CN109406591A - 测定方法和测定装置 - Google Patents

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Abstract

测定方法和测定装置。能够进行精度较高的试样中的测定对象成分的测定。测定方法包括如下处理，将设置有含有酵素的试剂的第1电极、未设置试剂的第2电极和第3电极、以及与第1～第3电极不同的第4电极中的第1电极用作作用极，将第4电极用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给流路内的试样并测定第1电响应值，将第2电极和第3电极用作作用极和对极，将具有高于第1值的第2值的直流的第2信号连续对流路内的所述试样施加规定时间，测定表示由于试样中的水分的电解而产生的电荷量的第2电响应值，根据第2电响应值来校正根据第1电响应值得到的值。

Description

测定方法和测定装置
技术领域
本发明涉及测定方法和测定装置。
背景技术
以往，存在如下技术，测定作为生物学试样的一例的血液中的葡萄糖的浓度的值(葡萄糖值)和血细胞比容值值(Hct值)，根据Hct值来校正葡萄糖值。作为葡萄糖值和Hct值的测定方法，例如具有如下方法，使用设置有介体的作用极和对极来测定Hct值，并且使用设置有试剂的作用极和对极来测定葡萄糖值(例如，参照专利文献1)。
或者还具有如下方法，对均设有试剂的作用极和对极通过交流电压的施加来测定Hct值，并且通过直流电压的施加来测定葡萄糖值(例如，参照专利文献2)。而且还具有如下方法，在葡萄糖值的测定和Hct值的测定中使用共同的作用极，通过直流电压的施加来进行两个测定(例如，参照专利文献3)。或者还具有如下方法，测定相对于向可接触试样的第1电极对输入的第1信号的第1电响应，将相对于向所述可接触试样的第2电极对输入的、从第1电平向第2电平发生值的变化，并在此后的一定时间内保持所述第2电平的第2信号的第2电响应测定为相对于所述第2信号的所述变化的响应信号的峰值，根据所述响应信号的峰值，校正表示根据第1电响应得到的所述试样的测定对象成分的量的值(例如，参照专利文献4)。
在先技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第4611208号公报
专利文献2：日本特表2016-510124号公报
专利文献3：日本特开2005-147990号公报
专利文献4：日本特开2014-232102号公报
发明内容
发明要解决的课题
本发明的目的在于，使用新的手法来提供能够进行精度较高的试样中的测定对象成分的测定的测定方法和测定装置。
用于解决课题的手段
本发明的一个方面是使用在流路内配置有多个电极的分析用具，测定生物学试样中包含的测定对象成分的测定方法。该测定方法的特征在于，包括如下步骤：将所述多个电极中包含的第1电极、第2电极、第3电极以及第4电极中的所述第1电极用作作用极，并将所述第4电极用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给流路内的试样，其中，在该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和第3电极均未设置所述试剂，该第4电极与所述第1电极、所述第2电极和所述第3电极不同；测定所述试样对于所述第1信号的第1电响应值；将所述第2电极和所述第3电极用作作用极和对极，将具有高于所述第1值的第2值的直流的第2信号施加给所述流路内的所述试样；在规定时间内测定表示由于所述试样中的水分的电解而产生的电荷量的试样对于所述第2信号的第2电响应值；以及根据所述第2电响应值，校正由所述第1电响应值得到的值。
本发明的另一个方面是使用在流路内配置有多个电极的分析用具，测定生物学试样中包含的测定对象成分的测定方法。该测定方法的特征在于，包括如下步骤：将所述多个电极中包含的第1电极、第2电极和第3电极中的所述第1电极用作作用极，并将所述第2电极和第3电极用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给流路内的试样，其中，在该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和第3电极均未设置所述试剂；测定所述试样对于所述第1信号的第1电响应值；将所述第2电极和所述第3电极用作作用极和对极，将具有高于所述第1值的第2值的直流的第2信号对所述流路内的所述试样连续施加规定时间；在规定时间内测定表示由于所述试样中的水分的电解而产生的电荷量的试样对于所述第2信号的第2电响应值；以及根据所述第2电响应值，校正由所述第1电响应值得到的值。
本发明的另一个方面是具备与上述测定方法同样的特征的测定装置。
根据本发明，能够进行精度较高的试样中的测定对象成分的测定。
附图说明
