CN109331058B - 一种具有抗病毒作用的中药提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药技术领域，具体公开了一种具有抗病毒作用的中药提取物及其制备方法和应用。所述具有抗病毒作用的中药提取物的制备方法具体包含如下步骤：(1)将皂刺用乙醇提取，得皂刺醇提取物；(2)将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取，得皂刺乙酸乙酯萃取物；进一步地，将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，先用体积分数为25～30％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用体积分数为40～45％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为40～45％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物。由该方法制备得到的中药提取物对流感病毒、乙肝病毒或呼吸道合胞病毒具有很好的抗病毒效果，尤其是对呼吸道合胞病毒，其抗病毒效果更显著。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种具有抗病毒作用的中药提取物及其制备方法和应用。
背景技术
皂刺为豆科植物皂荚的干燥棘刺，又名皂荚刺、天丁、皂角针、皂针，其拉丁名为Gleditsia sinensis Lam.性辛、温，其主治功能为：消毒透脓；搜风；杀虫。主痈疽肿毒；瘰疬；疮疹顽癣；产后缺乳；胎衣不下；疠风。虽然有现有技术报道了皂刺具有抗菌、抗炎、抗病毒.免疫调节、抗凝血和抗癌等作用。但现有技术对皂刺的研究不够透彻，如病毒具有多种多样，皂刺是否对所有的病毒都有抑制作用，对哪种病毒抑制作用最显著，这是本领域研究人员研究的重点之一；更进一步地，皂刺中存在的化学成分众多，并不是每种成分都具有抗病毒作用，而哪些化学成分或有效部位具有抗病毒作用，哪些没有抗病毒作用，哪些成分或有效部位对于哪些病毒效果显著，这仍需研究人员进一步研究探索的。
因此，为了得到抗病毒效果更好的有效部位或得到针对某种病毒效果显著的有效部位，对皂刺做进一步的抗病毒开发具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，一种具有抗病毒作用的中药提取物的制备方法。由该方法制备得到的中药提取物对流感病毒、乙肝病毒或呼吸道合胞病毒具有很好的抗病毒效果，尤其是对呼吸道合胞病毒，其抗病毒效果更显著，明显优于流感病毒和乙肝病毒。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种具有抗病毒作用的中药提取物的制备方法，所述的中药为皂刺，具体包含如下步骤：
(1)将皂刺用乙醇提取，得皂刺醇提取物；
(2)将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取，得皂刺乙酸乙酯萃取物；即所述的具有抗病毒作用的中药提取物。
优选地，所述的乙醇为体积分数为70～100％的乙醇。
最优选地，所述的乙醇为体积分数为80％的乙醇。
优选地，所述的提取为加热回流提取。
优选地，进一步还包括大孔树脂洗脱步骤，所述的大孔树脂洗脱步骤如下：
将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，先用体积分数为25～30％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用体积分数为40～45％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为40～45％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物。
进一步优选地，所述的大孔树脂洗脱步骤如下：
将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，先用体积分数为28％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物。
最优选地，所述的大孔树脂洗脱步骤如下：
将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，先用2～4倍柱体积的体积分数为25～30％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用4～6倍柱体积的体积分数为40～45％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为40～45％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物；
所述的大孔树脂洗脱步骤如下：将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，先用3倍柱体积的体积分数为28％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物。
优选地，所述的大孔树脂为非极性大孔吸附树脂。
所述的柱体积是指用大孔树脂装柱后，从柱底到大孔树脂沉积表面的体积。
优选地，所述的病毒为流感病毒、乙肝病毒或呼吸道合胞病毒。
上述制备方法制备得到的具有抗病毒作用的中药提取物。
优选地，所述的病毒为流感病毒、乙肝病毒或呼吸道合胞病毒。
有益效果：本发明提供了一种全新的皂刺提取物的制备方法，由该方法制备得到的皂刺提取物具有很好的抗流感病毒、乙肝病毒和呼吸道合胞病毒作用，尤其是对呼吸道合胞病毒，其抗病毒效果更显著；进一步地，通过本发明所述的大孔树脂柱层析步骤能进一步富集到抗呼吸道合胞病毒更好的有效成分。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1中药提取物的制备
(1)将皂刺用体积分数为80％的乙醇加热回流提取，提取1次，时间为2h，将提取液浓缩至浸膏状得皂刺醇提取物；所述的皂刺与乙醇的用量比为1g：5mL；
(2)将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩干燥即得皂刺乙酸乙酯萃取物；即所述的具有抗病毒作用的中药提取物；所述水的重量用量与皂刺醇提取物的重量用量比为30:1；每次萃取过程中乙酸乙酯的体积用量与水的体积用量相同。
实施例2中药提取物的制备
(1)将皂刺用体积分数为80％的乙醇加热回流提取，提取1次，时间为2h，将提取液浓缩至浸膏状得皂刺醇提取物；所述的皂刺与乙醇的用量比为1g：5mL；
(2)将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩干燥即得皂刺乙酸乙酯萃取物；所述水的重量用量与皂刺醇提取物的重量用量比为30:1；每次萃取过程中乙酸乙酯的体积用量与水的体积用量相同；
(3)将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱(大孔树脂柱中装填皂刺乙酸乙酯萃取物重量30倍的D101型大孔树脂)，先用3倍柱体积的体积分数为28％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为42％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物。
对比例1中药提取物的制备
(1)将皂刺用体积分数为80％的乙醇加热回流提取，提取1次，时间为2h，将提取液浓缩至浸膏状得皂刺醇提取物；所述的皂刺与乙醇的用量比为1g：5mL；
(2)将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩干燥即得皂刺乙酸乙酯萃取物；所述水的重量用量与皂刺醇提取物的重量用量比为30:1；每次萃取过程中乙酸乙酯的体积用量与水的体积用量相同；
(3)将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱(大孔树脂柱中装填皂刺乙酸乙酯萃取物重量30倍的D101型大孔树脂)，先用3倍柱体积的体积分数为30％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积分数为50％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为50％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药提取物。
对比例1与实施例2的不同之处在于步骤(3)的大孔树脂洗脱条件不同。
对比例2中药提取物的制备
(1)将皂刺用体积分数为80％的乙醇加热回流提取，提取1次，时间为2h，将提取液浓缩至浸膏状得皂刺醇提取物；所述的皂刺与乙醇的用量比为1g：5mL；
(2)将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩干燥即得皂刺乙酸乙酯萃取物；所述水的重量用量与皂刺醇提取物的重量用量比为30:1；每次萃取过程中乙酸乙酯的体积用量与水的体积用量相同；
(3)将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱(大孔树脂柱中装填皂刺乙酸乙酯萃取物重量30倍的D101型大孔树脂)，先用3倍柱体积的体积分数为45％的乙醇水溶液洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积分数为60％的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为60％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药提取物。
对比例2与实施例2的不同之处在于步骤(3)的大孔树脂洗脱条件不同。
实施例3中药提取物抗病毒活性测试
取长满单层MDCK细胞层的96孔细胞培养板，弃去上清液后用PBS洗两到三遍，加入100μL/孔的100TCID50病毒液吸附1h，然后每孔分别加入用MEM倍比稀释的药液100μL，同时设细胞对照组、病毒对照组、空白对照组。置于37℃，饱和湿度，5％CO2培养箱中孵育。48h后，吸弃96孔板中的旧液，用CCK8原溶液稀释十倍，再分别按每孔100μL加入被测试孔中。培养箱孵育1h后，用酶标仪在450nm测吸光度，并计算IC50值。
IC50计算方式如下：细胞存活率＝(加药孔OD值－病毒对照组OD值)/(细胞对照组OD值－病毒对照组OD值)×100％；以药物浓度为X轴，细胞存活率为Y轴，在Origin作图，求出50％细胞存活率对应的浓度则为IC50。试验结果见表1，试验结果中IC50值越小说明抗病毒效果越好。
上述实验中病毒液选用甲型H1N1流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、呼吸道合胞病毒(RSV)。
上述实验中的药液分别为含有实施例1～2以及对比例1～2的中药提取物的药液。
表1.中药提取物抗病毒活性测试结果表
从表1数据中可以看出，实施例1和2制备得到的中药提取物具有抗H1N1流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)以及呼吸道合胞病毒(RSV)作用，尤其是对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用要明显好于H1N1流感病毒和乙型肝炎病毒(HBV)。
从实施例1和2对比实验可以看出，经大孔树脂柱层析后得到的中药提取物，其抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用大幅提高，但对抗H1N1流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒能力并未得到提升；这说明经本发明大孔树脂柱层析后能够富集大量的抗呼吸道合胞病毒(RSV)的成分，但经大孔树脂富集后的成分虽然也具有对H1N1流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒能力，但对H1N1流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒能力并未提升。
从实施例2和对比例1、2相比，在其它大孔树脂柱层析条件下制备得到的中药提取物，其对H1N1流感病毒、乙型肝炎病毒(HBV)以及呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制能力要显著低于在本发明大孔树脂柱层析条件下制备得到的中药提取物。
Claims (1)
1.具有抗病毒作用的中药提取物在制备抗病毒药物中的应用；所述的中药
提取物的制备方法，具体包含如下步骤：
（1）将皂刺用体积分数为80%的乙醇加热回流提取，提取1次，时间为2h，将提取液浓缩至浸膏状得皂刺醇提取物；所述的皂刺与乙醇的用量比为1g：5mL；
（2）将制备得到的皂刺醇提取物加水混悬，然后直接用乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩干燥即得皂刺乙酸乙酯萃取物；所述水的重量用量与皂刺醇提取物的重量用量比为30:1；每次萃取过程中乙酸乙酯的体积用量与水的体积用量相同；
（3）将皂刺乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，其中大孔树脂柱中装填皂刺乙酸乙酯萃取物重量30倍的D101型大孔树脂；先用3倍柱体积的体积分数为28%的乙醇水溶液洗脱除杂；再用5倍柱体积的体积分数为42%的乙醇水溶液洗脱；收集体积分数为42%的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗病毒作用的中药提取物；
所述的病毒为呼吸道合胞病毒。
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