CN109548754B - 一种瓢虫成虫的低温贮藏方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于瓢虫的贮藏技术领域，公开了一种瓢虫成虫的低温贮藏方法，包括：将瓢虫新羽化成虫室内用人工饲料或蚜虫饲喂4天；将瓢虫转移至15℃下饲养2天进行低温适应处理；瓢虫在饲养及低温适应结束后，保存在培养皿内用封口膜封住后转移至6℃冰箱内；6℃低温贮藏30天后，将瓢虫转移到15℃下间断恢复1小时；瓢虫成虫低温贮藏结束后，直接转移到饲养条件下，筛选存活的成虫；瓢虫饲养条件为：温度24±1℃，湿度60‑70％，光周期L:D＝14h:10h。本发明选择未交配且刚处于性成熟的成虫作为贮藏虫态，通过贮藏前补充营养、冷适应、室温间断恢复的低温贮藏方法，能够极大提高成虫的存活率及长期贮藏后的生殖力。
Description
技术领域
本发明属于瓢虫的贮藏技术领域，尤其涉及一种瓢虫成虫的低温贮藏方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：随着人们对食品安全的重视程度逐步加深，减少化学药剂的使用已成为全社会的共识。利用天敌昆虫的生物防治已成为一种重要的害虫综合治理技术，其中通过大规模释放来防治害虫的方法已取得一定成功。在特定时间内积累足够数量的健壮天敌昆虫是大量释放的关键技术环节，但大多数天敌很难在较短时间内完成大量扩繁，尤其是捕食性天敌的扩繁需耗费大量天然猎物，而室内很难持续维持植物-植食性昆虫-捕食性天敌的饲养系统。低温贮藏是生物防治中一种重要的技术，通过该技术可以对天敌昆虫进行长期保存，一方面可以为生物防治提供充足的天敌昆虫；另一方面，可通过调节天敌昆虫的贮藏时间使其与害虫的发生危害规律相吻合，提高防治效率；此外，还可在不需要释放天敌或饲养条件不满足时用于保存种群。天敌昆虫成虫低温贮藏的主要技术要求为：贮藏后天敌存活率高，并具有较高生殖力。
捕食性瓢虫因捕食量大而在生物防治中发挥着重要作用。异色瓢虫与七星瓢虫是常见的两类优势捕食性天敌，可捕食各类蚜虫、粉虱、介壳虫及其他小型昆虫，在我国无公害农业生产中具有广泛的应用前景。低温贮藏是捕食性瓢虫商业化应用的主要技术环节，但目前的低温贮藏研究主要针对越冬代成虫，而针对室内人工饲养种群的常规贮藏方法不能较长时间贮藏瓢虫成虫，且尚不明确对生殖力的影响。
综上所述，现有技术存在的问题是：目前的低温贮藏研究主要针对越冬代成虫，而针对室内人工饲养种群的常规贮藏方法不能较长时间贮藏瓢虫成虫。因而，现有的低温贮藏技术并不能满足通用依靠室内饲养瓢虫-贮藏-田间释放的生物防治模式的技术需要。此外，目前的研究尚不明确低温贮藏对室内饲养成虫生殖力的影响，这将严重影响瓢虫释放后的持续防治效率。
解决上述技术问题的难度和意义：解决以上问题需要创新低温贮藏方法，综合考虑贮藏前的营养补充与冷适应、贮藏瓢虫的日龄与贮藏期的间断恢复等，并完善贮藏后的质量评价(存活率与生殖力)，做到最大贮藏时间与最优品质的平衡，以满足实际生物防治的需要。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种瓢虫成虫的低温贮藏方法。
本发明是这样实现的，一种瓢虫成虫的低温贮藏方法，所述瓢虫成虫的低温贮藏方法包括：将瓢虫新羽化成虫室内用人工饲料或蚜虫饲喂4天；将瓢虫转移至15℃下饲养2天进行低温适应处理；瓢虫在饲养及低温适应结束后，保存在培养皿内用封口膜封住并放置到不透光纸盒后转移至6℃冰箱内；6℃低温贮藏30天后，将瓢虫转移到15℃下间断恢复1小时；瓢虫成虫低温贮藏结束后，直接转移到饲养条件下，筛选存活的成虫。
进一步，所述瓢虫成虫的低温贮藏方法包括以下步骤：
步骤一，在室内用蚜虫人工饲养瓢虫，获得新羽化成虫；能保证瓢虫在较短时间内完成发育(约14天左右)，且所获得的新羽化成虫个体大。
步骤二，将步骤一的瓢虫新羽化成虫在最适生长温度(24±1℃)条件下用人工饲料或蚜虫饲养4天，每天更换一次食物；
步骤三，将步骤二饲养的瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应饲养2天，每天更换一次食物；15℃为一个中间冷适应温度，能促使瓢虫成虫积累耐寒物质，激活抗氧化系统，并降低其转移到贮藏温度后有毒物质的积累量。
