CN109402001B - 一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用 - Google Patents

一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109402001B
CN109402001B CN201811285102.7A CN201811285102A CN109402001B CN 109402001 B CN109402001 B CN 109402001B CN 201811285102 A CN201811285102 A CN 201811285102A CN 109402001 B CN109402001 B CN 109402001B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pseudomonas aeruginosa
pyrene
sodium citrate
promoting
environment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811285102.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109402001A (zh
Inventor
李静
邓毛程
栗瑞敏
陈聂欣
王瑶
吴丰裕
张慧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Industry Technical College
Original Assignee
Guangdong Industry Technical College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Industry Technical College filed Critical Guangdong Industry Technical College
Priority to CN201811285102.7A priority Critical patent/CN109402001B/zh
Publication of CN109402001A publication Critical patent/CN109402001A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109402001B publication Critical patent/CN109402001B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C02F2101/34—Organic compounds containing oxygen

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用。本发明是在存在芘的环境中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘。本发明发明人发现，柠檬酸钠是铜绿假单胞菌的容易利用碳源，可促进菌体生长，在芘降解前期可迅速形成较大菌体量；当柠檬酸钠被利用后，会使培养基pH上升，可以抵消其它物质分解代谢引起pH下降，从而有利于铜绿假单胞菌的生长和对芘的代谢；且其发酵液对疏水性化合物的乳化效果更好，有利于芘的溶解及被降解。因此，本发明适合在环境中降解芘，修复环境。

