CN109328057A - 用于药物应用的高浓度免疫球蛋白组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及液体组合物，其包含多克隆免疫球蛋白、至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸和至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸，其中超过90％的多克隆免疫球蛋白为单体或二聚体的形式，且小于5％为多聚体的形式，并且其中所述组合物中的免疫球蛋白浓度高于160g/L且pH为5.2至5.9。本发明还涉及用于医学治疗的液体组合物、用于配制高度浓缩多克隆免疫球蛋白的氨基酸、以及配制方法。

Description

用于药物应用的高浓度免疫球蛋白组合物
技术领域
本发明涉及液体组合物，其包含具有改善的处理、施用和储存特性的高浓度免疫球蛋白。
背景技术
免疫系统使用免疫球蛋白或抗体来识别和中和病原体(例如病毒和细菌)。因此，人免疫球蛋白浓缩物长期以来已用于治疗和预防疾病(例如感染性疾病和免疫缺陷)。
免疫球蛋白制剂通常静脉内(i.v.)、皮下(s.c.)或肌内(i.m.)施用。如果施用是通过皮下或肌内途径，那么对于患者便利性而言，免疫球蛋白制剂应具有低体积并因此具有高免疫球蛋白浓度，因为应用于皮下或肌肉组织的大体积可导致刺激和疼痛并可延长施用时间。
然而，蛋白质浓度的提高对蛋白质稳定性、聚集以及组合物的黏度有影响。除了构象稳定性方面，缔合和聚集在高蛋白质浓度方面是重要障碍，因为预期更高的分子碰撞速率提高分子间蛋白质缔合和随后的聚集。
此外，免疫球蛋白制剂通常在免疫球蛋白浓度提高期间(特别是由于蛋白质聚集的趋势)经历黏度的指数上升。
制剂黏度的提高限制了通过细注射针进行皮下施用的可注射性和适用性。另外，高黏度会在处理期间(例如在渗滤或填充期间)产生问题。因此，希望将待输注或注射的药物的黏度保持尽可能低。
还希望提供具有长储存稳定性的构象稳定的免疫球蛋白制剂。一般来说，免疫球蛋白的构象稳定性在等电点(isoelectric point，pI)附近很高(Mueller等.2013)。
然而，蛋白质的溶解度在pI时是最小的(Wang等，2008)，特别是对于更高浓度的IgG制剂，这可成为问题。
McCue及其同事表明，人血浆IgG中的pI为pH 4.5至11，在pH 7至pH 9显示出明显的最大值。该小组还发现在中性pH及高于中性pH值下寡聚物质提高且结合性能受到干扰(McCue等.1986)。
另一方面，在酸性条件下，由于较高的蛋白质表面电荷，构象稳定性下降(Chi等，2003)。值得注意的是，特别地，低于4的pH值可导致IgG的片段化(fragmentation)和聚集(Bolli等，2010；Wang等，2007；Vermeer等，2000或Szenczi等，2006)。
降低这样的免疫球蛋白浓缩物的黏度的一种方式是通过将浓缩物的pH值改变为高值或低值。例如，WO 02/30463 A2描述了通过以50至200mM的浓度添加缓冲液或盐，将制剂的pH值改变为较低值(4.0至5.3)或升高的值(6.5至12.0)来将浓缩的免疫球蛋白组合物的黏度降低至少80g/L浓度的方法。作为替代，该文献建议通过添加盐或缓冲组分来提高制剂的总离子强度。
如实施例1和图1中所示，pH的降低导致蛋白质稳定性降低和解折叠的倾向。在长期储存期间，结果是提高的蛋白质片段化。另一方面，pH值提高至6.5至9的值降低了免疫球蛋白的溶解度，而高于10的pH值在长期储存期间诱导构象不稳定性。
对于其他药物制剂(即包含单克隆抗体的制剂)，WO 2013/063510A1描述了氨基酸用于降低黏度的用途。然而，尚不清楚这些发现是否适用于高度浓缩人血浆来源的免疫球蛋白，并且(如果是这样的话)尚不清楚无数的氨基酸和氨基酸组合中的哪一种会具有降低黏度的作用。
因此，本发明的一个目的是提供用于稳定高浓度的人血浆来源免疫球蛋白的制剂。
发明概述
本发明尤其基于以下发现：配制具有以下之组合的高度浓缩免疫球蛋白组合物导致具有降低的黏度和提高的稳定性的组合物：一定的微酸性pH范围(特别是pH 5.5至5.9)与添加某些氨基酸浓度的稳定化氨基酸(stabilizing amino acid)(例如甘氨酸或脯氨酸)和黏度降低氨基酸(viscosity reducing amino acid)(例如组氨酸或精氨酸)。
因此，本发明提供了液体组合物，其包含多克隆免疫球蛋白、至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸(viscosity modulating amino acid)和至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸，其中超过90％的多克隆免疫球蛋白为单体(monomer)或二聚体(dimer)的形式且少于5％为多聚体(polymer)的形式，并且其中所述组合物中的免疫球蛋白浓度高于160g/L且pH为5.5至5.9。
该组合导致高度浓缩免疫球蛋白组合物，其黏度足够低以允许组合物的良好加工以及充分的可注射性。此外，组合物中的免疫球蛋白足够稳定以进行长期储存。这意味着免疫球蛋白片段的产生被最小化并且免疫球蛋白具有低的形成多聚体的趋势。
在第二方面，本发明涉及根据第一方面的液体组合物，其用于医学治疗。
根据第三方面，本发明涉及配制高度浓缩多克隆免疫球蛋白组合物的方法，其包括提供高度浓缩多克隆免疫球蛋白组合物、将组合物的pH调节至5.5至5.9的值、以及添加至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸和至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸的步骤。
