CN109380122A - 一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药用植物种植技术领域，具体涉及一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法。目前对于滇黄精的种植技术还不成熟，种植方法多是种植者根据经验总结出，没有系统化、专业化，本方法通过育苗试验优化了块茎育苗的消毒程序、以及组培育苗的外植体采摘时间、消毒方法、培养基成分及配比等培养参数，探索出萌发率高并且腐烂率小的育苗方法，结合针对滇黄精的大田集约化种植方法，大大缩短了滇黄精育苗时间，同时实现了滇黄精的大量规范化种植。

Description

一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法

技术领域

本发明涉及药用植物种植技术领域，具体涉及一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法。

背景技术

滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl)是百合科黄精属草本植物，根状茎近圆柱形或近连珠状，结节有时作不规则菱状，肥厚。浆果红色，直径1-1.5厘米，具7-12颗种子。花期3-5月，果期9-10月。根据《中国药典》2015年版记载，中药黄精为滇黄精、黄精或多花黄精的干燥根茎。滇黄精作为黄精的基原品种之一，其根茎较为粗大，是黄精药材中质量最好的品种之一。滇黄精在国外主要分布于越南、缅甸，我国主产于云南、四川、贵州、广西等省，其中云南为滇黄精的道地产地，蕴藏量大，品质优良。

近年来，随着对滇黄精研究的不断深入，滇黄精的各类价值也被不断发掘，其应用领域也在不断拓展，尤其是在医药、保健、美容等方面。滇黄精市场需求量越来越大，但是现有的市场供应并不能完全满足市场需求量。多年来，传统滇黄精的人工种植繁殖方式主要有两种：一种是通过种子进行有性繁殖，另一种是通过根茎进行无性繁殖。由于滇黄精种子难收集，萌发率低，育苗生长周期长，增加了生产种植成本，不利于大面积推广种植。根茎繁殖这一方法繁殖系数低，根茎用量大既不经济，又限制了生产种植规模，种苗问题已经成为限制滇黄精人工大面积推广种植的瓶颈。目前针对滇黄精的大田集约化种植技术还不完善，多是种植户少量种植，集约化程度低。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，本方法利用块茎苗或组培苗进行育苗繁殖，大大缩短了滇黄精育苗时间，大田集约化的种植方法实现了滇黄精的大量规范化种植。

本发明的技术方案如下：

一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，包括育苗和集约化种植两个步骤，所述育苗方法是块茎诱导育苗或组织培养育苗。

上述块茎诱导育苗的方法：将滇黄精块茎切段，每段2节，1～3个芽眼，用30％甲霜灵水剂浸泡切好的块茎约5min，使块茎表面形成一层保护膜，晾干后，栽种于沙床上，保持沙床湿润，种植30-45天。

上述组织培养育苗包括以下步骤：

(1)外植体取材

在每年9～10月份进行外植体取材，采取的滇黄精块茎先贮存于已经消毒杀菌的河沙中，备用；

(2)外植体消毒

将滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净，在超净工作台上切成带芽的小块，即得外植体材料，将外植体材料进行消毒处理后，在无菌环境中，切除外植体表面肉质块茎(注意不要伤到芽体)，以减少污染；

(3)诱导萌发

将消毒过的外植体接入无菌的MS基本培养基中，每个培养瓶接种一个外植体，培养至丛生芽长出；

(4)增殖培养

将所得丛芽切成保留一个顶芽或侧芽的外植体，接入无菌的增殖培养基中，培养45-60天，期间更换2-3次新鲜培养基；

(5)不定根诱导

将增殖培养得到的芽较高的无菌材料，接入生根培养基中，每个培养瓶接入10苗，培养20-30天；

(6)炼苗和移栽

当外植体生根后，将培养瓶的瓶塞打开，置于大棚中炼苗5天，取出培养的外植体栽种于大棚土壤中，移栽后7天内，避免阳光直晒移植体。

进一步，上述的步骤(2)中外植体材料消毒程序如下：

a.75％酒精作表面消毒，消毒时间为20s；

b.无菌水清洗2～3次；

c.0.1％氯化汞作深度消毒，消毒时间为15min；

d.无菌水清洗4～5次。

进一步，上述的步骤(4)中所述的增殖培养基成分是：MS+6-BA2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.8g/L。