图1的(A)是实施方式的分析用具(具有4个电极的生物传感器)的俯视图，图1的(B)是图1的(A)所示的生物传感器的侧视图。
图2的(A)是实施方式的分析用具(具有3个电极的生物传感器)的俯视图，图2的(B)是图2的(A)所示的生物传感器的侧视图。
图3的(A)和图3的(B)是实施方式的测定装置的结构例。
图4是表示使用实施方式的生物传感器和测定装置的测定方法的示例的流程图。
图5的(A)示出葡萄糖值为一定的情况下的第2电响应值与Hct值的对应关系(Hct校正曲线的线性)，图5的(B)示出葡萄糖值为一定的情况下的第2电响应值的时间的变化(时程)，图5的(C)示出葡萄糖值为一定的情况下的第1电响应值的时间的变化。
图6的(A)示出Hct值为一定的情况下的第2电响应值的时间的变化，图6的(B)示出Hct值为一定的情况下的第1电响应值的时间的变化。
标号说明
1：绝缘性基板，2：隔块，3：罩，4～7、12～14：电极，10A、10B：生物传感器，20、20A：测定装置，21：第1测定部，22：第2测定部，23：控制部，24：存储部，25：输出部，31：开关，32a、32b、32c、32d：连接器。
具体实施方式
以下，对实施方式的测定方法和测定装置进行说明。在实施方式中，说明使用在流路内配置有多个电极的分析用具对生物学试样中包含的测定对象成分进行测定的测定方法。测定方法包括第1测定方法和第2测定方法。
第1测定方法的特征在于，包括如下步骤：将多个电极中包含的第1电极、第2电极、第3电极以及第4电极中的第1电极用作作用极，并将第4电极用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给流路内的试样，其中，该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和第3电极未设置试剂，该第4电极与第1电极、第2电极和第3电极不同；测定试样对于第1信号的第1电响应值；将多个电极中的第2电极和第3电极用作作用极和对极，将具有高于第1值的第2值的直流的第2信号对流路内的试样连续施加规定时间；在所述规定时间内测定表示由于试样中的水分的电解而产生的电荷量的试样对于第2信号的第2电响应值；以及根据第2电响应值，校正由第1电响应值得到的值。
第2测定方法的特征在于，包括如下步骤：将多个电极中包含的第1电极、第2电极和第3电极中的第1电极用作作用极，将第2电极和第3电极中的一方用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给流路内的试样，其中，该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和第3电极未设置试剂；测定试样对于第1信号的第1电响应值；将第2电极和第3电极用作作用极和对极，将具有高于第1值的第2值的直流的第2信号对流路内的试样连续施加规定时间；在所述规定时间内测定表示由于试样中的水分的电解而产生的电荷量的试样对于第2信号的第2电响应值；以及根据第2电响应值，校正由第1电响应值得到的值的步骤。在第1和第2测定方法中，被校正的值作为试样中的测定对象成分的测定值进行处理。
用于第1和第2测定方法的分析用具例如是生物传感器。生物学试样是血液、间质液、尿等的液体试样。试样中的测定对象成分是葡萄糖值(血糖值)、乳糖值(乳酸值)等。试剂可以包含酵素和介体。
在第1和第2测定方法中，试样优选是血液。此外，测定对象成分优选是葡萄糖。试样的第2电响应值优选是表示血细胞比容值的值。此外，试样的第1电响应值优选是表示由表示血细胞比容的值校正前的葡萄糖的值。
在第1和第2测定方法中，在不同的时机进行第1电响应值的测定和第2电响应值的测定。测定的顺序可任意进行。在第1和第2测定方法中，具有第1值的直流的第1信号和具有不同于第1值的第2值的直流的第2信号例如是方向不根据时间发生变化的电压、即直流(DC)电压。第1值和第2值根据电极材料、酵素、介体的种类不同而不同。其中，作为绝对条件，第1值＜第2值(第1值小于第2值)。
关于对于电极的施加电压，考虑到水的电解引起的电压，DC1.0V左右是下限。此外，只要是1.0V以上则成为不会受到试样中的测定对象成分的影响的响应电流值。另一方面，随着施加电压的上升而会在试样中产生气泡，电响应值成为受到气泡的影响的值，因此施加电压的上限为不产生气泡的7.0V左右。另外，例如在对电极材料使用钌(使用钌电极)的情况下，优选为下限是1.5V、上限是5.0V的施加电压。在对电极材料使用钌的情况下，作为第1信号的DC电压值(第1值)例如是0.5V左右，作为第2信号的DC电压值(第2值)例如是2.5V左右。其中，如上述那样，第2值的上限为不产生气泡的7V左右。在本发明中，用于第2信号的DC电压的第2值是1V以上7V以下的值，更优选在1.8或2V以上5V以下，例如是2.5V。进行第2信号的连续施加的规定时间优选是2～5秒，更优选是2.5～4秒，例如是3秒。作为第1信号的DC电压的第1值是小于第2值的值，优选是50mV～1.0V，更优选是100mV～750mV，例如是500mV。另外，以上为钌电极的情况，在使用不同于钌的材料的电极的其进行，适当的施加电压为不同的范围。此外，根据酵素和基质、即盐的种类而言，适当的施加电压也可能成为不同的范围。
