CN109331184A - 一种荷正电药物纳米结晶制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂领域，涉及一种可用于粘膜给药的、具有生物粘附性的荷正电药物纳米结晶制剂及其制备方法。本发明采用聚多巴胺包被技术实现对药物纳米结晶的表面包覆及正电荷化，使药物纳米结晶表面附着聚多巴胺包覆层并进行氨基化修饰，使药物纳米结晶表面富正电荷，赋予药物纳米结晶对生物组织较好的粘附性和较好的稳定性。本发明能解决现有技术中纳米结晶稳定性不足和缺乏生物粘附性等问题，所述制剂可用于多种粘膜途径给药，也可用于膀胱内或手术切缘用药。本发明制剂中药物纳米结晶表面所荷正电荷有利于纳米结晶与生物粘膜或其他组织之间的相互作用。

Description

一种荷正电药物纳米结晶制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，涉及一种可用于粘膜给药的、具有生物粘附性的荷正电药物纳米结晶制剂及其制备方法。

背景技术

现有技术公开了生物粘附是指合成或天然的高分子物质所具有的能够粘附到腔道粘液或上皮细胞表面的能力。二十世纪80年代以来，本研究领域将这种生物粘附性聚合物用于给药系统，称之为生物粘附给药系统；该传递系统用于人体后，可以粘附到可接触到的靶部位(给药部位、吸收部位或病灶部位)，延长药物在病灶部位的保留时间，提高其治疗局部疾患的效果；同时，较高的局部药物浓度以及药物与吸收部位表面的紧密接触可促进药物的吸收，提高其生物利用度。

负电荷在人体粘膜上广泛存在，可与带正电荷的制剂发生电性作用。已有研究表明，表面荷正电荷的脂质体在能够分泌粘液的细胞层上滞留效果优于中性或表面荷负电的脂质体(International Journal of Pharmaceutics,2016.498:225-33)。可见，带正电荷的制剂有望具有更好的生物粘附性。

临床实践中，存在有若干治疗活性很好的药物水溶性差，在制剂中分散程度低，溶出效果差，难以充分发挥效果。新兴的纳米结晶技术在提高药物分散度方面具有优势，以聚合物或者少量表面活性剂作为稳定剂，将药物颗粒分散并稳定至胶体分散体系，兼具了高载药量和高分散度的优点，已被用于多种难溶性药物口服制剂的制备，如专利CN201010295644.X(布地奈德纳米结晶制剂及其制备方法)、CN201610346724(谷维素纳米结晶胶囊剂及其制备工艺)、CN201110184529.X(黄豆苷元纳米结晶速释胶囊及其制备工艺)、CN200810053839.6(纳米结晶米格列奈钙口腔崩解片及其制备方法)、CN200910017720.8(水飞蓟宾纳米结晶制剂及其制备方法)、CN105315249(辛伐他汀纳米结晶的制备方法)、CN201210435272.5(一种非诺贝特纳米结晶粉末的制备方法及其应用)、CN105878194(一种格列本脲纳米结晶制剂及其制备方法)、CN201210047749.2(一种血竭纳米药物结晶制剂及其制备方法)、CN201610346682(白藜芦醇烟酸酯纳米结晶速释胶囊制剂及其制备工艺)；也有用于非口服给药途径的实践，如CN201410507426.6(一种伏立康唑眼用纳米结晶制剂及其制备方法)就是用于粘膜给药(眼部)的例子。

上述实例中，出于遏制颗粒聚集、保持制剂稳定的需要，多加入各种天然来源或人工合成的高分子或小分子作为稳定剂，或吸附在纳米结晶表面构成稳定保护层，或增加介质粘度减小颗粒间接触。但是，上述稳定剂与纳米结晶之间的作用比较松散，不足以做为纳米结晶表面的进一步功能化修饰的物质基础，因此目前鲜见有关纳米结晶的功能化修饰的尝试和报道。

近年来，贻贝类分泌的黏性蛋白在潮湿高盐条件下对岩石和船底的牢固附着引起了仿生材料学领域的浓厚兴趣。多巴胺与贻贝黏性蛋白前驱体结构相似，在弱碱性条件下极易氧化，从而聚合成聚多巴胺(polydopamine,pDA)，能在大部分固体表面附着，形成一层聚合物膜。pDA的附着对象非常广泛，药物纳米结晶的表面亦可作为pDA附着的位点，pDA的存在可构成药物纳米结晶间的物理屏障，增强纳米结晶的稳定性。进一步的，pDA膜中存在的醌基等功能基团可与亲核物质(如巯基、氨基)反应，为纳米结晶的功能化修饰提供了反应平台。

本申请的发明人基于现有技术的纳米结晶的正电荷化，赋予纳米结晶一定的生物粘附性，同时，正电荷化的纳米结晶可因颗粒之间同性电荷的排斥作用获得更好的稳定性的现状，拟提供一种荷正电药物纳米结晶制剂及其制备方法。

发明内容

本发明旨在提供一种可用于粘膜给药的、具有生物粘附性的荷正电药物纳米结晶制剂及其制备方法，解决现有技术中纳米结晶稳定性不足和缺乏生物粘附性等问题。

本发明所述制剂中，药物以表面富正电荷的纳米结晶形式存在，Zeta电位>5mV，粒径在50-500nm之间，分散在适宜介质中，如纯水、电解质溶液或温度敏感型凝胶基质中，也可以以冻干物的形式保存及使用。

本发明所述制剂可以用于口服、阴道内、鼻腔内、口腔内、直肠内等粘膜途径给药，也可用于膀胱内或手术切缘用药，

本发明借助聚多巴胺包被技术实现对药物纳米结晶的表面包覆及正电荷化，使药物纳米结晶表面附着了聚多巴胺包覆层，该聚多巴胺包覆层进行了氨基化修饰，从而使药物纳米结晶表面富正电荷，赋予药物纳米结晶对生物组织较好的粘附性和较好的稳定性。

本发明的具体技术方案如下：

1)药物纳米结晶的制备：采用成膜水化法、机械研磨法、高压乳匀法、微沉淀法等方法实现；

2)药物纳米结晶的聚多巴胺包覆：向所述药物纳米结晶混悬液中加入盐酸多巴胺，室温搅拌反应，使多巴胺在药物纳米结晶表面形成聚合附着层，离心洗涤除去未反应的小分子；

3)药物纳米结晶的阳离子化：向所述包覆了聚多巴胺层的药物纳米结晶混悬液中加入氨基化试剂，在水性环境中，室温搅拌反应即得阳离子化纳米晶，离心洗涤除去未反应的氨基化试剂，当所述氨基化试剂的化学结构中存在带保护基团的氨基时，离心洗涤除去未反应的氨基化试剂之后，采用适当方法脱去氨基的保护基；

4)药物纳米结晶的分散：将所述包覆了聚多巴胺层的药物纳米结晶通过搅拌分散到纯水、电解质溶液或温度敏感型凝胶基质中。

本发明中，所含药物为一种难溶性药物或多种难溶性药物的组合，占制剂重量分数0.01～10％范围内。

本发明中，用于分散药物纳米结晶的电解质溶液成分选自氯化钠或磷酸盐缓冲盐、醋酸盐缓冲盐、枸橼酸盐缓冲盐等缓冲体系的一种或组合。

本发明中，分散药物纳米结晶所用温度敏感型凝胶基质是基于泊洛沙姆类聚合物的温度敏感型凝胶；所述温度敏感型凝胶基质由泊洛沙姆407或泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的组合与纯水构成；所述温度敏感型凝胶基质可进一步含有电解质成分，如氯化钠、磷酸盐缓冲盐、醋酸盐缓冲盐或枸橼酸盐缓冲盐；所述温度敏感型凝胶基质含有质量分数在15～30％范围内的泊洛沙姆407和质量分数在0～30％范围内的泊洛沙姆188；本发明的实施例中，所述温度敏感型凝胶基质含有质量分数在15～30％范围内的泊洛沙姆407、质量分数在0～30％范围内的泊洛沙姆188，总摩尔浓度在100～400mM范围内的醋酸盐缓冲盐，pH在4.5～7.5范围内。

本发明制备方法中，步骤1)采用成膜水化法制备药物纳米结晶，包括：将药物和稳定剂溶解在易挥发有机溶剂中，减压条件下旋转蒸发，除去溶剂，使药物和稳定剂在容器内壁上形成薄膜，真空干燥后，加入纯水，振摇涡旋，即得药物纳米结晶；其中，稳定剂是α-琥珀酸生育酚聚乙二醇酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、吐温80、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇、胆酸钠中的一种或组合；稳定剂与药物的摩尔比例在1:2～5:1范围内；本发明的实施例中，将药物、稳定剂和枸橼酸一起溶于易挥发有机溶剂中，进行后续操作，水化时采用碳酸氢钠水溶液，枸橼酸与碳酸氢钠的摩尔比例在1:1～1:10范围内，碳酸氢钠水溶液的浓度在1～10mg/mL范围内。

