CN109541210B - 一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器及其使用方法 - Google Patents
一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器及其使用方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器及其使用方法,涉及微纳医疗检测应用技术领域,提供多个纳米孔三明治阵列芯片作为基板,底座的各液池靠近废液出口的一侧有多个流道,各流道与液池相连通,在底座的各液池中各装上芯片,并与PDMS盖板键合,纳米孔三明治阵列芯片分别平放在底座的各液池的中间,每个液池上下两侧的溶液只能通过纳米孔阵列实现贯穿,然后在各个通道的基板的中间层纳米孔内表面修饰肿瘤标志物抗体分子,再用精密注射泵将检测样品通过所述各通道输送至检测区,进行多种肿瘤标志物的并行检测,肿瘤标志物分子被纳米孔三明治阵列芯片中的抗体分子所捕获,并产生阻塞电流,根据阻塞电流下降的幅值实现肿瘤标志物浓度的判定。
Description
技术领域
本发明涉及生物传感器技术领域,特别是涉及一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器及其使用方法。
背景技术
癌症已是造成人类死亡的第二大病因,我国新发癌症病例约占世界的1/4。世界卫生组织指出1/3的癌症可通过早期诊断及时治愈。肿瘤标志物是肿瘤细胞直接产生或由非肿瘤细胞经肿瘤细胞诱导产生的物质。研究表明,当肿瘤发生时,标志物浓度明显异常,标示着肿瘤的存在。肿瘤标志物检测研究为无创的癌症早期诊断提供新的思路。利用库伦阻塞、量子尺寸效应等特殊效应的微纳传感器实现肿瘤标志物定量检测也已经成为癌症早期诊断的主要研究方法。
纳米孔测序方法已经研究20年。其基本原理是,当DNA分子在电场的驱动下穿过纳米孔时,碱基物理占位产生阻塞电流信号,再通过测量阻塞电流的幅值与时间特性可辨别不同碱基。受到纳米孔测序原理的启发,加上纳米孔传感器具有快速检测、高灵敏度等独特优势,基于纳米孔的肿瘤标志物检测技术也随之得到发展。而检测效率与精确问题也成为了基于纳米孔的肿瘤标志物定量检测的技术关键。
研究表明,单个肿瘤标志物穿过纳米孔时间在毫秒级,实现飞摩尔级定量检测的时间超过100小时,检测效率低。同时,单分子穿过纳米孔形态多,产生多种阻塞电流信号,降低检测精度。另外,单一癌症的肿瘤标志物具有多样性的特征,因此实现多通道肿瘤标志物并行检测,是癌症早期检测面临的严峻的挑战。研究多通道肿瘤标志物并行检测传感器及其使用方法具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的之一在于避免现有技术中的不足之处而提供一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器,该并行检测传感器能实现多种肿瘤标志物并行检测。
本发明的另一目的在于避免现有技术中的不足之处而提供一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器的使用方法,该使用方法简单,快速。
本发明的目的之一通过以下技术方案实现:提供一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器,该传感器从下至上依次为底座、纳米孔三明治阵列芯片和PDMS盖板,所述底座的中部设置有多个并排液池,所述底座的一端设置有废液出口,所述底座相对的另一端设置有注液口,所述纳米孔三明治阵列芯片安装在各液池上,各液池与PDMS盖板键合,形成多通道肿瘤标志物并行检测传感器,在所述各液池靠近废液出口的一侧设置多条与各液池相连通的底座流道,在所述底座流道的中部以及废液出口一端设置有与底座流道相连通的圆槽,所述PDMS盖板底面的中部设置有多个并排的槽,所述槽的形状和纳米孔三明治阵列芯片的形状对应,在所述槽靠近注液口的一侧设置多个与槽相连通的PDMS盖板底部流道,在所述各PDMS盖板底部流道中部以及注液口一端设置有通孔,并且在槽靠近废液出口的一侧设置两排均匀分布的通孔。