Description

一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用
技术领域
本发明属于环境生物技术领域，特别涉及一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用。
背景技术
芘是具有四个苯环的高分子量多环芳烃，具有稳定、难降解、致癌、致畸、致突变等特性，对人类健康和生态环境造成了巨大危害被美国环保局(US EPA)列为优先监测物。多环芳烃的生物降解吸引国内外研究者高度关注，芘通常被作为高分子量多环芳烃降解研究的模式化合物。迄今为止，现已经发现多种微生物能够降解芘，主要包括红球菌属(Rhodococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、分支杆菌属(Mycobacteria)、伯克氏菌属(Burkholderia)、产碱性杆菌属(Alcaligenes)、曲霉属(Aspergillus)、短梗蠕孢属(Trichocladium canadense)、青霉菌属(Penicillium janthinellum)、尖孢镰刀菌属(Fusarium oxysporum)等。但是，由于芘不溶于水，在环境中很难被微生物所利用，导致微生物对芘的降解周期长、降解效率低。
有些研究人员在培养基中添加Triton X-100、Tween 80、Tween 60等表面活性剂，对芘起到增溶作用，以促进微生物对芘的摄取及分解利用。有些研究人员在培养基中添加玉米淀粉、麦麸、葡萄糖等，提高芘降解前期的菌体量，以提高芘降解率。但是，这些方法对芘的降解率仍然不高。
因此，有必要继续寻找促进微生物降解芘的方法。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法。
本发明的另一目的在于提供所述添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，包括如下步骤：在存在芘的环境中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘。
所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，更优选包括如下步骤：在存在芘的环境中加入柠檬酸钠、铜绿假单胞菌、氮源和无机盐，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘，氮源和无机盐有利于铜绿假单胞菌的生长。
所述的环境包括水体和土壤；优选为水体。
所述的铜绿假单胞菌优选铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PA06，其于2017年3月6日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2017082。
所述的铜绿假单胞菌是处于对数增生长期中后期的铜绿假单胞菌。
所述的处于对数增生长期中后期的铜绿假单胞菌，优选通过如下步骤制备得到：以柠檬酸钠为碳源配制适宜铜绿假单胞菌生长的液体培养基，经除菌后，接种铜绿假单胞菌菌种，振荡培养至菌体处于对数增生长期中后期。
所述的液体培养基的组成优选如下：柠檬酸钠15～20g/L，蛋白胨5～10g/L，KH2PO42～2.5g/L，MgSO4·7H2O 0.4～0.5g/L；水为溶剂，pH为6.5～7.5。
所述的液体培养基中的pH优选为7。
所述的除菌优选为灭菌。
所述的灭菌的条件优选为115～121℃灭菌15～30min；更优选为121℃灭菌20min。
所述的振荡培养的条件优选为：于28～30℃、150～200rpm的转速培养12～16h。
所述的振荡培养优选为摇瓶培养。
所述的摇瓶培养中的装液量为体积百分比10～20％。装液量为摇瓶培养基的量/培养瓶的容积。
所述的培养瓶优选为三角瓶。
所述的氮源优选为蛋白胨。
所述的氮源的用量优选为：当所述的环境为水体时，按5～10g/L的量添加氮源。
所述的无机盐优选为KH2PO4和MgSO4·7H2O中的一种或两种；更优选为两种。
所述的KH2PO4的用量优选为：当所述的环境为水体时，按2～2.5g/L的量添加KH2PO4。
所述的MgSO4·7H2O的用量优选为：当所述的环境为水体时，按0.4～0.5g/L的量添加MgSO4·7H2O。
所述的柠檬酸钠的用量优选为：当所述的环境为水体时，按5～15g/L的量添加柠檬酸钠。
所述的铜绿假单胞菌的接种量优选为：当所述的环境为水体时，按体积百分比5％～10％的量添加。
所述的环境为水体时，在水体中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，任选无机盐和氮源，混匀，处理一段时间即可；在处理期间，维持搅拌状态有利于得到更好的处理效果，如较小体积的水体，可通过在容器中进行处理，处理的条件优选为：于28～30℃、150～200rpm的转速进行处理。
所述的处理的时间优选为20～30天。
所述的环境为土壤时，在土壤中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，任选无机盐和氮源，混匀，处理一段时间即可。
所述的存在芘的环境中芘的含量为200～300mg/L，处理效果较好；芘的含量为200mg/L时，芘的降解率最高可达到76.5％，与不添加柠檬酸钠的试验相比，降解率可提高22.1％。
所述添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法在环境修复中的应用。
本发明相对于现有技术，具有如下优点和有益效果：
本发明的研究成果表明，柠檬酸钠是铜绿假单胞菌的容易利用碳源，可促进菌体生长，在芘降解前期可迅速形成较大菌体量。当柠檬酸钠被利用后，会使培养基pH上升，可以抵消其它物质分解代谢引起pH下降，从而有利于铜绿假单胞菌的生长和对芘的代谢。玉米淀粉、麦麸、葡萄糖等物质被铜绿假单胞菌利用后，会加速培养基pH下降，与这些物质相比，柠檬酸钠对铜绿假单胞菌降解芘的pH条件具有稳定作用。另外，与乳酸钠、葡萄糖等作为碳源相比，铜绿假单胞菌以柠檬酸钠为碳源时，其发酵液对疏水性化合物的乳化效果更好，有利于芘的溶解及被降解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养
称取1.5g柠檬酸钠、0.5g蛋白胨、0.2g KH2PO4和0.04g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入500mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入到摇瓶培养基中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养12h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解
称取40mg芘、1g柠檬酸钠、1g蛋白胨、0.4g KH2PO4和0.08g MgSO4·7H2O，加入200mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取20mL步骤(1)制备的摇瓶培养液中，接入到含芘培养基中，将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为68.4％。
实施例2
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养
称取2g柠檬酸钠、1g蛋白胨、0.25g KH2PO4和0.05g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入500mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入到摇瓶培养基中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养16h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解
称取40mg芘、2g柠檬酸钠、2g蛋白胨、0.4g KH2PO4和0.08g MgSO4·7H2O，加入200mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取20mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为76.5％。
实施例3
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养
称取2.63g柠檬酸钠、1.13g蛋白胨、0.33g KH2PO4和0.068g MgSO4·7H2O，加入150mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入摇瓶培养基中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于29℃、180rpm的条件下培养14h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解
称取30mg芘、2.25g柠檬酸钠、1.5g蛋白胨、0.375g KH2PO4和0.075g MgSO4·7H2O，加入150mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取15mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于29℃、180rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为70.2％。
实施例4
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养
称取2g柠檬酸钠、1g蛋白胨、0.25g KH2PO4和0.05g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入摇瓶培养基中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于30℃、200rpm的条件下培养16h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解
称取30mg芘、1g柠檬酸钠、1g蛋白胨、0.25g KH2PO4和0.05g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取5mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于30℃、200rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为54.1％。
实施例5
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养