附图说明
图1示出了包含人血浆来源IgG的组合物的热转变曲线。热转变曲线表示根据温度的组合物摩尔热容量，并通过DSC测量确定。所述组合物包含IgG、20mM NaCl、20mM乙酸钠，并且如图所示pH不同(pH 4.5、5.0、5.5、5.9、6.2)。曲线的局部最大值表示解折叠转变。确定每条曲线的第一最大值(Tm1)的确切温度。所述IgG溶液在不同pH值下的Tml-温度为：对于pH＝4.5为61.3℃，对于pH＝5.0为66.2℃，对于pH＝5.5为69.2℃，对于pH＝5.9为70.6并且在pH＝6.2时为71.0℃。
图2定性地示出了IgG制剂的pH与IgG多聚体的分数之间的关系。通过SEC测量IgG组合物(20mM NaCl，20mM乙酸钠)的IgG多聚体分数，并基于多种pH值下的总IgG以％进行定义。
图3示出了包含人血浆来源IgG的组合物的热转变曲线。热转变曲线表示根据温度的组合物摩尔热容量并通过DSC测量确定。该组合物包含IgG、20mM NaCl、20mM乙酸钠，且pH为5.7。该组合物还包含如图中所示的230mM浓度的精氨酸、甘氨酸、脯氨酸或组氨酸中的任一种。曲线的局部最大值表示解折叠转变。
图4示出了不同氨基酸的浓度对包含人血浆来源IgG的组合物的动态黏度的影响。向pH为5.7的包含20mM NaCl和20mM乙酸钠的组合物添加氨基酸至终浓度为250mM，并且测定所得的动态黏度(Y-轴)。所得组合物含有甘氨酸和不同摩尔分数(在X轴上表示)的组氨酸或精氨酸。随着精氨酸或组氨酸浓度的提高，动态黏度显著降低。
图5示出了包含人血浆来源IgG的组合物的热转变曲线。热转变曲线表示根据温度的组合物摩尔热容量并通过DSC测量确定。该组合物包含IgG、20mM NaCl、20mM乙酸钠，且pH为5.7。此外，所测量的组合物含有50mM精氨酸、230mM精氨酸，或者75mM精氨酸和175mM甘氨酸的混合物，或不含氨基酸(“无添加物”)，如图中所示。
图6示出了IgG浓度与含有和不含氨基酸添加物的IgG组合物的动态黏度的相关性。相对于天然的未经氨基酸稳定化的制剂，使用精氨酸和甘氨酸的组合可降低高度浓缩人血浆来源IgG溶液中的黏度。该曲线代表具有20mM NaCl、20mM乙酸钠、pH 5.7、不同的IgG浓度的IgG组合物。由黑点表示的组合物含有75mM精氨酸和175mM甘氨酸，由圆圈表示的组合物不含添加物(“无添加物”)。
发明详述
根据第一方面，本发明提供了液体组合物，其包含多克隆免疫球蛋白、至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸和至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸，其中超过90％的多克隆免疫球蛋白为单体或二聚体的形式，且小于5％为多聚体的形式，并且其中所述组合物中的免疫球蛋白浓度高于160g/L，且pH为5.5至5.9。
根据本发明的多克隆免疫球蛋白来源于人血浆。根据本发明的多克隆免疫球蛋白可包含免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)。多克隆免疫球蛋白特别地为人IgG浓缩物。那么IgG浓缩物通常包含不同的杂质，例如其他免疫球蛋白(例如IgA或IgM)和其他血液蛋白质(例如白蛋白)。
免疫球蛋白制剂的主要成分是免疫球蛋白。因此，在根据本发明的组合物中，基于总蛋白质，免疫球蛋白的含量大于90％，优选大于95％，更优选大于98％。
本文中使用的总蛋白质是指用双缩脲测定(Biuret-Assay)确定的总蛋白质浓度，所述双缩脲测定基于当在碱性pH下铜-(II)-离子与氨基反应时紫色的显色。
根据本发明的免疫球蛋白G(IgG)浓缩物可例如如WO 2005/082937 A2中所述制备。因此，原料是根据冷乙醇级分技术(例如Cohn，Kistler-Nitschmann或其修改)从血浆汇集物制备的级分I+II+III。然后可使用辛酸盐沉淀和阴离子交换色谱法处理重构的级分I+II+III。专用病原体安全步骤包括溶剂/洗涤剂(solvent/detergent，S/D)处理，随后的S/D试剂去除以及纳米过滤。
对于针对进一步降低杂质负载(impurity load)的产品改进方法，可并入另外的措施，例如通过与基于如WO-A2-01/27623中所公开的某些三糖的亲和树脂接触来降低血凝素。出于病原体安全性原因，这些免疫球蛋白制备方法通常包括至少溶剂/洗涤剂(S/D)处理和纳米过滤步骤。
本文中使用的术语“免疫球蛋白”是指与特定抗原结合的蛋白质。免疫球蛋白包括但不限于多克隆、单克隆、嵌合和人源化抗体，并包括以下类别：IgA、IgG、IgM、IgD和IgE。免疫球蛋白通常包含两条相同的重链和轻链。然而，本文中使用的术语免疫球蛋白还包括片段(例如单链免疫球蛋白)以及蛋白质二聚体、多聚体或聚集体(aggregate)。
通过分子大小分布测量证实，根据本发明的液体组合物中的多克隆免疫球蛋白显示出低水平的多聚化。这意味着多克隆免疫球蛋白包含总和至少90％的单体和二聚体以及至多5％的多聚体。此外，多克隆免疫球蛋白仅显示低程度的片段化。这意味着至多5％的多克隆免疫球蛋白是片段(fragment)。通过尺寸排阻高压液相色谱测量的聚集体、二聚体、单体和片段的曲线下面积计算百分比。应注意的是，在本文件中，在聚集体和多聚体之间或在聚集和多聚化之间没有严格区分，原因是技术人员知晓意指分子量高于免疫球蛋白二聚体之分子量的分子或分子簇(其各自形成过程)。因而，免疫球蛋白的单体、二聚体、多聚体和片段的总和为100％。根据药典，至多5％的多聚体百分比显著低于所需的阈值。
