CN109496834B - 一种巴旦木液体花粉及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种巴旦木液体花粉及其制备方法，提供一种巴旦木液体花粉，按重量份数计，巴旦木液体花粉包括巴旦木混合花粉26‑30%、蔗糖68.5‑72.5%、尿素0.6‑1.0%、硼酸0.2‑0.4%、黄原胶0.25‑0.45%、CaCl20.033‑0.045%、GA30.005‑0.025%、IAA 0.0005‑0.0025%，用6倍水稀释；通过对巴旦木液体花粉配方中的各成分开展梯度试验，找出最适配比，并在巴旦木花期进行田间试验，使用后显著提高了巴旦木的座果率，有效提高产量，推进我国巴旦木产业发展。

Description

一种巴旦木液体花粉及其制备方法
技术领域
本发明主要涉及果树授粉的技术领域，具体地说，本发明涉及巴旦木液体花粉及其制备方法的技术领域。
背景技术
巴旦木(Amygdalus communis L.)为蔷薇科李亚科桃属扁桃亚属落叶乔木，学名扁桃。巴旦木是世界干果之首及木本油料树种，是国际贸易中坚果类的畅销品。巴旦木仁中含有丰富的蛋白质和油脂，既是营养滋补佳品，也是重要的药材，医药用途广泛。新疆喀什莎车县地区是世界巴旦木适生区，也是我国巴旦木的唯一主产区。当前，莎车县巴旦木栽培面积超过90万亩，年产量7～8万吨，巴旦木为当地特色林果和经济发展的重要支柱产业。
巴旦木为异花授粉植物，花期较短。在生产中，需配置适宜的授粉品种，并通过蜜蜂授粉。巴旦木花量极大，但莎车地区坐果少、产量低，平均单株产量仅2.5-3kg，与拥有世界先进的巴旦木产业的美国加州产区相比(平均单株产量4.5-13kg)，仍有较大差距。一方面，每年3月至5月，喀什地区冷空气活动频繁，气温回升不稳定，大风日数多，又因在塔克拉玛干沙漠边缘，极易于产生沙尘暴。每年3月中下旬至4月初巴旦木花期时，喀什地区都会出现强沙尘暴天气。干燥的风和浮尘不仅加速柱头干燥，极不利于花粉的萌发，更导致蜜蜂无法授粉，严重影响巴旦木授粉，降低果园产量。同时，喀什地区春季升温快，巴旦木花期常有倒春寒发生，对树体的花芽和花朵造成危害，常会导致巴旦木大量减产甚至绝收。另一方面，南疆地区林果种植面积大、各树种开花时间集中，巴旦木花期经常出现授粉的蜂群供不应求的情况。虽然种植面积已成规模，但莎车县巴旦木管理整体较粗放，由于品种配置不当，造成品种混乱、主栽品种与授粉品种花期不一致、亲和性差等问题仍普遍存在。因此，提高巴旦木授粉率是当前我国巴旦木产业生产和科研中亟待解决的问题。
人工授粉技术不仅能够对花期不良气候因素对果实受精造成的影响进行弥补，并且花粉亲和性高、授粉时间灵活，科学使用，可有效提高果实坐果率。与固体喷粉相较，液体喷粉具有节省花粉、喷粉操作方便等优点。目前，我国对梨、苹果、杏等树种的液体花粉配方研究报道较多，但在巴旦木方面尚属空白。液体花粉配方的成分、配比对巴旦木混合花粉萌发造成重要影响。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对传统的巴旦木授粉方法影响花粉的授粉和萌发，导致巴旦木坐果率少、产量低，严重影响巴旦木的产量和效益的问题，提供了一种巴旦木液体花粉及其制备方法。
为解决上述技术问题，本发明旨在于提供一种巴旦木液体花粉制备方法，按重量百分比计，巴旦木液体花粉包括巴旦木混合花粉26-30％、蔗糖68.5-72.5％、尿素0.6-1.0％、硼酸0.2-0.4％、黄原胶0.25-0.45％、CaCl2 0.033-0.045％、GA3 0.005-0.025％、IAA 0.0005-0.0025％，用6倍水稀释；通过对巴旦木液体花粉配方中的各成分开展梯度试验，找出最适配比，并在巴旦木花期进行田间试验，使用后显著提高了巴旦木的坐果率，有效提高产量，推进我国巴旦木产业发展。
本发明通过以下技术方案实现的：
本发明具体提供一种巴旦木液体花粉，按重量百分比计，包括巴旦木混合花粉26-30％、蔗糖68.5-72.5％、尿素0.6-1.0％、硼酸0.2-0.4％、黄原胶0.25-0.45％、CaCl20.033-0.045％、GA3 0.005-0.025％、IAA 0.0005-0.0025％，用6倍水稀释。