称取2.63g柠檬酸钠、1.13g蛋白胨、0.33g KH2PO4和0.068g MgSO4·7H2O，加入150mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入到摇瓶培养基中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于29℃、180rpm的条件下培养12h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解
称取25mg芘、1g柠檬酸钠、0.75g蛋白胨、0.225g KH2PO4和0.045g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取7.5mL摇瓶培养液，接入到装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于29℃、180rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为67.3％。
对比例1
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养，与实施例1步骤(1)的区别仅在于使用葡萄糖取代柠檬酸钠，具体如下：
称取1.5g葡萄糖、0.5g蛋白胨、0.2g KH2PO4和0.04g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入500mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入500mL三角瓶中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养12h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解，与实施例1步骤(2)的区别仅在于不加入柠檬酸钠，具体如下：
称取40mg芘、1g蛋白胨、0.4g KH2PO4和0.08g MgSO4·7H2O，加入200mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取20mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为54.4％。
对比例2
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养，与实施例4步骤(1)的区别仅在于使用葡萄糖取代柠檬酸钠，具体如下：
称取2g葡萄糖、1g蛋白胨、0.25g KH2PO4和0.05g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入摇瓶培养基中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于30℃、200rpm的条件下培养16h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解，与实施例4步骤(2)的区别仅在于不加入柠檬酸钠，具体如下：
称取30mg芘、1g蛋白胨、0.25g KH2PO4和0.05g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取5mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于30℃、200rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为41.2％。
对比例3
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养，与对比例1步骤(1)相同，具体如下：
称取1.5g葡萄糖、0.5g蛋白胨、0.2g KH2PO4和0.04g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入500mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入500mL三角瓶中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养12h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解，与实施例1步骤(2)的区别仅在于以葡萄糖替代柠檬酸钠，具体如下：
称取40mg芘、1g葡萄糖、1g蛋白胨、0.4g KH2PO4和0.08g MgSO4·7H2O，加入200mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取20mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为58.2％。
对比例4
(1)铜绿假单胞菌的摇瓶培养，与实施例1步骤(1)的区别仅在于使用乳酸钠取代柠檬酸钠，具体如下：
称取1.5g乳酸钠、0.5g蛋白胨、0.2g KH2PO4和0.04g MgSO4·7H2O，加入100mL水，混匀，调节pH为7.0，放入500mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到摇瓶培养基。冷却后，用接种环将铜绿假单胞菌PA06(保藏于中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M2017082)斜面菌种接入500mL三角瓶中，接种量为2环。将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养12h，得到摇瓶培养液。
(2)铜绿假单胞菌对芘的降解，与实施例1步骤(2)的区别仅在于使用乳酸钠取代柠檬酸钠，具体如下：
称取40mg芘、1g乳酸钠、1g蛋白胨、0.4g KH2PO4和0.08g MgSO4·7H2O，加入200mL水，混匀，调节pH为7.0，放入1000mL三角瓶中，121℃灭菌20min，冷却，得到含芘培养基。用无菌吸管吸取20mL摇瓶培养液，接入装有含芘培养基的1000mL三角瓶中，将三角瓶放入振荡培养箱，于28℃、150rpm的条件下培养21天。然后，用二氯甲烷萃取培养液中残留的芘，用高效气相色谱仪测定萃取液中芘的含量，计算出芘的降解率为62.7％。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于包括如下步骤：在存在芘的环境中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘；
所述的环境包括水体和土壤；
所述的铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PA06，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2017082。
2.根据权利要求1所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于包括如下步骤：在存在芘的环境中加入柠檬酸钠、铜绿假单胞菌、氮源和无机盐，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘。
3.根据权利要求1所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于：所述的铜绿假单胞菌是处于对数增生长期中后期的铜绿假单胞菌，其通过如下步骤制备得到：以柠檬酸钠为碳源配制适宜铜绿假单胞菌生长的液体培养基，经除菌后，接种铜绿假单胞菌菌种，振荡培养至菌体处于对数增生长期中后期。
4.根据权利要求3所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于：所述的液体培养基的组成如下：柠檬酸钠 15～20 g/L，蛋白胨 5～10 g/L，KH2PO4 2～2.5g/L，MgSO4•7H2O 0.4～0.5 g/L；水为溶剂，pH为6.5～7.5；
所述的振荡培养的条件为：于28～30℃、150～200 rpm的转速培养12～16 h。
5.根据权利要求1或2所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于：
所述的柠檬酸钠的用量为：当所述的环境为水体时，按5～15 g/L的量添加柠檬酸钠；
所述的铜绿假单胞菌的接种量为：当所述的环境为水体时，按体积百分比5%～10%的量添加；
所述的存在芘的环境中芘的含量为200～300 mg/L。
6.根据权利要求2所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于：
所述的氮源为蛋白胨；
所述的无机盐为KH2PO4和MgSO4•7H2O中的一种或两种。
7.根据权利要求6所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于：
所述的氮源的用量为：当所述的环境为水体时，按5～10 g/L的量添加氮源；
所述的KH2PO4的用量为：当所述的环境为水体时，按2～2.5 g/L的量添加KH2PO4；
所述的MgSO4•7H2O的用量为：当所述的环境为水体时，按0.4～0.5 g/L的量添加MgSO4•7H2O。
8.根据权利要求1或2所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，其特征在于：
所述的环境为水体时，在水体中加入柠檬酸钠、铜绿假单胞菌、无机盐和氮源，于28～30℃、150～200 rpm的条件处理。
9.权利要求1～8任一项所述添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法在环境修复中的应用。
CN201811285102.7A 2018-10-31 2018-10-31 一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用 Active CN109402001B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811285102.7A CN109402001B (zh) 2018-10-31 2018-10-31 一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811285102.7A CN109402001B (zh) 2018-10-31 2018-10-31 一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109402001A CN109402001A (zh) 2019-03-01
CN109402001B true CN109402001B (zh) 2021-10-19