进一步，上述的步骤(5)中所述的生根培养基的成分是1/2MS、NAA 0.5mg/L、CA(活性炭)0.5g/L、IBA 1.0mg/L。

进一步，上述的块茎诱导育苗或组织培养育苗的培养条件为温度(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。

上述的集约化种植方法：

(1)环境条件控制

海拔：700～3600m，交通便捷的地区；

土壤：肥沃砂质壤土，厚度≥30cm，保水、保肥性好，土壤pH值为5.5～7.2；

温度：生长季节适宜温度为18℃～28℃，极端最高气温不超过32℃，极端最低气温不低于0℃，1月平均气温高于8℃，无霜期300天/年以上；

水分：年降雨量＞1000mm，冬季少雨干旱，夏季高温多湿，生长季节相对湿度70％～80％，土壤湿度20％～30％；

光照：荫蔽度0.3～0.5；

(2)整地

翻耕土壤30cm以上，细耙，按1.3～1.5宽起垄，挖宽约35cm、深约30cm的小沟，垄面中间高两边微低；

(3)建立排水系统

周边开挖大沟，宽80cm，深70cm，地块内开横或顺沟间隔7～8m；开挖中沟，宽70cm，深50cm；

(4)施基肥

每亩施入腐熟厩肥500～800kg、腐殖质山基土1500～2000kg，翻入土中作基肥；

(5)搭建荫棚及安装喷灌

搭建高2m，遮阴度30％的荫棚，并安装好喷灌系统(按3.5cm×3.5cm安装地喷，每亩安装52个)；

(6)密度控制及种植方法

将块茎诱导或组织培养的幼苗移植到荫棚中，定植时间：春季3月～5月，秋冬季10月～12月，以春季定植为主。定植密度：4000株/亩～5000株/亩，株行距为50cm×80cm，沿等高线行向栽植。

畦宽1.0m～1.2m，高0.25～0.3m，沟宽0.5m，畦长一般不超过50m穴栽，品字形挖穴，穴深15cm，穴底挖松整平，每穴栽滇黄精苗一株，覆土压紧，淋透定根水，再盖土与畦面齐平。移栽一周后，再浇水一次，以提高幼苗栽植成活率。

(7)田间管理

a.中耕除草

每年4月～10月每月各进行1次除草，避免伤及滇黄精的根系，严禁使用化学除草剂，在滇黄精生长过程中，要经常清沟培土于根部，避免根状茎外露吹风或见光。

b.水分管理

滇黄精喜阴湿，移栽后应保持土壤湿润，以利成活，进入雨季要提前做好清沟排水准备，避免积水造成滇黄精烂茎。

c.疏花摘蕾

每年5月份将滇黄精花蕾全部剪掉，促进根状茎膨大增产。

d.病虫害防治

滇黄精的病害主要是叶斑病，4-5月开始发病。多发生于夏秋两季，雨季发病较严重。宜在收获根状茎后清洁地块，将茎叶等病残体集中烧毁，消灭越冬病原。发病前和发病初期喷1∶1∶100波尔多液，或50％退菌特1000倍液，9d喷1次，连喷4次，或65％代森锌可湿性粉剂500～600倍液喷洒，9喷1次，连喷3次。

有益效果：

本方法提供了从滇黄精育苗到大田集约化种植成套的解决方案，包括育苗和集约化种植两个部分，所述育苗方法是块茎诱导育苗或组织培养育苗。

1、滇黄精块茎育苗目前存在的最大问题是块茎容易腐烂，导致出苗率低、种苗质量不高。本发明通过实验比较了多菌灵、草木灰浆、30％甲霜灵以及不做处理四个组的滇黄精块茎的腐烂率和出苗率，结果表明使用30％甲霜灵对块茎进行消毒后，块茎的腐烂率最低，出苗率最高。

2、现有的滇黄精组培育苗方法多是套用已经研究成熟的其他农作物的组培程序，并没有针对滇黄精的生长特性探索出利于滇黄精外植体萌发及生长的最佳组培条件。本发明通过组培条件探索实验，确定了最佳的外植体消毒程序、所用培养基成分配比以及外植体采集时间，形成了完善的滇黄精外植体培养体系，大大提高滇黄精组培育苗的萌发率和生根率，降低外植体的污染率。