优选的，本发明提供的一种巴旦木液体花粉，按重量百分比计，包括巴旦木混合花粉28％、蔗糖70.5％、尿素0.8％、硼酸0.3％、黄原胶0.35％、CaCl2 0.039％、GA30.01％、IAA0.001％，用6倍水稀释。
本发明采用的巴旦木混合花粉优选为，纸皮巴旦木树和晚丰巴旦木树花期时收集的花粉，按照重量份数计，纸皮巴旦木：晚丰巴旦木＝1:1。
同时，本发明提供上述巴旦木液体花粉的制备方法，具体采用以下技术步骤：
(1)在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，待用；
(2)将步骤(1)中制备的巴旦木花粉从-40℃超低温冰箱中取出，采用37℃温水解冻5min，分别称取巴旦木混合花粉、尿素、硼酸、CaCl2、IAA、GA3、蔗糖、黄原胶和水，搅拌混合，制得巴旦木液体花粉。
通过实施本发明的技术方案，可以达到以下有益效果:
本发明提供一种巴旦木液体花粉，按重量百分比计，包括巴旦木混合花粉26-30％、蔗糖68.5-72.5％、尿素0.6-1.0％、硼酸0.2-0.4％、黄原胶0.25-0.45％、CaCl20.033-0.045％、GA3 0.005-0.025％、IAA 0.0005-0.0025％，用6倍水稀释；通过对巴旦木液体花粉配方中的各成分开展梯度试验，找出最适配比，并在巴旦木花期进行田间试验，使用后大大提高了巴旦木坐果率，有效提高产量，推进我国巴旦木产业发展。
附图说明
图1显示为蔗糖添加量和尿素添加量对巴旦木液体花粉萌发率的响应面图。
图2显示为硼酸添加量和蔗糖添加量对巴旦木液体花粉萌发率的响应面图。
图3显示为尿素添加量和硼酸添加量对巴旦木液体花粉萌发率的响应面图。
图4显示为CaCl2添加量和GA3添加量对巴旦木液体花粉萌发率的响应面图。
图5显示为CaCl2添加量和IAA添加量对巴旦木液体花粉萌发率的响应面图。
图6显示为IAA添加量和GA3添加量对巴旦木液体花粉萌发率的响应面图。
图7显示为巴旦木果实膨大期状态图。
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
试验地点为：莎车县国有二林场，试验站地处新疆喀什地区莎车县阿斯兰巴格乡，北纬38°12'13.4"N，东经77°08'22.5"E，海拔1200m，巴旦木栽培株行距为6m×7m，树形为自然开心形。
材料：巴旦木以莎车县国有二林场的巴旦木主栽品种“纸皮巴旦木”和“晚丰巴旦木”。
本发明采用的尿素、硼酸、CaCl2、IAA、GA3、蔗糖、黄原胶均可通过公共渠道购买，工艺中所采用的设备和仪器均为本领域常见的设备。
本发明中选用的所有材料、试剂和仪器都为本领域熟知的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
实施例一：
本发明具体提供一种巴旦木液体花粉，按重量百分比计，包括巴旦木混合花粉26-30％、蔗糖68.5-72.5％、尿素0.6-1.0％、硼酸0.2-0.4％、黄原胶0.25-0.45％、CaCl20.033-0.045％、GA3 0.005-0.025％、IAA 0.0005-0.0025％，用6倍水稀释。
本发明采用的巴旦木混合花粉优选为，纸皮巴旦木树和晚丰巴旦木树花期时收集的花粉，按照重量份数计，纸皮巴旦木：晚丰巴旦木＝1:1。
实施例二：巴旦木液体花粉的制备方法
在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，将超低温保存的花粉取出，采用37℃温水解冻5min，将巴旦木混合花粉26g、蔗糖68.5g、尿素0.6g、硼酸0.2g、黄原胶0.25g、CaCl2 0.033g、GA3 0.005g、IAA 0.0005g混合均匀，用6倍水稀释，制得巴旦木液体花粉。
实施例三：巴旦木液体花粉的制备方法
在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，将超低温保存的花粉取出，采用37℃温水解冻5min，将巴旦木混合花粉27g、蔗糖69.5g、尿素0.7g、硼酸0.25g、黄原胶0.3g、CaCl2 0.036g、GA3 0.015g、IAA 0.0015g混合均匀，用6倍水稀释，制得巴旦木液体花粉。
实施例四：巴旦木液体花粉的制备方法