步骤四，将步骤三的饲养的瓢虫成虫转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏；6℃为通用的瓢虫低温贮藏温度，在此温度下瓢虫进入休眠状态，能量消耗低，不会影响瓢虫成虫贮藏后的适合度。
步骤五，瓢虫成虫在低温贮藏结束后，转移至饲养条件下恢复24小时，筛选存活的成虫，模拟实际释放环境，用以评估瓢虫的耐低温能力及到室温后的快速适应能力。
进一步，所述瓢虫在贮藏前转移至直径9cm的培养皿内，培养皿用封口膜封住并放置到不透光纸盒，以降低瓢虫在贮藏期间身体水分的丢失。
进一步，所述瓢虫室内饲养条件是温度24±1℃，湿度60-70％，光周期L:D＝14h:10h。该条件是瓢虫的最适生长环境。
进一步，所述步骤四中，低温贮藏的瓢虫在贮藏30天时，转移至15±1℃下间断恢复1小时，降低长期持续低温贮藏造成的冷伤害及有毒代谢物质的积累量，并能激活抗氧化系统；步骤四的间断恢复过程中瓢虫无需饲喂，尽可能简化贮藏期间的操作。
本发明的另一目的在于提供一种所述瓢虫成虫的低温贮藏方法的低温贮藏效率测定方法，所述低温贮藏效率测定方法包括：
(1)在室内24±1℃条件下，将瓢虫1龄幼虫引入到饲养豌豆蚜的养虫笼内，并将蛹挑出放入培养皿内直至羽化，获得新羽化成虫；
(2)将瓢虫新羽化成虫按10头/培养皿的密度，饲养在直径为9cm的培养皿内(雌雄分开饲养)，每天提供充足的新鲜人工饲料，在24±1℃条件下连续饲养四天；以提供豌豆蚜饲养的处理作对照；每一处理饲养瓢虫成虫100-120头；
(3)将瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应2天，每天提供充足的新鲜饲料或豌豆蚜；
(4)将装有瓢虫成虫的培养皿用封口膜封住并放置到不透光纸盒，转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏；
(5)低温贮藏期，在贮藏30天时将成虫连同培养皿转移至15±1℃的人工培养箱内恢复1小时；
(6)在低温贮藏15天、30天、45天、60天及90天时，将30头成虫(雌雄各15头)取出转移到24±1℃的饲养条件下，筛选存活的成虫，统计存活率；
(7)将贮藏30天及60天的成虫配对，饲养在直径为9cm的培养皿内，每天提供充足的豌豆蚜，统计产卵量与卵孵化率。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：贮藏前的营养补充、冷适应、贮藏期的间断恢复及贮藏成虫的日龄均可能会影响贮藏后瓢虫的存活率与生殖力。因此，优化各方面条件将会创新捕食性瓢虫的低温贮藏方法，提高贮藏效率，也将有利于促进生物防治方法的推广与应用、降低防治成本。
由表1可知，贮藏前用人工饲料饲喂的异色瓢虫成虫(异色-饲料)，在贮藏60天后成虫的存活率仍在70％以上，同时具有较高的产卵量(24粒/天)及卵孵化率(30％)；贮藏90天后，10％的成虫仍能存活；贮藏前用蚜虫饲喂的异色瓢虫成虫(异色-蚜虫)，在贮藏60天后成虫的存活率在50％以上，并具有较高的产卵量(24粒/天)及卵孵化率(22.8％)。因此，异色瓢虫成虫在贮藏前饲喂人工饲料补充营养是一种更优的贮藏方法。
由表2可知，贮藏前用蚜虫饲喂七星瓢虫成虫(七星-蚜虫)，在贮藏60天后成虫的存活率在95％以上，同时具有很高的产卵量(43粒/天)及卵孵化率(80％以上)；在贮藏90天后的成虫存活率也超过78％；贮藏前用人工饲料饲喂七星瓢虫成虫(七星-饲料)，在贮藏60天后的存活率为80％，同时具有很高的产卵量(43粒/天)及卵孵化率(80％以上)。因此，七星瓢虫成虫贮藏前用蚜虫补充营养均具有更好的效果，但补充人工饲料也可作为一种经济的替代方法。
表1不同时间低温贮藏对异色瓢虫生物学特性的影响
表2不同时间低温贮藏对七星瓢虫生物学特性的影响
附图说明