3、本发明还滇黄精的生长特性提供针对性的大田集约化种植方法，其中涵盖了种植条件的控制、整地、排水系统建立、密度控制、种植方法、田间管理等集约化种植相关参数条件。大田集约化种植方法为滇黄精规模化、集约化、专业化种植提供可能，节约劳动力，提高生产效益。

4、将滇黄精的块茎诱导育苗或组织培养育苗与大田集约化技术相结合，既缩短了滇黄精的种植周期又实现了滇黄精的规模化种植，解决了现有的常规种植方法的许多问题。

附图说明

图1是不同月份采集外植体进行组织培养的萌发率。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的实施例都是在普洱市进行，所选种植地在普洱市林业科学研究所苗圃地内。普洱市地处北回归线以南，东经100°19′～101°27′，北纬22°27′～23°06′之间，属低纬高原南亚热带季风气候区，具有高温、多雨的特点，冬无严寒，夏无酷暑，干湿分明，日照充足，雨量充沛，年均气温19.4℃，最高气温25.6℃，最低气温15.4℃，日照时数2073.0h，年均降雨量1340.9mm，无霜期315d。普洱市的这些优良特性，非常适合滇黄精生长。

实施例一：块茎苗大田集约化种植

1块茎苗培育

选择健壮，颜色润黄，无病虫害，无破皮，具有顶芽的块茎作为育苗块茎。将滇黄精块茎先端幼嫩部分截成数段，每段2节，1～3个芽眼。用30％甲霜灵水剂浸泡截好的滇黄精块茎约5min，使块茎表面形成一层保护膜，晾干备用。将经过处理的滇黄精块茎栽种于沙床上，保持沙床湿润，种植30d后调查块茎出苗情况，此后每周统计一次。

2滇黄精大田集约化种植

2.1环境条件控制

海拔：种植地宜在海拔700～3600m、交通便捷的地区。

土壤：土壤要求以肥沃砂质壤土为主，要求土层深厚，厚度≥30cm，保水、保肥性好，土壤pH值为5.5～7.2。

温度：生长季节适宜温度为18℃～28℃，极端最高气温不超过32℃，极端最低气温不低于0℃，1月平均气温高于8℃，无霜期300d/y以上。

水分：年降雨量＞1000mm，冬季少雨干旱，夏季高温多湿，生长季节相对湿度70％～80％，土壤湿度20％～30％。

光照：滇黄精种植地荫蔽度控制在0.3～0.5。

环境空气：应符合GB 3095中二级标准的要求。

土壤质量：应符合GB 15618中二级标准的要求。

农田灌溉用水：应符合GB 5084中农田灌溉水质标准的要求。

2.2整地

翻耕土壤30cm以上，细耙。按1.3～1.5宽起垄，挖宽约35cm、深约30cm的小沟，垄面中间高两边微低。

2.3建立排水系统

周边开挖大沟，宽80cm，深70cm，地块内开横或顺沟间隔7～8m；开挖中沟，宽70cm，深50cm。大、中、小沟在完整的地块内顺一个方向拉线开挖，沟与沟对直，便于安装喷灌布管。

2.4施基肥

每亩施入腐熟厩肥500～800kg、腐殖质山基土1500～2000kg，翻入土中作基肥。

2.5搭建荫棚及安装喷灌

搭建高2m，遮阴度30％的荫棚，并安装好喷灌系统(按3.5cm×3.5cm安装地喷，每亩安装52个)。

2.6密度控制及种植方法

将步骤1中发芽长根的滇黄精块茎进行定植，定植时间：春季3月～5月，秋冬季10月～12月，以春季定植为主。定植密度：4000株/亩～5000株/亩，株行距为50cm×80cm，沿等高线行向栽植。

畦宽1.0～1.2m，高0.25～0.3m，沟宽0.5m，畦长一般不超过50m穴栽，品字形挖穴，穴深15cm，穴底挖松整平，每穴栽滇黄精苗一株，覆土压紧，淋透定根水，再盖土与畦面齐平。移栽一周后，再浇水一次，以提高幼苗栽植成活率。

2.7田间管理

(1)中耕除草

每年4月～10月每个月进行1次除草。在除草松土时，注意宜浅不宜深，避免伤及滇黄精的根系，严禁使用化学除草剂。在滇黄精生长过程中，要经常清沟培土于根部，避免根状茎外露吹风或见光。

(2)水分管理

滇黄精喜阴湿，移栽后应保持土壤湿润，以利成活，进入雨季要提前做好清沟排水准备，避免积水造成滇黄精烂茎。

(3)疏花摘蕾

滇黄精以根状茎为食用、药用主体，开花结果使得营养生长转向生殖生长，漫长的生殖生长阶段将耗费大量营养，所以应在每年5月份将滇黄精花蕾全部剪掉，以利养分回流，促进根状茎膨大增产。

(4)病虫害防治

滇黄精的病害主要是叶斑病，4-5月开始发病。多发生于夏秋两季，雨季发病较严重。宜在收获根状茎后清洁地块，将茎叶等病残体集中烧毁，消灭越冬病原。发病前和发病初期喷1∶1∶100波尔多液，或50％退菌特1000倍液，9d喷1次，连喷4次，或65％代森锌可湿性粉剂500～600倍液喷洒，9喷1次，连喷3次。

实施例二：组织培育大田集约化种植

1滇黄精组织培育

1.1外植体取材

在每年9～10月份，选取经驯化栽培、长势好、个头大、无病虫害的滇黄精植株的根茎芽作为外植体材料，采取的滇黄精块茎先贮存于已经消毒杀菌的河沙中，备用。

1.2外植体消毒

使用时，将滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净，将预处理过的块茎在超净工作台上切成带芽的小块，即得外植体材料。外植体材料消毒程序如下：

(1)75％酒精作表面消毒，消毒时间为20s；

(2)无菌水清洗2～3次；

(3)0.1％氯化汞作深度消毒，消毒时间为15min；

(4)无菌水清洗4～5次。

消毒完成后，在无菌环境中，切除外植体表面肉质块茎(注意不要伤到芽体)，以减少污染。

1.3诱导萌发

将上述消毒处理的外植体接入无菌的MS基本培养基中，每个培养瓶接种一个外植体，培养至丛生芽长出。

1.4增殖培养

将步骤1.3所得丛芽切成保留一个顶芽或侧芽的外植体，接入无菌的增殖培养基中，培养45-60天，期间更换2-3次新鲜培养基。所述增殖培养基成分是：MS+6-BA 2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.8g/L。

1.5不定根诱导

将增殖培养得到的芽较高的无菌材料，接入由1/2MS、NAA 0.5mg/L、CA(活性炭)0.5g/L、IBA1.0mg/L组成的生根培养基中，每个培养瓶接入10苗，培养20-30天。

1.6炼苗和移栽

当步骤1.5处理的外植体生根后，将培养瓶的瓶塞打开，置于大棚中炼苗5天。取出培养的外植体栽种于大棚土壤中，移栽后7天内，避免阳光直晒移植体。

移栽后的大田集约化种植过程如同实施例一。

实施例三：块茎育苗最佳消毒程序探索

1块茎选择

选择健壮，颜色润黄，无病虫害，无破皮，具有顶芽的块茎作为育苗块茎。

2块茎处理

滇黄精块茎育苗目前存在的最大问题是块茎容易腐烂，导致出苗率低、种苗质量不高。本试验旨在对滇黄精块茎进行消毒处理，筛选出最佳处理方案，从而降低块茎的腐烂率，提高出苗率及种苗质量。

将滇黄精块茎先端幼嫩部分截成数段，每段2节，1～3个芽眼。对块茎进行以下3种消毒处理：

处理1：将截好的滇黄精块茎用1∶800的多菌灵溶液浸泡45min，备用；

处理2：在截好的滇黄精块茎伤口处蘸草木灰浆(pH值11～13)，晾干备用；

处理3：用30％甲霜灵水剂浸泡截好的滇黄精块茎约5min，使块茎表面形成一层保护膜，晾干备用；

处理4(对照)：块茎不作任何处理。

3块茎育苗

将经过处理的滇黄精块茎栽种于沙床上，每个处理种50块，设置3重复。试验中保持沙床湿润，种植30d后调查块茎出苗情况，此后每周统计一次。

4结果与分析

块茎种植后大约3个月开始出苗，调查结果如下表：

表1滇黄精块茎育苗出苗率和腐烂率

表1结果表明，当块茎不做任何处理时，块茎的出苗率最低，为46.67％，腐烂率最高，为31.33％；处理3块茎出苗率最高，为80.67％，腐烂率最低，为8.67％。