在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，将超低温保存的花粉取出，采用37℃温水解冻5min，将巴旦木混合花粉28g、蔗糖70.5g、尿素0.8g、硼酸0.3g、黄原胶0.35g、CaCl2 0.039g、GA3 0.01g、IAA0.001g混合均匀，用6倍水稀释，制得巴旦木液体花粉。
实施例五：巴旦木液体花粉的制备方法
在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，将超低温保存的花粉取出，采用37℃温水解冻5min，将巴旦木混合花粉29g、蔗糖71.5g、尿素0.9g、硼酸0.35g、黄原胶0.4g、CaCl2 0.042g、GA30.02g、IAA0.002g混合均匀，用6倍水稀释，制得巴旦木液体花粉。
实施例六：巴旦木液体花粉的制备方法
在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，将超低温保存的花粉取出，采用37℃温水解冻5min，将巴旦木混合花粉30g、蔗糖72.5g、尿素1.0g、硼酸0.4g、黄原胶0.45g、CaCl2 0.045g、GA3 0.025g、IAA 0.0025g混合均匀，用6倍水稀释，制得巴旦木液体花粉。
实施例七：巴旦木液体花粉的制备
同时，本发明提供上述巴旦木液体花粉的制备方法，具体采用以下技术步骤：
(1)在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，待用；
(2)将步骤(1)中制备的巴旦木花粉从40℃超低温冰箱中取出，采用37℃温水解冻5min，分别称取巴旦木混合花粉、尿素、硼酸、CaCl2、IAA、GA3、蔗糖、黄原胶和水，搅拌混合，制得巴旦木液体花粉。
实施例八：巴旦木液体花粉配方的优化
分别采用如下不同的方案制备巴旦木液体花粉：
方案1：巴旦木混合花粉26g、蔗糖68.5g、尿素0.6g、硼酸0.2g、黄原胶0.25g、CaCl20.033g、GA3 0.005g、IAA 0.0005g混合均匀，用6倍水稀释。
方案2：巴旦木混合花粉27g、蔗糖69.5g、尿素0.7g、硼酸0.25g、黄原胶0.3g、CaCl20.036g、GA3 0.015g、IAA 0.0015g混合均匀，用6倍水稀释。
方案3：巴旦木混合花粉28g、蔗糖70.5g、尿素0.8g、硼酸0.3g、黄原胶0.35g、CaCl20.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g混合均匀，用6倍水稀释。
方案4：巴旦木混合花粉29g、蔗糖71.5g、尿素0.9g、硼酸0.35g、黄原胶0.4g、CaCl20.042g、GA3 0.02g、IAA 0.002g混合均匀，用6倍水稀释。
方案5：巴旦木混合花粉30g、蔗糖72.5g、尿素1.0g、硼酸0.4g、黄原胶0.45g、CaCl20.045g、GA30.025g、IAA 0.0025g混合均匀，用6倍水稀释，制得巴旦木液体花粉。
将上述提供的五个不同方案分别按照实施例七提供的制备方法制备巴旦木液体花粉：
在上述实验基础上制备的巴旦木液体花粉进行液体花粉优化，采用前一年冷冻保存的花粉进行试验，实验前将-40℃超低温保存的花粉取出，采用37℃温水解冻5min备用，以花粉个数、花粉萌发率、大田坐果率为指标，对巴旦木混合花粉、黄原胶、尿素、硼酸、CaCl2、IAA、GA3、蔗糖进行单因素实验。在此基础上，进行响应面分析。
1、检验方法
花粉萌发率：该试验方法采取液体培养法进行花粉培养，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取放入离心管中，加入混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，盖好载玻片，用显微镜进行观察计数。一般将花粉管长度超过花粉直径2倍以上判定为己萌发，计算已萌发花粉在视野中全部花粉中的百分比，每处理统计9个视野。
2、液体花粉添加量单因素实验
(1)不同尿素添加量对液体花粉的影响
