CN109453232A - 啤酒花中树脂类成分提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，具体公开了啤酒花中树脂类成分提取物及其制备方法和治疗骨质疏松症方面的应用。本发明提供的树脂类成分提取物的制备方法，工艺简便、成本较低、安全性高，经由该制备工艺制备的树脂类成分提取物，得率高、溶剂残留少、品质高、药效好。本发明还提供了药理学研究，证明啤酒花中树脂类成分提取物具有较强的抗骨质疏松症作用，辅以药学上可接受的辅料，可制备成各种口服、注射、外用制剂，具有较好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及啤酒花树脂类成分提取物及其制备方法与在制备抗骨质疏松症药物和食品中的应用。
背景技术
骨质疏松症是一种以骨密度降低、骨微结构破坏为主要特征，导致骨质脆性增加和易发生骨折的全身性骨代谢疾病。目前，骨质疏松的发病率日益升高，全球有超过五分之一的男性和三分之一的女性在50周岁及以上的年龄会患有骨质疏松。更加岌岌可危的是，预计到2050年，全亚洲患有骨质疏松及髋骨骨折的病人将占全球发病人群的50％以上。迄今，临床上治疗骨质疏松的药物主要包括维生素D类制剂、降钙素类制剂、雌激素类制剂、异丙氧黄酮类制剂、维生素K2制剂、促蛋白合成甾类制剂，以及双磷酸盐类制剂。然而，长期服用这些药物多具有副作用，如：雌激素类制剂会显著增加患心血管疾病和乳腺癌的风险；双磷酸盐类制剂易产生肾毒性和胃肠道反应。相反，植物药因其疗效可靠、毒副作用低的特点，已被逐渐视为开发抗骨质疏松药物的重要研发方向。另有研究表明，在骨代谢过程中，以清除受损碎片，形成骨洞为主要作用的破骨细胞，与以沉积钙质、填充骨洞为主要作用的成骨细胞相互协调，使骨质的形成与溶解处于一种动态平衡，维持骨质的不断更新。当成骨细胞骨形成作用弱于破骨细胞骨吸收作用时，骨代谢处于负平衡，骨质减少，进而导致骨质疏松。换言之，任何能够直接或间接作用于成骨细胞和或破骨细胞，有助于保持其动态平衡的药物，均可能有助于防治骨质疏松症。因此，成骨细胞骨形成及破骨细胞骨吸收指标常用于抗骨质疏松药物的筛选。
啤酒花别名忽布、蛇麻花、香蛇麻花、酒花、野酒花，为桑科(Moraceae)葎草属植物啤酒花Humulus lupulus L.的雌花序，原产欧洲，我国新疆有野生，东北、华北、山东等地也有栽培，是药食兼用的特色资源植物。在传统的药用记载中，啤酒花具有健胃消食，利尿，安神、止咳化痰等作用，常被用于治疗食欲不振，焦虑、失眠等精神性疾病。啤酒花主要含有树脂类、黄酮类及多酚类成分。其中树脂类化合物是啤酒花中最主要的成分之一，因其能够使啤酒具有苦味，故也被称为苦味酸。苦味酸可分为α-酸和β-酸，其含量约占啤酒花总量的5-20％。在现代药理研究中，树脂类成分展现出高效的抗菌活性，并具有降血糖以及抗炎的作用，能够减少骨关节炎的发生。然而，啤酒花中树脂类成分是脂溶性的成分，有关其提取物在防治骨质疏松症方面的作用与功效，尚未见文献报道。本发明人前期研究成果已申请中国专利，申请号：201610097260.4，发明名称为“一种抗骨质疏松啤酒花提取物及其制备方法和应用”，该专利提取制备了以水溶性提取物，其主要含有水溶性黄酮类成分黄腐酚，是不同于本发明树脂类成分提取物。尽管前述发明的水溶性提取物具有一定的抗骨质疏松作用，其效果仍然不尽如人意，故发明人仍在不懈寻找活性更好的啤酒花提取物。