在第1和第2测定方法中，进行规定时间以上的对于试样的规定值以上的第2信号的施加，进行从开始该施加起持续了规定时间的时刻的第2电响应值的测定。该处理基于以下的测定原理。对分析用具的流路内的试样(第2电响应值的测定用的电极)施加第2值的第2信号(例如DC电压)。这种情况下，从开始施加起1秒左右的期间的第2电响应值表示出依赖于试样中的测定对象成分的浓度(例如葡萄糖值)的衰减曲线。相对于此，若从开始施加起经过了2秒左右，则第2电响应值无论测定对象成分的浓度如何，都示出对应于试样中的Hct值的一定的值。这种现象由于以下情况而发生。
即，通过第2信号的施加，测定对象成分→试剂→电极的电荷移动不断推进，并且通过试样中的水分(H2O)的电解而发生H2O→电极的电荷移动。其中，电荷从H2O向电极移动的力大于电荷从测定对象成分通过试剂向电极移动的力。另外，在试剂包含酵素和介体的情况下，电荷移动按照测定对象成分→试剂(酵素→介体)→电极而推进。
因此，在从开始施加第2信号起某程度的期间(1秒左右)内，可观察到依赖于来自测定对象成分的电荷移动的第2电响应值，而在经过了规定时间(2秒左右)以后，从H2O向电极的电荷移动压制过从试剂向电极的电荷移动，试剂在具备电荷的情况下饱和，不再产生从试剂向电极的电荷移动。即，在从开始施加第2信号起经过了2秒左右(规定时间)后，对于第2信号的施加的第2电响应值实际成为表示由于H2O的电解而产生的电荷量的值。换言之，第2电响应值是通过连续进行规定时间的第2信号的施加而得到的、表示由于试样中的水分的电解而产生的电荷量的值。另外，在试剂是包含酵素和介体的试剂的情况下，不产生从试剂向电极的电荷移动指的是不产生从酵素向介体的电荷移动、不产生从介体向电极的电荷移动、以及这双方中的任意一方。
这里，血细胞比容是血液中的有形成分(血球)的体积，因此Hct值高表示被电解的H2O(血浆)的量少。因此，Hct值越高，则持续了规定时间施加的时刻的第2电响应值变小。换言之，施加持续了规定时间的时刻的第2电响应值与Hct值以负函数成正比。由此，若事先制作出第2电响应值与Hct值的校正曲线(表示相关关系的曲线图等)，则根据施加持续了规定时间的时刻的第2电响应值能够计算出Hct值。这种第2电响应值和Hct值可用于测定对象成分的校正。
根据上述内容，可理解以下内容。即，通过对从开始施加第2信号起持续了规定时间的时刻的第2电响应值进行测定，可得到比经过规定时间前的第2电响应值更为正确地示出Hct值的第2电响应值。即，能够进行精度高的Hct测定的结果是，可提高测定对象成分的校正的精度，能够进行精度提高的测定对象成分的测定。此外，在施加持续了规定时间的时刻，基于第2信号的施加的电气化学反应比经过规定时间前稳定，因此，相比于经过规定时间前的第2电响应值所求出的Hct值而言，根据该第2电响应值可得到精度更高的Hct值。
此外，用于第1和第2测定方法的分析用具包括多个电极。在第1测定方法中，多个电极包括设置有含有酵素的试剂的第1电极、未设置试剂的第2电极和第3电极、以及与第1电极、第2电极和第3电极不同的第4电极。例如通过将固态的试剂固定在电极上而将试剂设置在电极上。
在第1测定方法的第1电响应值的测定中，将第1电极用作作用极，并将第4电极用作对极。在第2电响应值的测定中，将第2电极和第3电极用作作用极和对极。这样，作为在第2电响应的测定中使用的作用极和对极，使用未设置试剂的电极。第4电极既可以设置试剂也可以不设置试剂。其中，在设置有试剂的情况下，第1电响应值的精度提高。
在第2测定方法中，多个电极至少包括设置有含有酵素的试剂的第1电极、以及未设置试剂的第2电极和第3电极。在第2测定方法的第1电响应值的测定中，第1电极被用作作用极，第2电极和第3电极中的任意一方被用作对极。与此相对，在第2电响应值的测定中，第2电极和第3电极被用作作用极和对极。这样，在第2测定方法中，作为在第2电响应的测定中使用的作用极和对极，使用未设置试剂的电极。
在第1和第2测定方法中，在第2电响应值的测定时，将未设置试剂的电极用作作用极和对极。由此，可得到以下的优点。即，在分析用具的制造步骤中，例如将液体的试剂滴落在电极上或印刷膏状的试剂并使其干燥，从而在电极上固定试剂。此时，试剂的固化状况在分析用具的个体之间存在差异，存在第2电响应值在个体之间产生差异的可能性。在第1测定方法和第2测定方法中，对于作用极和对极使用未设置试剂的电极。由此，可抑制第2电响应值的个体间的差异。
另外，在第2测定方法中，优选将第2电极和第3电极中的一方用作第2电响应值的测定中的作用极，将另一方用作在第1电响应值的测定和第2电响应值的测定的双方中共同的对极。其中，在第2电响应值的测定中用作作用极的第2电极和第3电极中的一方可以在第1电响应值的测定时被用作对极。
此外，在第1和第2测定方法中，在第1电响应值的测定和第2电响应值的测定中被用作作用极和对极的电极可以是2以上。此外，多个电极可以包含用作参照极的电极、以及在第1电响应值和第2电响应值的测定以外的测定项目的测定中使用的电极。
这里，“电极上设置有试剂”指的是在电极上接触设置有试剂的状态、固定有试剂的状态或放置有试剂的状态等。此外，虽然在作用极和对极上未设置试剂，然而在作用极与对极之间设置有试剂的情况下也属于“在第1电响应值的测定中使用的两个电极”。“在作用极与对极之间设置有试剂”指的是在作用极与对极之间的基板上接触设置有试剂的状态。“在作用极与对极之间设置有试剂”的情况还包含在形成作用极与对极之间的流路的隔块上和罩上接触设置有试剂的状态。例如是试剂的设置位置不在基板上，然而在俯视观察流路时试剂位于作用极与对极之间的状态。换言之，“在作用极与对极之间设置有试剂”指的是，设置为通过被导入流路内的试样的影响，所设置的试剂能够扩散(移动)到作用极附近的测定环境中。
而且，关于“在第2电响应值的测定中使用的两个电极”，在两个电极的双方未设置试剂。此外，关于在第2电响应值的测定中使用的两个电极(例如，作用极和对极)，在作用极和对极上未设置试剂，然而在作用极与对极之间设置有试剂的情况下的作用极和对极不属于“在第2电响应值的测定中使用的两个电极”。即，在第2电响应值的测定中，不仅需要作用极和对极上不设置试剂，还需要在第2电响应值的整个测定环境内都不设置试剂。
〔实施方式〕
以下，参照附图对本发明的实施方式的液体的收纳容器进行说明。以下说明的实施方式的结构仅为示例，本发明不限于实施方式的结构。
在以下的实施方式中，作为测定方法和测定装置的一例，说明使用作为分析用具的生物传感器，进行对作为试样中的测定对象成分的血液中的葡萄糖值的测定，根据血液中的Hct值(第2电响应值)来校正葡萄糖值的测定方法和测定装置。
＜生物传感器的结构＞
图1的(A)、图1的(B)、图2的(A)和图2的(B)表示实施方式的生物传感器的结构例。图1的(A)是实施方式的分析用具(具有4个电极的生物传感器)的俯视图，图1的(B)是图1的(A)所示的生物传感器的侧视图。图2的(A)是实施方式的分析用具(具有3个电极的生物传感器)的俯视图，图2的(B)是图2的(A)所示的生物传感器的侧视图。
生物传感器10A应用于第1测定方法。在图1的(A)和图1的(B)中，生物传感器10A(以下称为“传感器10A”)具有包括一端10a和另一端10b的长度方向(X方向)和宽度方向(Y方向)。传感器10A通过将绝缘性基板1(以下称为“基板1”)、隔块2和罩3在高度方向(Z方向)上层叠并接合而形成。
基板1例如使用合成树脂(塑料)。作为合成树脂，例如可使用聚醚酰亚胺(PEI)、聚对苯二甲酸乙二酯(PET)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)、聚乙烯(PE)、聚苯乙烯(PS)、聚甲基丙烯酸酯(PMMA)、聚丙烯(PP)、聚酰亚胺树脂、丙烯树脂、环氧树脂、玻璃环氧那样的各种树脂。另外，基板1还可以使用合成树脂以外的绝缘性材料。绝缘性材料除了合成树脂之外，还包括纸、玻璃、陶瓷、生分解性材料等。隔块2和罩3可使用与基板1相同的材料。
在基板1的上表面，作为多个电极的一例而设置有电极4、电极5、电极6和电极7。电极4、电极5、电极6和电极7分别为具有在传感器10A的宽度方向上延伸的部分和在长度方向上延伸的部分的钩状，在长度方向延伸的部分构成引线部4a、引线部5a、引线部6a和引线部7a。位于一端10a侧的引线部4a、引线部5a、引线部6a和引线部7a被隔块2和罩3覆盖，用于与血糖值计20(图3)的连接器的电连接。
电极4、电极5、电极6和电极7分别例如使用金(Au)、铂(Pt)、银(Ag)、钯、钌等的金属材料或碳黑等碳材料而形成。例如，作为电极4、电极5、电极6和电极7，分别可以通过对金属材料利用物理蒸镀(PVD、例如溅射)，或化学蒸镀(CVD)而成膜，由此形成为具备期望厚度的金属层。或者，作为电极4、电极5、电极6和电极7，还可以分别通过对含碳材料的油墨进行丝网印刷在基板1上印刷而形成。
隔块2具有向另一端10b侧开口的矩形的切口部(从另一端10b向一端10a侧凹陷的凹部)。通过基板1、隔块2和罩3的层叠，在传感器10A的另一端10b侧形成具有开口9a的空间，该空间由隔块2的切口部的厚度的面和通过切口部而分别露出的(未被与隔块2的接合而覆盖的)、设置有电极的基板1的上表面和罩3的下表面形成。该空间被用作试样的流路9。在罩3上形成有空气孔11。关于流路9，浸渍在开口9a的试样通过毛细管现象而被引入(导入)流路9内，并且形成为向空气孔11移动(在流路9内流动)。电极4、电极5、电极6和电极7的一部分在流路9内露出。在电极6和电极7的上设置(固定)有试剂8。与此相对，电极4和电极5未设置试剂。
试剂8包含酵素和基质。换言之，可认为含有盐。试剂8有时还包含介体。可根据试样的类别和测定对象成分来适当选择酵素。测定对象成分是血液或间质液中的葡萄糖的情况下，可使用葡萄糖氧化酶(GOD)或葡萄糖脱氢酶(GDH)。介体例如是氰化物、钌配合物、p-苯醌、p-苯醌衍生物、吩嗪硫酸甲酯、亚甲蓝、二茂铁、二茂铁衍生物等。在它们之中，优选氰化物或钌配合物，更优选氰化钾或钌化合物[Ru(NH3)6]Cl3。
电极6和电极7被用作在葡萄糖测定中使用的电极对。作为一例，电极6用作作用极，电极7用作对极。然而也可以反之。电极6和电极7是第1测定方法中的第1电极和第4电极的一例。其中，在电极6和电极7上设置有试剂的情况下，也可以将电极6用作对极，将电极7用作作用极。此外，在葡萄糖值的测定时用作对极的电极(电极6和电极7的一方)上可不设置试剂。
电极4和电极5作为在Hct值的测定中使用的电极对而被使用。作为一例，电极4被用作作用极，电极5被用作对极。然而也可以反之。这样，在图1(A)和图1(B)所示的例子中，在葡萄糖值的测定和Hct值的测定中使用不同的电极对，在Hct值的测定时使用不存在试剂的电极对。在电极4和电极5(Hct值测定的对极)上也不设置盐成分和介体。
图2的(A)和图2的(B)所示的生物传感器10B(以下称为“传感器10B”)用于第2测定方法。传感器10B具有包括用以替代传感器10A中的电极4、电极5、电极6和电极7的电极12、电极13和电极14的3电极结构。电极14上固定有试剂8，电极12和电极13上不设置试剂，也不设置盐成分和介体。
在葡萄糖值的测定时，电极14被用作作用极，并且电极13被用作对极。与此相对，在Hct值的测定时，电极12被用作作用极且电极13被用作对极。电极14相当于第2测定方法中的第1电极，电极12和电极13相当于第2测定方法中的第2电极和第3电极。其中，电极12在葡萄糖值的测定时可用作对极。
＜测定装置(血糖值计)的结构＞
图3的(A)是表示作为测定装置的一例的血糖值计20的结构例的框图。图3的(A)中，血糖值计20例如可连接传感器10A。血糖值计20使用所连接的传感器10A来进行葡萄糖值的测定和应用Hct值的葡萄糖值的校正。
血糖值计20具有第1测定部21、第2测定部22、开关(SW)31、控制部23、存储部24和输出部25。开关31通过多个连接器(图3的(A)与连接器32a、连接器32b、连接器32c和连接器32d)电连接。连接器32a与传感器10A的引线部4a(电极4)连接，连接器32b与传感器10A的引线部5a(电极5)连接。连接器32c与传感器10A的引线部6a(电极6)连接，连接器32d与传感器10A的引线部7a(电极7)连接。
开关31是对连接器32a、连接器32b、连接器32c、连接器32d与电极4、电极5、电极6和电极7的电连接和该切断状态进行切换的开关。控制部23是执行存储在存储部24中的程序的处理器(例如中央处理器、Central Processing Unit(CPU))。存储部24具有包括RAM(随机存取存储器、Random Access Memory)等的主存储装置、ROM(只读存储器、Read OnlyMemory)和硬盘等的辅助存储装置的存储器。存储部24存储由控制部23执行的程序以及在程序执行时使用的数据等。输出部25包括打印机和显示器等的输出装置、信号连接器和通信接口等的通信设备。
控制部23在葡萄糖值的测定时控制开关31，使葡萄糖值的测定用的作用极(电极6)和对极(电极7)成为与血糖值计20电连接的状态，使电极4和电极5处于切断状态。第1测定部21由电路、处理器和存储器构成，进行以下的动作。即，第1测定部21根据来自控制部23的指示，向电极6与电极7之间开始施加作为第1信号的DC电压，在连续进行该施加规定时间后作为对该DC电压的响应电流值而测定与葡萄糖值对应的响应电流值(针对第1信号的第1电响应值)。此时，第1测定部21例如将连续施加第1信号的规定时间的终点(端点)的响应电流值测定为第1电响应值。其中，得到第1电响应值的时刻(时机)也可以是施加第1信号的终点以外的第1信号的施加中的规定时刻。
控制部23在Hct值的测定时控制开关31，使Hct值的测定用的作用极(电极4)和对极(电极5)成为与血糖值计20电连接的状态，使电极6和电极7处于切断状态。第2测定部22由电路、处理器和存储器构成，进行以下的动作。即，第2测定部22根据来自控制部23的指示，向电极4与电极5之间施加相当于第2信号的DC电压。第2测定部22从开始施加DC电压起连续进行规定时间的施加，将作为表示由于试样中的水分的电解而产生的电荷量的状态的响应电流值测定为第2电响应值。其中，得到第2电响应值的时刻(时机)也可以是施加第2信号的终点以外的第2信号的施加中的规定时刻。
存储部24存储有求得与由第1测定部21测定的第1电响应值对应的葡萄糖值的校正曲线数据。控制部23使用校正曲线图将第1电响应值换算为葡萄糖值，由此计算葡萄糖值。葡萄糖值被存储于存储部24，或从输出部25输出(显示等)。另外，葡萄糖值用的校准电数据可以是校正曲线图。
此外，存储部24存储有根据由第2测定部22测定的第2电响应的值求出Hct值的校正曲线数据。控制部23使用校正曲线数据将第2电响应值换算为Hct值，从而计算Hct值。Hct值被存储于存储部24，或从输出部25输出(显示等)。另外，Hct值用的校正曲线数据可以是校正曲线图。
此外，控制部23使用从第2测定部22得到的第2电响应值或根据第2电响应值换算的Hct值来进行校正葡萄糖值的处理(葡萄糖值的血细胞比容校正)。例如，存储部24存储有表示第2电气响应值与校正量的对应关系的校正曲线数据和校正曲线图。控制部23使用校正曲线数据和校正曲线图来求出与第2电响应值对应的校正量，进行校正葡萄糖值的处理，计算校正后的葡萄糖值。校正后的葡萄糖值被存储于存储部24，或从输出部25输出(显示等)。另外，在葡萄糖值的校正中使用第2电响应值的情况下，并不一定需要从第2电响应值换算为Hct值的结构。此外，控制部23可以使用温度校正用的校正曲线数据和校正曲线图来进行第2电响应值的温度校正。
图3的(B)表示具备与3电极结构的传感器10B对应的结构的血糖值计20A。这种情况下，可省略连接器32d，连接器32a与引线部12a(电极12)连接，连接器32b与引线部13a(电极13)连接，连接器32c与引线部14a(电极14)连接。开关31在葡萄糖值的测定时，例如通过由控制部23的控制而使得第1测定部21与电极14和电极13成为电连接的状态。
与此相对，开关31在Hct值的测定时，例如通过由控制部23的控制，使第2测定部22与电极12和电极13成为电连接的状态。这样，开关31对电极12～14与第1测定部21和第2测定部22的连接状态进行切换。
第1测定部21向作为作用极的电极14与作为对极的电极13之间施加作为第1信号的DC电压，测定第1电响应值。第2测定部22向作为作用极的电极12与作为对极的电极13之间施加作为第2信号的DC电压，进行对从开始该施加起持续了规定时间的时刻的第2电响应值的测定。除上述之外，血糖值计20A具有与血糖值计20同样的结构。
＜动作例＞
图4是表示血糖值计20的动作例的流程图。在图4所示的S01中，进行试样的浸渍。即，生物传感器(例如传感器10A)与血糖值计20连接，若使传感器10A的另一端10b的开口9a接触(浸渍)从被检验者采集的血液(试样)，则通过毛细管力而使得血液被引入流路9，充满在流路9内。
控制部23在浸渍前对电极施加电压，观测所施加的电压，对由于浸渍而血液与电极接触所导致的电压的变化进行检测，检测血液被导入流路9的情况。于是，控制部23开始Hct的测定(S02)。
在S02中，控制部23控制第2测定部22，将第2信号施加给血液。即，控制部23向第2测定部22发出指示，将相当于第2信号的DC电压(例如，2.5V)施加给Hct测定用的电极对(电极4和电极5)。
第2测定部22等待从开始施加相当于第2信号的DC电压起经过规定时间(2秒左右)，在持续了规定时间的时刻、即响应值成为表示(不包含试剂的电荷量的)由于血液中的水分的电解而产生的电荷量的状态的时刻的血液的第2电响应(S03)。例如，第2测定部22测定针对DC电压的响应信号，进行A/D转换并发送给控制部23。
控制部23若取得了针对第2信号的血液的第2电响应，则开始葡萄糖测定。即，控制部23进行对于血液的第1信号的施加(S04)。即，控制部23指示第1测定部21作为第1信号而将低于第2信号的DC电压施加给葡萄糖测定用的电极对(电极6和电极7)。第1测定部21进行基于指示的DC电压的施加。
第1测定部21测定针对第1信号的血液的第1电响应(S05)。例如，第1测定部21对作为第1信号施加的DC电压的响应电流进行测定。第1测定部21对响应电流进行A/D转换并发送给控制部23。
控制部23作为校正部进行动作，进行葡萄糖值的校正处理(S06)。即，控制部23使用在S05取得的第1电响应(响应电流)的值和校正曲线数据或校正曲线图，计算血液所含的校正对象成分的值(葡萄糖值)。此外，控制部23使用在S03取得的第2电响应值(或与第2电响应值对应的Hct值)，计算所校正的葡萄糖值。
控制部23输出所校正的葡萄糖值(S07)。即，控制部23将在S06校正的葡萄糖值存储在存储部24中，并显示在输出部25(显示器)上。控制部23使用输出部25，还可以通过有线或无线网络向其他的装置发送葡萄糖值。另外，在使用传感器10B和血糖值计20A的情况下，也进行与图4同样的处理。因此，示例处理的详细说明。另外，在图4所示的动作例中，在测定葡萄糖值之前进行Hct值的测定，然而也可以使顺序相反。
【实施例1】
作为实施例1，说明使用在Hct测定时使用的作用极和对极不设置试剂的生物传感器进行的葡萄糖值的测定和Hct值的测定。作为生物传感器，制作了具有传感器10A的结构，电极4～7是钌制的生物传感器。在电极6和电极7上设置了试剂8。试剂8的处方和制法如下所述。调制出含有聚乙烯醇(PVA146,000)0.8重量％、钌化合物[Ru(NH3)6]Cl3，1.6重量％、FAD-GDH2.7U，1-甲氧PMS0.3重量％、ACES缓冲液(pH6.5)的酵素液。分注该酵素液0.5μL，在25℃使其干燥，从而得到试剂8。
作为检体，使用将2个人的全部血液混合的溶液。作为试样(标本(specimen))，准备了葡萄糖值是336mg/dl，Hct值分别为0、20％、42％、70％的标本。此外，准备了Hct值是42％，葡萄糖值分别为0、67mg/dl、600mg/dl、800mg/dl的标本。各标本的个数n是n＝5。
评价方法通过以下的步骤来进行。
1.将标本的Hct值调整为42％。
2.对Hct值均被调整为42％的试样进行添加葡萄糖添加液的处理，制作出葡萄糖值分别为0mg/dl、67mg/dl、336mg/dl、600mg/dl，800mg/dl的标本群(称作标本群1)。
3.此外，进行葡萄糖值被调整为336mg/dl的标本的Hct调整，制作出Hct值分别为0％、20％、42％、70％的标本群(称作标本群2)。
4.Hct值和葡萄糖值的测定基于以下的条件来进行。
(1)第2电响应值(Hct值)的测定
对在将流路内被导入检体的传感器10A的Hct值的测定用电极(电极4和电极5)与血糖值计20连接起5秒后(5秒打开电路)开始施加Hct值的测定用的DC电压(2.5V：相当于具有第2值的第2信号)。在2.5秒之间持续进行DC电压的施加，测定从施加开始起2.5秒后(测定开始起3秒)的响应电流(第2电响应值)。
(2)第1电响应值(葡萄糖值)的测定
在从开始施加DC2.5V起2.5秒后停止施加，在7秒期间内处于打开电路的状态(非通电状态)。在此期间内进行DC电压的施加对象的电极对的切换(即，由电极4和电极5向电极6和电极7的切换)。在经过7秒时连续施加5秒期间的葡萄糖值测定用的DC电压(200mV：相当于具有第1值的第1信号)。在从测定开始起14秒的时刻测定响应电流(第1电响应值)。
表1示出葡萄糖值为一定(336mg/dl)，Hct值为0％、20％、42％、70％的各标本的第2电响应值的测定结果。第2电响应值的测定值是从使用上述(2)的测定方法所示的测定开始起经过了3秒的时刻(持续进行了2.5秒施加的时刻)的测定值(3秒值)。
【表1】
Hct线性(3秒值)
Hct.(％) 70 42 20 0
电流值 23.29 42.95 58.73 71.06
图5的(A)是表示根据表1的测定结果制作的Hct线性的曲线图，图5的(B)示出使用标本群2(葡萄糖值一定)而测定的第2电响应值的时间的变化，图5的(C)示出使用标本群2(葡萄糖值一定)而测定的第1电响应值的时间的变化。
图5的(A)的曲线图示出葡萄糖值一定的情况下的第2电响应值与Hct值的对应关系(Hct校正曲线的线性)。如图5的(A)所示，第2电响应值与Hct值的对应关系示出线性，可知能够良好地作为校正曲线使用。
虽然Hct值越大则响应值越小，然而从图5的(B)和图5的(C)可观测到大致同样的波形。如图5的(B)所示，无论Hct值的差异如何(在0～70％的范围内)，在从测定开始起经过2秒左右后的第2电响应值都大致一定，可知即使在作用极和对极的双方不设置试剂也能够得到稳定的第2电响应值。
此外，如图5的(C)所示，第1电响应值示出与Hct值对应的时间的变化，然而每当经过13秒都成为一定的值。由此，可知即使在Hct值的测定后接着进行葡萄糖值的测定，在规定时间经过后也能测定出成为一定的值的第1电响应值。
图6的(A)示出使用Hct值为一定(42％)的标本群1测定的第2电响应值的时间的变化，图6的(B)示出使用Hct值为一定(42％)的标本群1测定的第1电响应值的时间的变化。
如图6的(A)所示，观测到无论葡萄糖值的差异如何(在0～800mg/dl的范围内)，时间的变化都大致同样的第2电响应值的时间的变化。如图6的(B)所示，葡萄糖值越低则第1电响应值越低，然而每当经过13秒都能够观测到大致一定的第1电响应值。这样，可知即使在Hct值的测定后接着测定葡萄糖值，也能够进行良好的葡萄糖测定。可以适当组合在实施方式中说明的结构。

Claims (10)

1.一种测定方法，使用在流路内配置有多个电极的分析用具，对生物学试样中包含的测定对象成分进行测定，该测定方法的特征在于，包括如下步骤：
