CN109541113A - 一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于果品中的色素检测技术领域，具体涉及一种利用花色苷指纹图谱的蓝莓汁鉴伪方法。该方法利用蓝莓汁特定提取和检测方式下花色苷指纹图谱来鉴别蓝莓汁掺假。本方法适用于蓝莓汁中各种廉价果汁的掺假，特别适用于葡萄汁和石榴汁等含花色苷果汁的掺假。利用本发明的花色苷指纹图谱鉴伪方法，可以快速准确的对掺假蓝莓汁进行鉴别。

Description

一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法
技术领域
本发明属于果品中的色素检测技术领域，具体涉及一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法。
背景技术
以蓝莓为代表的浆果类水果素有“黄金水果”的美誉，由于产量低、保质期短和价格高昂，蓝莓汁掺假、造假、错误标签等导致的食品质量和安全争议不断发生，果汁真伪鉴别技术面临巨大挑战。有些厂家为了降低成本，不惜用各种方法制作掺假果汁。目前蓝莓汁掺假主要有三种手段，一是完全配制而成，由甜味剂、色素、香精等添加剂调配而成，其中不含有任何果汁成分。二是稀释掺假，向蓝莓汁中掺入廉价的葡萄汁、石榴汁等深色果汁以次充好，在产品标签中夸大了含有的果汁真实含量。三是虚假标注原果汁含量。这种方法虽然不会影响人们的健康，但是严重损害了消费者的利益，还会影响到我国果汁的进出口贸易。
针对蓝莓汁中的各种掺假手段，国内外科研人员提出了多种鉴别方法。常用的蓝莓果汁真伪检测方法主要是采用基因技术，利用PCR技术对果汁中未知物鉴伪筛查；同位素分析法，利用质谱或核磁技术对果汁中C、H、O等同位素特征比例精确定量外源添加物含量；微生物培养法，对果汁的理化指标进行综合评价。这些方法在浆果果汁鉴定上各有优缺点，由于上述方法处理过程过于复杂，并且蓝莓汁物种鉴定方面容易受到原材料的产地、品种、加工方式等诸多因素的影响，尤其是当果汁是多品种混合汁时，上述方法的准确性、灵敏度和检测范围将会受到很大限制。市售蓝莓果汁饮品售价高昂且质量参差不齐，消费者又很难通过简单的感官判断加以鉴别，而现行分析检测技术方法无法完全满足上述要求。因此，亟需一种快捷、可靠的蓝莓果汁掺伪识别技术。
蓝莓汁样品花色苷含量丰富，种类多样，其花色苷分布具有特异性。虽然不同品种蓝莓汁不同类别花色苷含量有差异，但其种类相对固定，通过建立花色苷指纹图谱，无需确定其花色苷具体种类名称，只需对比其花色苷种类的变化，即可实现蓝莓汁是否掺假的判定。本发明适用于鉴别蓝莓汁中常用掺假廉价果汁葡萄汁、石榴汁、苹果汁、梨汁、桃汁等，以及常用糖溶液稀释掺假，此方法快速高效且准确度高，在蓝莓汁质量评价方面具有广泛的应用前景。
CN 107907602 A.一种玄参指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
（1）供试品的制备
取过三号筛玄参药材粉末0 .5 重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇20 体积份，密塞，称定重量，浸泡1小时，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（2）对照品溶液或内标物溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥10 h的哈巴俄苷苷对照品、肉桂酸对照品及哈巴苷对照品适量，分别加30％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，分别精密吸取哈巴俄苷、哈巴苷及肉桂酸对照品储备液适量，加30％甲醇制成每1mL分别含哈巴苷、肉桂酸、哈巴俄苷58 .2、4 .098、9 .6 μg的混合对照品溶液，即得；
（3）玄参指纹图谱的构建
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，进样，用高效液相色谱仪测定，以参照物肉桂酸的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积；