本实验设置7个处理组，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、硼酸0.2g、黄原胶0.3g、CaCl2 0.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g、尿素(0.0g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1.0g)添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察计数。统计花粉萌发率如表1所示，当尿素添加量为0.8g时，花粉萌发率最高为23.63％。
表1：不同尿素添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
序号 尿素(g) 花粉萌发率(％)
1 0 12.75
2 0.5 11.85
3 0.6 16.84
4 0.7 17.03
5 0.8 23.63
6 0.9 14.06
7 1.0 12.22
(2)不同硼酸添加量对液体花粉的影响
本实验设置6个处理组，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、尿素0.7g、黄原胶0.3g、CaCl2 0.039g、GA30.01g、IAA 0.001g、硼酸(0.0g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g)添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，如表2所示，硼酸添加量为0.3g时，花粉萌发率最高为23.71％。
表2：不同硼酸添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
序号 硼酸(g) 花粉萌发率(％)
1 0 10.19
2 0.2 13.39
3 0.25 17.22
4 0.3 23.71
5 0.35 10.47
6 0.4 7.37
(3)不同CaCl2添加量对液体花粉的影响
本实验设置6个处理组，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、尿素0.7g、硼酸0.2g、黄原胶0.3g、GA30.01g、IAA 0.001g、CaCl2(0.0g、0.033g、0.036g、0.039g、0.042g、0.045g)添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，如表3所示，CaCl2添加量为0.039g时，花粉萌发率最高为25.74％。
表3：不同CaCl2添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
序号 CaCl<sub>2</sub>(g) 花粉萌发率(％)
1 0 13.56
2 0.033 14.01
3 0.036 21.04
4 0.039 25.74
5 0.042 23.37
6 0.045 19.55
(4)不同IAA添加量对液体花粉的影响
本实验设置6个处理组，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、尿素0.7g、硼酸0.2g、黄原胶0.3g、CaCl2 0.039g、GA30.01g、IAA(0.0g、0.0005g、0.001g、0.0015g、0.0002g、0.0025g)添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，如表4所示，当IAA添加量为0.001g时，花粉萌发率最高为19.68％。
表4：不同IAA添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
序号 IAA(g) 花粉萌发率(％)
1 0 11.57
2 0.0005 14.22
3 0.001 19.68
4 0.0015 1.26
5 0.002 0.98
6 0.0025 1.75
(5)不同GA3添加量对液体花粉的影响