Family

ID=65470508

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811285102.7A Active CN109402001B (zh) 2018-10-31 2018-10-31 一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109402001B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113172087A (zh) * 2021-04-26 2021-07-27 重庆理工大学 生物刺激剂的应用及其复合制剂和应用
CN115156263B (zh) * 2022-07-07 2023-10-27 辽宁石油化工大学 利用氧化石墨烯强化铜绿假单胞菌修复污染土壤的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102296037A (zh) * 2011-07-15 2011-12-28 广东省生态环境与土壤研究所 一株铜绿假单胞菌及其分离方法和应用
CN102533589A (zh) * 2010-12-09 2012-07-04 大庆油田有限责任公司 一株铜绿假单胞菌及其应用
CN103215207A (zh) * 2013-04-18 2013-07-24 中国科学院微生物研究所 一株适用于油藏环境的假单胞菌菌株及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102533589A (zh) * 2010-12-09 2012-07-04 大庆油田有限责任公司 一株铜绿假单胞菌及其应用
CN102296037A (zh) * 2011-07-15 2011-12-28 广东省生态环境与土壤研究所 一株铜绿假单胞菌及其分离方法和应用
CN103215207A (zh) * 2013-04-18 2013-07-24 中国科学院微生物研究所 一株适用于油藏环境的假单胞菌菌株及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1株铜绿假单胞菌对芘的降解特性及代谢途径;李想;《环境科学》;20180430;第39卷(第4期);摘要、第1795页左栏第2段、第1.1-1.2节 *
Characterization of polycyclic aromatic hydrocarbons degradation and arsenate reduction by a versatile Pseudomonas isolate;Tiancai Feng;《International Biodeterioration & Biodegradation》;20140531;第90卷;摘要 *
铜绿假单胞菌NY3及其突变株好氧降解四溴双酚A的特性研究;齐慧霞;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20170215;摘要 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109402001A (zh) 2019-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mei et al. A novel lignin degradation bacteria-Bacillus amyloliquefaciens SL-7 used to degrade straw lignin efficiently
CN109402001B (zh) 一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用
JP6117450B1 (ja) 構成型１，４−ジオキサン分解菌
Nakasaki et al. Composting of food waste subjected to hydrothermal pretreatment and inoculated with Paecilomyces sp. FA13
CN105967343B (zh) 复合生物酶制剂、复合微生物菌剂及其在含油污泥处理中的应用
Liu et al. Bacteria-white-rot fungi joint remediation of petroleum-contaminated soil based on sustained-release of laccase
CN108128906B (zh) 高温工业废水处理剂
Yuan et al. Particulate toxicity of metal-organic framework UiO-66 to white rot fungus Phanerochaete chrysosporium
CN106635899A (zh) 一种嗜碱性假单胞杆菌降解蒽、芘的方法
JP5469314B2 (ja) バクテリアセルロースの生産方法
JP6566473B2 (ja) 環状エーテル構造を有する有機化合物の分解能を有する新規微生物とその使用
CN102766580B (zh) 一株产生物表面活性剂的酵母菌株及其应用
Saetang et al. Fungi immobilization for landfill leachate treatment
CN112779189B (zh) 一株土壤变形杆菌及其应用
CN113817625B (zh) 一株酸性黄杆菌及其在改良盐碱土壤中的应用
CN104818306A (zh) 一种黄曲霉毒素b1的制备方法
CN104860369B (zh) 一种利用青霉菌吸附回收污水中的三氯生的方法
CN110467273B (zh) 一种垃圾渗滤液浓缩液的微生物毒性及可生化性评价方法及其应用
CN106434476A (zh) 一种碱性果胶酶高产菌株及其应用
CN111676141A (zh) 一种去除盐藻中重金属砷的方法
JPH0334905A (ja) 植物用組成物
CN108359622A (zh) 基于化感自毒作用的玉米连作障碍修复剂及其应用
CN108408920B (zh) 一种利用青霉菌复合材料降解孔雀石绿废水的方法
Pham et al. Paclobutrazol biodegradation of native bacteria in mango orchards in Mekong Delta, Vietnam
Mohammed et al. Biodegradation of Anthracene Compound by Two Species of Filamentous Fungi

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant