CN109364067A - 一种提高血脑屏障通透性的药物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，特别涉及一种提高血脑屏障通透性的药物及其用途。所述提高血脑屏障通透性的药物的活性成分为硝唑尼特或替唑尼特。所述提高血脑屏障通透性的药物的给药途径为注射给药或外用给药。其外用制剂优选为外用凝胶制剂。所述外用凝胶制剂的药用辅料包括卡波姆941、丙二醇、甘油、三乙醇胺、乙醇和纯化水。上述提高血脑屏障通透性的药物能够对正常血脑屏障发挥开放作用，以便于其他药物通过血脑屏障，从而发挥对中枢神经系统的药效，并且所述提高血脑屏障通透性的药物在病理性血脑屏障损伤时对血脑屏障损伤有一定的抑制效果。

Description

一种提高血脑屏障通透性的药物及其用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种提高血脑屏障通透性的药物及其用途。

背景技术

血脑屏障是血液和脑组织之间存在一种重要的屏障结构。该结构由高密度细胞组成，包括无孔或少孔的内皮细胞、基底膜和有疏松连结的星形胶质细胞血管周足组成的断续膜。脑部毛细血管本身与身体其他部位的毛细血管即存在差别，缺乏其他部位毛细血管所存在的孔状结构，内皮细胞彼此覆盖使得外部分子难以通过。外部覆盖的基膜以及基膜外的星形胶质细胞血管周足进一步增强了屏障作用，使得脑部毛细血管呈现多层膜覆盖结构，大约85%的脑部毛细血管被覆盖。

生理状态下，血脑屏障对于防止外部分子进入脑组织产生不必要的损伤具有重要意义，是脑组织的保护结构之一。但对于一些需要进入中枢神经系统发挥药效的药物而言，血脑屏障的存在则成为不利因素。很多体外显示潜在活性的药物，在体内试验中丧失对中枢神经系统的活性，血脑屏障是其中的原因之一。典型的如青霉素钠难于透过血脑屏障，即使大剂量注射时进入脑组织的药物含量也非常低。因此，如何使针对中枢神经系统的药物更好的通过血脑屏障是药物研发领域的热点之一。其解决手段包括对药物本身进行结构改造，使药物能够进入脑组织；另一种方法是通过制剂学手段使药物能够进入脑组织。但这两种方法的成本和难度较大，迄今为止仍缺乏使药物有效进入中枢神经系统的化学或制剂学手段。因此，通过药物短暂改变血脑屏障结构，打开紧密连接，成为药物研发的方向之一。

病理状态下如脑缺血再灌注、外伤等情况下，炎症因子集中释放会对血脑屏障产生损伤，从而引发脑水肿等症状。因此，在血脑屏障损伤的病理状态下，修复血脑屏障是治疗相关损伤的方法之一。如在此时使用提高血脑屏障通透性的药物可能加剧血脑屏障损伤从而增加治疗的难度。

基于上述因素的考虑，理想的提高血脑屏障通透性的药物应当是在生理状态下即血脑屏障未损伤时，能够打开紧密连接，从而便于药物进入中枢神经系统发挥药效。在病理状态下即血脑屏障本身已经损伤的状态下，不增加血脑屏障损伤程度，甚至有利于修复血脑屏障。这就需要这类提高血脑屏障通透性的药物的作用机制，应当是非病理性机制，即不能通过诱发炎症等途径损坏血脑屏障，导致损伤性通透性提高。这就需要提高血脑屏障通透性的药物能够对紧密连接结构中的相关蛋白如紧密连接蛋白进行有限调节，并且在病理状态下如血脑屏障损伤时能够通过其他作用机制如抗炎等对血脑屏障进行保护，从而符合既能促进其他药物进入中枢神经系统，又不加剧血脑屏障病理性损伤的要求。

目前比较理想的符合上述要求的提高血脑屏障通透性的药物主要为冰片等从传统中医药资源中发现的活性物质。已有的研究显示，冰片能够促进血脑屏障开放，提高血脑屏障通透性，从而促进卡马西平、庆大霉素、顺铂等多种药物进入中枢神经系统。而且其本身具有抗炎活性，对脑外伤等多种情况所致的血脑屏障损伤反而有抑制作用。截至目前，符合上述要求的药物除冰片外，罕见其他报道。可能与药物研发的关注焦点不同有关。

硝唑尼特，英文名为Nitazoxanide，属于硝噻柳酸酰胺衍生物。其口服后在血液内经血液中的酶代谢为有活性的替唑尼特，英文名为Tizoxanide。且血液内几乎检测不到硝唑尼特的存在。硝唑尼特和替唑尼特的结构分别如下式I和式II所示：

从结构分析，二者结构差异极小，仅在苯环临位取代基存在差异。硝唑尼特属于上市较早的药物，早在1996年已经在国外上市，最初批准的适应症为寄生虫相关疾病，对贾第鞭毛虫病、阿米巴病、隐孢子虫病等具有良好的效果。其口服给药后吸收迅速，且安全性良好，应用已有几十年，且临床使用剂量较高。但硝唑尼特的活性作用机制迄今尚不清楚。虽然至今已发现硝唑尼特尚具有抗病毒等活性，对丙肝也具有治疗效果。但目前的制剂均为口服制剂。

随着研究的逐渐扩大，硝唑尼特的新活性也被逐渐发现，如已有研究发现，硝唑尼特口服对大鼠高脂饮食/链脲佐菌素诱导的糖尿病具有治疗效果（Elaidy SM, HussainMA, El-Kherbetawy MK. Time-dependent therapeutic roles of nitazoxanide onhigh-fat diet/streptozotocin-induced diabetes in rats: effects on hepaticperoxisome proliferator-activated receptor-gamma receptors. Can J PhysiolPharmacol. 2018;96(5):485-497.），也有研究显示硝唑尼特口服对帕金森具有治疗效果（Amireddy N, Puttapaka SN, Vinnakota RL, Ravuri HG, Thonda S, Kalivendi SV.The unintended mitochondrial uncoupling effects of the FDA-approved anti-helminth drug nitazoxanide mitigates experimental parkinsonism in mice. JBiol Chem. 2017;292(38):15731-15743.）、并能够促进阿尔茨海默病相关淀粉样蛋白的清除，从而可能对阿尔茨海默病发挥潜在的治疗作用。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的之一是提供硝噻柳酸酰胺衍生物的一种制药用途，具体而言是提供硝唑尼特、替唑尼特及其药物制剂在制备提高血脑屏障通透性药物中的用途。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

硝唑尼特、替唑尼特及其药物制剂在制备提高血脑屏障通透性药物中的用途。所述提高血脑屏障通透性药物是指能够促进其他药物从血液系统进入脑组织从而发挥预防或治疗作用的药物。所述提高血脑屏障通透性药物是指在生理状态下促进血脑屏障开放，在血脑屏障产生病理损伤时能够保护血脑屏障的药物。所述提高血脑屏障通透性药物为口服药物、注射药物或外用药物。所述提高血脑屏障通透性药物优选为注射药物或外用药物。进一步的，所述提高血脑屏障通透性药物优选为外用药物。

优选的，所述硝唑尼特或替唑尼特的人体每日给药剂量为0.36mg/kg～0.45 mg/kg。

本发明还提供了一种提高血脑屏障通透性的药物，所述提高血脑屏障通透性的药物的活性成分为硝唑尼特或替唑尼特，优选的所述提高血脑屏障通透性的药物的活性成分为硝唑尼特

优选的，所述提高血脑屏障通透性的药物为注射药物。

优选的，所述提高血脑屏障通透性的药物为外用药物，优选为外用凝胶制剂。

优选的，所述外用凝胶制剂的药用辅料为：卡波姆941、丙二醇、甘油、三乙醇胺、乙醇和纯化水。

优选的，所述外用凝胶制剂中药用辅料的重量份比为：卡波姆941 10重量份、丙二醇100重量份、甘油100重量份、三乙醇胺15重量份、乙醇90重量份、纯化水675重量份。即卡波姆941、丙二醇、甘油、三乙醇胺、乙醇和纯化水的重量比例为2: 20:20:3:18:135。

优选的，所述外用凝胶制剂中卡波姆941与硝唑尼特的重量份比为卡波姆941 10重量份、活性成分10重量份。即卡波姆941和硝唑尼特的重量比例为1:1。

优选的，所述外用凝胶制剂中卡波姆941与替唑尼特的重量份比为卡波姆941 10重量份、活性成分10重量份。即卡波姆941和硝唑尼特的重量比例为1:1。

实验结果显示，当外用给药时，硝唑尼特在较低剂量下，如大鼠给药剂量为2.27mg/kg～2.78 mg/kg时，可使正常大鼠脑组织血脑屏障通透性升高，有利于其他药物通过血脑屏障。按照大鼠剂量为人体剂量6.25倍计算，该剂量相当于人体剂量的0.36mg/kg～0.45mg/kg左右。但在更高剂量下，对正常大鼠脑组织血脑屏障通透性的升高效果未见增加。血脑屏障损伤大鼠静脉注射硝唑尼特时，其血脑屏障损伤程度受到抑制。因此，硝唑尼特外用或静脉注射给药具备促进其他药物进入中枢神经系统的潜力。