本实验设置6个处理组，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、尿素0.7g、硼酸0.2g、黄原胶0.3g、CaCl2 0.039g、IAA 0.001g、GA3(0.0g、0.005g、0.01g、0.015g、0.02g、0.025g)添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，分别加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，如表5所示，当GA3添加量为0.01g时，花粉萌发率最高为19.43％。
表5:不同GA3添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
序号 GA<sub>3</sub>(g) 花粉萌发率(％)
1 0 13.37
2 0.005 15.31
3 0.01 19.25
4 0.015 17.43
5 0.02 14.22
6 0.025 13.76
(6)不同蔗糖添加量对液体花粉的影响
本实验设置6个处理组，每个处理组配方按照尿素0.7g、硼酸0.2g、黄原胶0.3g、CaCl2 0.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g、蔗糖(67.5g、68.5g、69.5g、70.5g、71.5g、72.5g)的添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，分别加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，如表6所示，当蔗糖添加量为70.5g时，花粉萌发率最高为21.03％。
表6:不同蔗糖添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
序号 蔗糖(g) 花粉萌发率(％)
1 67.5 14.20
2 68.5 15.03
3 69.5 17.22
4 70.5 21.03
5 71.5 11.80
6 72.5 6.83
(7)黄原胶添加量实验
本实验设置5个处理组，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、尿素0.7g、硼酸0.2g、CaCl2 0.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g、黄原胶(0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g)添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在量筒中，分别加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在量筒中搅拌均匀，分别于0min、15min、30min、60min、90min取上层液体，观察花粉个数。结果如表7所示，随着时间的延长，0.35g的黄原胶添加量制备的液体花粉稳定性最好。
表7：不同黄原胶添加量对巴旦木液体花粉配方的影响
Figure BDA0001900073520000131
3、液体花粉培养基响应面优化试验
(1)在单因素试验基础上，选取蔗糖、尿素、硼酸添加量进行响应面实验，通过Box-Behnken中心组合实验并结合实际实验条件选取合理水平，以花粉萌发率作为响应值设计了三因素三水平的响应面分析实验，其组合设计水平取值及编码见表8。
表8：因素水平编码表
Figure BDA0001900073520000132
根据Box-Behnken试验设计原理，选取蔗糖添加量(A)、尿素添加量(B)、硼酸添加量(C)进行三因素三水平响应面分析，以花粉萌发率(Y)指标作为响应值，试验设计方案，每个处理组配方按照CaCl2 0.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g、黄原胶0.35g添加，其余添加剂按照表9中的实验设计添加后，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取1/40的液体培养基放在离心管中，分别加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，得到试验设计方案和结果见表9，并利用Design Expert 8.0软件对数据进行回归分析。