图1是本发明实施例提供的瓢虫成虫的低温贮藏方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对目前的低温贮藏研究主要针对越冬代成虫，而针对室内人工饲养种群的常规贮藏方法不能较长时间贮藏瓢虫成虫，且尚不明确对生殖力的影响。贮藏前的营养补充、冷适应、贮藏期的间断恢复及贮藏虫态均可能会影响贮藏后瓢虫的存活率与生殖力。因此，优化各方面条件将会创新捕食性瓢虫的低温贮藏方法，提高贮藏效率，也将有利于促进生物防治方法的推广与应用、降低防治成本。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的瓢虫成虫的低温贮藏方法包括以下步骤：
S101：在室内用蚜虫人工饲养瓢虫，获得新羽化成虫；
S102：将步骤S101的瓢虫新羽化成虫在24±1℃条件下用人工饲料或蚜虫饲养4天，每天更换一次食物；
S103：将步骤102饲养的瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应饲养2天，每天更换一次食物；
S104：将步骤S103的饲养的瓢虫成虫转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏；
S105：瓢虫成虫在低温贮藏结束后，转移至饲养条件下恢复24小时，筛选存活的成虫。
在本发明的优选实施例中，用于贮藏的瓢虫在贮藏前刚达到性成熟，未发生交配及产卵；所述的瓢虫在贮藏前转移至直径9cm的培养皿内，培养皿用封口膜封住后放到不透光纸盒中。
在本发明的优选实施例中，瓢虫室内饲养条件是温度24±1℃，湿度60-70％，光周期L:D＝14h:10h。
在本发明的优选实施例中，步骤S104中，低温贮藏的瓢虫在贮藏30天时，转移至15±1℃下间断恢复1小时；步骤S104的间断恢复过程中瓢虫无需饲喂。
在本发明的优选实施例中，低温贮藏效率测定：
(1)在室内24±1℃条件下，将瓢虫1龄幼虫引入到饲养豌豆蚜的养虫笼内，并将蛹挑出放入培养皿内直至羽化，获得新羽化成虫；
(2)将瓢虫(异色瓢虫或七星瓢虫)新羽化成虫按10头/培养皿的密度，饲养在直径为9cm的培养皿内(雌雄分开饲养)，每天提供充足的新鲜人工饲料，在24±1℃条件下连续饲养四天(记作异色/七星-饲料)；以提供豌豆蚜饲养的处理作对照(记作异色/七星-蚜虫)。每一处理饲养瓢虫成虫100-120头。
(3)将瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应2天，每天提供充足的新鲜饲料或豌豆蚜。
(4)将装有瓢虫成虫的培养皿用封口膜封住后放到不透光纸盒中，转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏。
(5)低温贮藏期，在贮藏30天时将成虫连同培养皿转移至15±1℃的人工培养箱内恢复1小时。
(6)在低温贮藏15天、30天、45天、60天及90天时，将15头成虫取出转移到24±1℃的饲养条件下，筛选存活的成虫，统计存活率。
(7)将贮藏30天及60天的成虫配对，饲养在直径为9cm的培养皿内，每天提供充足的豌豆蚜，统计其产卵量与卵孵化率。
下面结合实施例对本发明的应用原理作进一步的描述。
实施例1：
异色瓢虫的低温贮藏
(1)将豌豆蚜饲养在蚕豆苗上，建立豌豆蚜种群；
(2)将15份获得的鲜猪肝匀浆与1.5份酵母粉混合均匀，然后加入3份蔗糖，1.5份蜂蜜，1份亚麻油，1.5份橄榄油，0.02份～0.03份山梨酸钾。将各部分混合，获得半流体状饲料，保存于-20℃冰箱内备用。
(3)在室内24±1℃条件下，将瓢虫1龄幼虫引入到饲养豌豆蚜的养虫笼内，并将蛹挑出放入培养皿内直至羽化，获得新羽化成虫；
(4)将瓢虫新羽化成虫按10头/培养皿的密度，饲养在直径为9cm的培养皿内(雌雄分开饲养)，每天提供充足的新鲜人工饲料，在24±1℃条件下连续饲养四天。
(5)将瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应2天，每天提供充足的新鲜饲料。
(6)将装有瓢虫成虫的培养皿用封口膜封住并放到不透光的纸盒中，转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏。
(7)低温贮藏30天时，将成虫连同培养皿转移至15±1℃的人工培养箱内恢复1小时。