其中高效液相色谱仪的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充剂；甲醇-水、甲醇-0 .5%冰醋酸或甲醇-1%冰醋酸为流动相；线性梯度洗脱，流速0 .8-1 .2 mL/min；柱温25-35 ℃；检测波长260-290 nm；
利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统制定指纹图谱；所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。
以上方法存在的不足是，该方法建立的指纹图谱是采用共有峰标注， 不能单独用于质量评价，必须采用指纹图谱间相似度结合聚类分析、主成分分析等分析方法进行质量评价。指纹图谱间相似度对指纹图谱的生成条件要求严格，样品本身的含水量、加工方式以及有效成分的提取过程等均会对生成的色谱图造成一定的影响，从而影响指纹图谱间相似度，因此采用相似度来评价样品质量具有一定的随机性。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种快速高效且准确度高的蓝莓汁鉴别方法，通过该方法，可以快速的对蓝莓汁质量进行鉴别，同时准确的判断出某些掺假果汁的类别。
本发明的蓝莓花色苷的鉴别方法是通过下述的技术方案来解决以上的技术问题的：
一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，包括以下的步骤：
（1）准备蓝莓果汁样品
取蓝莓汁样品；
或者是取新鲜蓝莓，制备蓝莓汁样品，具体步骤是：将待测样品蓝莓清洗、打浆，均质机高速匀浆，离心，滤纸过滤，得蓝莓汁;
（2）建立花色苷指纹图谱
将（1）中的蓝莓汁过水相滤膜，按照花色苷液相色谱分析条件对果汁花色苷进行检测，得到果汁花色苷指纹图谱；
（3）蓝莓汁掺假样品的鉴伪
收集不同产地不同品种蓝莓汁样品花色苷指纹图谱，利用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，设置参照谱图，多点校正，选用全峰匹配，中位数法，时间宽度为0.2min，构建包含所有蓝莓汁品种花色苷色谱峰的标准花色苷指纹图谱。
本申请直接利用样品的花色苷指纹图谱与蓝莓汁花色苷标准指纹图谱进行比较，通过比较花色苷指纹图谱中蓝莓特征花色苷的变化，来判断样品是否为蓝莓汁或掺假样品，若样品花色苷指纹图谱中出现标准指纹图谱中不存在的花色苷峰即判定果汁掺假，若蓝莓汁样品中特有的花色苷色谱峰未检出，即判定果汁掺假。
采用的是全峰匹配，而非共有峰匹配，目的是将不同品种蓝莓汁中出现的所有花色苷色谱峰，集中在一张色谱图上，形成包含所有蓝莓汁花色苷的色谱图。这与其它专利中软件使用方式不同，其它专利中通过软件提取不同品种共有峰（即所有样品均存在的色谱峰）。
本发明只是采用全峰匹配生成标准花色苷指纹图谱，并没有采用其样品间相似度来进行质量评价，这是与其它专利最显著的区别。
优选的，（1）中，离心的条件是：10000r/min离心5min。
（2）中，过0.45μm水相滤膜。
（2）中，花色苷液相色谱分析条件如下：
色谱柱：AcclaimTM120 C18，规格：250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相A：10%甲酸/水，流动相B：水：甲酸：乙腈 4:1:5 ；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序： 0-26 min ,12%→30%B；26-35min 30%→100%B；35-38min，100%B；38-43min，12%B；43-46min，12%B；DAD检测器，检测波长：530nm; 流速：1.0 mL/min; 柱温40℃; 进样量10μL 。
蓝莓汁样品为的品种为：比洛克希、北村、蓝丰、Venture（温特）、Ochlockonee（奥克）、北蓝、公爵、北陆、格莱西、巴尔德温中的任一种。
本申请采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，旨在生成蓝莓汁样品的标准花色苷指纹图谱，采用的是全峰匹配，而非共有峰匹配，目的是将不同品种蓝莓汁中出现的所有花色苷色谱峰，集中在一张色谱图上，形成包含所有蓝莓汁花色苷的色谱图。