将所述多个电极中包含的第1电极、第2电极、第3电极以及第4电极中的所述第1电极用作作用极，并将所述第4电极用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给所述流路内的所述试样，其中，该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和该第3电极分别未设置所述试剂，该第4电极与所述第1电极、所述第2电极和所述第3电极不同；
测定所述试样对于所述第1信号的第1电响应值；
将所述第2电极和所述第3电极用作作用极和对极，将具有第2值的直流的第2信号对所述流路内的所述试样连续施加规定时间，其中，该第2值大于所述第1值；
在所述规定时间以内对表示由于所述试样中的水分的电解而产生的电荷量的所述试样对于所述第2信号的第2电响应值进行测定；以及
根据所述第2电响应值，校正由所述第1电响应值得到的值。
2.一种测定方法，使用在流路内配置有多个电极的分析用具，对生物学试样中包含的测定对象成分进行测定，该测定方法的特征在于，包括如下步骤：
将所述多个电极中包含的第1电极、第2电极和第3电极中的所述第1电极用作作用极，并将所述第2电极和所述第3电极中的一方用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给所述流路内的所述试样，其中，该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和该第3电极未设置所述试剂；
测定所述试样对于所述第1信号的第1电响应值；
将所述第2电极和所述第3电极用作作用极和对极，将具有第2值的直流的第2信号对所述流路内的所述试样连续施加规定时间，其中，该第2值大于所述第1值；
在所述规定时间以内，对表示由于所述试样中的水分的电解而产生的电荷量的对于所述第2信号的所述试样的第2电响应值进行测定；以及
根据所述第2电响应值，校正由所述第1电响应值得到的值。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其中，
在将所述第1信号施加给所述试样的步骤中，将设置有所述试剂的所述第4电极用作对极。
4.根据权利要求1至3中的任意一项所述的测定方法，其中，
所述第2信号是直流电压，所述第2值是1V以上7V以下的电压值。
5.根据权利要求1至4中的任意一项所述的测定方法，其中，
所述试样是血液。
6.根据权利要求1至5中的任意一项所述的测定方法，其中，
所述测定对象成分是葡萄糖。
7.根据权利要求1至6中的任意一项所述的测定方法，其中，
所述试样的第2电响应值是表示血细胞比容的值。
8.根据权利要求7所述的测定方法，其中，
所述试样的第1电响应值是表示通过表示所述血细胞比容的值校正前的葡萄糖的值。
9.一种测定装置，其使用分析用具对生物学试样中包含的测定对象成分进行测定，其中，该分析用具包括流路和配置于所述流路的多个电极，所述多个电极包括第1电极、第2电极、第3电极以及第4电极，该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和该第3电极分别未设置所述试剂，该第4电极与所述第1电极、所述第2电极和所述第3电极不同，该测定装置的特征在于，包括：
第1测定部，其将所述第1电极用作作用极，并将所述第4电极用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给所述流路内的所述试样，测定所述试样对于所述第1信号的第1电响应值；
第2测定部，其将所述第2电极和所述第3电极用作作用极和对极，将具有第2值的直流的第2信号对所述流路内的所述试样连续施加规定时间，在所述规定时间以内，对表示由于所述试样中的水分的电解而产生的电荷量的所述试样对于所述第2信号的第2电响应值进行测定，其中，该第2值大于所述第1值；以及
校正部，其根据所述第2电响应值，校正由所述第1电响应值得到的值。
10.一种测定装置，其使用分析用具对生物学试样中包含的测定对象成分进行测定，其中，该分析用具包括流路和配置于所述流路的多个电极，所述多个电极包括第1电极、第2电极和第3电极，该第1电极设置有含有酵素的试剂，该第2电极和第3电极分别未设置所述试剂，该测定装置的特征在于，包括：
第1测定部，其将所述第1电极用作作用极，并将所述第2电极和所述第3电极中的一方用作对极，将具有第1值的直流的第1信号施加给所述流路内的所述试样，测定所述试样对于所述第1信号的第1电响应值；
第2测定部，其将所述第2电极和所述第3电极用作作用极和对极，将具有第2值的直流的第2信号对所述流路内的所述试样连续施加规定时间，在所述规定时间以内，对表示由于所述试样中的水分的电解而产生的电荷量的所述试样对于所述第2信号的第2电响应值进行测定，其中，该第2值大于所述第1值；以及
校正部，其根据所述第2电响应值，校正由所述第1电响应值得到的值。
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