本发明制备方法中步骤2)中盐酸多巴胺与药物的摩尔比例在1:1～20:1范围内，盐酸多巴胺聚合包覆的反应时间控制在2～6小时范围内。

本发明制备方法中步骤3)中，所述氨基化试剂的化学结构中应含有两个氨基、一个氨基和一个带保护基团的氨基或一个巯基和一个带保护基团的氨基；当所述氨基化试剂的化学结构中存在带保护基团的氨基时，离心洗涤除去未反应的氨基化试剂之后，应脱去氨基的保护基；所述氨基化试剂是N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷，与药物的摩尔比例在50:1-5:1范围内；离心洗涤除去未反应的氨基化试剂后，加酸脱去N-(叔丁氧羰基)保护基，反应体系pH控制在1-3范围内。

本发明制备方法中，步骤1)还可采用研磨法制备药物纳米结晶，包括，采用球磨机，在含有稳定剂的球磨液体介质存在的条件下，将药物粉碎到纳米级别；进行球磨粉碎时，球料比在4:1-16:1范围内，球磨转速在4:1-16:1范围内，球磨时间在4-16小时范围内，球磨温度在0～40℃范围内，球磨液体介质在10～150毫升范围内；球磨液体介质的溶剂为去离子水，所含稳定剂是羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、α-琥珀酸生育酚聚乙二醇酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、吐温80、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇、胆酸钠中的一种或组合，所含稳定剂的质量分数可以是0.1-10％。

本发明制备方法中，步骤1)还可采用沉淀法制备药物纳米结晶。

本发明中，所述的药物纳米结晶分散在冷冻干燥保护剂中，以冷冻干燥的方式获得药物纳米结晶与冷冻干燥保护剂的固体混合物；冷冻干燥保护剂选自葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇或水苏糖；

所述制剂直接以撒布的方式施用于手术切缘或粘膜表面，或以纯水复溶后用于粘膜给药。

本发明制备方法中，所得药物纳米结晶还可分散在冷冻干燥保护剂水溶液中，进行冷冻干燥，即得。

本发明提供的制剂有以下特点：(1)附着在药物纳米结晶表面的聚多巴胺膜构成了对纳米结晶的保护膜，正电荷化后纳米结晶颗粒间的静电斥力进一步阻止了纳米结晶的相互接触，提高了药物纳米结晶的稳定性，使药物纳米结晶能够在室温下长时间保存而不发生沉降和聚集；(2)被氨基化修饰之后制剂，由于其带正电荷，与粘液中的粘蛋白及粘膜上的荷负电成分之间能够发生静电相互作用，具备了生物粘附性；(3)以温度敏感型凝胶作为纳米结晶的给药载体时，既能以液态方式方便地给药并均匀地分散、涂布到粘膜各处表面，又能在给入腔道后发生凝胶化，在一定时间内将药物纳米结晶滞留在给药处腔道内，使其有机会扩散抵达粘膜表面，发生粘附作用，缓慢释放药物，延长药物在粘膜表面的滞留时间，充分发挥药物的治疗效果。

本发明的优点在于：

(1)将难溶性药物制成纳米结晶制剂可显著提高其分散度，改进了药物粘膜给药时的药物溶出及药物与粘膜的充分接触；(2)将多巴胺聚合包覆技术与药物纳米结晶技术相结合，为药物纳米结晶构建了牢固的附着保护层，同时提供了功能化修饰平台；(3)基于聚多巴胺包被进行的正电荷化功能修饰，赋予了纳米结晶生物粘附性，延长药物在粘膜表面的滞留时间，同时提高了纳米结晶的稳定性。

附图说明

图1显示了阳离子化伊马替尼纳米结晶的形态和表面电荷性质。

图2显示了伊马替尼阳离子化纳米结晶/温度敏感型凝胶制剂在小鼠离体阴道黏膜上的粘附性能。

图3显示了伊马替尼阳离子化纳米结晶/温度敏感型凝胶制剂在小鼠阴道内的滞留行为。

具体实施方式

以下实施例是用来说明本发明的，不应被认为是以任何方式对本发明的限制

实施例1伊马替尼阳离子化纳米结晶的制备与表征

制备方法

步骤1：精密称取伊马替尼(3.35mg)、α-琥珀酸生育酚聚乙二醇酯(3.7mg)以及枸橼酸(7.6mg)，加入2mL乙腈搅拌溶解，置于梨形瓶中，常温下旋转蒸发成膜。加入5mL碳酸氢钠水溶液(3mg/mL)，震荡水化，即得伊马替尼纳米结晶混悬液；