在本发明的一个优选实施方案中，多克隆免疫球蛋白包含总和为至少94％的单体和二聚体、至多5％的多聚体和至多5％的片段。这意味着，由于百分比总是基于单体、二聚体、多聚体和片段的总和，因此多聚体和片段的总和小于6％。
本文中使用的分子大小分布通过亲水性硅胶适于对相对分子量为10000至500000的球状蛋白质进行分级的尺寸排阻高压液相色谱(SE-HPLC或SEC)测量，并用分光光度计在280nm处检测。结果作为聚集体、二聚体、单体和片段的曲线下面积％报告。
根据本发明的液体组合物中的免疫球蛋白浓度高于160g/L。低于该值的免疫球蛋白浓度不认为是高度浓缩免疫球蛋白组合物。较低浓度的免疫球蛋白组合物不像高度浓缩免疫球蛋白组合物那样经历黏度问题。
根据本发明，如果没有另外说明，则免疫球蛋白浓度由SEC测定。用与用于分子大小分布相同的设备通过SEC对免疫球蛋白进行测定。为了获得定量结果，有必要将获得的免疫球蛋白样品的曲线下面积与通过用已知免疫球蛋白浓度的校准材料建立校准曲线获得的值进行比较。对于足够纯的免疫球蛋白组合物，不需要对获得的值进行额外的校正。
液体组合物的pH为5.5至5.9。如引言中所述，当接近中性pH值时，IgG溶解度和伴随的IgG形成多聚体和聚集体的倾向提高。然而，如图2中示出的实例中所示，多聚体的百分比仍可接受。不推荐使用更高的pH值，因为这可能导致显著更高的聚集。因此，根据本发明的最大pH为5.9。
另外，液体免疫球蛋白组合物的pH值存在下限。如实施例1中所示，与5.5至6.2的较高pH值相比，组合物中免疫球蛋白的热力学稳定性在4.5和5.0的pH值下显著降低。由此可推测，就蛋白质稳定性和片段化而言，5.2的pH值可能是可接受的。然而，pH范围在pH 5.5至pH 5.9之间时，可保持热力学稳定的条件而不接近pI分布的最大值。
如果没有另外说明，那么本文中使用的组合物的黏度是动态黏度。根据本发明，动态黏度用来自AntonGmbH(Austria)的Automated Microviscositymeter“AMVn”在+20.0℃的温度和50°的毛细管倾斜角下测定。根据仪器使用说明书进行该测定。测量的结果是运动黏度。此外，为了获得动态黏度，还用来自AntonGmbH(Austria)的“DMA4500M”密度计在相同温度下测定密度。运动黏度与密度的乘积是动态黏度。
使用差示扫描量热法(Differentialscanning Calorimetry，DSC)来评估蛋白质对热变性的稳定性。关于量热参考，测量蛋白质热解折叠时的焓变化和单个或多个转变的热解折叠中点(Tm)。DSC被认为是在一定的期望时间(保质期)内预估蛋白质聚集的合理技术，尤其是在当希望根据构象稳定性的对(配制)条件进行排序的情况下时(Mueller等，2013和Weiss等，2009)。
在长期的储存聚集期间，可发生免疫球蛋白的多聚化和片段化，以及单体和二聚体级分之和的相应降低。
应注意的是，在本文件中，在聚集体和多聚体之间或在聚集和多聚化之间没有严格区分，因为技术人员知晓意指分子量高于免疫球蛋白二聚体之分子量的分子或分子簇(其各自形成过程)。
本文中使用的限定时间跨度的“储存稳定性”意指组合物中的免疫球蛋白具有总合大于90％单体和二聚体、至多5％多聚体和至多5％片段的分子大小分布，并且其中在限定的时间跨度内储存后，单体、二聚体、多聚体和片段的总和为100％。例如，如果定义免疫球蛋白组合物具有60个月的储存稳定性，则意味着分子大小分布至少60个月显示超过总和为90％的单体和二聚体、至多5％的多聚体和至多5％的片段。
根据本发明的液体组合物包含两种类型的氨基酸。第一类型是选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸。如实施例4中所示，向免疫球蛋白组合物添加精氨酸和组氨酸中的任一种导致具有高浓度免疫球蛋白的组合物的黏度显著降低。使用这两种黏度调节氨基酸，可将制剂的黏度调节至优选用于通过注射器施用组合物的值。
根据本发明的液体组合物中的第二类型氨基酸是稳定化氨基酸。所述稳定氨基选自甘氨酸和脯氨酸。如实施例3中所示，甘氨酸或脯氨酸的添加均导致热稳定性的显著提高。
此外，如实施例5和6中所示，黏度调节氨基酸和稳定化氨基酸的组合具有这两种作用。从实施例5甚至可以看出，稳定化和黏度调节氨基酸的组合导致仅与稳定化氨基酸相同的稳定化。而且，当添加至黏度调节氨基酸时，稳定化氨基酸对组合物的黏度没有负面影响。
根据一个实施方案，液体组合物的免疫球蛋白浓度为150至300g/L，优选免疫球蛋白浓度为160至260g/L。当免疫球蛋白浓度超过300g/L时，根据本发明的组分不再可将黏度降低至可通过注射器处理或施用液体组合物的范围。如实施例中所示，高至260g/L浓度的制剂可获得有合理黏度和长期储存稳定性。
液体组合物的pH为5.5至5.9。5.9的pH值与免疫球蛋白(特别是IgG)的等电点具有足够的距离。因此，与6.2的值相比，5.9的值导致多聚体或聚集体的形成较少。因此，将pH保持在低于5.9可能导致更稳定且更少聚集的制剂。如图2中所示，当pH从5.5降至5.0时，末端不稳定性强烈提高。因此，甚至5.2的pH可能适合于根据本发明的液体组合物，最小的pH5.5提供了液体组合物中免疫球蛋白的更高稳定性。在pH为5.7时获得了关于黏度和稳定性的非常好的结果。因此，根据一个实施方案，pH为5.6至5.8，特别是pH为约5.7。
根据一个实施方案，液体组合物的特征在于蛋白质浓度为160至180g/L，动态黏度为5至≤12mPa*s。根据一个替代实施方案，液体组合物的特征在于蛋白质浓度高于180至220g/L，且动态黏度为＞12至≤35mPa*s。根据另一个替代实施方案，液体组合物的特征在于蛋白质浓度为高于220至260g/L，且动态黏度为＞35至100mpa*s。
