CN109562081A - 防治神经炎症的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω‑3 PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA用于制备用于以下方面的组合物或药物的用途：在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状，以及降低小神经胶质细胞的激活，和/或治疗、减轻和/或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状；和/或在有需要的受试者中降低炎症细胞因子(优选IL‑6)的分泌，和/或治疗、减轻和/或预防与炎症细胞因子的过度分泌相关的症状。

Description

防治神经炎症的方法
本发明属于医疗营养学领域，更具体而言，涉及用于治疗或防治和/或预防中枢神经系统(CNS)(慢性或过度)炎症和/或降低中枢神经系统(CNS)(慢性或过度)炎症的风险的组合物。
背景技术
神经炎症是CNS的先天性免疫系统的应答，其与许多疾病相关，包括抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病和多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染、脑肿瘤。小神经胶质细胞被认为是神经炎症中涉及的重要的主要细胞类型。小神经胶质细胞是中枢神经系统的先天性免疫细胞，其对神经炎症迅速起作用。然而，小神经胶质细胞的长时间激活(如在慢性或急性神经炎症中)导致对脑组织和血脑屏障的损伤，从而引起神经退行性疾病。
饮食对其中神经炎症起作用的脑疾病的发病率的可能影响由Lourida等人(Epidemiology，2013，24，479-489)、Skarupski等人(J.Nutr.Health Aging，2013，17，441-445)和Jacka等人(Am.J.Psychiatry，2010，167，305-311)提出。还研究了特定营养素的可能的保护性作用，例如就n-3LC-PUFA而言(US 2003/0050341；Labrousse等人，PLoS One，2012，7，e36861；Laye等人，OCL，2011，18，301-306；Lalancette-Hébert，Stroke，2011，42，2903-2909)或者就维生素D而言(US 2012/0128711；Adzemovic等人，Exp.Neurol.2013，249，39-48；Amor，CNS and Neurological Disorders，2010，9，524)。
另一方面，已表明维生素A增加了大鼠大脑皮质中的高级糖基化终产物受体(RAGE)的含量(Roberto de Oliviera，An.Acad.Bras.Ciênc.2015，87(2Suppl.)，1361-1373)。
在本领域中，对于改进神经炎症的治疗和防治具有持续性需求。
发明内容
发明人出乎意料地发现，(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)多不饱和脂肪酸(PUFA)的结合物有效地治疗(防治)、减轻和/或预防有害的神经炎症，和/或治疗(防治)、减轻和/或预防与有害的神经炎症相关的症状。与单一成分相比，所述结合物降低了小神经胶质细胞的激活，并治疗、减轻或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状，并降低了炎症细胞因子的分泌。即使在单一组分不显示任何效果的剂量下，使用所述结合物也可观察到出乎意料的减轻效果。因此，益处之一是可降低单一组分的剂量(例如每日剂量)而不损害本发明的结合物的治疗功效。
在本发明的上下文中，将发明人所实现的效果视为在治疗上有利于治疗或预防神经炎症，所述神经炎症被认为是对受试者的健康有害，因此通常称为“有害的神经炎症”。因此，神经炎症在治疗上得到防治，而不会对受试者的健康造成伤害。
这些发现尤其是与中风诱导的或中风相关的神经炎症有关。在一个优选的实施方案中，维生素A和D(包括它们的等效物)，以及至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选至少DHA，甚至更优选DHA和EPA，构成组合物的一部分。这些组分(i)、(ii)和(iii)以治疗有效量存在。
更具体而言，已出乎意料地发现，本发明的结合物或组合物有效地降低了来自激活的小神经胶质细胞的NO和IL-6释放，其为神经炎症减轻的直接指示。已发现，(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)DHA和EPA的治疗结合物起协同作用，提供显著降低的NO和IL-6释放，而在相同浓度下的单一组分并未表现出这样的降低。在评估IL-6释放时观察到明显的降低趋势，并且发现NO释放显著降低。不希望囿于任何理论，发明人认为单一营养素(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)ω-3PUFA(优选DHA和EPA)的每一种均作用于神经炎症涉及的汇聚通路，并且所述结合物产生协同效应。
与之相关地，本发明因此涉及一种在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症或神经炎症相关症状的(治疗性)方法，包括给予受试者一种组合物或结合物，其包含治疗有效量的(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选至少DHA，甚至更优选DHA和EPA。因此，有害的神经炎症得到(预防性)治疗。本发明还可表述为治疗有效量的(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选至少DHA，甚至更优选DHA和EPA，用于制备用于在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状的组合物或药物的用途。换言之，本发明涉及一种在有需要的受试者中治疗性地用于治疗、减轻和/或预防神经炎症，和/或神经炎症相关症状的组合物，所述组合物包含治疗有效量的(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选至少DHA，甚至更优选DHA和EPA。本发明还涉及以下组分的结合物：(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA，(i)、(ii)和(iii)为治疗有效量，其在有需要的受试者中治疗性地用于治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状。所述结合物优选包含在组合物中和/或以组合物的形式给予。(预防性)治疗优选包括降低小神经胶质细胞的激活和/或降低炎症细胞因子(优选IL-6)的分泌。