表9：响应面试验方案及结果
试验号 A B C Y
1 -1 -1 0 18.05
2 1 -1 0 21.95
3 -1 1 0 18.53
4 1 1 0 20.05
5 -1 0 -1 17.05
6 1 0 -1 19.59
7 -1 0 1 20.3
8 1 0 1 21.96
9 0 -1 -1 17.87
10 0 1 -1 16.01
11 0 -1 1 17.87
12 0 1 1 19.09
13 0 0 0 24.31
14 0 0 0 24.75
15 0 0 0 24.82
16 0 0 0 24.41
17 0 0 0 24.27
按照表9试验数据进行多元回归方程拟合，建立拟合方程为：
Y＝24.51+1.20A-0.26B+1.09C-0.60AB-0.22AC+0.77BC-1.43A2-3.44B2-3.36C2
根据表9的实验结果，为了考察各个交互项对花粉萌发率的影响，在其他因素固定不变的情况下，利用Design-Expert 8.05软件对回归方程进行运算及交互项的响应面图，如表10、附图1、附图2和附图3所示。
表10：回归模型的方差分析
Figure BDA0001900073520000151
注：*P<0.05，差异显著；**p<0.01，差异极显著。
回归方程中各变量对指标(响应值)影响的显著性，由F检验来判定，概率P的值越小，则相应变量的显著程度越高。由表10可知，当模型F值为F＝142.15，P<0.0001，失拟项＞0.05，说明模型显著。决定系数为R2＝0.9907，校正系数为R2 Adj＝0.9788表明实测值与预测值之间具有很好的拟合度。由此可以说明模型的建立呈显著性，说明此模型的拟合程度较好，试验操作准确可信，因此可以利用此模型对巴旦木液体花粉中蔗糖、尿素、硼酸添加量进行分析和预测。由软件Design-Expert 8.05自动分析可得到蔗糖、尿素、硼酸的最佳添加量为：蔗糖70.87g、尿素0.79g和硼酸0.31g，考虑到实际操作的可实施性，将最佳添加量结果修订为：蔗糖70.5g、尿素0.8g和硼酸0.3g。
(2)在单因素试验基础上，选取CaCl2、GA3、IAA添加量进行响应面实验，通过Box-Behnken中心组合实验并结合实际实验条件选取合理水平，以花粉萌发率作为响应值设计了三因素三水平的响应面分析实验，其组合设计水平取值及编码见表11。
表11：因素水平编码表
Figure BDA0001900073520000161
根据Box-Behnken试验设计原理，选取CaCl2添加量(A)、GA3添加量(B)、IAA添加量(C)进行三因素三水平响应面分析，以花粉萌发率(Y)指标作为响应值，试验设计方案，每个处理组配方按照蔗糖70.5g、尿素0.8g、硼酸0.3g、黄原胶0.35g添加，其余添加剂按照表12中的实验设计添加后，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取1/40的液体培养基放在离心管中，分别加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，得到试验设计方案和结果见表12，并利用DesignExpert 8.0软件对数据进行回归分析。
表12：响应面试验方案及结果
试验号 A B C Y
1 -1 -1 0 17.99
2 1 -1 0 20.57
3 -1 1 0 17.57
4 1 1 0 20.32
5 -1 0 -1 16.19
6 1 0 -1 20.62
7 -1 0 1 18.75
8 1 0 1 19.94
9 0 -1 -1 19.43
10 0 1 -1 18.91
11 0 -1 1 19.72
12 0 1 1 21.85
13 0 0 0 24.64
14 0 0 0 24.35
15 0 0 0 24.23
16 0 0 0 24.66
17 0 0 0 24.71
按照表12试验数据进行多元回归方程拟合，建立拟合方程为：
Y＝24.52+1.37A+0.12B+0.64C+0.042AB-0.81AC+0.66BC-3.25A2-2.15B2-2.39C2