(8)低温结束后，将成虫转移到24±1℃的饲养条件下，筛选存活的成虫。
实施例2：
七星瓢虫的低温贮藏
(1)将豌豆蚜饲养在蚕豆苗上，建立豌豆蚜种群；
(2)将15份获得的鲜猪肝匀浆与1.5份酵母粉混合均匀，然后加入3份蔗糖，1.5份蜂蜜，1份亚麻油，1.5份橄榄油，0.02份～0.03份山梨酸钾。将各部分混合，获得半流体状饲料，保存于-20℃冰箱内备用。
(3)在室内24±1℃条件下，将瓢虫1龄幼虫引入到饲养豌豆蚜的养虫笼内，并将蛹挑出放入培养皿内直至羽化，获得新羽化成虫；
(4)将瓢虫新羽化成虫按10头/培养皿的密度，饲养在直径为9cm的培养皿内(雌雄分开饲养)，每天提供充足的新鲜人工饲料或蚜虫，在24±1℃条件下连续饲养四天。
(5)将瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应2天，每天提供充足的新鲜饲料或蚜虫。
(6)将装有瓢虫成虫的培养皿用封口膜封住并放到不透光的纸盒中，转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏。
(7)低温贮藏30天时，将成虫连同培养皿转移至15±1℃的人工培养箱内恢复1小时。
(8)低温结束后，将成虫转移到24±1℃的饲养条件下，筛选存活的成虫。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种瓢虫成虫的低温贮藏方法，其特征在于，所述瓢虫成虫的低温贮藏方法包括：将瓢虫新羽化成虫室内用人工饲料或蚜虫饲喂4天；将瓢虫转移至15℃下饲养2天进行低温适应处理；瓢虫在饲养及低温适应结束后，保存在培养皿内用封口膜封住后转移至6℃冰箱内；6℃低温贮藏30天后，将瓢虫转移到15℃下间断恢复1小时；瓢虫成虫低温贮藏结束后，直接转移到饲养条件下，筛选存活的成虫；
所述瓢虫成虫的低温贮藏方法包括以下步骤：
步骤一，在室内用蚜虫人工饲养瓢虫，获得新羽化成虫；
步骤二，将步骤一的瓢虫新羽化成虫在24±1℃条件下用人工饲料或蚜虫饲养4天，每天更换一次食物；
步骤三，将步骤二饲养的瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应饲养2天，每天更换一次食物；
步骤四，将步骤三饲养的瓢虫成虫转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏；
步骤五，瓢虫成虫在低温贮藏结束后，转移至饲养条件下恢复24小时，筛选存活的成虫；
所述步骤四中，低温贮藏的瓢虫在贮藏30天时，转移至15±1℃下间断恢复1小时；步骤四的间断恢复过程中瓢虫无需饲喂；
所述瓢虫成虫的低温贮藏方法的低温贮藏效率测定方法，所述低温贮藏效率测定方法包括：
（1）在室内24±1℃条件下，将瓢虫1龄幼虫引入到饲养豌豆蚜的养虫笼内，并将蛹挑出放入培养皿内直至羽化，获得新羽化成虫；
（2）将瓢虫新羽化成虫按10头/培养皿的密度，饲养在直径为9 cm的培养皿内,雌雄分开饲养，每天提供充足的新鲜人工饲料，在24±1℃条件下连续饲养四天；以提供豌豆蚜饲养的处理作对照；每一处理饲养瓢虫成虫100-120头；
（3）将瓢虫成虫转移至15±1℃的人工培养箱内冷适应2天，每天提供充足的新鲜饲料或豌豆蚜；
（4） 将装有瓢虫成虫的培养皿用封口膜封住后放到不透光纸盒中，转移至6℃的冰箱内进行低温贮藏；
（5）低温贮藏期，在贮藏30天时将成虫连同培养皿转移至15±1℃的人工培养箱内恢复1小时；
（6）在低温贮藏15天、30天、45天、60天及90天时，将30头成虫取出转移到24±1℃的饲养条件下，30头成虫雌雄各15头,筛选存活的成虫，统计存活率；
（7）将贮藏30天及60天的存活成虫配对，饲养在直径为9 cm的培养皿内，每天提供充足的豌豆蚜，统计产卵量与卵孵化率；
所述瓢虫在贮藏前转移至直径9 cm的培养皿内，培养皿用封口膜封住后放到不透光纸盒中；
所述瓢虫室内饲养条件是温度24±1℃，湿度60-70%，光周期L:D=14h:10h。
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