根据本发明的一个实施方案，一种或更多种稳定化氨基酸和一种或更多种黏度调节氨基酸的浓度，即稳定化氨基酸和黏度调节氨基酸的总浓度为100至400mM。低于100mM的总浓度，单个黏度调节和稳定化氨基酸的浓度将不足以提供具有合适黏度和长期稳定性的高度浓缩免疫球蛋白组合物。
根据一个优选的实施方案，稳定化和黏度降低氨基酸的总浓度为150至350mM。如实施例(特别是实施例7)中所示，该范围内的总氨基酸浓度导致免疫球蛋白组合物的长期储存稳定性。
使用约250mM的稳定化和黏度调节氨基酸的总浓度获得特别好的结果。因此，根据一个优选的实施方案，稳定化和黏度调节氨基酸的总氨基酸浓度为200至300mM，更优选225至275mM，最优选约250mM。
根据一个实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸。根据另一个实施方案，稳定化氨基酸是脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸。根据另一个替代实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸或脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸和组氨酸。根据另一个替代实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸和脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸。根据另一个实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸和脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸和组氨酸。根据一个优选的实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸。
根据一个实施方案，液体组合物中黏度调节氨基酸的浓度为50至100mM。低于50mM时，黏度调节氨基酸的黏度降低效果通常不足以使组合物的黏度达到合适的值。高于100mM的值，黏度调节氨基酸的去稳定化作用变得如此太强，以至于其中应存在极高浓度的稳定化氨基酸以抵消去稳定化作用，因此氨基酸的总浓度将超过400mM。
优选地，黏度调节氨基酸的浓度为60至90mM。如实施例中所示，特别是对于精氨酸，发现75mM的浓度在黏度降低和稳定化方面提供了最好的结果。因此，优选地，黏度调节氨基酸的浓度为65至85mM，最优选70至80mM，特别是约75mM。根据一个优选的实施方案，液体组合物含有浓度为70至80mM的精氨酸。
根据一个实施方案，稳定化氨基酸的浓度为80至300mM。低于80mM的浓度，推测稳定作用不能抵消黏度调节氨基酸的去稳定化作用。高于300mM的浓度，氨基酸的总浓度达到氨基酸可能干扰免疫球蛋白功能的范围。
发现特别地用于稳定化氨基酸甘氨酸的优选浓度为175mM，参见实施例7。因此，根据一个优选的实施方案，稳定化氨基酸的浓度为130至220mM。根据一个更优选的实施方案，浓度为160至190mM。更优选的稳定化氨基酸浓度为170至180mM。特别地，浓度为约175mM。根据一个优选的实施方案，液体组合物含有浓度为170至180mM的稳定化氨基酸。
如实施例7中所示，根据本发明的液体组合物中的免疫球蛋白在2至8℃的低温或在室温下(其为在15℃到27℃)显示长期存储稳定性。
根据一个实施方案，液体组合物中免疫球蛋白的储存稳定性在2至8℃的温度下为至少40个月。优选地，储存稳定性在2至8℃的温度下的期限为至少60个月，更优选至少69个月。在23至27℃的储存温度下，根据本发明的液体组合物中免疫球蛋白的储存稳定性的期限为至少12个月储存，更优选至少24个月储存，且最优选至少40个月储存。
另一些赋形剂或稳定剂也可存在于本发明的免疫球蛋白制剂中，但对于获得要求保护的稳定性不是必需的。根据一个实施方案，液体组合物可含有一种或更多种表面活性剂、洗涤剂或糖类。液体组合物还可含有表面活性剂、洗涤剂或糖类中各自的一种或更多种。合适的糖类的实例是麦芽糖、山梨糖醇、甘露糖、松三糖或葡萄糖。合适的表面活性剂的实例是聚山梨酯。聚山梨酯优选以5至60mg/L存在。
根据一个实施方案，液体组合物另外含有选自乙酸钠、氯化钠或柠檬酸二氢钠的盐。优选地，液体组合物包含乙酸钠和NaCl。乙酸钠优选以10至50mM的浓度存在。更优选地，乙酸钠以约20mM的浓度存在。NaCl优选以10至50mM的浓度存在。更优选地，NaCl以约20mM的浓度存在。根据一个实施方案，乙酸钠和NaCl均以约20mM的浓度存在。
根据本发明的一个实施方案，液体组合物实际上不含血栓形成因子，并且具有小于2mIU/ml的FXIa样活性，指的是使用NIBSC FXIa参考标准通过Technoclone(Austria)的凝血酶生成测定(Thrombin Generation Assay，TGA)测定的5％总蛋白质溶液。
根据一个实施方案，当通过直接库姆斯试验(Direct Coombs Test)测定时，本发明的液体组合物对于抗A(anti-A)具有降低至≤16，且对于抗B(anti-B)具有≤8的血凝素效价。
根据本发明，根据药典欧洲药典中定义的方案进行直接库姆斯测试。简言之，在该测定中，抗A或抗B抗体与木瓜蛋白酶接触，并确定效价，所述效价是观察到凝集的最高稀释度。