根据表12的实验结果，为了考察各个交互项对花粉萌发率的影响，在其他因素固定不变的情况下，利用Design-Expert 8.05软件对回归方程进行运算及交互项的响应面图，如表13、附图4、附图5和附图6所示。
表13：回归模型的方差分析
Figure BDA0001900073520000171
Figure BDA0001900073520000181
注：*P<0.05，差异显著；**p<0.01，差异极显著。
回归方程中各变量对指标(响应值)影响的显著性，由F检验来判定，概率P的值越小，则相应变量的显著程度越高。由表13可知，当模型F值为F＝120.74，P<0.0001，失拟项＞0.05，说明模型是显著的。决定系数为R2＝0.9912，校正系数为R2 Adj＝0.9799表明实测值与预测值之间具有很好的拟合度。由此可以说明模型的建立呈显著性，说明此模型的拟合程度较好，试验操作准确可信，因此可以利用此模型对巴旦木液体花粉中CaCl2、GA3、IAA添加量进行分析和预测。由软件Design-Expert 8.05自动分析可得到CaCl2、GA3、IAA的最佳添加量为：CaCl2 0.039g、GA3 0.01g和IAA 0.001g。
4、巴旦木液体花粉萌发率对比试验
(1)原料：取当年制备的巴旦木花粉、前一年保存的巴旦木花粉，前一年保存的巴旦木花粉，花粉从-40℃超低温中取出，采用37℃温水解冻5min备用，混合花粉为纸皮巴旦木：晚丰巴旦木按重量比1:1。
(2)本实验设置4个处理组，分别为当年花粉制备的液体花粉组、前一年保存花粉制备的液体花粉组、当年花粉对照组和前一年保存花粉对照组，2个处理组按照蔗糖70.5g、尿素0.8g、硼酸0.3g、黄原胶0.35g、CaCl2 0.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g添加，用600mL水稀释获得液体培养基，将提前配置好的液体培养基用移液器吸取约1/40的液体培养基放在离心管中，分别加入0.75g(等于26g固体花粉的1/40)混合花粉在离心管中液体表面；2个对照组按照蔗糖10％、琼脂1％、混合花粉4％添加混合，25℃静置培养6-24h后，吸取一滴培养后的花粉悬浮液于载玻片中央，用显微镜进行观察，统计花粉萌发率，如表14所示，使用当年花粉配置巴旦木液体花粉，花粉萌发率为79.72％，其对照组所获得的萌发率为53.77％，使用前一年保存的花粉配置巴旦木液体花粉，花粉萌发率为24.56％，其对照组所获得的萌发率仅仅为9.62％，由于前一年冷藏保存的花粉由于长时间存放，导致花粉本身活性低于当年制备后贮藏的花粉，所以制备的液体花粉花粉萌发率略低。通过实验获得的液体花粉配方能不仅能有效提高前一年冷藏保存花粉的萌发率，也能通过液体花粉配方提高当年花粉的萌发率。
表14：不同花粉贮藏方式对巴旦木液体花粉萌发率的影响
Figure BDA0001900073520000191
5、巴旦木液体花粉配方大田坐果率测定
(1)原料：取当年制备的巴旦木花粉、前一年冷藏保存的巴旦木花粉，混合花粉为纸皮巴旦木：晚丰巴旦木＝1:1。
(2)方法：每处理采用蔗糖70.5g、尿素0.8g、硼酸0.3g、黄原胶0.35g、CaCl20.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g，分别添加25g、26g、27g、28g、29g、30g的混合花粉，用6倍水稀释制得巴旦木液体花粉，以点授花粉和蜜蜂授粉作为对照。每处理选择小软壳巴旦木3个方向果枝，每枝上取30-50朵花，采用小喷壶液体喷粉，挂牌计数。随配随用，2h内用完。于果实膨大期(约在授粉后45天左右)，统计坐果率，计算公式如下：坐果率＝(座果数/授粉花朵数)×100％
(3)结果与分析
于果实膨大期，如附图7所示，对授粉挂牌果实进行统计，并计算坐果率，得到以下结果，如表15所示。
表15：不同混合花粉添加量对液体花粉授粉坐果率的影响
Figure BDA0001900073520000201
由表15可知，对于巴旦木液体花粉配方中，采用冷藏保存后的混合花粉当添加量为28g时，制得的液体巴旦木花粉坐果率为25.56％，坐果率远高于点授花粉和蜜蜂授粉，座果效果最好；采用当年制备的混合花粉添加量为28g时，制得的液体巴旦木花粉坐果率为43.76％，座果效果最好。