与之相关地，本发明还涉及一种在有需要的受试者中用于以下方面的(治疗性)方法：降低小神经胶质细胞的激活，和/或治疗、减轻和/或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状，和/或降低炎症细胞因子(优选IL-6)的分泌；和/或治疗、减轻和/或预防与炎症细胞因子的过度分泌相关的症状；所述方法包括给予受试者一种组合物或结合物，其包含治疗有效量的(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA。换言之，本发明还涉及治疗有效量的(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选至少DHA，甚至更优选DHA和EPA用于制备在有需要的受试者中用于以下方面的组合物或药物的用途：降低小神经胶质细胞的激活，和/或治疗、减轻和/或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状；和/或降低炎症细胞因子(优选IL-6)的分泌，和/或治疗、减轻和/或预防与炎症细胞因子的过度分泌相关的症状。本发明还涉及一种在有需要的受试者中治疗性地用于以下方面的组合物：降低小神经胶质细胞的激活，和/或治疗、减轻和/或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状，和/或降低炎症细胞因子(优选IL-6)的分泌，和/或治疗、减轻和/或预防与炎症细胞因子的过度分泌相关的症状；所述组合物包含治疗有效量的(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选至少DHA，甚至更优选DHA和EPA。组分(i)、(ii)和(iii)以治疗有效量存在。本发明还涉及以下组分的结合物：(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA，(i)、(ii)和(iii)为治疗有效量；所述结合物在有需要的受试者中治疗性地用于以下方面：降低小神经胶质细胞的激活，和/或治疗、减轻和/或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状，和/或降低炎症细胞因子(优选IL-6)的分泌，和/或治疗、减轻和/或预防与炎症细胞因子的过度分泌相关的症状。所述结合物优选包含在组合物中和/或以组合物的形式给予。
在一个优选的实施方案中，本发明的方法、用途、使用的结合物或组合物涉及在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症，优选在有需要的受试者中治疗神经炎症，特别是在患有中风或具有增加的中风风险的受试者(包括具有增加的中风复发的风险的受试者)中治疗神经炎症。
优选的实施方案
1.治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA用于制备用于在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状的组合物或药物的用途。
2.实施方案1的用途，所述神经炎症与选自以下的疾病相关：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤，和/或所述受试者患有一种或多种选自以下的疾病：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤。
3.实施方案2的用途，所述疾病选自阿尔茨海默病(AD)、术后认知功能障碍(POCD)和中风。
4.实施方案3的用途，所述神经炎症为与中风相关的神经炎症，和/或所述受试者患有中风或具有增加的中风风险，优选具有增加的中风复发的风险。
5.前述实施方案中任一项的用途，所述神经炎症为慢性神经炎症。
6.前述实施方案中任一项的用途，所述治疗、减轻和/或治疗和/或预防包括降低神经炎症的强度和/或缩短神经炎症的持续时间。
7.前述实施方案中任一项的用途，所述治疗、减轻和/或预防包括降低小神经胶质细胞的激活和/或降低炎症细胞因子(优选TNF-α和/或IL-6)的分泌。
8.前述实施方案中任一项的用途，其中维生素A和/或功能等效物以0.05-3mg/天，优选0.5-1.5mg/天的每日剂量给予。
9.前述实施方案中任一项的用途，其中维生素D和/或功能等效物以0.1-100μg/天，优选5-15μg/天的每日剂量给予。
10.前述实施方案中任一项的用途，其中ω-3PUFA以500至5000mg的每日剂量给予。
11.前述实施方案中任一项的用途，其中DHA以0.05-5g/天，优选0.5-1.5g/天的每日剂量给予。
12.前述实施方案中任一项的用途，其中所述组合物还包含胆碱，优选还包含一种或多种维生素B。
13.前述实施方案中任一项的用途，其中所述组合物还包含磷脂、胆碱、一种或多种维生素B和抗氧化剂。
14.一种在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症或神经炎症相关症状的方法，包括给予所述受试者一种组合物或结合物，所述组合物或结合物包含治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA。
15.一种在有需要的受试者中治疗性地用于治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状的组合物，所述组合物包含治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA。
16.以下组分的结合物：(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种ω-3PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA，(i)、(ii)和(iii)为治疗有效量，所述结合物在有需要的受试者中治疗性地用于治疗、减轻和/或预防神经炎症或神经炎症相关症状。
优选的实施方案2-13的主题(例如医学适应症(medical indication)、剂量、化合物/成分)还适用于实施方案14的方法、实施方案15的组合物和实施方案16的结合物。
具体描述
发明人出乎意料地发现，维生素A、维生素D、EPA和DHA的结合物有效地降低了来自LPS刺激的BV-2细胞的NO释放。在激活的免疫细胞中，通过iNOS催化的反应，由L-精氨酸产生NO。iNOS的表达主要由转录因子NF-kappaB激活。已表明过量的NO产生会导致神经毒性作用。NO介导谷氨酸盐神经毒性并且已显示存在于数种脑病理中，包括神经退行性疾病。激活的免疫细胞抑制过度的NO释放的能力被广泛用作抗炎症功效的指标。发明人还发现，维生素A、维生素D、EPA和DHA的结合物有效地降低了来自LPS刺激的BV-2细胞的IL-6释放。IL-6水平增加与疾病严重程度相关，并且正在开发用于炎症疾病的新的治疗策略，其致力于阻断IL-6信号转导。基于这些出乎意料的发现，与单一组分实现的效果相比，本发明涉及维生素A和D以及它们的等效物和ω-3多不饱和脂肪酸(优选EPA和DHA)以结合物、组合物的形式的用途，所述结合物、组合物用于治疗与NO和/或IL-6过度产生相关的疾病的用途和方法。