本发明的一些优选实施方案是免疫球蛋白G制剂，当用150至210mM甘氨酸和50至105mM精氨酸配制时，其免疫球蛋白G含量为185至215g/L，pH值为5.5至5.9或5.6至5.9，且动态黏度为＞12且高至30mPa*s。这些优选的实施方案在23至27℃下具有至少12个月的储存稳定性，并且当在2至8℃下冷藏储存时具有至少24个月的储存稳定性，同时还确定了在67和69个月后冷冻免疫球蛋白G制剂的稳定性，并且仍然发现根据上述定义的标准是稳定的。
根据本发明的免疫球蛋白可用于治疗或预防多种疾病。因此，根据第二方面，本发明涉及包含高浓度的多克隆免疫球蛋白的液体组合物，其用于医学治疗。根据本发明的医学治疗包括预防和治疗。
换言之，根据第二方面，本发明涉及通过向患者施用包含高浓度多克隆免疫球蛋白的液体组合物来治疗或预防疾病。
根据第二方面应用的液体组合物包含至少一种稳定化氨基酸和至少一种黏度调节氨基酸。此外，根据第二方面的液体组合物特别地具有5.5至5.9的pH。特别地，根据第二方面的液体组合物特别地是根据第一方面定义的液体组合物。
医疗治疗包括治疗和预防疾病，例如免疫缺陷，例如先天性无丙球蛋白血症(agammaglobulinaemia)、低丙球蛋白血症(hypogammaglobulinaemia)、常见变异型免疫缺陷、重症联合免疫缺陷、伴有复发性感染的IgG亚类缺陷、骨髓瘤、伴有严重的继发性低丙球蛋白血症的慢性淋巴性白血病、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、轻度认知损害(mild cognitive impairment，MCI)、获得性自身免疫缺陷综合征(acquired auto immunedeficiency syndrome，AIDS)、威斯科特-奥尔德里奇综合征(Wiskott-Aldrich syndrome)和重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency，SCID)、急性和慢性特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)、异体骨髓移植(bonemarrow transplantation，BMT)、川崎氏病(Kawasaki’s disease)、吉兰-巴雷综合征(Guillan-Barre′s syndrome)、慢性炎性脱髓鞘多神经病(chronic inflammatorydemyelinating polyneuropathy，CIDP)、多灶性运动神经病变(multifocal motoricneuropathy)、多发性硬化、重症肌无力、伊顿-兰伯特综合征(Eaton-Lambert syndrome)、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、系统性硬皮病、血管炎(vasculitis)、韦格纳肉芽肿病(Wegner’s granulomatosis)、舍格伦综合征(syndrome)、自身免疫性中性粒细胞减少、自身免疫性溶血性贫血、中性粒细胞减少、克罗恩病(Crohn’s disease)、结肠溃疡(colitic ulcerous)、乳糜泻(coeliac disease)、哮喘、脓毒症休克综合征(septic shocksyndrome)、慢性疲劳综合征、银屑病、中毒性休克或复发性感染。
治疗或预防优选包括向患者施用有效量的液体组合物。液体组合物可例如以药物组合物的形式施用。
可通过药学领域中公知的任何方法制备实施方案的药物组合物并向对象施用。参见例如Goodman&Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，Hardman等，编辑，McGraw-Hill Professional(第10版，2001)；Remington：Thescience and Practice ofPharmacy，Gennaro，ed.，Lippincott Williams&Wilkins(第20版，2003)；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Ansel等.(编辑)，Lippincott Williams&Wilkins(第7版，1999)。此外，实施方案的药物组合物还可配制成包含其他医学上可用的药物或生物制剂。
根据本发明的药物组合物包含具有有效量免疫球蛋白的液体组合物，其中液体组合物另外与至少一种可药用载体一起配制。
可药用载体是本领域中已知或建立的任何载体。示例性的可药用载体包括无菌无热原水和无菌无热原盐水溶液。
可用于本发明实施方案的其他形式的可药用载体包括黏合剂、崩解剂、表面活性剂、吸收促进剂、保湿剂、吸收剂、润滑剂、填充剂、增量剂、水分赋予剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、增溶剂、控制渗透压的盐、稀释剂，例如通常根据制剂的使用形式使用的缓冲剂和赋形剂。这些根据所得制剂的单位剂量任选地选择和使用。
液体组合物或药物组合物可通过任何常规施用途径(例如，经口、肠胃外或通过吸入)施用于患者。肠胃外施用包括皮下注射、腹膜内注射、肌内注射以及腹膜内注射液体剂、混悬剂、乳剂和滴剂。优选肌内(i.m.)和皮下(s.c.)施用。
根据第三方面，本发明涉及配制高度浓缩多克隆免疫球蛋白制剂的方法，其包括提供高度浓缩多克隆免疫球蛋白制剂，将组合物的pH调节至5.5至5.9的值，添加至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸，以及添加至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸。