这是与其它现有技术或现有公开的专利或专利申请中软件使用方式不同，其它专利中通过软件提取不同品种共有峰（即所有样品均存在的色谱峰）。本发明的优点是：该标准指纹图谱包含所有品种蓝莓汁花色苷色谱峰，包含了不同品种蓝莓汁的差异性和综合性，在蓝莓汁的质量控制中具有重要意义，只提取共有峰，不足以鉴别蓝莓汁的掺假，特别是掺假浓度较低时，蓝莓汁中共有峰均可以被检测到，从色谱图中不足以鉴别蓝莓汁的掺假。而采用全峰匹配，建立全色谱峰标准指纹图谱，可以从未知色谱峰的出现和特征峰的消失，两个方面来综合评判，从而准确判断样品是否掺假。
本发明采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，只是采用全峰匹配生成标准花色苷指纹图谱，并没有采用其样品间相似度来进行质量评价，这与其它其它专利或专利申请所不同的，也是本发明进步性的体现。
本发明最大的优点是：直接用样品花色苷色谱图与蓝莓汁标准花色苷指纹图谱进行比较，避免了采用相似度，相似度对指纹图谱的生成条件要求严格，样品本身的含水量、加工方式以及有效成分的提取过程等均会对样品相似度造成影响。而直接采用样品花色苷色谱图，直接通过色谱图中色谱峰的变化，来判断样品质量，更加直观，且准确度更高。
本发明的有益效果在于，本发明的前处理方法简单快捷，无干扰，同时检测方法易于实现，且鉴别速度快。并且通过实验验证，对于掺假廉价果汁或糖溶液的样品，通过本发明均可以实现鉴别，准确度高。
附图说明
图1为本发明的10种不同品种蓝莓汁样品花色苷指纹图谱（S1-S10）以及蓝莓汁花色苷标准指纹图谱R，其中峰7为内标物天竺葵素-3-氯化葡萄糖苷；
图2为本发明不同来源葡萄汁样品花色苷指纹图谱（S1-S10），其中峰1为内标物天竺葵素-3-氯化葡萄糖苷；
图3为本发明不同来源石榴汁样品花色苷指纹图谱（S1-S10），其中峰6为内标物天竺葵素-3-氯化葡萄糖苷；
图4 掺入不同量葡萄汁的蓝莓汁花色苷图谱；
图5 掺入不同量石榴汁的蓝莓汁花色苷图谱；
图6掺入不同量蔗糖溶液的蓝莓汁花色苷图谱；
图7 不同类型市购蓝莓汁花色苷指纹图谱；
图8为对比例1中的图谱；
图9为对比例2中的图谱；
图10为对比例3中的图谱。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式来对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。
实施例1
一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，包括以下步骤：
1、不同产地不同品种蓝莓，清洗，打浆，均质机高速匀浆，10000r/min离心5min，滤纸过滤，得蓝莓汁；（若是市场购买的蓝莓汁，直接滤纸过滤，获得蓝莓汁进入步骤2备用）
2、蓝莓汁花色苷指纹图谱的建立
将1中的蓝莓汁过0.45μm水相滤膜，按照花色苷液相色谱分析条件（色谱柱：AcclaimTM120 C18，规格：250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相A：10%甲酸/水，流动相B：水：甲酸：乙腈 4:1:5 ；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序： 0-26 min ,12%→30%B；26-35min 30%→100%B；35-38min，100%B；38-43min，12%B；43-46min，12%B。DAD检测器，检测波长：530nm; 流速：1.0 mL/min; 柱温40℃; 进样量10μL ）对果汁花色苷进行检测，得到果汁花色苷指纹图谱；
3、将所有蓝莓汁花色苷谱图输入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”中，生成蓝莓汁花色苷标准指纹图谱（附图1）；
4、将待测果汁按照蓝莓花色苷检测方法，生成待测果汁花色苷HPLC图谱，将待测果汁花色苷HPLC图谱与蓝莓汁花色苷标准指纹图谱比对进行鉴伪，如果待测果汁花色苷HPLC图谱中出现蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中不存在的花色苷峰，即可判定该蓝莓汁掺假其它果汁，如果待测果汁花色苷HPLC图谱中缺失蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中花色苷峰，即可判定该蓝莓汁掺假了其他果汁或对蓝莓汁进行了稀释。