将出苗率进行反正弦转换后再进行方差分析，结果见表2。

表2滇黄精块茎育苗出苗率方差分析

表2显示，4种不同处理滇黄精块茎出苗率F＝60.691，P＝0.000＜0.01，差异性极为显著。对出苗率进行多重比较，结果见表3。

表3滇黄精块茎育苗出苗率多重比较

表4滇黄精块茎育苗腐烂率方差分析

表4结果表明，4种不同处理滇黄精块茎腐烂率F＝37.558，P＝0.000＜0.01，差异性极为显著。对腐烂率进行多重比较，结果见表5。

表5滇黄精块茎育苗腐烂率多重比较

多重比较结果表明，用多菌灵溶液(处理1)或草木灰(处理2)处理块茎后再育苗，相较于对照来说块茎出苗率得到极显著提高，腐烂率明显下降，但效果仍不如处理3。

滇黄精块茎用30％甲霜灵水剂浸泡后，块茎表面能够形成一层保护膜，能够有效隔绝病菌侵害，降低块茎腐烂率，显著提高块茎育苗的出苗率和种苗质量。且此种块茎处理方法简便易操作，能够广泛应用于滇黄精块茎育苗生产之中。

实施例四：组培育苗最佳条件探索

1探索最佳消毒程序

1.1试验材料

试验材料来源于普洱市玉林林业开发有限公司收集种植的当地滇黄精野生驯化植株，选取经过玉林公司驯化栽培、长势好、个头大、无病虫害的植株的根茎芽为外植体材料，为减少污染和方便取材，在试验前一年倒苗后即2014、2015年9～11月，将选好的黄精块茎沙藏处理(河沙用多菌灵或高锰酸钾消毒处理)至试验用时。

1.2试验方法

(1)外植体预处理

沙埋过的滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净，如果块茎太大，需切分成小块以便在超净工作台上消毒。

(2)外植体消毒试验

将预处理过的外植体材料在超净工作台上切成带芽的小块，先用75％酒精作表面消毒，用无菌水清洗2～3次后，再用10％次氯酸钠或0.1％氯化汞作深度消毒，酒精消毒的时间为10s、20s，次氯酸钠和氯化汞消毒的时间分别为5min、10min、15min，采用双因素试验设计，共计12个处理(表6)。深度消毒过的外植体用无菌水清洗4～5次后，再切掉一层表面肉质块茎(注意不要伤到芽体)，以减少污染，然后接入MS+6-BA 2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.8g/L培养基，每瓶接种一个外植体，每个处理组20瓶，3次重复，40d后统计污染率和萌发率。培养室条件为温度(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。污染判断标准：肉眼可见霉菌生长，发出恶臭。

污染率＝污染瓶数/接种瓶数；萌发率＝未被污染的萌发瓶数/接种瓶数。

表6外植体消毒时间表

1.3实验结果

不同消毒剂和消毒时间对污染率和萌发率的影响结果如表7所示：

表7不同消毒剂和时间对污染率和萌发率的影响

注：表中字母表示在0.05水平上的差异性，污染率和萌发率为三次重复的平均值±标准差。

由表7可以看出，污染率最低的是处理9(75％酒精20s，0.1％HgCl₂15min)，污染率38％，其次是处理3(75％酒精10s，0.1％HgCl₂15min)，处理8(75％酒精20s，0.1％HgCl₂10min)，处理12(75％酒精20s，10％NaClO15min)，污染率分别是48％，58％，58％；萌发率最高的是处理3(75％酒精10s，0.1％HgCl₂15min)，处理9(75％酒精20s，0.1％HgCl₂15min)，萌发率都是43％，其次是处理8(75％酒精20s，0.1％HgCl₂10min)，处理12(75％酒精20s，10％NaClO15min)，萌发率为40％，35％。

外植体消毒剂在对外植体进行杀菌的同时也可能破坏外植体的生长萌发活性，本实验对常用外植体消毒剂的组合及消毒时间进行探索性实验，发现先用75％酒精消毒20s，无菌水冲洗2、3次后，再用0.1％HgCl₂消毒15min的程序进行消毒的外植体的污染率最低且萌发率最高，使用此程序对外植体进行消毒既不破坏其生长活性又降低污染概率。

2探索最佳取材时间

2.1试验材料

试验材料来源于普洱市玉林林业开发有限公司收集种植的当地滇黄精野生驯化植株，选取经过玉林公司驯化栽培、长势好、个头大、无病虫害的植株的根茎芽为外植体材料，为减少污染和方便取材，在试验前一年倒苗后即2014、2015年9～11月，将选好的黄精块茎沙藏处理(河沙用多菌灵或高锰酸钾消毒处理)至试验用时。取材时间分别在同一年的1～2月、3～4月、5～6月、7～8月、9～10月、11～12月(处理编号13～18)，所取外植体源于同一试验田。

2.2试验方法

沙埋过的滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净。将预处理过的外植体材料在超净工作台上切成带芽的小块，先用75％酒精作表面消毒20s，无菌水清洗2～3次后，再用0.1％HgCl₂消毒15min。深度消毒过的外植体用无菌水清洗4～5次后，再切掉一层表面肉质块茎(注意不要伤到芽体)，以减少污染，然后接入MS+6-BA2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.8g/L培养基，每瓶接种一个外植体，每个处理组30瓶，3次重复，45d后统计萌发率，污染的外植体不记入统计。培养室条件：温度(25±2)℃，光照强度控制1500～2000lx，光照时间12h/d。

萌发率＝未被污染的萌发瓶数/接种瓶数

2.3结果

不同月份对滇黄精芽体进行取材，接入无外源激素的MS培养基中，45d统计萌发情况，结果如下表：

表8不同月份取材对芽体萌发的影响

由表8和图1结果可以看出，在9～10月份取材，滇黄精芽体萌发情况最好，去除被污染的瓶数，萌发率为62％，其次是11～12月，萌发率57％。

3探索最佳继代培养基

3.1试验材料

试验材料来源于普洱市玉林林业开发有限公司收集种植的当地滇黄精野生驯化植株，选取经过玉林公司驯化栽培、长势好、个头大、无病虫害的植株的根茎芽为外植体材料，为减少污染和方便取材，在试验前一年倒苗后即2014、2015年9～11月，将选好的黄精块茎沙藏处理(河沙用多菌灵或高锰酸钾消毒处理)至试验用时。取材时间为9～10月。

3.2试验方法

沙埋过的滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净。将预处理过的外植体材料在超净工作台上切成带芽的小块，先用75％酒精作表面消毒20s，无菌水清洗2～3次后，再用0.1％HgCl₂消毒15min。深度消毒过的外植体用无菌水清洗4～5次后，再切掉一层表面肉质块茎(注意不要伤到芽体)，以减少污染。将消毒试验和诱导萌发所得到的无菌材料，接入由不同基本培养基、不同外源激素种类、浓度组成的培养基中(如表9)，每升MS基本培养基中加入有蔗糖30g和琼脂粉5.8g。每瓶接入3个芽块、每个处理组20瓶、3次重复，60d左右统计芽块增殖情况，污染的外植体不计入统计。培养室条件：温度(25±2)℃，光照强度控制1500～2000lx，光照时间12h/d。

增殖系数＝萌发芽数/接种芽块数

表9增殖试验培养基组成表

3.3结果

消毒和萌发试验所得到的无菌材料，把芽切下作生根试验或继代培养的材料，剩下芽块作增殖试验的材料，接入不同基本培养基和外源激素组成的培养基中(中间需转接2～3次)，60天左右统计增殖系数和增殖情，见下表：

表10不同基本培养基和外源激素组合芽增殖情况

经过60天左右的生长，大部分的芽块长出了3个以上的芽体，6-BA和KT用量达到2mg/L以上时，芽体较多，较细小，有许多刚冒出的小芽未计入统计数，6-BA和KT浓度介于1～2mg/L之间时，芽体较少和健壮。处理间的增殖系数差异不显著。