目前，由于啤酒花中单体成分的含量有限，制备工艺复杂，成本较高，以单体成分为主的新药开发难度较大，而以啤酒花中有效成分的提取物进行新药研发则具有显著的优势。目前，已有专利技术(CN201510220128.3，CN201310024053.2，CN201310024052.8，CN201510027779.0，CN201410460743.7，CN200810037197.0，CN201410182552.9，CN201410182552.9)，多采用溶剂粗提，结合大孔树脂、聚酰胺除杂工艺设计，来制备啤酒花中有效成分，但存在工艺步骤多、成本高、所用试剂及树脂所含的有害杂质可能引入到最终提取物中等方面的弊端。另有专利技术，采用超临界流体萃取技术 (CN200910089532.6，CN02815697.8)，或者膜技术(CN201210412183.9， CN201110218675.X)进行啤酒花提取物的制备，但同样存在成本高、工艺复杂、提取效率低等显而易见的问题。因此，克服现有工艺技术的缺点，开发设计一种工艺简便、成本低、提取效率高的啤酒花中有效成分的制备工艺是十分必要的。
发明内容
鉴于中草药成分的高度复杂性，啤酒花提取物的制备成本高、工艺复杂、提取效率低等技术问题，本发明的目的在于提供一种啤酒花中树脂类成分提取物及其制备工艺，设计该制备工艺的出发点在于，基于简便、安全、低成本的制备工艺基础上制备得到有效成分的提取物，不片面追求单一成分的高含量，而是在所设定的药理作用方面，具有显著的效果，以方便作为药物、食品的应用。
本发明的啤酒花中树脂类成分提取物由啤酒花经超临界CO2萃取法提取得到，其中α- 酸和β-酸的质量比为5～14:1优选5～10，其中α-酸为类律草酮(cohumulone)和伴律草酮 (adhumulone)，β-酸为类蛇麻酮(colupulone)和伴蛇麻酮(adlupulone)。优选的，所述啤酒花中树脂类成分提取物中α-酸含量为13.5～18％，β-酸的含量为1.3～2.6％。
优选的，所述啤酒花中树脂类成分提取物的萃取条件为：萃取压力23～27Mpa，萃取温度48～52℃，CO2流速为13～17L/h，萃取时间1.5～2h。
进一步的，其萃取条件为：萃取压力25Mpa，萃取温度50℃，CO2流速为15L/h，萃取时间1.5h。
本发明的目的还在于提供所述啤酒花中树脂类成分提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤：
a)采用正交实验设计法优选超临界CO2萃取条件
设定萃取压力、萃取温度、CO2流速、萃取时间4个实验因素，每个因素设计3个水平进行正交提取试验，其中萃取压力设计范围为15～30Mpa，萃取温度范围为30～60℃， CO2流速为10～25L/h，萃取时间：0.5～3h；
根据正交试验的结果，以浸膏的量、浸膏中α-酸含量和浸膏中β-酸含量作为指标，以各指标的最大值为参照，对数据进行归一化处理，设定浸膏的量权重系数设为0.4～0.6，α- 酸含量权重系数设为0.25～0.35，β-酸含量权重系数设为0.15～0.25，进行分别评分和综合评分，并进行方差分析，具体的：
α-酸含量评分＝α-酸含量/最大α-酸含量×(0.25～0.35)×100，
β-酸含量评分＝β-酸含量/最大β-酸含量×(0.15～0.25)×100，
浸膏重量评分＝浸膏重量/最大浸膏重量×(0.4～0.6)×100，
综合评分＝α-酸含量评分+β-酸含量评分+浸膏重量评分；
根据综合评分和方差分析确定最优的萃取条件进行；
b)采用最优的萃取条件对啤酒花进行超临界CO2萃取。
本发明的一较佳实施例的所述方法的步骤a)中，具体实验因素水平设计如下：
萃取压力：15Mpa、20Mpa、25Mpa，
萃取温度：40℃、45℃、50℃，
CO2流速：15L/h、18L/h、21L/h，
萃取时间：0.5h、1.0h、1.5h；
评分时，设定浸膏的量权重系数设为0.5，α-酸含量权重系数设为0.3，β-酸含量权重系数设为0.2；
确定最优的萃取条件为：萃取压力25Mpa，萃取温度50℃，CO2流速为15L/h，萃取时间1.5h。
本发明采用正交实验设计法对啤酒花中树脂类成分提取物的制备方法进行优选，设定萃取压力、萃取温度、CO2流速、萃取时间4个实验因素，每个因素设计3个水平。结合浸膏的量、α-酸含量和β-酸含量以及这些指标成分不同的权重系数进行综合评定，根据各指标成分在工艺中的主次地位，其中浸膏的量为该工艺最重要因素，权重系数设置较大，根据啤酒花中树脂类成分的含量及药理作用，将α-酸含量权重系数次之，β-酸含量权重系数再次之。优选得到的最佳提取工艺为：萃取压力25Mpa，萃取温度50℃，CO2流速为 15L/h，萃取时间1.5h。
经维甲酸大鼠及成骨细胞模型证实，本发明的啤酒花中树脂类成分提取物具有抗骨质疏松作用，具体的：1、通过维甲酸灌胃建立骨质疏松症大鼠模型，研究啤酒花树脂类成分提取物对大鼠血清中骨代谢相关指标的影响，明确树脂类成分可调控骨代谢；2、以成骨细胞为研究对象，通过成骨细胞增殖实验，明确树脂类成分提取物可促进成骨细胞骨形成。
通过体内体外相关药理研究，发现并证明啤酒花中树脂类成分提取物可显著促进成骨细胞的增殖，提高维甲酸致骨质疏松大鼠血清骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(AKP)水平，降低抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的表达。
鉴于啤酒花中树脂类成分提取物对于骨代谢具有显著的调控作用，其可以用于制备抗骨质疏松症药物或者食品。
啤酒花树脂类成分提取物可辅以药学上可接受的辅料载体，采用常规制剂技术即可制成各种口服、注射、外用制剂，可以通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是注射剂、片剂、包衣片剂、胶囊。
所述的药学上可接受的辅料载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。可以选择上述药物载体中一种，也可以是多种。
本发明的优势和积极效果在于一方面通过正交实验法，明确啤酒花树脂类成分提取物的最优提取和制备工艺。另一方面，通过体内体外相关药理研究，发现并证明树脂类成分提取物可显著促进成骨细胞的增殖，提高维甲酸致骨质疏松大鼠血清骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(AKP)水平，降低抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的表达。
综上所述，本发明提供的啤酒花中树脂类成分提取物的制备方法，工艺简便、成本较低、安全性高，经由该制备工艺制备的树脂类成分提取物，得率高、溶剂残留少、品质高、药效好。本发明不片面追求单一成分的高含量，而是在所设定的药理作用方面，具有显著的效果，以方便作为药物、食品的应用。啤酒花中树脂类成分提取物对于骨代谢具有显著的调控作用，可应用于骨质疏松的预防和治疗，有望将其开发成为防治骨质疏松的药物或食品，具有广阔的市场前景，蕴藏着巨大的社会和经济效益。
附图说明
图1是啤酒花树脂类成分提取物的HPLC图谱(A：对照品溶液；B：供试品溶液；峰 1：类律草酮，峰2：伴律草酮，峰3：类蛇麻酮，峰4：伴蛇麻酮)。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。
实施例1(啤酒花中树脂类成分提取物的制备)
1.材料：啤酒花药材(批号：20170306，于2017年3月购于新疆昌吉市山水啤酒花有限公司)；纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；色谱纯乙腈、色谱纯甲醇(阿达玛斯试剂有限公司)；其余试剂均为分析纯。标准酒花浸膏(美国酿造化学家协会，其中类律草酮含量为13.88％，伴律草酮含量为30.76％，类蛇麻酮含量为13.44％，伴蛇麻酮含量为 10.84％)；啤酒花水提物(按专利201610097260.4实施例1方法制备)。
2.实验方法
2.1超临界CO2法提取啤酒花树脂类成分工艺路线
将700g粉碎后的啤酒花装入萃取器中，选取合适的萃取压力、萃取温度、CO2流速和萃取时间，CO2通过冷却加压进入萃取器中，在加热加压状态下，啤酒花中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中，并随CO2流体经过分离器。通过降低压力和升高温度等途径，有效成分和CO2转变成气态从分离器中分离出去，而萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体冷凝后循环使用。达到萃取时间后，停止运行，从分离器底部的接样阀接取样品，待系统压力恢复至常压，可卸去啤酒花萃余物准备下一次操作。收集萃取器中的啤酒花萃余物留做后续实验用。
2.2啤酒花树脂类成分提取物含量测定
对照品溶液配制：将标准酒花浸膏于30℃水浴加热后搅拌均匀，精密称取0.46627g 于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混合均匀后于4℃保存。
供试品溶液配制：精密称取啤酒花超临界CO2树脂类提取物100mg于10mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度。
流动相：甲醇(A)∶0.1％磷酸(B)＝90∶10；流速：0.8mL/min；进样量：10μL；柱温：25℃；检测时间：20min；检测波长：315nm。
标准曲线的绘制：将对照品溶液稀释为系列浓度的对照品溶液，分别过微孔滤膜后进样测定。分别以对照品中类律草酮、伴律草酮、类蛇麻酮、伴蛇麻酮四类成分的浓度(μg/mL) 为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，分别绘制标准曲线。类律草酮标准曲线：A＝16174C-29314，r＝1.0000，线性范围：12.94～647.18μg/mL。伴律草酮标准曲线： A＝15407C-40824，r＝1.0000，线性范围：28.68～1434.25μg/mL。类蛇麻酮标准曲线： A＝12482C-5643.8，r＝1.0000，线性范围：12.53～626.67μg/mL。伴蛇麻酮标准曲线： A＝13501C-1839，r＝1.0000，线性范围：10.11～505.44μg/mL。线性关系均良好。
2.3正交试验优选提取工艺
采用正交实验设计法，设定萃取压力(A)、萃取温度(B)、CO2流速(C)、萃取时间(D)4 个实验因素，每个因素设计3个水平，实验因素水平设计见表1，选用L9(34)正交试验表进行超临界CO2法提取实验。
表1实验因素水平表
2.3.2正交结果与讨论
正交试验方案及结果见表2，其中α-酸为类律草酮和伴律草酮，β-酸为类蛇麻酮和伴蛇麻酮。
表2正交试验方案及结果
注：(1)α-酸含量评分＝α-酸含量/最大α-酸含量×0.3×100；β-酸含量评分＝β-酸含量/ 最大β-酸含量×0.2×100；浸膏重量评分＝浸膏重量/最大浸膏重量×0.5×100。综合评分＝α-酸含量评分+β-酸含量评分+浸膏重量评分。
(2)K1指A、B、C、D各组中方法1所得综合评分的均值；K2指A、B、C、D各组中方法2所得综合评分的均值；K3指A、B、C、D各组中方法3所得综合评分的均值； R指各组中K1、K2、K3的极差。
2.3.3方差分析
表3方差分析结果
F1-0.05(2.2)＝19.00；F1-0.10(2.2)＝9.00
以各指标的最大值为参照，对数据进行归一化处理，再结合各指标成分不同的权重系数进行综合评分。根据各指标成分在工艺中的主次地位，其中浸膏的量为该工艺最重要因素，权重系数设为0.5，根据啤酒花中树脂类成分的含量及药理作用，将α-酸含量权重系数设为0.3，β-酸含量权重系数设为0.2，根据这3个指标不同的加权系数，求出综合评分，并进行方差分析，见表2和表3。
由表3极差值分析，可见各因素作用的主次为A＝D>C>B，从表3的方差分析可见因素A、D、C对指标有显著影响，因素B对指标无显著影响；从表2可得最佳回流提取工艺为A3B3C1D3，即萃取压力25Mpa，萃取温度50℃，CO2流速为15L/h，萃取时间1.5h。
2.4重复性结果与讨论
按照最佳提取工艺提取实验3次，结果如表4所示。
表4重复性实验结果
由表4可知，采用上述优选的萃取条件，萃取综合评分高达1.23，可达到较佳的提取效果。
实施例2(树脂类成分提取物对成骨细胞及维甲酸致骨质疏松大鼠的作用)
1.材料：新生24h Wistar大鼠和3月龄雌性SD大鼠(体重180～220g，许可证号：SCXK(沪)2013-0016)均购自上海斯莱克实验动物有限公司；维甲酸(批号：20171127，纯度≥98％)，购自北京贝丽莱斯生物化学有限公司；雌二醇(批号：B24215，纯度≥98％)，购自上海源叶生物科技有限公司。啤酒花树脂类提取物系实施例1重复实验1制备，以 DMSO配制成浓度为2×10-3g/mL溶液供细胞培养试验用，以0.5％CMC-Na(羧甲基纤维素钠)配制成浓度为0.2g/mL混悬液供大鼠动物试验用。
2.实验方法
2.1原代成骨细胞的分离与培养
取新生24h Wistar大鼠，脱颈椎处死，用75％乙醇溶液浸泡消毒5min，在无菌条件下剪取颅盖骨。用含1％双抗的PBS缓冲液冲洗骨片3次，后加入0.25％胰蛋白酶消化30min；30min后用含1mg/mL I型胶原酶的α-MEM空白培养基，置于细胞培养箱消化2h；1000r/min离心10min并弃去上清液，此时底部沉淀的细胞即为原代成骨细胞。用含10％胎牛血清的α-MEM培养液培养细胞，用胰蛋白酶进行消化传代。成骨细胞培养至3-4代时可用于相关指标检测。
2.2成骨细胞增殖检测
将3代成骨细胞按照密度1×104个/mL接种于96孔板，每孔100μL。24h后弃去培养液，更换含药培养液100μL。将大鼠成骨细胞分为空白对照组、标准酒花浸膏高剂量组、啤酒花水提物高剂量组、啤酒花树脂类提取物高、中、低剂量组，每组设置3个复孔。给药24h 后，对7组孔板均加入20μL MTT(噻唑蓝)溶液，于培养箱中继续培养4h，弃去培养液，加入200μLDMSO，摇床振荡10min后，用酶标仪在540nm处检测吸光度值。
2.3维甲酸致大鼠骨质疏松症模型的分组及给药
所有大鼠在温度20～25℃，相对湿度50％～65％，通风良好条件下饲养。适应性的饲养 3d后，将大鼠按照体重随机分为7组，每组8只，包括：
A正常对照组
B维甲酸模型组
C雌二醇组(0.2mg/kg/d)
D标准酒花浸膏(以药材计1.5g/kg/d)
E啤酒花水提物高剂量组(以药材计1.5g/kg/d)
F啤酒花树脂类提取物低剂量组(以药材计0.5g/kg/d)
G啤酒花树脂类提取物高剂量组(以药材计1.5g/kg/d)
除正常对照组外，其余6组均每日用70mg/kg维甲酸灌胃给药，正常对照组每日用等量 0.5％CMC-Na灌胃给药，连续灌胃2周进行造模。造模结束后，正常对照组和维甲酸模型组每日用等量0.5％CMC-Na(此为空白溶剂)灌胃给药，其余各组大鼠按方案灌胃给药，连续给药4周。实验过程中，每周对大鼠称重一次，给药量按体重进行调整。
末次给药后，将大鼠禁食不禁水12h。用10％水合氯醛溶液腹腔注射麻醉后，腹主动脉取血，4℃下以12000rpm/min离心10min制备血清；脱颈处死，取右侧后肢股骨，用组织固定液浸泡2周进行固定。
2.4血清生化指标检测
按照试剂盒说明书步骤测定血清中碱性磷酸酶(AKP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP) 及骨钙素(BGP)水平。
3.实验结果
3.1啤酒花树脂类成分对成骨细胞增殖的影响
表5 MTT(噻唑蓝)实验结果与讨论
注：与对照组相比**P<0.01，*P<0.05。
如表5所示，与对照组相比，啤酒花树脂类提取物低、中、高剂量组均可增加大鼠成骨细胞的增殖，促进骨形成，并且中、高剂量效果优于高剂量的标准酒花浸膏和啤酒花水提物。
3.2啤酒花树脂类成分对维甲酸大鼠骨代谢指标的影响
表6 AKP、TRACP、BGP含量测定结果
注：与正常组比，##P<0.01，#P<0.05；与对照组相比**P<0.01，*P<0.05。
由表6可知，啤酒花树脂类提取物的低、高剂量可以显著升高维甲酸大鼠血清中的AKP (P＜0.05)和BGP含量(P＜0.01)，同时显著降低TRACP含量(P＜0.01)，并且其效果优于高剂量的标准酒花浸膏和啤酒花水提物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.啤酒花中树脂类成分提取物，其特征在于，其由啤酒花经超临界CO2萃取法提取得到，其中α-酸和β-酸的质量比为5～14:1，其中α-酸为类律草酮和伴律草酮，β-酸为类蛇麻酮和伴蛇麻酮。
2.如权利要求1所述的啤酒花中树脂类成分提取物，其特征在于，其中α-酸含量为13.5～18％，β-酸的含量为1.3～2.6％。
3.如权利要求1所述的啤酒花中树脂类成分提取物，其特征在于，其萃取条件为：萃取压力23～27Mpa，萃取温度48～52℃，CO2流速为13～17L/h，萃取时间1.5～2h。
4.如权利要求3所述的啤酒花中树脂类成分提取物，其特征在于，其萃取条件为：萃取压力25Mpa，萃取温度50℃，CO2流速为15L/h，萃取时间1.5h。
5.如权利要求1所述的啤酒花中树脂类成分提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤：
a)采用正交实验设计法优选超临界CO2萃取条件
设定萃取压力、萃取温度、CO2流速、萃取时间4个实验因素，每个因素设计3个水平进行正交提取试验，其中萃取压力设计范围为15～30Mpa，萃取温度范围为30～60℃，CO2流速为10～25L/h，萃取时间：0.5～3h；
根据正交试验的结果，以浸膏的量、浸膏中α-酸含量和浸膏中β-酸含量作为指标，以各指标的最大值为参照，对数据进行归一化处理，设定浸膏的量权重系数设为0.4～0.6，α-酸含量权重系数设为0.25～0.35，β-酸含量权重系数设为0.15～0.25，进行分别评分和综合评分，并进行方差分析，具体的：
α-酸含量评分＝α-酸含量/最大α-酸含量×(0.25～0.35)×100，
β-酸含量评分＝β-酸含量/最大β-酸含量×(0.15～0.25)×100，
浸膏重量评分＝浸膏重量/最大浸膏重量×(0.4～0.6)×100，
综合评分＝α-酸含量评分+β-酸含量评分+浸膏重量评分；
根据综合评分和方差分析确定最优的萃取条件进行；
b)采用最优的萃取条件对啤酒花进行超临界CO2萃取。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤a)中，具体实验因素水平设计如下：
萃取压力：15Mpa、20Mpa、25Mpa，
萃取温度：40℃、45℃、50℃，
CO2流速：15L/h、18L/h、21L/h，
萃取时间：0.5h、1.0h、1.5h；
评分时，设定浸膏的量权重系数设为0.5，α-酸含量权重系数设为0.3，β-酸含量权重系数设为0.2；
确定最优的萃取条件为：萃取压力25Mpa，萃取温度50℃，CO2流速为15L/h，萃取时间1.5h。
7.如权利要求1～4任一项所述的啤酒花中树脂类成分提取物在制备抗骨质疏松症药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的啤酒花树脂类成分提取物辅以药学上可接受的辅料载体，所述的辅料载体是稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂和甜味剂中一种或多种。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的抗骨质疏松症药物是注射剂、片剂、粉剂、粒剂、胶囊、水悬浮剂或油悬浮剂。
10.如权利要求1～4任一项所述的啤酒花中树脂类成分提取物在防治骨质疏松症的食品中的应用。
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