按步骤1、步骤2和步骤3收集葡萄汁、石榴汁花色苷液相图谱图2、图3以做对照。掺假葡萄汁、石榴汁等颜色深花色苷含量高果汁的蓝莓汁样品按照步骤2所述方法进行分析，采集不同掺假浓度样品花色苷液相色谱图，结果见图4、图5。
如附图4所示，当掺假葡萄汁含量到15%时，峰10(RT23.833min) 出现，峰10(RT23.833min)为葡萄汁中特征花色苷，峰10(RT23.833min)处花色苷在蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中不存在，因此当峰10(RT23.833min)出现时，即可判定该果汁掺入了超过10%的葡萄汁。
如附图5所示，当掺假石榴汁含量到20%时，峰2（RT 7.843 min）出现 ，峰2（RT7.843 min）为石榴汁中特征花色苷，不存在于蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中，因此当果汁中峰2（RT 7.843 min）出现时，即可判定该果汁掺入了超过15%的石榴汁。
附图4中，S1-掺入5%葡萄汁；S2-掺入10%葡萄汁；S3掺入15%葡萄汁；S4掺入20%葡萄汁；S5掺入30%葡萄汁；S6掺入40%葡萄汁；S7掺入50%葡萄汁；S8掺入60%葡萄汁；S9掺入80%葡萄汁
附图5中，S1-掺入5%石榴汁；S2-掺入10%石榴汁；S3掺入15%石榴汁；S4掺入20%石榴汁；S5掺入30%石榴汁；S6掺入40%石榴汁；S7掺入50%石榴汁；S8掺入60%石榴汁；S9掺入80%石榴汁。
实施例2
一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，包括以下步骤：
1、不同产地不同品种蓝莓，清洗，打浆，均质机高速匀浆，10000r/min离心5min，滤纸过滤，得蓝莓汁；
2、蓝莓汁花色苷指纹图谱的建立
将1中的蓝莓汁过0.45μm水相滤膜，按照花色苷液相色谱分析条件（色谱柱：AcclaimTM120 C18，规格：250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相A：10%甲酸/水，流动相B：水：甲酸：乙腈 4:1:5 ；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序： 0-26 min ,12%→30%B；26-35min 30%→100%B；35-38min，100%B；38-43min，12%B；43-46min，12%B。DAD检测器，检测波长：530nm; 流速：1.0 mL/min; 柱温40℃; 进样量10μL ）对果汁花色苷进行检测，得到果汁花色苷指纹图谱。
3、将所有蓝莓汁花色苷谱图输入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”中，生成蓝莓汁花色苷标准指纹图谱（图2）。
4、将待测果汁按照蓝莓花色苷检测方法，生成待测果汁花色苷HPLC图谱，将待测果汁花色苷HPLC图谱与蓝莓汁花色苷标准指纹图谱比对进行鉴伪，如果待测果汁花色苷HPLC图谱中出现蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中不存在的花色苷峰，即可判定该蓝莓汁掺假其它果汁，如果待测果汁花色苷HPLC图谱中缺失蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中花色苷峰，即可判定该蓝莓汁掺假了其他果汁或对蓝莓汁进行了稀释。
掺假蔗糖溶液或苹果汁、梨汁、桃汁等颜色浅花色苷含量低果汁的蓝莓汁样品按照步骤2所述方法进行分析，采集不同掺假浓度样品花色苷液相色谱图。苹果汁、梨汁、桃汁样品采用上述步骤1和步骤2处理，花色苷色谱图并未采集到任何色谱峰。掺假不同量苹果汁、梨汁、桃汁样品的蓝莓汁花色苷指纹图谱与掺假蔗糖溶液色谱峰完全一致，因此本发明以掺假蔗糖溶液蓝莓汁花色苷指纹图谱图6代表掺假苹果汁、梨汁、桃汁等检测不到任何花色苷色谱峰的果汁。