步骤2：用稀盐酸调制pH至7.5，加入适量盐酸多巴胺(5mg)，室温下电磁搅拌，反应30分钟，10000rpm离心5min，弃去上清，以纯水分散沉淀物，即得阳离子化伊马替尼纳米结晶混悬液；

步骤3：投入10μL N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷，室温下电磁搅拌，反应4小时，加入适量盐酸调节pH到2，终止反应并脱去氨基上的保护基，以10000rpm离心5分钟，弃去上清，以纯水分散沉淀物即得；

成品测试

如图1所示，透射电镜照片表明，阳离子化伊马替尼纳米结晶呈近圆形。动态光散射结果表明，步骤1)所得伊马替尼纳米结晶粒径160.9±53.9nm，表面电位-17.3±5.3mV；步骤2)所得聚多巴胺包覆伊马替尼纳米结晶粒径305.1±67nm,表面电位远小于0；步骤3)所得阳离子化伊马替尼纳米结晶粒径208.9±38.4nm，表面电位+30.9±7.3mV，正电荷化效果明显；

分散在纯水中，室温储存6个月后分散性良好，粒径299.3±78.5nm，无显著增大，具有较好的储存稳定性；而步骤1)或步骤2)所得的、未进行阳离子化的纳米结晶在放置3天后就出现了沉聚现象)；

在体外进行的细胞毒性实验(TC-1细胞系)表明，阳离子化伊马替尼纳米结晶的细胞毒性强于非阳离子化伊马替尼纳米结晶(即步骤1所得药物纳米结晶)，IC₅₀分别为14.8μM(阳离子化伊马替尼纳米结晶14.8μM)、41.34μM(非阳离子化伊马替尼纳米结晶)和87.91μM(游离药伊马替尼)；

在不同pH(5.5和7.4)下测定阳离子化伊马替尼纳米结晶及非阳离子化伊马替尼纳米结晶(即步骤1所得药物纳米结晶)对粘蛋白的粘附能力(将纳米结晶与黏蛋白溶液混合1小时后离心，以考马斯亮法测定上清中黏蛋白的浓度，计算混合前后黏蛋白浓度的变化)，其结果如表1所示，在两个pH下，阳离子化伊马替尼纳米结晶对粘蛋白的粘附能力均显著强于非阳离子化伊马替尼纳米结晶。

表1伊马替尼纳米结晶对粘蛋白的粘附能力(均值±S.D.，n＝3)

实施例2伊马替尼阳离子化纳米结晶/温度敏感型凝胶制剂的制备与表征

制备方法

步骤1：同实施例1。

步骤2：同实施例1。

步骤3：投入10μL N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷，室温下电磁搅拌，反应4小时，加入适量盐酸调节pH到2，终止反应并脱去氨基上的保护基，以10000rpm离心5分钟，弃去上清，以0.77mL醋酸盐缓冲液(pH 5.5，100mM)分散沉淀物，随后加入0.13g泊洛沙姆407，冰浴下电磁搅拌，至固体物完全溶解，即得。

成品测试

所得伊马替尼阳离子化纳米结晶/温度敏感型凝胶制剂的凝胶化温度在28-30℃,在凝胶化温度以下时为液态，在凝胶化温度以上时为半固态。

在小鼠离体阴道滞留实验中，将伊马替尼阳离子化纳米结晶/温度敏感型凝胶滴加在小鼠离体阴道粘膜上，并以阴道模拟液进行连续冲刷，在2小时、4小时、6小时和8小时后，对粘膜上残留的荧光信号进行半定量测定。作为比对，同时测试具有相同药物及泊洛沙姆407含量的非阳离子化伊马替尼纳米结晶(按照步骤1所得)的温度敏感型凝胶。两种受试纳米结晶中均混入香豆素作为荧光探针，结果显示，纳米结晶阳离子化与否显著影响药物在阴道粘膜表面的滞留，在多个时间点上，载伊马替尼阳离子化纳米结晶温度敏感型凝胶的荧光信号均显著强于载伊马替尼非阳离子化纳米结晶温度敏感型凝胶(如图2所示)；