组合物
本发明的方法、用途、使用的结合物或组合物包括给予本发明的组合物。本发明的组合物可用作药品或营养品，优选所述组合物为营养品或营养补充剂。
一方面，本发明的组合物可用作药品，其包括一种或多种药学上可接受的载体材料。这类产品可包含如下定义的以一个或多个剂量单元表示的每日剂量。剂量单元可以是液体形式或固体形式，其中在固体形式的情况下可以通过一个或多个固体剂量单元(例如一个或多个胶囊或片剂)来提供每日剂量。药品，优选用于肠内施用的药品，可以是固体或液体盖仑制剂。固体盖仑制剂的实例为片剂、胶囊(例如硬壳或软壳明胶胶囊)、丸剂、囊剂、粉剂、颗粒剂等，其包含活性成分以及常规的盖仑载体。可使用任何常规的载体材料。载体材料可以是适于口服给药的有机或无机惰性载体材料。适合的载体包括水、明胶、阿拉伯胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、植物油等。此外，可以根据可接受的药物复合配制操作加入添加剂，例如调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂等。尽管单一活性成分适于以单独的组合物给药，但是它们还可以以单独的剂量单元给药。
在一个优选的方面，本发明的组合物可为(可用作)营养品，例如营养补充剂，其可为(可用作)例如正常饮食添加剂、强化剂或完全营养物的添加剂。营养品优选包含选自脂肪、蛋白质和碳水化合物的至少一种组分，优选全部组分。应理解，营养品与药品的不同之处在于存在营养素，该营养素为被给予组合物的受试者提供营养，特别是存在蛋白质、脂肪、可消化的碳水化合物和/或膳食纤维。
在一个实施方案中，所述产品还包含碳水化合物和/或蛋白质，其中液体组分提供食品的10-95能量％，优选20-50能量％，更优选20-45能量％，甚至更优选25-45能量％，最优选30-40能量％。在一个实施方案中，食品为液体组合物，其含有大于0.5kcal/ml，优选大于0.8kcal/ml，优选1.0kcal/ml以上，或1.5kcal/ml以上，或甚至2kcal/ml以上。在一个实施方案中，食品为液体组合物，其含有0.5kcal/ml至2.5kcal/ml，优选0.5kcal/ml至2.5kcal/ml。
本发明的组合物通常为肠内组合物，即意欲用于口服给药。其优选以液体形式给药。优选地，所述组合物包含组分溶于和/或悬浮于其中的水。
组合物优选为液体。或者，组合物为固体(通常为粉末或片剂，优选为粉末)，其可用液体(优选水)来复配以获得液体组合物。
本文定义的组分剂量可以为例如每日剂量或每100ml的浓度。定义每100ml的浓度还适用于复配粉末，在这种情况下这些量在用液体复配之后来确定。
维生素A
本发明的用途、方法、组合物或结合物包含(i)维生素A，包括其功能等效物。适合使用本领域已知的任何功能形式的维生素A，包括视黄醇(特别是视黄醇酯类)、视黄醛、视黄酸、β-胡萝卜素、前维生素A，或其任意组合。优选地，所述组合物包含视黄醇，特别是乙酸视黄酯和/或棕榈酸视黄酯。
有利地，以以下每日剂量给予维生素A：0.05-3mg/天，优选0.1-2.5mg/天，更优选0.1-2mg/天，甚至更优选0.5-1.5mg/天或0.1-1mg/天，甚至更优选0.2-0.8mg/天，最优选0.2-0.5mg/天。根据视黄醇活性当量(RAE)来给予剂量，特别是对于成年人，并且技术人员能够确定儿童的剂量。此外，技术人员能够确定视黄醇等效物的剂量。通常将视黄醇活性当量定义为，1毫克RAE等于1毫克视黄醇或12毫克β-胡萝卜素。在本发明的组合物或结合物中，维生素A的量优选为这样的量，以便获得上文提及的每日剂量。这样的维生素A的含量特别适于在摄入较低量的组合物时实现本发明的效果。维生素A通常以治疗有效量来使用。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文定义的维生素A的用途，优选与维生素D或维生素D的功能等效物和/或至少一种ω-3PUFA(优选DHA和/或EPA)结合，治疗性地用于抵抗如本文定义的神经炎症，并且优选以本文详述的量。
维生素D
本发明的用途、方法、组合物或结合物包含(ii)维生素D，包括其功能等效物。维生素D是一组负责提高钙、铁、镁、磷酸盐和锌的肠内吸收的脂溶性开环甾类化合物。在人体内，该组中最重要的化合物是维生素D3(也称为胆钙化醇)和维生素D2(麦角钙化醇)。胆钙化醇和麦角钙化醇——统称为“钙化醇”——可从饮食和补充剂中摄取。当在阳光下充分暴露时，身体还可以在皮肤中由胆固醇合成维生素D(尤其是胆钙化醇)。适合使用本领域已知的任何功能形式的维生素D，包括维生素D1、维生素D2、维生素D3、维生素D4、维生素D5，或其任意组合。优选地，所述组合物包含维生素D2和/或维生素D3，更优选维生素D3。
维生素D，也称为钙化醇，包括一组负责提高钙、铁、镁、磷酸盐和锌的肠内吸收的脂溶性开环甾类化合物。在人体内，该组中最重要的化合物是维生素D3(也称为胆钙化醇)和D2(麦角钙化醇)。胆钙化醇和麦角钙化醇可从饮食和补充剂中摄取。当在阳光下充分暴露时，身体还可在皮肤中由胆固醇合成维生素D(尤其是胆钙化醇)。适合使用本领域已知的任何功能形式的维生素D，包括维生素D1、维生素D2、维生素D3、维生素D4、维生素D5，或其任意组合。优选地，所述组合物包含维生素D2和/或维生素D3，更优选维生素D2。有利地，以以下每日剂量给予维生素D：0.1-100μg/天，优选1-50μg/天，更优选1-25μg/天，更优选1-20μg/天，更优选5-15μg/天。在本发明的组合物中，维生素D的量优选为这样的量，以便获得上文提及的每日剂量。在本发明的用途、方法、组合物中，维生素D的量优选为1.3-40mg/100g组合物，更优选1.8-34mg/100g组合物，最优选2.0-28mg/100g组合物。这样的维生素D的含量特别适于在摄入较低量的组合物时实现本发明的效果。维生素D通常以治疗有效量来使用。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文定义的维生素D的用途，优选与维生素A或维生素A的功能等效物和/或至少一种ω-3PUFA(优选DHA和/或EPA)结合，治疗性地用于抵抗如本文定义的神经炎症，并且优选以本文详述的量。
PUFA
本发明的组合物或结合物包含(iii)至少一种ω-3长链多不饱和脂肪酸(PUFA)。在本发明的上下文中，LC-PUFA(长链PUFA)的链长度为18个以上的碳原子。尽管可存在一种PUFA，但优选存在至少两种不同的PUFA。PUFA优选选自二十二碳六烯酸(22:6；DHA)、二十碳五烯酸(20:5；EPA)、二十二碳五烯酸(22:5ω-3；DPA)及其混合物，优选DHA和EPA中的至少一种，甚至更优选至少DHA。优选地，本发明的组合物或结合物包含至少治疗有效量的DHA，更优选DHA和EPA。已发现DHA对于降低NO释放具有显著效果，但在将DHA与EPA结合时该效果得到进一步提高。PUFA优选与维生素A和维生素D(包括它们的功能等效物)结合使用。