该配制方法的产物是包含多克隆免疫球蛋白、至少一种稳定化氨基酸和一种黏度调节氨基酸的液体组合物，其中pH为5.5至5.9。免疫球蛋白制剂特别是可如上定义获得的IgG浓缩物。
根据该方法的一个实施方案，将pH调节至5.5至5.9，更优选5.7至5.9，特别是pH约5.8的值。
在该方法的一个实施方案中，在添加氨基酸和调节pH之前，将缓冲组分(例如乙酸钠或NaCl)添加至免疫球蛋白制剂。
根据该方法的一个实施方案，在加入黏度调节氨基酸并调节pH之前，将稳定化氨基酸添加至高度浓缩多克隆免疫球蛋白组合物。因此，在另一个步骤中，可在调节pH之前添加黏度调节氨基酸。或者，作为下一步，在添加黏度调节氨基酸之前调节pH。
在该方法的替代实施方案中，在添加稳定化氨基酸和黏度调节氨基酸之前调节pH。因此，在下一步中添加稳定化氨基酸。或者，在添加稳定化氨基酸之前添加黏度调节氨基酸。
该方法的另一个替代实施方案包括在添加稳定化氨基酸并调节pH之前添加黏度调节氨基酸。在这方面，在下一步骤中，可在调节pH之前添加稳定化氨基酸。或者，在添加稳定化氨基酸之前调节pH。
根据一个实施方案，将稳定化氨基酸和黏度调节氨基酸混合，之后将混合物添加至高度浓缩多克隆免疫球蛋白组合物。可添加该氨基酸混合物以调节pH或者在调节pH之后添加该氨基酸混合物。
在该方法的一个实施方案中，所得液体组合物的免疫球蛋白浓度大于160g/L。优选地，其为160至300g/L，更优选地，免疫球蛋白浓度为160至260g/L。
根据该方法的一个优选实施方案，以使得所得液体组合物中稳定化和黏度调节氨基酸的总浓度为150至350mM的浓度添加氨基酸。优选地，以使得在所得液体组合物中总浓度为200至300mM、更优选225至275mM、最优选约250mM的浓度添加稳定化氨基酸和黏度调节氨基酸的总浓度。
根据该方法的一个实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸。根据该方法的替代实施方案，稳定化氨基酸是脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸。根据该方法的另一个替代实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸或脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸和组氨酸。根据该方法的另一个替代实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸和脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸。根据该方法的另一个实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸和脯氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸和组氨酸。根据该方法的一个优选实施方案，稳定化氨基酸是甘氨酸，且黏度调节氨基酸是精氨酸。
根据第三方面的方法可包括添加对于根据第一方面的液体组合物所列出的任何成分。因此，对于第一方面的液体组合物所描述的其他成分(特别是赋形剂，例如洗涤剂、表面活性剂和糖)可在稳定化氨基酸和黏度调节氨基酸之前、之后或与其一起添加。而且，可在调节pH之前或之后添加所述成分。根据一个实施方案，在添加黏度调节和稳定化氨基酸之后并在调节pH之后添加赋形剂。
根据第四方面的配制方法特别地导致形成根据第一方面的液体组合物。
在第四方面，本发明还涉及与黏度调节氨基酸(特别是组氨酸或精氨酸)组合的稳定化氨基酸(特别是甘氨酸或脯氨酸)在配制高度浓缩多克隆免疫球蛋白制剂中的用途。稳定化氨基酸和调节氨基酸的用途导致形成包含多克隆氨基酸的液体组合物。特别地，该用途导致形成根据第一方面的液体组合物。技术人员将理解，该用途可包含针对根据第三方面的方法描述的任何方法步骤。
通过以下非限制性实施例进一步描述本发明。
实施例
实施例1-免疫球蛋白稳定性的pH依赖性
基本上根据如WO 2005/082937 A2中所述的方法制备免疫球蛋白G(IgG)。因此，原料是从血浆汇集物制备的重构的级分I+II+III，并使用辛酸盐沉淀和阴离子交换色谱进行处理。专用病原体安全步骤包括溶剂/洗涤剂(S/D)处理，随后的S/D试剂去除以及纳米过滤。
此后，通过超滤/渗滤浓缩所获得的含IgG溶液并用不同的缓冲液配制。制备分别含有20mM NaCl和20mM乙酸钠的不同的组合物，pH值分别为4.5、5.0、5.5、5.9和6.2。
用差示扫描量热法(DSC)测量组合物。使用MicroCalTM VP-毛细管DSC系统生成熔解曲线以及确定由于以1℃/分钟的速率从25℃加热至120℃的蛋白质解折叠的中点(Tm)和焓变化。作为量热参考，使用缓冲液，其具有相同的pH并且由与蛋白质样品相同的组分(蛋白质除外)组成。
测量结果如图1所示。热转变曲线表示根据温度的组合物摩尔热容量，并通过DSC测量确定。曲线的局部最大值表示去折叠转变。确定每条曲线的第一个最大值(Tm1)的确切温度。所述免疫球蛋白组合物的Tm1-温度对于pH＝4.5为61.3℃，对于pH＝5.0为66.2℃，对于pH＝5.5为69.2℃，对于pH＝5.9为70.6，且在pH＝6.2时为71.0℃。
随着pH的降低，可在图1中看到热转变曲线向较低温度的移动。这意味着所测量的蛋白质(特别是组合物中的免疫球蛋白)，在较低温度下随着pH降低而解链(melt)。从该图可得出在较低pH值下人血浆来源免疫球蛋白的构象稳定性降低。
特别是在pH为4.5时，可从所提供的数据推断出显著更低的热力学免疫球蛋白稳定性，而在pH值为5.5或高于5.5时可发现更高的结构稳定性。
实施例2-免疫球蛋白聚集的pH依赖性