在小鼠在体阴道滞留实验中，将载伊马替尼阳离子化纳米结晶温度敏感型凝胶以每只10μL的剂量在雌性小鼠中进行阴道给药，在预定时间点，每组取出3只，进行阴道灌洗，以高效液相色谱法对灌洗液中的伊马替尼浓度进行定量测定。作为比对，同时测试步骤1所得、具有相同药物及泊洛沙姆407含量的非阳离子化伊马替尼纳米结晶的温度敏感型凝胶；结果如图3所示，与前述离体滞留试验结果相符，纳米结晶阳离子化与否显著影响药物在阴道粘膜表面的滞留，载伊马替尼阳离子化纳米结晶的温度敏感型凝胶在阴道粘膜表面的药物滞留显著高于载伊马替尼非阳离子化纳米结晶温度敏感型凝胶。

实施例3姜黄素/伊马替尼复合阳离子化纳米结晶制剂/温度敏感型凝胶制剂的制备

制备方法

步骤1：精密称取姜黄素(1.25mg)、伊马替尼(1.65mg)、α-琥珀酸生育酚聚乙二醇酯(3.7mg)以及枸橼酸(7.6mg)，加入2mL乙腈搅拌溶解，置于梨形瓶中，常温下旋转蒸发成膜。加入5mL碳酸氢钠水溶液(3mg/mL)，震荡水化，即得姜黄素/伊马替尼复合纳米结晶混悬液；

步骤2：用稀盐酸调制pH至7.5，加入适量盐酸多巴胺(5mg)，室温下电磁搅拌，反应30分钟，10000rpm离心5min，弃去上清，以纯水分散沉淀物；

步骤3：投入10μL N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷，室温下电磁搅拌，反应4小时，加入适量盐酸调节pH到2，终止反应并脱去氨基上的保护基，以10000rpm离心5分钟，弃去上清，以0.77mL醋酸盐缓冲液(pH 5.5，100mM)分散沉淀物，随后加入0.13g泊洛沙姆407，冰浴下电磁搅拌，至固体物完全溶解，即得；

姜黄素/伊马替尼复合阳离子化纳米结晶粒径140±5.2nm，表面Zeta电位>5mV。所得载姜黄素/伊马替尼阳离子化纳米结晶温度敏感型凝胶制剂的凝胶化温度在28-30℃,在凝胶化温度以下时为液态，在凝胶化温度以上时为半固态。

Claims (32)

1.一种荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于，药物以表面富正电荷的纳米结晶形式存在，分散在适宜介质中。

2.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：药物纳米结晶表面附着了聚多巴胺包覆层，该聚多巴胺包覆层进行了氨基化修饰。

3.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：药物纳米结晶表面富正电荷，Zeta电位>+5mV，粒径在50-500nm之间。

4.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：所含药物为一种难溶性药物或多种难溶性药物的组合，占制剂重量分数0.01～10％范围内。

5.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：通过口服、阴道内、鼻腔内、口腔内、直肠内粘膜途径给药，或用于膀胱内或手术切缘用药给药途径。

6.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：用于分散药物纳米结晶的介质选自纯水、电解质溶液或温度敏感型凝胶基质中的任一种。

7.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：用于分散药物纳米结晶的电解质溶液成分选自氯化钠或磷酸盐缓冲盐、醋酸盐缓冲盐、枸橼酸盐缓冲盐等缓冲体系的一种或组合。

8.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：分散药物纳米结晶所用温度敏感型凝胶基质是基于泊洛沙姆类聚合物的温度敏感型凝胶。

9.按权利要求8所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：所述温度敏感型凝胶基质由泊洛沙姆407或泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的组合与纯水构成。

10.按权利要求9所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：所述温度敏感型凝胶基质可进一步含有电解质成分，如氯化钠、磷酸盐缓冲盐、醋酸盐缓冲盐或枸橼酸盐缓冲盐。

11.按权利要求9或10所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：所述温度敏感型凝胶基质含有质量分数在15～30％范围内的泊洛沙姆407和质量分数在0～30％范围内的泊洛沙姆188。

12.按权利要求11所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：所述温度敏感型凝胶基质含有质量分数在15～30％范围内的泊洛沙姆407、质量分数在0～30％范围内的泊洛沙姆188，总摩尔浓度在100～400mM范围内的醋酸盐缓冲盐，pH在4.5～7.5范围内。

13.权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂的制备方法，其特征在于：其包括步骤。

1)药物纳米结晶的制备：采用成膜水化法、机械研磨法、高压乳匀法或微沉淀法；

2)药物纳米结晶的聚多巴胺包覆：向所述药物纳米结晶混悬液中加入盐酸多巴胺，室温搅拌反应，使多巴胺在药物纳米结晶表面形成聚合附着层，离心洗涤除去未反应的小分子；

3)药物纳米结晶的阳离子化：向所述包覆了聚多巴胺层的药物纳米结晶混悬液中加入氨基化试剂，室温搅拌反应得阳离子化纳米结晶，离心洗涤除去未反应的氨基化试剂；

4)药物纳米结晶的分散：将所述包覆了阳离子化药物纳米结晶通过搅拌分散到纯水、电解质溶液或温度敏感型凝胶基质中。

14.按权利要求13所述的方法，其特征在于：其中步骤1)采用成膜水化法制备药物纳米结晶，包括：将药物和稳定剂溶解在易挥发有机溶剂中，减压条件下旋转蒸发，除去溶剂，使药物和稳定剂在容器内壁上形成薄膜，真空干燥后，加入纯水，振摇涡旋，即得药物纳米结晶。

15.按权利要求14所述方法，其特征在于：稳定剂是α-琥珀酸生育酚聚乙二醇酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、吐温80、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇、胆酸钠中的一种或组合。

16.按权利要求14所述的方法，其特征在于：稳定剂与药物的摩尔比例在1:2～5:1范围内。

17.按权利要求14所述的方法，其特征在于：将药物、稳定剂和枸橼酸一起溶于易挥发有机溶剂中，进行后续操作，水化时采用碳酸氢钠水溶液。

18.按权利要求17所述的方法，其特征在于：枸橼酸与碳酸氢钠的摩尔比例在1:1～1:10范围内，碳酸氢钠水溶液的浓度在1～10mg/mL范围内。

19.按权利要求13所述的方法，其特征在于：步骤2)中盐酸多巴胺与药物的摩尔比例在1:1～20:1范围内。

20.按权利要求13所述的方法，其特征在于：步骤2)中盐酸多巴胺聚合包覆的反应时间控制在2～6小时范围内。

21.按权利要求13所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述氨基化试剂的化学结构中应含有两个氨基、一个氨基和一个带保护基团的氨基或一个巯基和一个带保护基团的氨基。

22.按权利要求21所述的方法，其特征在于：步骤3)中，当所述氨基化试剂的化学结构中存在带保护基团的氨基时，离心洗涤除去未反应的氨基化试剂之后，应脱去氨基的保护基。

23.按权利要求21所述的方法，其特征在于：步骤3中所述氨基化试剂是N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷，与药物的摩尔比例在50:1-5:1范围内。

24.按权利要求23所述的方法，其特征在于：离心洗涤除去未反应的氨基化试剂后，加酸脱去N-(叔丁氧羰基)保护基，反应体系pH控制在1-3范围内。

25.按权利要求13所述的方法，其特征在于：其中步骤1)采用研磨法制备药物纳米结晶，包括，采用球磨机，在含有稳定剂的球磨液体介质存在的条件下，将药物粉碎到纳米级别。

26.按权利要求25所述的方法，其特征在于：进行球磨粉碎时，球料比在4:1-16:1范围内，球磨转速在4:1-16:1范围内，球磨时间在4-16小时范围内，球磨温度在0～40℃范围内，球磨液体介质在10～150毫升范围内。

27.按权利要求25所述的方法，其特征在于：球磨液体介质的溶剂为去离子水，所含稳定剂是羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、α-琥珀酸生育酚聚乙二醇酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、吐温80、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇、胆酸钠中的一种或组合，所含稳定剂的质量分数可以是0.1-10％。

28.按权利要求13所述的方法，其特征在于：其中步骤1)采用沉淀法制备药物纳米结晶。

29.按权利要求1所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：药物纳米结晶分散在冷冻干燥保护剂中，以冷冻干燥的方式获得药物纳米结晶与冷冻干燥保护剂的固体混合物。

30.按权利要求29所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：冷冻干燥保护剂选自葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇或水苏糖。

31.按权利要求29所述的荷正电药物纳米结晶制剂，其特征在于：其中，所述制剂直接以撒布的方式施用于手术切缘或粘膜表面，或以纯水复溶后用于粘膜给药。

32.按权利要求29所述制剂的制备方法，其特征在于：采用同权利要求13所述方法步骤1)-3)操作后，所得药物纳米结晶分散在冷冻干燥保护剂水溶液中，进行冷冻干燥，即得。