如图6所示，当掺假蔗糖溶液达到20%时，蓝莓汁花色苷指纹图谱中色谱峰（RT14.200min）消失，因此，当检测不到果汁花色苷图谱中峰（RT14.200min）时，即可判定该果汁掺假，且掺假量超过15%。当掺假蔗糖溶液达到30%时，蓝莓汁花色苷指纹图谱中色谱峰（RT12.64min）消失，因此，当检测不到果汁花色苷图谱中峰（RT12.64min）时，即可判定该果汁掺假，且掺假量超过20%。
附图6中，S1-掺入5%蔗糖溶液；S2-掺入10%蔗糖溶液；S3掺入15%蔗糖溶液；S4掺入20%蔗糖溶液；S5掺入30%蔗糖溶液；S6掺入40%蔗糖溶液；S7掺入50%蔗糖溶液；S8掺入60%蔗糖溶液；S9掺入80%蔗糖溶液。
实施例3
一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，包括以下步骤：
1、从厂家收集蓝莓汁（或从超市直接购买不同果汁含量的蓝莓汁 ）；
2、蓝莓汁花色苷指纹图谱的建立
将1中的蓝莓汁滤纸过滤，过0.45μm水相滤膜，按照花色苷液相色谱分析条件（色谱柱：AcclaimTM120 C18，规格：250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相A：10%甲酸/水，流动相B：水：甲酸：乙腈 4:1:5 ；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序： 0-26 min ,12%→30%B；26-35min 30%→100%B；35-38min，100%B；38-43min，12%B；43-46min，12%B。DAD检测器，检测波长：530nm; 流速：1.0 mL/min; 柱温40℃; 进样量10μL ）对果汁花色苷进行检测，得到果汁花色苷指纹图谱。
3、将所有蓝莓汁花色苷谱图输入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”中，生成蓝莓汁花色苷标准指纹图谱（附图2）。
4、将待测果汁按照蓝莓花色苷检测方法，生成待测果汁花色苷HPLC图谱，将待测果汁花色苷HPLC图谱与蓝莓汁花色苷标准指纹图谱比对进行鉴伪，如果待测果汁花色苷HPLC图谱中出现蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中不存在的花色苷峰，即可判定该蓝莓汁掺假其它果汁，如果待测果汁花色苷HPLC图谱中缺失蓝莓汁花色苷标准指纹图谱中花色苷峰，即可判定该蓝莓汁掺假了其他果汁或对蓝莓汁进行了稀释。
从蓝莓生产厂家收集10种不同果汁含量的蓝莓汁，包括2种100%蓝莓汁，2种果汁含量60%的蓝莓汁，2种果汁含量85%的蓝莓汁，2种未标注果汁含量的蓝莓汁，2种蓝莓味饮料。采用上述步骤2，生成果汁花色苷指纹图谱，10种蓝莓汁花色苷指纹图谱见图7。
如图7所示，S1、S2标注为100%的蓝莓汁花色苷指纹图谱, 花色苷峰（RT12.64min）和峰（RT14.20min）均被检测到，但S2种出现峰（RT7.843min），说明S1样品为100%蓝莓汁，S2样品中添加了石榴汁，且石榴汁添加量超过了15%。
如图7所示，S3、S4为标注60%的蓝莓汁，花色苷峰（RT12.64min）和峰（RT14.20min）均未被检测到，与模拟实验中果汁或糖溶液添加量超过30%的花色苷指纹图谱是一致的。
如图7所示，S5、S6为标注80%的蓝莓汁，花色苷峰（RT12.64min）均被检测到，但花色苷峰（RT14.20min）未被检测到，与模拟实验中果汁或糖溶液添加量为20%的花色苷指纹图谱是一致的。
如图7所示，S7、S8为未标注果汁含量的蓝莓汁，S7、S8花色苷指纹图谱中只检测到2个花色苷峰，且峰面积很小，与掺假80%蔗糖溶液或苹果汁、梨汁、桃汁等果汁的花色苷图谱比较，说明S7、S8样品中蓝莓汁含量不足20%。
如图7所示，S9、S10为蓝莓味饮料，花色苷指纹图谱中未检测到花色苷峰，说明S9、S10中不含蓝莓汁。
从10种样品的检测结果看，标注蓝莓汁含量的样品S1、S3、S4、S5、S6样品的检测结果与模拟鉴伪结果相符，说明此种鉴伪方式是可行的且准确度很高，S7、S8、S9、S10样品未标注浓度，经鉴伪确认S2为掺假石榴汁样品，S7、S8样品蓝莓汁含量不足20%，S9、S10两个蓝莓饮料中不含蓝莓汁。