PUFA优选以下述物质提供：甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯、游离脂肪酸或其盐或酯、磷脂、溶血磷脂、甘油醚、脂蛋白、神经酰胺、糖脂，或其组合。优选地，本发明的组合物至少包含甘油三酯形式的DHA。适合的(n-3)PUFA来源包括海洋油(例如鱼油、藻油或磷虾油)、富含DHA的烷基酯、蛋黄或富含(n-3)LC-PUFA的磷脂(例如磷脂酰丝氨酸-DHA)。优选地，(n-3)PUFA来源为鱼油或藻油。
n-3LC-PUFA(更优选DHA+EPA)在总脂肪酸中的比例优选为5-95重量％，更优选10-80重量％，最优选15-70重量％。本发明的组合物优选包含基于总脂肪酸计5-95重量％的DHA，优选基于总脂肪酸计10-75重量％的DHA，更优选基于总脂肪酸计10-60重量％的DHA。本发明的组合物优选包含基于总脂肪酸计5-95重量％的EPA，优选基于总脂肪酸计10-75重量％的EPA，最优选15-60重量％的EPA。在一个实施方案中，PUFA，优选DHA和/或EPA，最优选DHA和EPA，是唯一存在的脂肪酸，因此构成100重量％的总脂肪酸。
就每日剂量而言，有利地以以下每日剂量给予DHA：0.05-5g/天，优选0.1-4g/天，更优选0.5-2g/天，最优选0.5-1.5g/天。在本发明的组合物或结合物中，DHA的量优选为这样的量，以便获得上文提及的每日剂量。有利地以以下每日剂量给予EPA：0.1-5g/天，优选0.5-4g/天，更优选1-3g/天，最优选1.3-1.8g/天。在本发明的组合物或结合物中，EPA的量优选为这样的量，以便获得上文提及的每日剂量。
所述组合物优选给予500-5000mg n-3LC-PUFA(更优选DHA+EPA)/天，更优选750-4000mg/天，最优选1000-3000mg/天。如果同时存在DHA和EPA，则DHA与EPA的重量比优选为约1:4至约10:1，优选大于1，更优选约2:1至约10:1，更优选约3:1至约8:1。
除n-3PUFA以外，组合物还可包含n-6PUFA或n-6LC-PUFA(例如α-亚麻酸(ALA)、亚油酸(LA))。ALA浓度优选维持在基于总脂肪酸的重量计小于2.0重量％的水平，更优选小于1.5重量％，特别是小于1.0重量％。LA浓度可以维持在基于总脂肪酸的重量计20-30重量％，尽管在一个实施方案中LA浓度显著降低至小于15重量％，甚至小于10重量％的量，基于总脂肪酸计。LA浓度优选为总脂肪酸的至少1重量％。
在一个实施方案中，在本发明的组合物中，n-3PUFA:n-6PUFA的重量比优选在0.3至7的范围内，优选在1.4:1至5.9:1的范围内，更优选在3:1至5.5:1的范围内，最优选在3:1至5:1的范围内，特别地小于5:1。基于组合物中脂肪酸的总重量计，n-6LC-PUFA的量优选小于50重量％，优选在5-40重量％的范围内，更优选为8-30重量％。
其他组分
本发明的组合物可包含其他组分，例如选自磷脂、胆碱和一种或多种维生素B的一种或多种，优选全部三种，更优选还包含抗氧化剂。优选存在(治疗有效量的)胆碱、一种或多种维生素B(特别是叶酸和维生素B6)和抗氧化剂(特别是维生素C和/或E)中的一种或多种，优选全部三种，因为已表明脑损伤导致这些组分的营养缺乏。因此，存在的胆碱、一种或多种维生素B(特别是维生素B12)和抗氧化剂(特别是维生素C和/或E)可有助于患有神经炎症的患者的总体健康。这些组分通常以治疗有效量存在。在一个实施方案中，不存在其他活性组分，并且所述组合物或结合物由(i)维生素A、(ii)维生素D和(iii)至少一种ω-3PUFA组成。
本发明的组合物可包含治疗量的磷脂。优选地，一种或多种磷脂存在于本发明的组合物中，优选一种或多种选自磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷酸肌醇(PI)的磷脂。本发明的组合物优选包含至少一种磷脂，其量为0.01-1g/100ml，更优选0.05-0.5g/100ml，最优选80-600mg/100ml。至少一种磷脂优选由卵磷脂提供。
本发明的组合物可包含治疗量的胆碱。胆碱可以其本身存在，或作为例如盐或酯形式或其任意组合的形式的胆碱等效物存在。胆碱盐优选选自盐酸胆碱、酒石酸氢胆碱或硬脂酸胆碱。胆碱酯优选选自磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱。本发明的组合物优选给予大于50mg胆碱/天，优选80-3000mg胆碱/天，更优选100-2000mg胆碱/天，最优选150-1000mg胆碱/天。本发明的组合物优选包含80mg-3000mg胆碱/100ml液体组合物，优选100mg-2000mg胆碱/100ml，优选200mg-1000mg胆碱/100ml组合物，最优选200mg-600mg胆碱/100ml。上述数值基于胆碱计，可考虑与胆碱的摩尔当量计算胆碱等效物或胆碱来源的量。
本发明的组合物可包含一种或多种维生素B，优选至少一种、更优选至少两种选自维生素B6、维生素B12和维生素B9的维生素B。更优选地，组合物至少包含维生素B6和/或B9，最优选维生素B6、B9和B12。这些术语中涵盖了功能等效物。例如，术语“维生素B12”包括本领域已知的全部钴胺素等效物。维生素B以治疗有效剂量给予。
维生素B6优选以这样的量存在，以提供在0.1至100mg范围内的每日剂量，特别是在0.5至25mg范围内，更特别是在0.5至5mg范围内。本发明的组合物优选包含0.1至100mg维生素B6/100g(液体)产品，更优选0.5至5mg维生素B6/100g(液体)产品，更优选0.5至5mg维生素B6/100g(液体)产品。维生素B9优选以这样的量存在，以提供在50至5000μg范围内的每日剂量，特别是在100至1000μg范围内，更特别是在200至800μg范围内。本发明的组合物优选包含500至5000μg维生素B9/100g(液体)产品，更优选100至1000μg维生素B9/100g(液体)产品，更优选200至800μg叶酸/100g(液体)产品。维生素B9可以作为叶酸类存在，其包括叶酸，亚叶酸，甲基化、亚甲基化(methenylated)和甲酰化形式的叶酸，它们的盐或酯(例如C1-6烷基酯)，以及它们与一种或多种谷氨酸的衍生物，并且全部为还原形式或氧化形式。优选地，提供的维生素B9为叶酸。维生素B12优选以这样的量存在，以提供在0.5至100μg范围内的每日剂量，特别是在1至10μg范围内，更特别是在1.5至5μg范围内。本发明的组合物优选包含0.5至100μg维生素B12/100g(液体)产品，更优选1至10μg维生素B12/100g(液体)产品，更优选1.5至5μg维生素B12/100g(液体)产品。
本发明的组合物还可包含抗氧化剂，优选选自维生素C、维生素E和硒，优选至少维生素E。特别优选所述组合物同时包含维生素C和维生素E，最优选本发明的组合物包含维生素C、维生素E和硒。抗氧化剂优选包含在本发明的组合物中，因为它们可以防止由膳食PUFA引起的氧化损伤。
维生素C包括其功能等效物，并且可以以这样的量存在，以提供在20至2000mg范围内的每日剂量，特别是在30至500mg范围内，更特别是在75至150mg范围内。在一个实施方案中，在每100ml组合物中所存在的维生素C的量在20至2000mg范围内，特别是在30至500mg范围内，更特别是在75至150mg范围内。