考虑到硝唑尼特无论何种给药途径，一旦进入血液均会被代谢为替唑尼特，因此硝唑尼特的上述提高血脑屏障通透性的作用很显然是通过替唑尼特发挥的。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明的技术方案进行更为详细的说明，以便于理解和实施。应当理解的是，以下实施例仅用于对本发明的解释和说明，而非限制本发明的保护范围。

实施例1 硝唑尼特外用凝胶

组方：

硝唑尼特 10g

卡波姆941 10g

丙二醇 100g

甘油 100g

三乙醇胺 15g

乙醇 90g

纯化水 675g

制备方法：

取处方量卡波姆941加纯化水配成4%的浓溶液，静置过夜充分溶胀作为凝胶基质，另取处方量硝唑尼特、乙醇、丙二醇、甘油混合后加入凝胶基质，边搅拌边加入。加入完毕后，取处方量三乙醇胺滴加进入凝胶基质。最后将余量纯化水加入，搅匀分装。

实施例2 硝唑尼特外用凝胶

组方：

硝唑尼特 20g

卡波姆941 10g

丙二醇 100g

甘油 100g

三乙醇胺 15g

乙醇 90g

纯化水 675g

制备方法：

取处方量卡波姆941加纯化水配成4%的浓溶液，静置过夜充分溶胀作为凝胶基质，另取处方量硝唑尼特、乙醇、丙二醇、甘油混合后加入凝胶基质，边搅拌边加入。加入完毕后，取处方量三乙醇胺滴加进入凝胶基质。最后将余量纯化水加入，搅匀分装。

实施例3 硝唑尼特外用凝胶

组方：

硝唑尼特 20g

卡波姆941 10g

丙二醇 100g

甘油 100g

三乙醇胺 15g

乙醇 90g

纯化水 665g

制备方法：

取处方量卡波姆941加纯化水配成4%的浓溶液，静置过夜充分溶胀作为凝胶基质，另取处方量硝唑尼特、乙醇、丙二醇、甘油混合后加入凝胶基质，边搅拌边加入。加入完毕后，取处方量三乙醇胺滴加进入凝胶基质。最后将余量纯化水加入，搅匀分装。

实施例4 硝唑尼特外用对健康大鼠血脑屏障的影响

健康雄性SD大鼠18只，体重180～220g。将大鼠随机分为3组，每组6只，各组大鼠麻醉后背部常规剃毛备皮。第2日开始给药。其中对照组大鼠于备皮部位涂抹二甲基亚砜；硝唑尼特低剂量组于备皮部位涂抹硝唑尼特二甲基亚砜混合液，每只给予硝唑尼特0.5mg，按体重计算剂量为2.27mg/kg～2.78mg/kg；硝唑尼特高剂量组于备皮部位涂抹硝唑尼特二甲基亚砜混合液，每只给予硝唑尼特10mg。各组大鼠均每日给药1次，连续给药2日。

给药完毕后24小时，采用常规的依文思蓝染色法测定各组大鼠脑组织依文思蓝渗出量，以评价药物对血脑屏障通透性的影响。依文思蓝渗出量升高表示血脑屏障通透性增加。具体测定方法为：将依文思蓝溶于生理盐水配制成2%的染色液。大鼠麻醉后尾静脉注射依文思蓝生理盐水溶液，每只注射剂量为3ml/kg体重。1小时后经心脏灌注200毫升生理盐水。灌注完毕后立即取脑组织，观察脑组织依文思蓝染色情况。去除脑干和小脑后，取半侧大脑剪碎加入2ml pH7.2-7.4 的磷酸盐缓冲液，4摄氏度下1500转/分钟匀浆5分钟。匀浆完毕取上清液加入等体积质量体积浓度为50%的三氯乙酸溶液涡旋混合2分钟，然后4摄氏度孵育24小时，孵育完毕1500转/分钟匀浆5分钟。取上清液于610nm下测定待测样品中的依文思蓝含量。以每毫升样品中依文思蓝含量或每g脑组织中依文思蓝含量为指标比较各组大鼠的脑组织依文思蓝渗出量，作为血脑屏障通透性的评价指标。

大体观察显示，给药组大鼠脑组织存在明显的依文思蓝渗出。定量测定结果见表1。组间比较采用t检验。

表1硝唑尼特对正常大鼠血脑屏障通透性的影响（n=6）

由表1可见，无论按照待测样品中依文思蓝的浓度还是以每g大脑组织中依文思蓝的含量计算，硝唑尼特组依文思蓝渗出量均显著高于对照组（p<0.01或P<0.05）。但硝唑尼特低剂量组与硝唑尼特高剂量组依文思蓝渗出量无显著差异（p>0.05）。

实施例5 硝唑尼特静脉注射给药对血脑屏障损伤大鼠的影响

健康雄性SD大鼠12只，体重180～220g。将大鼠随机分为2组，每组6只。模型组大鼠尾静脉注射二甲基亚砜每日1次，每次0.2ml，连续注射7日。给药组大鼠尾静脉注射硝唑尼特二甲基亚砜混合液，每日1次，每次0.2ml，含硝唑尼特1.5mg，连续注射7日。

第7日给药完毕后1小时，采用线拴法诱导大鼠脑缺血再灌注从而引导大鼠血脑屏障损伤。大鼠麻醉后仰卧位固定于操作台，手术部位常规备皮消毒，颈部正中切口，暴露左侧颈总动脉及颈内动脉、颈外动脉。结扎左侧颈总动脉及颈外动脉根部，在左侧颈总动脉分叉处剪V形切口，插入尼龙线，尼龙线插入端预先烧钝避免刺伤血管，插入至感有轻微阻力时停止，固定栓线后逐层缝合皮肤，诱导脑部缺血，栓线插入后2小时抽出栓线进行再灌注，再灌注12小时后再次尾静脉注射给药，模型组尾静脉注射二甲基亚砜0.2ml，给药组尾静脉注射硝唑尼特二甲基亚砜混合液0.2ml，含硝唑尼特1.5mg。

再灌注24小时后采用依文思蓝染色法测定各组大鼠脑组织依文思蓝渗出量，以评价药物对血脑屏障通透性的影响。具体测定方法为：将依文思蓝溶于生理盐水配制成2%的染色液。大鼠麻醉后尾静脉注射依文思蓝生理盐水溶液，每只注射剂量为3ml/kg体重。1小时后经心脏灌注200毫升生理盐水。灌注完毕后立即取脑组织，观察脑组织依文思蓝染色情况。去除脑干和小脑后，取半侧大脑剪碎加入2ml pH7.2-7.4 的磷酸盐缓冲液，4摄氏度下1500转/分钟匀浆5分钟。匀浆完毕取上清液加入等体积质量体积浓度为50%的三氯乙酸溶液涡旋混合2分钟，然后4摄氏度孵育24小时，孵育完毕1500转/分钟匀浆5分钟。取上清液于610nm下测定待测样品中的依文思蓝含量。以每毫升样品中依文思蓝含量或每g脑组织中依文思蓝含量为指标比较各组大鼠的脑组织依文思蓝渗出量，作为血脑屏障通透性的评价指标。

大体观察显示，模型组及硝唑尼特组大鼠脑组织均存在依文思蓝渗出。定量测定结果见表2。组间比较采用t检验。

表2硝唑尼特对血脑屏障损伤大鼠血脑屏障通透性的影响（n=6）

由表2的统计结果显示，硝唑尼特组依文思蓝渗出存在低于模型组的趋势。以每g大脑组织中依文思蓝的含量计算，硝唑尼特组的依文思蓝渗出量显著低于模型组（p<0.05）；以待测样品中依文思蓝的浓度计算硝唑尼特组的依文思蓝渗出量也显著低于模型组（p<0.01）。可见在硝唑尼特在血脑屏障损伤前及损伤过程中给药时，对血脑

屏障损伤具有抑制作用。

综合分析实施例4和实施例5的数据，硝唑尼特外用给药对正常脑组织由提高血脑屏障通透性的效果，静脉注射预防性给药对血脑屏障损伤大鼠的损伤程度有减轻效果。

Claims (10)

1.一种提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述提高血脑屏障通透性的药物的活性成分为硝唑尼特或替唑尼特。

2.根据权利要求1所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于所述提高血脑屏障通透性的药物的活性成分为硝唑尼特。

3.根据权利要求1和2所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述提高血脑屏障通透性的药物为注射药物。

4.根据权利要求1和2所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述提高血脑屏障通透性的药物为外用药物。

5.根据权利要求4所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述外用药物为外用凝胶制剂。

6.根据权利要求5所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述外用凝胶制剂的药用辅料为：卡波姆941、丙二醇、甘油、三乙醇胺、乙醇和纯化水。

7.根据权利要求6所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述外用凝胶制剂中药用辅料的重量份比为：卡波姆941 10重量份、丙二醇100重量份、甘油100重量份、三乙醇胺15重量份、乙醇90重量份、纯化水675重量份。

8.根据权利要求7所述的提高血脑屏障通透性的药物，其特征在于，所述外用凝胶制剂中卡波姆941与硝唑尼特的重量份比为卡波姆941 10重量份、活性成分10重量份。

9.权利要求1至8所述的提高血脑屏障通透性的药物在制备提高血脑屏障通透性药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述硝唑尼特的人体每日给药剂量为0.36mg/kg～0.45mg/kg。