CN109331025A - 羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用，属于微生物传染病及医药领域。本发明发现羟氯扎胺能够抑制猪链球菌的生长，并对猪链球菌感染的小鼠有保护效果，其具有制备抗猪链球菌的药物、制备预防或治疗猪链球菌感染的药物的应用。本发明发现了羟氯扎胺新的药用价值，为猪链球菌感染提供了新的防治药物。通过使用羟氯扎胺可以达到同时驱虫和预防猪链球菌感染的双重目的。羟氯扎胺与头孢等人用抗生素无交叉耐药性，可以避免出现对人用抗生素的耐药菌株出现。

Description

羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用

技术领域

本发明涉及微生物传染病及医药领域，具体涉及羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用。

背景技术

猪链球菌(S.suis)是一种常见病原体，其感染猪可引起宿主多种疾病，包括脑膜炎、关节炎、化脓性淋巴结炎、败血症、肺炎和心内膜炎等。各年龄阶段的猪均可发病，其中败血症型和脑膜脑炎型多见于仔猪，化脓性淋巴结炎型多见于中猪。由于病猪、临床康复猪和健康猪均可带菌，所以不宜被察觉，当健康猪群引入带菌猪后，由于互相接触，病菌可通过口、鼻、皮肤伤口而传染，从而留下隐患，一旦季节交替或者饲喂出现不当易爆发感染，从而给养猪业造成严重的损失。值得警惕的是，链球菌还可以通过皮肤上的伤口或通过口腔或鼻腔粘膜感染与病猪、携带猪或生猪肉接触的人，感染人类后可引起人类的脑膜炎、心内膜炎和链球菌中毒性休克综合征(STSLS)。到目前为止，全世界已报告超过1642例人类猪链球菌感染。此外，由于药物的不合理使用，链球菌耐药现象也日趋严重，间接加重了药物残留现象。

发明内容

本发明的目的在于提供兽用驱虫药羟氯扎胺新的应用，即提供羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明发现羟氯扎胺能够抑制猪链球菌的生长，并对猪链球菌感染的小鼠有保护效果。基于此，本发明提供羟氯扎胺的如下应用：羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用；羟氯扎胺在制备预防或治疗猪链球菌感染的药物中的应用。其中，羟氯扎胺的结构式如下所示：

本发明具有如下优点和有益效果：

(1)本发明发现了羟氯扎胺新的药用价值，为猪链球菌感染提供了新的防治药物。

(2)养殖业可以调整生产周期，在猪链球菌容易爆发的时期进行驱虫，通过使用羟氯扎胺可以达到同时驱虫和预防猪链球菌感染的双重目的。

(3)羟氯扎胺与头孢等人用抗生素无交叉耐药性，可以避免出现对人用抗生素的耐药菌株出现。

附图说明

图1是实施例2使用WST-1法检测羟氯扎胺对vero细胞毒性的结果图。

图2是实施例3溶血试验结果图。

图3是实施例4小鼠存活率结果图。

图4是实施例5小鼠的血液及组织细菌量计数结果图，***：P<0.001。

具体实施方式

以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

下述实施例中所用到的猪链球菌SC19菌株为2005年中国四川省疫情爆发时从死猪脑中分离的毒力株。

实施例1

根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准测定羟氯扎胺对猪链球菌SC19菌株的MIC值。

将药物溶于DMSO配成5120μg/mL的原液冻存在-20℃，使用时取出用PBS稀释10倍备用。将纯化的猪链球菌SC19划线接种于羊血琼脂平板上，37℃培养20h，采用比浊法计数法用生理盐水将菌落洗下并稀释菌液至终浓度为0.5麦氏比浊(1.5×10⁸CFU/mL)，再用MH+5％溶解马血的液体培养基将菌液1:100稀释后备用(此时菌液应该在15min内用完)。在96孔培养板中每孔加入50μLMH+5％溶解马血的液体培养基，取50μL稀释好的备用药液加入每排第一孔，吹打5～10次，充分混匀，再吸出50μL混匀的药液加到第二孔，如此倍比稀释到最后一孔后吸出50μL药液弃去，最后在每一孔加入备用菌液50μL，3个重复；同时设置不加药物只加培养基和细菌的3个重复孔作为对照，置37℃温箱中孵育20h，用酶标仪读取OD₆₀₀。结果见表1，测得羟氯扎胺对猪链球菌SC19的MIC值为4μg/mL。

表1各孔OD₆₀₀值

注：表中A-H分别为羟氯扎胺128μg/mL-1μg/mL倍比稀释。MIC判断标准是第一个不浑浊的孔中的药物浓度，即F孔4μg/mL的药物浓度。

实施例2

采用猴源vero细胞使用WST-1法检测羟氯扎胺对细胞的毒性。

vero细胞在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中于37℃、5％CO₂条件下培养。将vero细胞以70-80％汇合在96孔板中以100μL/孔培养基的体积培养。将系列稀释的化合物与细胞在37℃、5％CO₂中孵育24h，同时设置不加药物的纯细胞对照孔。孵育20h时各孔分别加入10μL WST-1溶液，4h后通过酶标仪使用490nm处的吸光度检测WST-1还原。计算药物孔相对于未加药物处理孔的荧光百分比，即药物孔OD₄₉₀/对照孔OD₄₉₀，得出细胞存活率。结果见图1，羟氯扎胺在MIC值的浓度范围内对细胞生长无明显抑制。

实施例3

在96孔板中，将50μL悬浮于PBS中的2％绵羊红细胞加入50μL在PBS中连续稀释的羟氯扎胺中，并在37℃下孵育1小时。然后将板在500g下离心5分钟，并将来自测定板的每个孔的50μL上清液转移到新鲜的96孔板中。用连续稀释的蜂毒肽处理的细胞作为阳性对照。通过目视观察是否有溶血现象，结果见图2，可以看到阳性对照蜂毒肽从2μg/mL开始引起溶血，羟氯扎胺在128μg/mL的最大测试浓度下都没有引起红细胞溶血，表明羟氯扎胺不会对哺乳动物细胞膜造成物理性破坏。

实施例4

将36只4周龄BALB/c小鼠，随机分成攻毒组、给药组、PBS组，每组12只小鼠。攻毒组、给药组小鼠以8×10⁸CFU的猪链球菌SC19腹腔注射进行攻毒，PBS组注射同样体积的PBS；给药组以2.5mg/kg的剂量于攻毒后1h注射一次，此后每24h通过腹腔注射给药一次，攻毒组、PBS组给予同样体积的PBS。连续观察小鼠7天，统计存活率。结果见图3，攻毒组12只小鼠均死亡，给药组12只小鼠共有5只存活，对照PBS组无死亡，表明羟氯扎胺对猪链球菌SC19感染有保护效果。

实施例5

将24只4周龄BALB/c小鼠，随机分成攻毒组、给药组、PBS组，每组8只小鼠。攻毒组、给药组小鼠以8×10⁸CFU的猪链球菌SC19腹腔注射进行攻毒，PBS组注射等体积的PBS；给药组于攻毒1h后以2.5mg/kg的剂量通过腹腔注射给药，攻毒组、PBS组给予等体积的PBS。12h后解剖小鼠，对小鼠的血液及组织中的细菌量计数，以评估药物对小鼠体内的细菌清除效果。结果见图4，单次给予羟氯扎胺的给药组比攻毒组菌量下降了两个数量级。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.羟氯扎胺在制备抗猪链球菌的药物中的应用。

2.羟氯扎胺在制备预防或治疗猪链球菌感染的药物中的应用。