂₆₀/OD₂₈₀值为1.90，OD₂₆₀OD₂₃₀值为,2.00，表明RNA质量较好，可用于下一步试验。

RNA提取的具体步骤为：用剪刀将组培玻璃瓶的白花虎眼万年青叶上珠芽剪取下来放到研钵内，加入液氮后研磨，用小勺小心地将匀浆装入已经加入RNAiPlus提取液的1.5ml的EP管中，并震荡使得植物匀浆与提取液充分接触混匀，室温静置5分钟，然后在冷冻离心机上12000g4℃离心5分钟，将上清液转移至新的1.5ml的EP管中，加入等体积的氯仿，震荡混匀，室温静置5分钟，12000g4℃离心15分钟，用移液枪吸取上清液转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，室温静置10分钟，12000g4℃离心10分钟，吸去上清液，用1ml的75％乙醇漂洗两次，在超净台上干燥，然后用适量的DEPC水溶解。

(2)cDNA模板的制备

以所得的RNA为模板，反转录获得cDNA，所使用的是诺唯赞公司的HiScriptII 1^stStrand Cdna Synthesis Kit试剂盒，1)反应混合液的制备：在无RNA酶的离心管内依次加入下列试剂：1uLPrimer(OligodT₂₃VN),总RNA6ul，并加入RNase free ddH₂O至12ul，在PCR仪上加热5分钟，迅速置于冰上骤冷，并在冰上静置2分钟，然后加入10×RT Mix 2ul和HiScript II Enzyme Mix 2ul轻轻混匀后在PCR仪上，程序为50℃50分钟，85℃5分钟，3)然后在上述反应液中加入1ul的RNaseH,37℃20分钟以去除DNA污染。

(3)基因完整编码区CDS的克隆

根据白花虎眼万年青叶上珠芽转录组获得的QtHIPP37基因完整编码区序列，设计引物进行PCR扩增，引物如下：

QtHIPP37F:ATGACTAAAGATGAAGAGTTCAAGC，

QtHIPP37R:TCACATCACAGAACAACTGCCAGTGCTGTC，

使用诺唯赞公司Phanta Super–Fidelity DNA Polymerase高保真酶进行基因克隆，25ul反应体系，5×buffer(with 10mMMgSO4)5ul,2.5mMdNTP2ul，正向引物2ul，反向引物2ul，cDNA模板2ul，Super–Fidelity DNA Polymerase0.5ul,余量加ddH2O补足。

PCR反应条件：95℃，4min；95℃30s，66℃30s，72℃2min；35℃cycle；72℃10min；4℃，Forever。

QtHIPP37基因编码区PCR产物在1％琼脂糖凝胶电泳，结果如图2所示，扩增出的QtHIPP37基因，约1100bp。

在紫外灯下，用解剖刀将目的条带的DNA从琼脂糖凝胶上小心切割下来，进行纯化回收，采用宝生物Takara pMD-T Vector载体系统进行连接反应，反应体系如下：5ulLigation Buffer，1ul pMD-T Vector，4ul PCR纯化产物，ddH2O补足至10ul，混匀，16℃过夜后，将其转入大肠杆菌感受态中，涂布平板，37℃倒置培养后挑取单克隆进行PCR鉴定及测序。

对获得的阳性克隆进行测序分析，发现QtHIPP37基因编码区长度为1101bp，序列为SEQ ID NO.1所示，所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，包括366个氨基酸的开发阅读框(ORF)。将测序获得的序列在NCBI上进行Blast比对，查找到其同源序列，采用软件进行其同源序列比对，发现与海枣、油棕等QtHIPP37基因同源性较高。