为了确定含有根据实施例1的组合物的免疫球蛋白的聚集水平，使用适于对相对分子质量为10000至500000的球状蛋白质进行分级的亲水性硅胶进行尺寸排阻色谱(SEC)，并在280nm处用分光光度计检测。计算与聚集体、二聚体、单体和片段相关的SEC色谱图的曲线下面积。在图2中，与pH相关地示出组合物中通过分子大小分布确定的多聚体百分比。
实施例3-氨基酸对免疫球蛋白稳定性的影响
在该实验中，使用DSC测试了不同氨基酸对免疫球蛋白稳定性的影响。为此，如实施例1中所述制备免疫球蛋白组合物。最终配制的组合物含有调节至5.7的20mM NaCl、20mM乙酸钠和230mM选自精氨酸、甘氨酸、脯氨酸和组氨酸的氨基酸。如实施例1中所述，通过DSC测定四种免疫球蛋白组合物的热转变曲线。结果在图3中描述。
因此，从图3中可明显看出，与含有组氨酸或精氨酸的组合物的曲线相比，添加甘氨酸或脯氨酸导致曲线向较高温度的移动。因此，甘氨酸和脯氨酸均可被认为是稳定化氨基酸。
实施例4-氨基酸对组合物黏度的影响
在下一步中测试哪种氨基酸适合于降低免疫球蛋白组合物的黏度。因此，其中免疫球蛋白组合物如实施例1中所述制备，并用20mM乙酸钠和20mM NaCl在pH为5.7下配制。制备不同的含有单独的甘氨酸或含有提高的精氨酸或组氨酸摩尔分数(总氨基酸浓度为250mM)的氨基酸组合物。
这些免疫球蛋白组合物的动态黏度用来自AntonGmbH(Austria)的Automated Microviscometer“AMVn”在+20.0℃的温度和50°的毛细管倾斜角下测定。
结果示于图4中。因此，精氨酸和组氨酸均随着所述氨基酸摩尔分数的提高而导致动态黏度的强烈降低。
实施例5-具有不同氨基酸的免疫球蛋白组合物的稳定性
在下一步中，证实了精氨酸和甘氨酸的组合关于其对制剂中免疫球蛋白稳定性的影响。根据实施例1制备免疫球蛋白组合物，并用pH为5.7的20mM乙酸钠和20mM NaCl配制。向第一免疫球蛋白组合物添加175mM甘氨酸和75mM精氨酸。作为比较，用50mM精氨酸、230mM精氨酸或无添加物制备三种组合物。同样，其中通过DSC测量免疫球蛋白组合物的热转变曲线。结果示于在图5中。因此，具有75mM精氨酸和175mM甘氨酸的组合物具有与无添加物的组合物的曲线相当的转变。相反，少量精氨酸(50mM)或大量精氨酸(230mM)的使用使组合物去稳定化。预期后一结果是因为溶液黏度的降低通常与溶液中蛋白质的去稳定化相关。
该实验表明，通过使用足够量的甘氨酸，完全消除了由黏度调节氨基酸精氨酸引起的黏度降低的去稳定化作用。
实施例6-具有甘氨酸和精氨酸的免疫球蛋白组合物的黏度
为了确定稳定化氨基酸甘氨酸是否对免疫球蛋白组合物的黏度具有负面影响，如实施例3中所述测试了具有175mM甘氨酸和75mM精氨酸和浓度提高的免疫球蛋白(180g/L、200g/L和220g/L)之免疫球蛋白组合物的动态黏度。作为比较，还测量了无添加物和提高量的免疫球蛋白的组合物的动态黏度。结果示于图6中。从图6的图表中可明显看出，稳定化氨基酸甘氨酸对黏度降低没有负面影响。
实施例7-多种免疫球蛋白制剂的储存稳定性
如实施例1中所述制备多克隆免疫球蛋白浓缩物。在以下储存实验中配制和储存不同的免疫球蛋白浓缩物。在储存之前和之后，测试免疫球蛋白组合物的组成。
免疫球蛋白制剂1的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、202mM甘氨酸和51mM精氨酸配制成在pH为5.8下免疫球蛋白浓度为208g/l。测定动态黏度为20.0mPa*s。将免疫球蛋白组合物的样品在2至8℃或23至27℃下储存12个月。
在储存之前和之后从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
在不同温度下储存的结果示于表1和2中。
表1：在2至8℃的温度下储存的结果
制剂1.1 最初 12个月
多聚体 0.6 1.8
二聚体％ 10.1 14.6
单体％ 89.3 83.7
单体+二聚体％ 99.4 98.3
片段％ ＜0.2 ＜02
表2：在23至27℃的温度下储存的结果
制剂1.2 最初 12个月
多聚体 0.6 0.6
二聚体％ 10.1 12.4
单体％ 89.3 85.2
单体+二聚体％ 99.4 97.6
片段％ ＜0.2 1.9
免疫球蛋白制剂2的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、173mM甘氨酸和74mM精氨酸配制成在pH为5.8下免疫球蛋白浓度为207g/L。测定动态黏度为19.1mPa*s。将免疫球蛋白组合物的样品在2至8℃下储存12个月或在23至27℃下储存69个月。
在储存之前，储存12个月后以及在组合物2.2的情况下储存69个月后，从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
不同温度下储存的结果示于表3和4中。
表3：在2至8℃的温度下储存的结果
制剂2.1 最初 12个月 69个月
多聚体 0.6 1.7 2.1
二聚体％ 9.5 14.5 16.0
单体％ 89.9 83.8 81.3
单体+二聚体％ 99.4 98.3 97.3
片段％ ＜0.2 ＜0.2 0.6
表4：制剂2在23至27℃的温度下储存的结果
制剂2.2 最初 12个月
多聚体 0.6 0.4
二聚体％ 9.4 12.2
单体％ 89.9 85.4
单体+二聚体％ 99.3 97.6
片段％ ＜0.2 2.0
免疫球蛋白制剂3的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、168mM甘氨酸和87mM精氨酸配制成在pH为5.7下免疫球蛋白浓度为195g/L。测定动态黏度为19.1mPa*s。将制剂3的样品在2至8℃下储存67个月。