4探索最佳生根培养基

4.1试验材料

试验材料来源于普洱市玉林林业开发有限公司收集种植的当地滇黄精野生驯化植株，选取经过玉林公司驯化栽培、长势好、个头大、无病虫害的植株的根茎芽为外植体材料，为减少污染和方便取材，在试验前一年倒苗后即2014、2015年9～11月，将选好的黄精块茎沙藏处理(河沙用多菌灵或高锰酸钾消毒处理)至试验用时。取材时间为9～10月。

4.2试验方法

沙埋过的滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净。将预处理过的外植体材料在超净工作台上切成带芽的小块，先用75％酒精作表面消毒20s，无菌水清洗2～3次后，再用0.1％HgCl₂消毒15min。深度消毒过的外植体用无菌水清洗4～5次后，再切掉一层表面肉质块茎(注意不要伤到芽体)，以减少污染。将消毒试验和诱导试验所得到的无菌材料，接入到含有2mg/L 6-BA的MS基本培养基中，所述MS基本培养基每升含有蔗糖30g和琼脂粉5.8g，培养室条件：温度(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。培养至萌发的芽较高。将所得萌发的无菌材料接入到生根培养基中，所述生根培养基的组成为：1/2MS、NAA 0.5mg/L、CA(活性炭)0.5g/L、IBA，其中IBA浓度作为变量，设置IBA浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、1.5mg/L，处理编号为31～35，探究最佳生根培养基的配比，每瓶接入10苗，每个处理组10瓶，3次重复，30d后统计生根情况，污染的外植体不计入统计。

生根系数＝生根总数/接种苗数；生根率＝生根苗数/接种苗数

4.3结果

最佳生根培养基探索实验结果如下表所示：

表11不同IBA浓度对滇黄精生根的影响

滇黄精无菌苗接入生根培养基后，20d左右开始长根，30d统计生根情况，生根率达到65％以上，生根率最高的培养基是处理32，即1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+CA 0.5g/L，IBA浓度1.0mg/L时，生根率为67％，各处理间生根率差异不显著。生根系数最高的也是处理32。

实施例二的探究性试验表明：对于滇黄精外植体的消毒，HgCl₂比NaClO在相同消毒时间内消毒效果更好，用75％酒精进行表面灭菌的最宜时间是20s左右，用0.1％HgCl₂进行深度灭菌的最佳时长是10～15min；滇黄精组培在普洱最好在9～12月份取材，萌发增殖情况最好；本次增殖试验外源激素选择6-BA或KT，浓度是1、2、3mg/L，基本培养基选择MS或1/2MS，激素种类浓度或基本培养基浓度对增殖效果的影响差异不是很明显，本试验认为6-BA或KT浓度适宜在1～2mg/L之间；生根培养基探索试验冲，使用的生根培养基中的IBA浓度为1.0mg/L进行培养时，根的生长状况更好，除了IBA浓度为0.1mg/L外，其余浓度的生根率和生根系数差异不是很明显。

本发明通过外植体培养实验探索出在滇黄精外植体培养时所用常规消毒及培养基的最佳浓度及成分配比，利于节约资源并提高外植体培养质量与效率。

本发明未详述之处，均为本技术领域技术人员的公知技术。最后说明的是，以上实施例仅用于说明解释本发明的技术方案而非限制，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (8)

1.一种快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：包括育苗和集约化种植两个步骤，所述育苗方法是块茎诱导育苗或组织培养育苗。

2.根据权利要求1所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述块茎诱导育苗的方法是：将滇黄精块茎切段，每段2节，1～3个芽眼，用30％甲霜灵水剂浸泡切好的块茎约5min，使块茎表面形成一层保护膜，晾干后，栽种于培养室沙床上，保持沙床湿润，种植30-45天。