实施例2基因功能验证

首先构建白花虎眼万年青QtHIPP37基因植物表达载体，转入野生型烟草中，进行真核细胞表达及转基因烟草植株的表型观察、鉴定与分析。

(一)QtHIPP37基因的组成型植物表达载体的构建

1.将QtHIPP37基因的ORF克隆至PHBYFP载体并置于泛素启动子的控制下，具体方法为：

2.根据上述白花虎眼万年青QtHIPP37基因cDNA序列和PHBYFP载体的HindIII和BamHI各个酶切位点旁15～20个碱基设计无缝连接引物，序列如下：

PHBY-F-HindIIIQtHIPP37F:

ACCAGTCTCTCTCTCAAGCTTatgactaaagatgaagagttc；

PHBY-R-BamHIQtHIPP37R:

gctcaccatactagtggatccCATCACAGAACAACTGCCAGTG；

3.采用HindIIIQtHIPP37F和BamHIQtHIPP37R引物对已经获得的白花虎眼万年青cDNA模板进行扩增后回收目的条带，与经过HindIII和BamHI双酶切处理的线性化PHBYFP载体进行无缝融合连接，并将反应产物转化大肠杆菌，涂布平板，挑取单克隆后摇菌，提取质粒进行双酶切检测。

4.采用宝生物HindIII和BamHI快切酶双酶切，双酶切反应体系如下：：2ulbuffer,0.5ulXbaI，0.5ulKpnI，ddH2O up to 20ul。

在PCR仪上进行37℃，20分钟，1％琼脂糖凝胶电泳检测。

双酶切结果如图3和图4所示，切下来的QtHIPP37基因和PHBYFP植物表达载体条带符合目的片段大小，表示PHBYFP+QtHIPP37植物表达载体构建成功。

(二)叶盘法转化烟草

1.将PHBYFP+QtHIPP37植物表达载体采用冻融法转入根瘤农杆菌LBA4404感受态中，涂布平板；

2.在无菌条件下挑取平板上的阳性菌落，接种于YEB液体培养基中(Sm+，Kan+)，28度，200rpm振荡培养24～36小时；

3.在离心机上4000g离心5min后，丢弃上清，用1/2MS液体培养基悬浮菌丝体并稀释，使得菌液的浓度OD600值为0.6左右；

4.选取生长健壮的烟草组培苗的无菌叶片，去其主脉，剪成1平方厘米左右的小叶片；

5.将上述小叶片放入制备好的菌液中，浸泡5分钟，在无菌滤纸上吸干菌液；

6.把经侵染的叶片接种于MS培养基中，28度黑暗条件下共培养2～3天；

7.将经过共培养的烟草叶片转接到抑菌培养基(MS+6BA2.0mg/L+Carb250mg/L)上，在25度左右光照下培养，15～20天左右，以去除根瘤农杆菌；

8.将上述烟草接种于筛选培养基上(MS+6BA2.0mg/L+Hyg50mg/L)上，进行抗性不定芽的筛选；

9.将筛选出的不定芽切下转接到生根培养基(1/2MS+NAA1.0mg/L)上进行生根培养，一周后逐渐开始生根，并进行观察、记录和拍照。

10.选择长有八片叶子的转基因烟草和野生型烟草(8叶期)移栽至盆钵内(20cm(盆口直径)×30cm(高))，用蛭石和泥炭土混合形成的疏松透气的培养基质装填至盆口，每盆基本上移栽一株烟草的转基因烟草的组培苗，转基因烟草栽种10盆，另外用同样的方法移栽野生型烟草组培苗10盆作为对照，上述20盆烟草均在塑料棚内，避免外来雨水的影响，并用遮阴网适当遮阴而进行缓苗，缓苗期保持土壤相对持水量75％左右，进行烟草组培种苗的缓苗。

待转基因烟草和野生型烟草恢复正常生长(10叶期)后，先将每盆的土壤含水量调至相同，再进行轻中干旱处理，按照四天浇一次水和每次每盆浇水400ml的办法进行，分别于30～40天和60～80天后，观察分析转基因烟草和野生型烟草在受到干旱胁迫处理后的生长情况。

(三)转QtHIPP37基因烟草的筛选、鉴定、移栽及在轻中度干旱胁迫下的表型观察

1.转基因烟草幼苗移栽，如图5所示，获得的转QtHIPP37基因烟草幼苗移栽至营养钵中。

2.转基因烟草PCR鉴定，结果如图6所示，1为野生型烟草(空白)，未能扩增出目的条带；4-11:经过潮霉素和除草剂双筛选后的转基因阳性烟草，均扩增出了约1100bp的目的条带。

3.与野生型烟草椭圆形叶片相比，转基因烟草部分叶片变成了倒卵形和圆形，叶片边缘皱缩甚至浅裂，如图7所示，转基因烟草叶片形状发生了显著变化，野生型烟草叶片为椭圆形，转基因烟草叶片倒卵形和圆形并且叶片边缘皱缩或浅裂。

4.经过30-40天的干旱胁迫处理后，野生型烟草生长受到一定的抑制，生长不良，植株低矮且很多叶片变黄；而转基因烟草生长发育受到影响很少，植株生长基本正常，株型挺拔且叶片多数保持浓绿(图8)；

5.经过60-80天的干旱胁迫处理后，野生型烟草生长受到较为严重的抑制，生长严重不良，株型矮小且很多叶片枯萎，顶端花序仅有一两个分枝且开花也很小；而转基因烟草的生长发育受到影响很少，植株较为高大，顶端形成多个分枝的多歧复合有限聚伞花序和多个较大的花器官(图9)。

上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 四川天艺优境环境科技有限公司四川农业大学

<120> 一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因及应用

<130> 2018

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1101

<212> DNA

<213> 白花虎眼万年青(Ornithogalum thyrsoides)

<400> 1

atgactaaag atgaagagtt caagctcctc aagatccaga caatcatcct caaagtgaat 60

ctacactgtg atgggtgcaa gcagaaagtg aagaaactgc tccaaaaaat tgaaggggtt 120

tacacagtga acatagatgc agaacaacag aaggtcacag tgtcaggaaa tgttgattct 180

gccactttaa tcaagaagct agccagatca ggcaagcacg cagagctttg gcctcaaaag 240

tccaacaaca ccccaaaagg caacaacaac aatcaccacc accaacaaca atcttccaaa 300

gatggctcca agaacaacaa caaagggcaa gggcaggttc ccccaaacca agccctgctc 360

caaggcctca aagctttcaa gaaccagcac aacaacaagc aggttgaagt cttcagttcc 420

gatgaagacg attgctttga cgactatgat gacgaagatg atgaagacga gctcaagttc 480

ctcaatttcc taaaacaggg aaacaactct gcggccgctg ctggtaagaa gaatggcggt 540

ggaggcggcg caaacggggc caatgtagga ggcaagaagg tgaaccacca gaaccaggca 600

ggggcaaaag ggccaaatgg gtcagacccc aagctcacaa atggtgcacc acccaactct 660

aaaatgggca accctgggct tcttggtatg gggcattcaa tgacaggagg tgagcccaac 720

aagcatgcaa tgatgaacct aggaggaatg caaggcttcc agccctcgaa taatgctggt 780

gggcatggtg gaatgaatcc tcagatgatc aacttccaag ggtatcagaa caatccctca 840

gccatgatga tgaacctgag aggtctcacc aataacaacc accccaacat gatgcaatca 900

ctgcagcctc aggcccagcc tcagcctcag attgcgtaca atagagcacc tcagctccct 960

ccttacactg gctactacta cccctaccct tacccctact atgcaagccc ttacctcagt 1020

gcaccccagc agccagagaa tggagggtat ggtgccaatg ccttcaatga tgacagcact 1080

ggcagttgtt ctgtgatgtg a 1101

<210> 2

<211> 366

<212> PRT

<213> 白花虎眼万年青(Ornithogalum thyrsoides)

<400> 2

Met Thr Lys Asp Glu Glu Phe Lys Leu Leu Lys Ile Gln Thr Ile Ile

1 5 10 15

Leu Lys Val Asn Leu His Cys Asp Gly Cys Lys Gln Lys Val Lys Lys

20 25 30

Leu Leu Gln Lys Ile Glu Gly Val Tyr Thr Val Asn Ile Asp Ala Glu

35 40 45

Gln Gln Lys Val Thr Val Ser Gly Asn Val Asp Ser Ala Thr Leu Ile

50 55 60

Lys Lys Leu Ala Arg Ser Gly Lys His Ala Glu Leu Trp Pro Gln Lys

65 70 75 80

Ser Asn Asn Thr Pro Lys Gly Asn Asn Asn Asn His His His Gln Gln

85 90 95

Gln Ser Ser Lys Asp Gly Ser Lys Asn Asn Asn Lys Gly Gln Gly Gln

100 105 110

Val Pro Pro Asn Gln Ala Leu Leu Gln Gly Leu Lys Ala Phe Lys Asn

115 120 125

Gln His Asn Asn Lys Gln Val Glu Val Phe Ser Ser Asp Glu Asp Asp

130 135 140

Cys Phe Asp Asp Tyr Asp Asp Glu Asp Asp Glu Asp Glu Leu Lys Phe

145 150 155 160

Leu Asn Phe Leu Lys Gln Gly Asn Asn Ser Ala Ala Ala Ala Gly Lys

165 170 175

Lys Asn Gly Gly Gly Gly Gly Ala Asn Gly Ala Asn Val Gly Gly Lys

180 185 190

Lys Val Asn His Gln Asn Gln Ala Gly Ala Lys Gly Pro Asn Gly Ser

195 200 205

Asp Pro Lys Leu Thr Asn Gly Ala Pro Pro Asn Ser Lys Met Gly Asn

210 215 220

Pro Gly Leu Leu Gly Met Gly His Ser Met Thr Gly Gly Glu Pro Asn

225 230 235 240

Lys His Ala Met Met Asn Leu Gly Gly Met Gln Gly Phe Gln Pro Ser

245 250 255

Asn Asn Ala Gly Gly His Gly Gly Met Asn Pro Gln Met Ile Asn Phe

260 265 270

Gln Gly Tyr Gln Asn Asn Pro Ser Ala Met Met Met Asn Leu Arg Gly

275 280 285

Leu Thr Asn Asn Asn His Pro Asn Met Met Gln Ser Leu Gln Pro Gln

290 295 300

Ala Gln Pro Gln Pro Gln Ile Ala Tyr Asn Arg Ala Pro Gln Leu Pro

305 310 315 320

Pro Tyr Thr Gly Tyr Tyr Tyr Pro Tyr Pro Tyr Pro Tyr Tyr Ala Ser

325 330 335

Pro Tyr Leu Ser Ala Pro Gln Gln Pro Glu Asn Gly Gly Tyr Gly Ala

340 345 350

Asn Ala Phe Asn Asp Asp Ser Thr Gly Ser Cys Ser Val Met

355 360 365

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence )

<400> 3

atgactaaag atgaagagtt caagc 25

<210> 4

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence )

<400> 4

tcacatcaca gaacaactgc cagtgctgtc 30

<210> 5

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence )

<400> 5

accagtctct ctctcaagct tatgactaaa gatgaagagt tc 42

<210> 6

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence )

<400> 6

gctcaccata ctagtggatc ccatcacaga acaactgcca gtg 43

Claims

1.一种白花虎眼万年青QtHIPP37基因的表达蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID NO.2所示。

2.权利要求1所述的表达蛋白编码的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.含有权利要求2所述基因的重组表达载体或重组菌。

5.权利要求1所述的表达蛋白，或者权利要求2或3所述的基因在培育抗干旱鳞茎球根花卉中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述鳞茎球根花卉为虎眼万年青或百合。