通过响应面试验优化以及大田坐果率实验结果可知，巴旦木液体花粉配方为：巴旦木混合花粉26-30g、蔗糖68.5-72.5g、尿素0.6-1.0g、硼酸0.2-0.4g、黄原胶0.25-0.45g、CaCl2 0.033-0.045g、GA3 0.005-0.025g、IAA 0.0005-0.0025g，用6倍水稀释。
即巴旦木液体花粉配方，按重量百分比计，包括巴旦木混合花粉26-30％、蔗糖68.5-72.5％、尿素0.6-1.0％、硼酸0.2-0.4％、黄原胶0.25-0.45％、CaCl2 0.033-0.045％、GA3 0.005-0.025％、IAA 0.0005-0.0025％，用6倍水稀释。采用方案3制备的巴旦木液体花粉坐果率最高，优选的，本发明具体提供一种巴旦木液体花粉，按重量百分比计，包括巴旦木混合花粉28％、蔗糖70.5％、尿素0.8％、硼酸0.3％、黄原胶0.35％、CaCl20.039％、GA3 0.01％、IAA 0.001％，用6倍水稀释。通过对巴旦木液体花粉配方中的各成分开展梯度试验，找出最适配比，并在巴旦木花期进行田间试验，使用后巴旦木坐果率显著提高，有效提高产量。
实施例九：不同巴旦木液体花粉配方大田对比试验
参考现有公知技术，选择2种液体花粉配方与本申请的液体花粉配方进行大田坐果率对比实验。
(1)材料和仪器：取当年制备的巴旦木混合花粉、冷藏保存的巴旦木混合花粉，混合花粉为纸皮巴旦木：晚丰巴旦木＝1:1。
(2)方法：:花粉配方分别为：①公知配方1：硼酸0.03g、氯化钙0.03g、尿素0.3g、聚乙二醇15g、蔗糖8g和混合花粉4g，加100mL水混合；②公知配方2：黄原胶0.04g、萝卜糖17g、果蔬钙0.03g、硼酸0.01g、PBO300倍液和混合花粉4g，加100mL水混合；③本申请的巴旦木液体花粉配方为：混合花粉28g、蔗糖70.5g、尿素0.8g、硼酸0.3g、黄原胶0.35g、CaCl20.039g、GA3 0.01g、IAA 0.001g，用6倍水稀释。
每处理选择小软壳巴旦木3个方向果枝，每枝上取30-50朵花，采用小喷壶液体喷粉，挂牌计数。随配随用，2h内用完。于果实膨大期(约在授粉后45天左右)，统计坐果率，计算公式如下：坐果率＝(座果数/授粉花朵数)×100％。
(3)结果与分析
于果实膨大期，对授粉挂牌果实进行统计，并计算坐果率，得到以下结果，如表16所示。
表16：不同液体花粉配方对巴旦木坐果率的影响
Figure BDA0001900073520000221
由表16可知，本申请提供的巴旦木液体花粉配方在田间坐果率实验中，无论是冷藏保存后的花粉还是当年制备的花粉，制备的巴旦木液体花粉的坐果率明显高于其他2种公知液体花粉配方的坐果率，说明本申请提供的巴旦木液体花粉配方能有效提高巴旦木坐果率，提高产量。
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。

Claims (2)

1.一种巴旦木液体花粉的制备方法，其特征在于，具体采用以下技术步骤：
(1)在巴旦木树处于花期时，采摘花苞，快速脱去花药，进行干燥开药，并收集干燥的花粉，-40℃超低温避光保存，待用；
(2)将步骤(1)中制备的巴旦木花粉从-40℃超低温冰箱中取出，采用37℃温水解冻5min，分别称取按重量百分比计，巴旦木混合花粉26-30％、蔗糖68.5-72.5％、尿素0.6-1.0％、硼酸0.2-0.4％、黄原胶0.25-0.45％、CaCl2 0.033-0.045％、GA3 0.005-0.025％、IAA 0.0005-0.0025％，用6倍水稀释，搅拌混合，制得巴旦木液体花粉；
所述的巴旦木混合花粉为，纸皮巴旦木和晚丰巴旦木花期时收集的花粉，按照重量份数计，纸皮巴旦木：晚丰巴旦木＝1:1。
2.如权利要求1所述的一种巴旦木液体花粉的制备方法，其特征在于，所述的巴旦木混合花粉28％、蔗糖70.5％、尿素0.8％、硼酸0.3％、黄原胶0.35％、CaCl2 0.039％、GA30.01％、IAA 0.001％，用6倍水稀释。
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