维生素E指的是本领域已知的具有维生素E活性的化合物，通常是生育酚和/或其等效物。维生素E可以以这样的量存在，以提供在10至300mg范围内的每日剂量，特别是在30至200mg范围内，更特别是在35至100mg范围内。所述量的维生素E防止由本发明的组合物中存在的膳食PUFA引起的损伤位置的氧化损伤。在一个实施方案中，每100ml组合物中存在的生育酚和/或等效物的量在10至300mg范围内，特别是在30至200mg范围内，更特别是在35至100mg范围内。本发明的说明书中使用的术语“生育酚和/或其等效物”包括生育酚类(例如α-和γ-)、生育三烯酚类、它们的药学和/或营养上可接受的衍生物，以及其任意组合。上述数值基于α-生育酚等效物(α-TE)计，如本领域所公认的。
本发明的组合物优选包含硒。硒的抗氧化活性有利地防止和/或抑制对脑区域的损伤。优选地，所述组合物包含0.01-5mg硒/100ml液体产品，优选0.02-0.1mg硒/100ml液体产品。每天给予的硒的量优选大于0.01mg，更优选0.01至0.5mg。
应用
本发明的用途、结合物、组合物或方法用于在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状。本发明还涉及降低小神经胶质细胞的激活和/或治疗、减轻和/或预防与小神经胶质细胞的过度激活相关的症状；和/或降低炎症细胞因子(特别是IL-6)的分泌，和/或治疗、减轻和/或预防与炎症细胞因子的过度分泌相关的症状。在本发明的上下文中，预防性治疗包括降低神经炎症和/或其症状、小神经胶质细胞的激活和/或其症状、细胞因子的分泌和/或其症状的风险或发生率。在本发明的上下文中，“神经炎症”还可以指中枢神经系统(CNS)的炎症。在本文中，CNS是指脑和脊髓，优选地，本发明涉及脑的炎症。在本发明的上下文中，“分泌”(如“炎症细胞因子的分泌”)和“释放”(如“炎症细胞因子的释放”)是同义的，并且可互换使用。
在本发明的上下文中，“神经炎症相关症状”可以称为神经炎症的症状，并且在技术人员的理解范围之内完全知晓哪些是神经炎症的症状。
在说明书和权利要求书通篇中，术语“神经炎症的治疗”包括预防并且通常包括防治神经炎症，优选达到(病理性或有害)神经炎症被遏制、限制或减轻的程度。(有害或病理性)神经炎症可以是急性或慢性神经炎症。在本发明的上下文中，治疗和/或减轻神经炎症包括降低(有害)神经炎症的强度和/或缩短(有害)神经炎症的持续时间。在一个实施方案中，缩短神经炎症的持续时间相当于，与给予单一组分维生素A、维生素D或PUFA相比，持续时间缩短，例如持续时间缩短至少10％，优选缩短至少25％。在一个实施方案中，降低神经炎症的强度相当于降低炎症细胞因子(优选IL-6)的分泌，例如，与仅给予维生素A相比，分泌降低至少10％，优选降低至少20％；和/或与仅给予维生素D相比，分泌降低至少10％，优选降低至少20％；和/或与仅给予PUFA相比，分泌降低至少10％，优选降低至少20％。在一个实施方案中，降低神经炎症的强度相当于降低NO释放，例如，与仅给予维生素A相比，表达降低至少10％，优选降低至少30％；和/或与仅给予维生素D相比，表达降低至少10％，优选降低至少30％；和/或与仅给予PUFA相比，表达降低至少10％，优选降低至少30％。
脑组织或脑脊髓液中的IL-6和NO水平的增加与神经炎症疾病相关，所述疾病为例如抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤。因此，在一个实施方案中，神经炎症与选自以下的疾病相关：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤。同样，在一个实施方案中，受试者患有一种或多种选自以下的疾病：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤。在一个实施方案中，本发明的用途、方法、结合物或组合物用于治疗和/或预防选自以下的疾病：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤。在本发明的上下文中，优选的疾病为阿尔茨海默病(AD)、术后认知功能障碍(POCD)和中风。
在一个实施方案中，神经炎症是慢性神经炎症或长期神经炎症，被认为对受试者的健康状况有害的神经炎症。患有有害神经炎症或小神经胶质细胞激活的受试者优选患有神经退行性疾病，例如抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病和多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染、脑肿瘤。在一个实施方案中，本发明的组合物用于治疗和/或预防神经炎症，优选用于治疗神经炎症，特别是降低神经炎症的持续时间和/或程度。
在一个实施方案中，神经炎症是中枢神经系统的神经炎症。此外，在本发明的上下文中，通常降低中枢神经系统中的小神经胶质细胞的激活和/或炎症细胞因子的分泌。小神经胶质细胞的过度激活导致对脑组织和血脑屏障的损伤，从而引起神经退行性疾病。
本发明特别涉及由毒素或有毒代谢物、自身免疫、衰老、感染(例如细菌或病毒感染)、创伤性脑损伤、中风引起的神经炎症，最优选与中风相关的神经炎症或由中风诱导的神经炎症。在一个优选的实施方案中，目标受试者患有中风、已经患有中风、具有增大的中风风险或增大的中风复发的风险。在一个实施方案中，本发明的用途、方法、使用的结合物或组合物用于预防中风复发或二次或再次发生中风和/或降低中风复发或二次或再次发生中风的风险。同样，在一个优选的实施方案中，目标受试者已经患有中风。
在一个实施方案中，本发明的用途、结合物、组合物或方法用于治疗性地降低炎症细胞因子的分泌和/或用于治疗、减轻和/或预防其相关症状。降低或减少炎症细胞因子的分泌可采取以下形式：降低(过度)表达的炎症细胞因子的量(程度)和/或缩短(过度)的炎症细胞因子分泌的持续时间。所述炎症细胞因子分泌的降低通常发生在中枢神经系统中。在该用途的优选的实施方案中，炎症细胞因子为IL-4、IL-6、IL-10和TNFα中的至少一种，优选IL-6和TNFα的至少一种，最优选至少IL-6。炎症细胞因子(例如IL-6)在神经炎症期间通常由激活的小神经胶质细胞表达，并且导致氧化应激增加的持续状态。
在一个实施方案中，本发明的用途、结合物、组合物或方法用于治疗性地降低NO释放和/或用于治疗、减轻和/或预防其相关症状。NO释放的降低或减少可采取以下形式：降低(过度)释放的NO的量(程度)和/或缩短(过度的)NO释放的持续时间。所述NO释放的降低通常发生在中枢神经系统中。已表明过度的NO释放导致神经毒性作用。在本发明的上下文中，“NO释放”还可以称为“NO产生”。
上文描述的用途、结合物、组合物或方法可以用作营养疗法、营养辅助的一部分，用作医疗食物、用作特殊医疗目的的食物或用作营养补充剂。通常在神经炎症发病后的恢复和/或康复期间给予本发明的组合物，并且只要其负面效果在延长就可以持续给予本发明的组合物。尽管在给药的第一周内已观察到积极效果，但优选给药持续至少2周，更优选至少4周。优选在神经炎症发病后的第一天开始给药。在中风发病后的恢复和/或康复期间，本发明的组合物可以每天服用若干次，优选每天一次、二次或三次服用50-250mL，通常是每天125mL或200mL。优选的每日剂量范围是100至500mL，更优选125至375mL，最优选125至300mL。
优选地，所述组合物经肠给予。优选每天给予至少一次，尽管可由这些数值确定替代的剂量方案。
附图说明
图1示出了单一营养素对LPS诱导的NO和IL-6释放的效果，如实施例1所示。用不同营养素(I＝维生素A；II＝维生素D；III＝DHA；IV＝EPA)温育后，来自LPS激活的小神经胶质细胞的NO(图1A)和IL-6(图1B)释放表示为来自未用营养素温育的LPS激活的小神经胶质细胞的NO释放(对照，设定为100％)的百分比。与对照相比，营养素I-III显示出显著降低的NO和IL-6释放(p<0.001)。
图2示出了单一营养素和营养素结合物对LPS诱导的NO和IL-6释放的效果，如实施例2所示。用不同营养素(I＝维生素A；II＝维生素D；III＝DHA；IV＝EPA；V＝维生素A+维生素D+DHA+EPA)温育后，来自LPS激活的小神经胶质细胞的NO(图2A)和IL-6(图2B)释放表示为来自未用营养素温育的LPS激活的小神经胶质细胞的NO释放(对照，设定为100％)的百分比。与单一成分I-IV相比，营养素结合物V显示出显著降低的NO释放(p<0.001)。
实施例
实施例1和2的材料和方法
试剂：以下物质购自Sigma Aldrich并且未经进一步纯化即可使用：脂多糖(LPS，来自大肠杆菌(Escherichia coli)055:B5)，维生素B6、B9(叶酸)，维生素B12，维生素A，维生素D3(形式为7-脱氢胆固醇/25-OH维生素D3)(乙醇中100μg/ml)，顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA)、顺-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(EPA)。
BV-2细胞培养物：BV-2细胞由IRCCS获得(Azienda Ospedaliera UniversitariaSan Martino–ISTIstituto Nazionale per la Ricerca sul Cancro，Genova，Italy)。BV-2细胞系是来自C57bl/6小鼠的永生细胞系。它们被认为非常类似于原代小神经胶质细胞的生理机能，并且成为用于体外研究的成熟模型(Henn等人，ALTEX，2009，26，83-94)。脂多糖(LPS)是一种来自革兰氏阴性细菌的细胞壁的内毒素，并且是最广泛使用的激活免疫细胞的试剂。将细胞培养在Dulbecco改良的伊格尔培养基(DMEM，Gibco)中并保持在37℃和5％CO2中，所述培养基补充有10％热灭活的胎牛血清(Invitrogen)、10,000单位/ml青霉素(Gibco)、10,000μg/ml链霉素(Gibco)和200mM L-谷氨酰胺(Gibco)。在实验前24小时，将细胞以约20,000个细胞/孔的细胞密度接种在96孔板(Corning)上，并且在实验持续期间使其保持在DMEM中，所述DMEM补充有2％胎牛血清(Invitrogen)、10,000单位/ml青霉素、10,000μg/ml链霉素和200mM L-谷氨酰胺。
细胞存活率：使用浓度为1mg/ml的2,3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑鎓-5-甲酰苯胺内盐(XTT，Sigma)来评估细胞增殖和存活率。加入浓度为200mg/ml的吩嗪硫酸甲酯(PMS，Sigma)作为电子耦联剂。将无菌水中的XTT/PMS溶液(100μl)加入每个孔中。2小时之后，在450nm(和690nm作为参照)下测量吸光度。针对细胞数目校正吸光度。对于每次实验，均重复存活率测试，作为板内对照。将其中细胞存活率低于未处理的对照细胞的存活率的85％的实验结果从数据分析中排除。
Griess测定法(一氧化氮释放)：将细胞用不同的营养素结合物处理24小时。在该处理之后，将培养基更换为含有LPS(50ng/ml)连同相同营养素的新鲜培养基。温育24h之后，收集培养基以测量NO释放。由BV-2细胞释放的NO的稳定产物是NO2-。根据制造商的说明，使用Griess测定法试剂盒(Promega)来测量NO2-的浓度。针对细胞存活率来校正数据(未处理的对照细胞的存活率代表100％的存活率)。数据表示为由仅用LPS刺激的细胞释放的NO的百分比。为了评估测试之间的变化，将来自仅用LPS处理的数据合并，并计算实验之间的平均NO释放。对于仅用LPS处理，NO释放表示为实验之间的平均释放的百分比。
ELISA(IL-6)：将细胞用不同的营养素结合物处理24h。随后，移除培养基，并将细胞在含有LPS(50ng/ml)连同相同营养素的新鲜培养基中温育24h。收集培养基以测量IL-6释放。在-80℃下储存收集的样品直至进一步分析。根据制造商方案，使用购自Biolegend的ELISA MAXTM Deluxe来评估细胞因子水平。针对细胞存活率来校正数据。数据表示为由仅用LPS刺激的细胞释放的IL-6的百分比。为了评估测试之间的变化，将来自仅用LPS处理的数据合并，并计算实验之间的平均IL-6释放。对于仅用LPS处理，IL-6释放表示为实验之间的平均释放的百分比。
统计分析：所有实验至少进行三次。数据表示为：代表平均值的点和代表标准误差平均值(SEM)的柱(bar)。由于样品量小，使用了非参数统计学检验。使用Kruskal-Wallis H检验来分析数据，如果达到统计学上的显著性，则进行Mann Whithey U检验以及Bonferroni-Holm事后校正以允许多重比较。如果概率(p)<0.05，则认为差异具有统计学上的显著性。
实施例1：单一营养素的效果
将BV-2细胞用不同的营养素预处理24h：(I)维生素A(1.75μM)；(II)维生素D(1μg/ml)；(III)DHA(20μM)；(IV)EPA(20μM)；(V)维生素B6(29μM，包括培养基中已存在的19μM)；(VI)叶酸(24μM，包括培养基中已存在的9μM)；(VII)维生素B12(0.2μM)。之后使用LPS(50ng/ml)与相同的营养素一起温育24h。收集培养基，以使用Griess测定法来测量NO释放(图1A)和使用ELISA来测量IL-6释放(图1B)。NO和IL-6水平表示为由仅用LPS处理的细胞产生的浓度(LPS对照，虚线)的百分比。所有的图均代表来自4个独立实验的结果(平均值±SEM)。使用Kruskal-Wallis H检验，随后进行Bonferroni-Holm事后检验，对数据进行统计分析。当p<0.05时，则认为差异具有统计学上的显著性。
营养素以高的非毒性浓度使用，所述浓度获自单一物质及其混合物的剂量-效应曲线，在该浓度下与未处理的对照相比，细胞存活率未降低至低于90％。以类似的方式，LPS的剂量-效应曲线获自NO释放测量，以选择半最大有效浓度(EC50)。使用Griess测定法来测量由激活的BV-2细胞释放的促炎症介导因子一氧化氮(NO)。仅暴露于培养基或补充有营养素的培养基的细胞未显示出任何可检测的NO释放(数据未示出)。用LPS(50ng/ml)处理BV-2细胞24h，导致NO的强烈释放。为了研究营养素抑制LPS诱导的NO释放的效力，将BV-2细胞用营养素预处理24h，随后用LPS和相同的营养素共同处理另外24h。在这些实验中，维生素B6、B9和B12以及氨基酸L-色氨酸和L-赖氨酸没有对LPS诱导的NO释放造成任何显著的影响(数据未示出)。与LPS处理的对照相比，脂肪酸DHA导致NO释放显著下降，68％(IQR，49-77％，p＝0.036)(图1A)。脂肪酸EPA导致NO释放下降至80％(IQR，75-91％，p＝0.115)，这不具有统计学上的显著性，而混合DHA和EPA导致NO释放下降至61％(IQR43-66％，数据未示出)。在该测定法中，最有效的抗炎症营养素是维生素A和D(图1A)。相对于LPS处理的对照细胞，维生素D将NO释放显著下降至43％(IQR 36-55％；p＝0.032)。通过用维生素A处理，还观察到显著的抗炎症效果。维生素A将NO释放显著下降至LPS处理的对照的39％(IQR 20-52.4％；p＝0.024)。因此，结论是，在所有测试的营养素中，维生素A和D以及DHA最有效地降低LPS诱导的NO释放。
使用ELISA来研究营养素对LPS诱导BV-2细胞产生IL-6的抗炎症效果。LPS处理导致来自BV-2细胞的IL-6释放以浓度依赖性方式高度增加。对于本实验而言，根据IL-6释放的浓度依赖性曲线选择最佳LPS浓度(诱导约50％的最大释放)(数据未示出)。类似于对于NO释放观察到的效果，在这些实验中维生素B6、B9和B12以及氨基酸L-色氨酸和L-半胱氨酸没有对LPS诱导的IL-6释放造成任何显著的影响(数据未示出)。对IL-6释放的抑制的响应更大(图1B)。DHA使LPS刺激的BV-2细胞的IL-6释放显著下降至68％(IQR49-77％，p＝0.032，n＝4)。脂肪酸EPA导致IL-6释放下降至70％(IQR，67-96％，p＝0.7，n＝4)(图1B)，但在统计学上不具有显著性。而混合DHA和EPA导致IL-6释放下降至51％(IQR 38-54％，数据未示出)。维生素A和D分别使IL-6释放下降至42％(IQR39-58％，p＝0.024，n＝4)和43％(IQR 21-57％，p＝0.024，n＝4)(图1B)。
总之，这些数据表明，维生素A和D——以及较小程度的DHA和EPA——显示出对LPS刺激的BV-2细胞的抗炎症效果。维生素B和氨基酸L-半胱氨酸和L-色氨酸对LPS激活的BV-2细胞不具有抗炎症效果。
实施例2：结合营养素的效果
将BV-2细胞用不同的营养素结合物预处理24h：(I)维生素A(0.583μM)；(II)维生素D(0.1μg/ml)；(III)DHA(6.67μM)；(IV)EPA(20μM)；(V)维生素A(0.583μM)+维生素D(0.1μg/ml)+DHA(6.67μM)+EPA(20μM)。之后用LPS(50ng/ml)与相同的营养素一起温育24h。收集培养基，以使用Griess测定法来测量NO释放和使用ELISA来测量IL-6释放。NO(图2A)和IL-6(图2B)水平表示为由仅用LPS处理的细胞产生的浓度(LPS对照)的百分比。对于LPS对照的NO和IL-6水平(100％)在各图上用虚线表示。所有的图代表5个独立实验的结果(平均值±SEM)。使用Kruskal-Wallis H检验对数据进行统计分析。当p<0.05时，则认为差异具有统计学上的显著性。为了测试单一营养素和包含维生素A、D和脂肪酸DHA和EPA的混合物之间的差异，进行事后检验以及Bonferroni-Holm校正。当p<0.05时，则认为差异具有统计学上的显著性。
如图2A所示，以较低浓度使用的单一营养素对于NO释放几乎不产生任何影响，而相同浓度的这些物质的结合物导致NO释放下降至由未处理的LPS刺激的对照细胞所释放的37％(IQR 28.0-45.7％)。观察到的营养素结合物的NO释放的下降与单独使用各营养素所观察到的效果(Bonferroni-Holm校正之后p＝0.032)显著不同。以类似的方式，较低浓度的单一营养素不导致IL-6释放的显著下降。与LPS刺激的对照相比，使所述物质结合使得IL-6下降至84％(IQR，54.1-88.9)。

Claims (16)

1.治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA用于制备用于在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状的组合物或药物的用途。
2.权利要求1的用途，所述神经炎症与选自以下的疾病相关：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤，和/或所述受试者患有一种或多种选自以下的疾病：抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、多发性硬化症(MS)、术后认知功能障碍(POCD)、脊髓损伤(SCI)、AIDS痴呆综合征(ADC)、缺血、中风、创伤性脑损伤(TBI)、脑或中枢神经系统感染和脑肿瘤。
3.权利要求2的用途，所述疾病选自阿尔茨海默病(AD)、术后认知功能障碍(POCD)和中风。
4.权利要求3的用途，所述神经炎症为与中风相关的神经炎症，和/或所述受试者患有中风或具有增加的中风风险，优选具有增加的中风复发的风险。
5.前述权利要求中任一项的用途，所述神经炎症为慢性神经炎症。
6.前述权利要求中任一项的用途，所述治疗、减轻和/或治疗和/或预防包括降低神经炎症的强度和/或缩短神经炎症的持续时间。
7.前述权利要求中任一项的用途，所述治疗、减轻和/或预防包括降低小神经胶质细胞的激活和/或降低炎症细胞因子、优选TNF-α和/或IL-6的分泌。
8.前述权利要求中任一项的用途，其中维生素A和/或功能等效物以0.05-3mg/天，优选0.5-1.5mg/天的每日剂量给予。
9.前述权利要求中任一项的用途，其中维生素D和/或功能等效物以0.1-100μg/天，优选5-15μg/天的每日剂量给予。
10.前述权利要求中任一项的用途，其中PUFA以500至5000mg的每日剂量给予。
11.前述权利要求中任一项的用途，其中DHA以0.05-5g/天，优选0.5-1.5g/天的每日剂量给予。
12.前述权利要求中任一项的用途，其中所述组合物还包含胆碱，并且优选还包含一种或多种维生素B。
13.前述权利要求中任一项的用途，其中所述组合物还包含磷脂、胆碱、一种或多种维生素B和抗氧化剂。
14.一种在有需要的受试者中治疗、减轻和/或预防神经炎症或神经炎症相关症状的方法，包括给予所述受试者一种组合物或结合物，所述组合物或结合物包含治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA。
15.一种在有需要的受试者中治疗性地用于治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状的组合物，所述组合物包含治疗有效量的(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA。
16.以下组分的结合物：(i)维生素A和/或功能等效物、(ii)维生素D和/或功能等效物和(iii)至少一种PUFA，优选DHA和/或EPA，更优选DHA和EPA，(i)、(ii)和(iii)为治疗有效量，所述结合物在有需要的受试者中治疗性地用于治疗、减轻和/或预防神经炎症和/或神经炎症相关症状。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2611439A (en) * 2020-05-06 2023-04-05 Regenall Ltd Vitamin A for use in the treatment of traumatic brain injury

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007104030A1 (en) * 2006-03-08 2007-09-13 Kinemed, Inc. Retinoids and related compounds for the treatment of neuroinflammatory conditions, diseases and disorders
CN101433240A (zh) * 2007-11-16 2009-05-20 光明乳业股份有限公司 一种适合孕妇和乳母食用的牛奶及其制备方法
CN102843922A (zh) * 2010-05-13 2012-12-26 尼特罗米加公司 硝基脂肪酸–认知减退的神经保护和/或抑制
CN102843920A (zh) * 2010-01-29 2012-12-26 N·V·努特里奇亚 适用于管饲的、使上消化道和下消化道病症最小化的液体肠营养组合物
WO2016016790A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Universita' Degli Studi Di Cagliari Ester of a phospholipid with conjugated linoleic acid for the treatment of psychiatric disorders with neuroinflammatory and neurodegenerative basis
WO2016072842A1 (en) * 2014-11-05 2016-05-12 N.V. Nutricia Method for preventing, reducing the risk of, or treating behavioral frontotemporal dementia

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7704542B2 (en) 2001-09-12 2010-04-27 Xanodyne Pharmaceuticals, Inc. Vitamin/mineral compositions with DHA
US20120128711A1 (en) 2009-09-21 2012-05-24 Total Nutraceutical Solutions, Inc. Anti-inflammatory approach to prevention and suppression of post-traumatic stress disorder, traumatic brain injury, depression and associated disease states

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007104030A1 (en) * 2006-03-08 2007-09-13 Kinemed, Inc. Retinoids and related compounds for the treatment of neuroinflammatory conditions, diseases and disorders
CN101433240A (zh) * 2007-11-16 2009-05-20 光明乳业股份有限公司 一种适合孕妇和乳母食用的牛奶及其制备方法
CN102843920A (zh) * 2010-01-29 2012-12-26 N·V·努特里奇亚 适用于管饲的、使上消化道和下消化道病症最小化的液体肠营养组合物
CN102843922A (zh) * 2010-05-13 2012-12-26 尼特罗米加公司 硝基脂肪酸–认知减退的神经保护和/或抑制
WO2016016790A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Universita' Degli Studi Di Cagliari Ester of a phospholipid with conjugated linoleic acid for the treatment of psychiatric disorders with neuroinflammatory and neurodegenerative basis
WO2016072842A1 (en) * 2014-11-05 2016-05-12 N.V. Nutricia Method for preventing, reducing the risk of, or treating behavioral frontotemporal dementia

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ME´LANIE LALANCETTE-HE´BERT ET AL.: "Accumulation of Dietary Docosahexaenoic Acid in the Brain Attenuates Acute Immune Response and Development of Postischemic Neuronal Damage", 《STROKE》 *
MILENA Z. ADZEMOVIC ET AL.: "Efficacy of vitamin D in treating multiple sclerosis-like", 《EXPERIMENTAL NEUROLOGY》 *
VIRGINIE F. LABROUSSE ET AL.: "Short-Term Long Chain Omega3 Diet Protects from Neuroinflammatory Processes and Memory Impairment in Aged Mice", 《PLOS ONE》 *

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