3.根据权利要求1所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述组织培养育苗包括以下步骤：

(1)外植体取材

在每年9～10月份进行外植体取材，采取的滇黄精块茎先贮存于已经消毒杀菌的河沙中，备用；

(2)外植体消毒

将滇黄精块茎用1％洗衣粉液刷洗表面，流水下冲洗干净，在超净工作台上切成带芽的小块，即得外植体材料，外植体材料经消毒处理后，在无菌环境中，切除外植体表面肉质块茎；

(3)诱导萌发

将消毒过的外植体接入无菌的MS基本培养基中，每个培养瓶接种一个外植体，置于培养室培养至丛生芽长出；

(4)增殖培养

将上一步所得外植体接入无菌的增殖培养基中，培养45-60天，期间更换2-3次新鲜培养基；

(5)不定根诱导

将增殖培养得到的芽较高的无菌材料，接入生根培养基中，每个培养瓶接入10苗，培养20-30天；

(6)炼苗和移栽

当外植体生根后，将培养瓶的瓶塞打开，置于大棚中炼苗5天，取出培养的外植体栽种于大棚土壤中，移栽后7天内，避免阳光直晒移植体。

4.根据权利要求3所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述组织培养育苗方法步骤(2)外植体材料消毒程序如下：

a.75％酒精作表面消毒，消毒时间为20s；

b.无菌水清洗2～3次；

c.0.1％氯化汞作深度消毒，消毒时间为15min；

d.无菌水清洗4～5次。

5.根据权利要求3所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述组织培养育苗方法步骤(4)中，所述的增殖培养基成分是：MS、6-BA 2.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂粉5.8g/L。

6.根据权利要求3所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述组织培养育苗方法步骤(5)中，所述的生根培养基成分是：1/2MS、NAA 0.5mg/L、CA 0.5g/L、IBA 1.0mg/L。

7.根据权利要求1-3任意一项所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述培养块茎或外植体的培养室条件为温度(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。

8.根据权利要求1所述的快速繁殖的滇黄精大田集约化种植方法，其特征在于：所述集约化种植方法如下：

(1)环境条件控制

海拔：700～3600m，交通便捷的地区；

土壤：肥沃砂质壤土，厚度≥30cm，保水、保肥性好，土壤pH值为5.5～7.2；

温度：生长季节适宜温度为18℃～28℃，极端最高气温不超过32℃，极端最低气温不低于0℃，1月平均气温高于8℃，无霜期300天/年以上；

水分：年降雨量＞1000mm，冬季少雨干旱，夏季高温多湿，生长季节相对湿度70％～80％，土壤湿度20％～30％；

光照：荫蔽度0.3～0.5；

(2)整地

翻耕土壤30cm以上，细耙，按1.3～1.5宽起垄，挖宽约35cm、深约30cm的小沟，垄面中间高两边微低；

(3)建立排水系统

周边开挖大沟，宽80cm，深70cm，地块内开横或顺沟间隔7～8m；开挖中沟，宽70cm，深50cm；

(4)施基肥

每亩施入腐熟厩肥500～800kg、腐殖质山基土1500～2000kg，翻入土中作基肥；

(5)搭建荫棚及安装喷灌

搭建高2m，遮阴度30％的荫棚，并安装好喷灌系统；

(6)密度控制及种植方法

按照权利要求2所述的方法获得由块茎诱导的幼苗或者按照权利要求3-6任意一项所述的方法获得组织诱导培养的幼苗，将所获得的滇黄精幼苗移植到荫棚中，定植时间：春季3月～5月，秋冬季10月～12月，以春季定植为主；定植密度：4000株/亩～5000株/亩，株行距为50cm×80cm，沿等高线横向栽植；

畦宽1.0～1.2m，高0.25～0.3m，沟宽0.5m，畦长一般不超过50m穴栽，品字形挖穴，穴深15cm，穴底挖松整平，每穴栽滇黄精苗一株，覆土压紧，淋透定根水，再盖土与畦面齐平，移栽一周后，再浇水一次；

(7)田间管理

a.中耕除草

每年4月～10月每月各进行1次人工除草，避免伤及滇黄精的根系；

b.水分管理

移栽后应保持土壤湿润，进入雨季前做好清沟排水准备，避免积水造成滇黄精烂茎；

c.疏花摘蕾

每年5月份将滇黄精花蕾全部剪掉，促进根状茎膨大增产；

d.病虫害防治

在收获根状茎后清洁地块，将茎叶等病残体集中烧毁，消灭越冬病原；发病前和发病初期喷1∶1∶100波尔多液，或50％退菌特1000倍液，9d喷1次，连喷4次，或65％代森锌可湿性粉剂500～600倍液喷洒，9d喷1次，连喷3次。