其中,所述底座上设置的圆槽和液池的中心均位于所述底座流道所在的直线上。
其中,所述PDMS盖板上设置的通孔和槽的中心均位于所述PDMS盖板底部流道所在的直线上。
本发明的目的之一的有益效果:
1.本发明提出的多通道肿瘤标志物并行检测传感器,能实现多种肿瘤标志物并行检测,可作为单一癌症早期精准诊断。
2.通过检测纳米孔阵列阻塞电流下降的幅值,判断肿瘤标志物的浓度,检测方法简单,快速,提高了检测效率。
另外,还提供一种如上所述的多通道肿瘤标志物并行检测传感器的使用方法,包括以下步骤:
S1: 提供多个纳米孔三明治阵列芯片作为基板;
S2:在底座的各液池中装上所述纳米孔三明治阵列芯片,并与PDMS盖板键合,形成多通道肿瘤标志物并行检测传感器;
S3:在各个通道的基板的中间层纳米孔内表面修饰肿瘤标志物抗体分子;
S4:用精密注射泵将待检测样品通过各通道输送至检测区,进行多种肿瘤标志物的并行检测。
其中,在步骤S1中,纳米孔三明治阵列芯片包括中间层纳米孔阵列和位于中间层纳米孔阵列两侧的保护层纳米孔阵列,中间层纳米孔阵列为硅纳米孔阵列、银纳米孔阵列或金纳米孔阵列中的一种,保护层纳米孔阵列为氧化硅、氮化硅、氧化钛、二氧化铪或氧化铝中的一种。
其中,在步骤S1中,纳米孔三明治阵列芯片的中间层纳米孔阵列的孔长度为10~500nm,纳米孔三明治阵列芯片的保护层的孔长度为2~50 nm。
其中,所述步骤S2中,所述纳米孔三明治阵列芯片分别平放在底座的各液池的中间,每个液池上下两侧的溶液只能通过纳米孔阵列实现贯穿。
其中,所述步骤S3中,所述肿瘤标志物抗体分子为一种或者多种。
其中,所述步骤S4中,当肿瘤标志物分子被纳米孔三明治阵列芯片中修饰的抗体分子所捕获,并产生阻塞电流,根据阻塞电流下降的幅值实现肿瘤标志物浓度的判定
本发明的目的之二的有益效果是:一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器的使用方法,该使用方法简单,快速。
附图说明
利用附图对发明作进一步说明,但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制,对于本领域的普通技术人员,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据以下附图获得其它的附图。
图1为本发明PDMS盖板示意图;
图2为本发明纳米孔三明治阵列芯片示意图;
图3为本发明底座结构示意图;
图4为本发明纳米孔三明治阵列结构示意图;
图5为本发明多通道肿瘤标志物并行检测传感器使用方法流程图;
图6为本发明所需的保护层纳米孔阵列结构示意图;
图7为本发明所需的中间层纳米孔阵列结构示意图;
图8为本发明纳米孔三明治阵列芯片基板结构示意;
图9为本发明多通道肿瘤标志物并行检测传感器使用方法步骤S2中呈现的结构示意图;
图10为本发明多通道肿瘤标志物并行检测传感器使用方法步骤S3中呈现的结构示意图;
图11为图10的B-B截面图;
图12为本发明多通道肿瘤标志物并行检测传感器使用方法步骤S4中呈现的结构示意图;
图13为图12的C-C截面图;
图14为本发明多通道肿瘤标志物并行检测传感器使用方法步骤S4中呈现的检测结果示意图。
图中;
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明的具体实施作进一步说明,但本发明并不局限于此。
如图1-图4所示,本实施例提供一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器结构,其结构组成是:从下至上依次组合的是底座31、纳米孔三明治阵列芯片1和PDMS盖板30。
在本实施例中,所述底座31的中部设置有三个并排液池2,在所述各液池2靠近废液出口7的一侧设置三条与各液池2相连通的底座流道311,在所述底座流道311的中部以及废液出口7一端设置有与底座流道311相连通的圆槽310,所述PDMS盖板30底面的中部设置有三个并排的槽302,槽302的形状和纳米孔三明治阵列芯片1的形状对应,在本实施例中,槽302为方形槽,在方形槽靠近注液口6的一侧设置三条与方形槽相连通的PDMS盖板底部流道301,在所述各PDMS盖板底部流道301中部以及注液口一端设置有通孔300,并且在方形槽靠近废液出口7的一侧设置两个均匀分布的通孔300,通孔300中心均位于所述PDMS盖板底部流道301所在的直线上,在底座31的各液池2装上所述纳米孔三明治阵列芯片1,并与PDMS盖板30键合,形成三通道肿瘤标志物并行检测传感器3。
在本实施例中,底座31上所设置的圆槽310和液池2的中心位于所述底座流道311所在的直线上。PDMS盖板30上所设置的通孔300与槽302的中心均位于PDMS盖板底部流道301所在的直线上。在底座31的三个液池2分别装上所述纳米孔三明治阵列芯片1,并与PDMS盖板30键合后,从注液口到废液出口,由通孔300、PDMS盖板底部流道301、液池2、底座流道311、圆槽310依次连通,形成三条检测通道。
如图5所示,本实施例提供一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器使用方法,该使用方法包括以下步骤:
S1:提供多个纳米孔三明治阵列芯片作为基板;
S2:在底座的各液池中装上所述纳米孔三明治阵列芯片,并与PDMS盖板键合,形成多通道肿瘤标志物并行检测传感器;
S3:在各个通道的基板的中间层纳米孔内表面修饰肿瘤标志物抗体分子;
S4:用精密注射泵将待检测样品通过所述各通道输送至检测区,进行多种肿瘤标志物的并行检测;
下面结合具体附图对本实施例多通道肿瘤标志物并行检测的方法详细的介绍。
首先执行步骤S1,提供多个纳米孔三明治阵列芯片1作为基板,以其中一基板为例,如图6~8所示。基板是由中间层纳米孔阵列11以及所述中间层纳米孔阵列11两侧为保护层纳米孔阵列10构成的纳米孔三明治结构,纳米孔三明治结构的中间层纳米孔阵列11为硅纳米孔阵列,银纳米孔阵列,也可以是金纳米孔阵列,保护层纳米孔阵列10可以全部是氧化硅、氮化硅,氧化钛,二氧化铪或氧化铝,也可以是其中任意两种组合而成。其中所述中间层纳米孔阵列11的孔长度区间为10~500nm,保护层纳米孔阵列10的孔长度区间为2~50 nm。
本实施例中,提供三个同样的纳米孔三明治阵列芯片1作为基板,所述中间层纳米孔阵列11为硅纳米孔阵列11,其长度选择100nm,所述保护层纳米孔阵列10为氮化硅纳米孔阵列10,其长度为20nm,所述硅纳米孔阵列11与所述保护层纳米孔阵列10也可以选择要求范围内的其他长度。
然后执行步骤S2,在底座31的各液池2中装上所述纳米孔三明治阵列芯片1,并与PDMS盖板30键合,形成多通道肿瘤标志物并行检测传感器3,如图9所示,纳米孔三明治阵列芯片1平放在底座31的液池2中间,液池2上下两侧的溶液只能通过纳米孔阵列实现贯穿,本实施例中,PDMS盖板30与底座31均采用光刻、硅刻蚀与倒模工艺组合实现,形成三个通道,如图4所示,在底座31的各液池2中装上所述三个纳米孔三明治芯片1,并与PDMS盖板30键合,得到三通道肿瘤标志物并行检测传感器3。
接着执行步骤S3,在各个流道的基板的中间层硅纳米孔11内表面修饰肿瘤标志物抗体分子4,在本实施例中,如图11所示,为修饰在其中一通道的基板的中间层硅纳米孔11内表面的抗体分子4,如图10所示,在三个通道的液池2中基板的中间层硅纳米孔11内表面修饰的是三种不同的肿瘤标志物抗体分子4。
最后执行步骤S4,用精密注射泵将待检测样品通过所述各流道输送至检测区,进行多种肿瘤标志物的并行检测,在本实施例中,如图12所示,用精密注射泵将待检测样品通过所述三个通道输送至检测区,进行三种肿瘤标志物的并行检测,如图13所示,以其中一流道为例,肿瘤标志物分子5被纳米孔三明治阵列芯片1中的抗体分子4捕获,并产生阻塞电流。根据阻塞电流下降的幅值实现肿瘤标志分子5浓度的判定,如图14所示。阻塞电流下降的幅值I1即为肿瘤标志物分子5浓度特征的反映,从而实现肿瘤标志物的检测。
本实施例提供的一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器及其使用方法,实现多种肿瘤标志物并行检测,可作为单一癌症早期精准诊断。并且检测方法简单,快速。通过检测纳米孔阵列阻塞电流下降的幅值,判断肿瘤标志物的浓度,检测时间短,提高了检测效率。
此外,本实施例操作简单,具有较好的扩展性和较广的使用范围。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (7)
1.一种多通道肿瘤标志物并行检测传感器,其特征在于:该传感器从下至上依次为底座(31)、纳米孔三明治阵列芯片(1)和PDMS盖板(30),所述底座(31)的中部设置有多个并排液池(2),所述底座(31)的一端设置有废液出口,所述底座相对的另一端设置有注液口,所述纳米孔三明治阵列芯片(1)安装在各液池(2)上,各液池(2)与PDMS盖板(30)键合,形成多通道肿瘤标志物并行检测传感器,在所述各液池(2)靠近废液出口的一侧设置多条与各液池(2)相连通的底座流道(311),在所述底座流道(311)的中部以及废液出口一端设置有与底座流道(311)相连通的圆槽(310),所述PDMS盖板(30)底面的中部设置有多个并排的槽(302),所述槽(302)的形状和纳米孔三明治阵列芯片(1)的形状对应,在所述槽(302)靠近注液口的一侧设置多个与槽(302)相连通的PDMS盖板底部流道(301),在所述各PDMS盖板底部流道(301)中部以及注液口一端设置有通孔(300),并且在槽(302)靠近废液出口的一侧设置两排均匀分布的通孔(300);
所述底座(31)上设置的圆槽(310)和液池(2)的中心均位于所述底座流道(311)所在的直线上;
所述PDMS盖板(30)上设置的通孔(300)和槽(302)的中心均位于所述PDMS盖板底部流道(301)所在的直线上。
2.一种权利要求1所述的多通道肿瘤标志物并行检测传感器的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1: 提供多个纳米孔三明治阵列芯片作为基板;
S2:在底座(31)的各液池(2)中装上所述纳米孔三明治阵列芯片(1),并与PDMS盖板键合,形成多通道肿瘤标志物并行检测传感器;
S3:在各个通道的基板的中间层纳米孔内表面修饰肿瘤标志物抗体分子;
S4:用精密注射泵将待检测样品通过各通道输送至检测区,进行多种肿瘤标志物的并行检测。
3.根据权利要求2所述的使用方法,其特征在于:在步骤S1中,纳米孔三明治阵列芯片包括中间层纳米孔阵列(11)和位于中间层纳米孔阵列(11)两侧的保护层纳米孔阵列(10),中间层纳米孔阵列(11)为硅纳米孔阵列、银纳米孔阵列或金纳米孔阵列中的一种,保护层纳米孔阵列(10)为氧化硅、氮化硅、氧化钛、二氧化铪或氧化铝中的一种。
4.根据权利要求3所述的使用方法,其特征在于:在步骤S1中,纳米孔三明治阵列芯片的中间层纳米孔阵列(11)的孔长度为10~500nm,纳米孔三明治阵列芯片的保护层纳米孔阵列(10)的孔长度为2~50 nm。
5.根据权利要求2所述的使用方法,其特征在于:所述步骤S2中,所述纳米孔三明治阵列芯片(1)分别平放在底座(31)的各液池(2)的中间,每个液池(2)上下两侧的溶液只能通过纳米孔阵列实现贯穿。
6.根据权利要求2所述的使用方法,其特征在于:所述步骤S3中, 所述肿瘤标志物抗体分子为一种或者多种。
7.根据权利要求2所述的使用方法,其特征在于:所述步骤S4中,当肿瘤标志物分子被纳米孔三明治阵列芯片(1)中修饰的抗体分子所捕获,并产生阻塞电流,根据阻塞电流下降的幅值实现肿瘤标志物浓度的判定。
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Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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