附图7中，S1、S2标注为100%的蓝莓汁，S3、S4-标注为60%的蓝莓汁，S5、S6-标注为80%的蓝莓汁，S7、S8-未标注果汁含量的蓝莓汁，S9、S10-蓝莓味饮料。
对比例1
与实施例1的不同在于，蓝莓汁花色苷指纹图谱的建立步骤中，取5g蓝莓汁，加入40mL2%盐酸甲醇溶液，超声提取30min，5000r/min离心10min，上清液定容至50mL，用0.45μm有机滤膜过滤。其余步骤与实施例1相同；
得到的蓝莓汁花色苷色谱图如附图8所示。
对比例2
与实施例1的不同在于，蓝莓汁花色苷指纹图谱的建立步骤中，取5g蓝莓汁，加入40mL2%盐酸乙醇溶液，超声提取30min，5000r/min离心10min，上清液定容至50mL，用0.45μm有机滤膜过滤。其余步骤与实施例1相同；
得到的蓝莓汁花色苷色谱图如附图9所示。
对比例3
与实施例1的不同在于，蓝莓汁花色苷指纹图谱的建立步骤中，取5g蓝莓汁，加入40mL乙醇溶液，超声提取30min，5000r/min离心10min，上清液定容至50mL，用0.45μ m有机滤膜过滤。其余步骤与实施例1相同；
得到的蓝莓汁花色苷色谱图如附图10所示。
从以上的对比例1和2中可以看出，采用有机溶剂处理样品，不同溶剂提取出的不同种类花色苷含量不同，虽然提取的花色苷含量较高，但基线不稳，小杂峰较多，不利于样品间的比对。通过对比例2和对比例3可以看出提取溶液的PH也会对提取的效果造成一定的影响，酸化乙醇溶液的提取效果明显优于非酸化的乙醇溶液提取效果。本发明为了避免出现上述的现象，采用滤纸过滤蓝莓汁样品，过水相滤膜，未经任何有机试剂提取，色谱图基线稳，花色苷色谱峰种类数量适中，色谱峰鉴别不仅方便快捷，而且避免了提取过程造成的损失和差异。

Claims (5)

1.一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，包括以下的步骤：
（1）准备蓝莓果汁样品
取蓝莓汁样品；
或者是取新鲜蓝莓，制备蓝莓汁样品，具体步骤是：将待测样品蓝莓清洗、打浆，均质机高速匀浆，离心，滤纸过滤，得蓝莓汁;
（2）建立花色苷指纹图谱
将（1）中的蓝莓汁过水相滤膜，按照花色苷液相色谱分析条件对果汁花色苷进行检测，得到果汁花色苷指纹图谱；
（3）蓝莓汁掺假样品的鉴伪
收集不同产地不同品种蓝莓汁样品花色苷指纹图谱，利用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，设置参照谱图，多点校正，选用全峰匹配，中位数法，时间宽度为0.2min，构建包含所有蓝莓汁品种花色苷色谱峰的标准花色苷指纹图谱。
2.如权利要求1所述的一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，其特征在于：
（1）中，离心的条件是：10000r/min离心5min。
3.如权利要求1所述的一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，其特征在于：（2）中，过0.45μm水相滤膜。
4.如权利要求1所述的一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，其特征在于：（2）中，花色苷液相色谱分析条件如下：
色谱柱：AcclaimTM120 C18，规格：250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相A：10%甲酸/水，流动相B：水：甲酸：乙腈 4:1:5 ；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序： 0-26 min ,12%→30%B；26-35min 30%→100%B；35-38min，100%B；38-43min，12%B；43-46min，12%B；DAD检测器，检测波长：530nm; 流速：1.0 mL/min; 柱温40℃; 进样量10μL 。
5.如权利要求1所述的一种一种蓝莓汁花色苷指纹图谱鉴伪方法，其特征在于：蓝莓汁样品品种为：比洛克希、北村、蓝丰、Venture、Ochlockonee、北蓝、公爵、北陆、格莱西、巴尔德温中的任一种。
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