在储存前、储存12个月后、24个月后和69个月后从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
不同温度下储存的结果示于表5中。
表5：制剂3在2至8℃的温度下储存的结果
制剂3 最初 12个月 24个月 67个月
多聚体 0.3 0.6 0.5 0.6
二聚体％ 9.3 19.8 20.2 20.3
单体％ 90.4 79.6 79.3 78.5
单体+二聚体％ 99.7 99.4 99.5 98.8
片段％ ＜0.2 ＜0.2 ＜0.2 0.6
免疫球蛋白制剂4的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、172mM甘氨酸和70mM精氨酸配制成在pH为5.7下免疫球蛋白浓度为200g/L。测定动态黏度为19.1mPa*s。将制剂4的样品在2至8℃下储存24个月。
在储存前、储存12个月后和24个月后从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
不同温度下储存的结果示于表6中。
表6：制剂4在2至8℃的温度下储存的结果
制剂4 最初 12个月 24个月
多聚体 0.4 0.7 0.6
二聚体％ 10.1 20.5 20.0
单体％ 89.5 78.8 79.4
单体+二聚体％ 99.6 99.3 99.4
片段％ ＜0.2 ＜0.2 ＜0.2
免疫球蛋白制剂5的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、172mM甘氨酸和77mM精氨酸配制成在pH为5.7下免疫球蛋白的浓度为200g/L。测定动态黏度为19.1mPa*s。将制剂5的样品在2至8℃下储存12个月。
在储存前和储存12个月后从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
不同温度下储存的结果示于表7中。
表7：制剂5在2至8℃的温度下储存的结果
制剂5 最初 12个月
多聚体 0.3 0.6
二聚体％ 9.8 19.7
单体％ 89.9 79.6
单体+二聚体％ 99.7 99.4
片段％ ＜0.2 ＜0.2
免疫球蛋白制剂6的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、150mM甘氨酸和100mM精氨酸配制成在pH为5.7下免疫球蛋白浓度为210g/L。测定动态黏度为18.1mPa*s。将制剂6的样品在2至8℃或23至27℃下储存12个月。
在储存前和储存12个月后从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
不同温度下储存的结果示于表8和9中。
表8：制剂6在2至8℃的温度下储存的结果
制剂6.1 最初 12个月
多聚体 0.6 1.4
二聚体％ 10.1 13.9
单体％ 89.3 84.7
单体+二聚体％ 99.4 98.6
片段％ ＜0.2 ＜0.2
表9：制剂6在23至27℃的温度下储存的结果
制剂6.2 最初 12个月
多聚体 0.6 0.4
二聚体％ 10.1 11.2
单体％ 89.3 86.2
单体+二聚体％ 99.4 97.4
片段％ ＜0.2 2.1
免疫球蛋白制剂7的储存实验
免疫球蛋白浓缩物用20mM乙酸钠、20mM NaCl、196mM甘氨酸和51mM精氨酸配制成在pH为5.7下的免疫球蛋白浓度为184g/L。测定动态黏度为12.2mPa*s。将制剂7的样品在2至8℃或23至27℃下储存12个月。
在储存前和储存12个月后从通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图确定多聚体、二聚体、单体、单体加二聚体和片段的分数。
不同温度下储存的结果示于表10和11中。
表10：制剂7在2至8℃的温度下储存的结果
制剂7.1 最初 12个月
多聚体 0.6 1.7
二聚体％ 7.2 14.9
单体％ 92.2 83.4
单体+二聚体％ 99.4 98.3
片段％ ＜0.2 ＜0.2
表11：制剂7在23至27℃的温度下储存的结果
制剂7.2 最初 12个月
多聚体 0.6 0.6
二聚体％ 7.2 12.4
单体％ 92.2 85.2
单体+二聚体％ 99.4 97.7
片段％ ＜0.2 1.9
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Claims (16)

1.液体组合物，其包含多克隆免疫球蛋白、至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸和至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸，其中超过90％的所述多克隆免疫球蛋白为单体或二聚体的形式，且小于5％为多聚体的形式，并且其中所述组合物中的免疫球蛋白浓度高于160g/L且pH为5.5至5.9。
2.根据权利要求1所述的液体组合物，其中所述免疫球蛋白浓度为150至300g/L，特别是160至260g/L。
3.根据权利要求1或2所述的液体组合物，其中所述pH为5.6至5.8。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的液体组合物，其特征在于
-免疫球蛋白浓度为160至180g/L，且动态黏度为5至≤12mPa*s；
-免疫球蛋白浓度为180至220g/L，且动态黏度为＞12至≤35mPa*s；或者
-免疫球蛋白浓度为220至260g/L，且动态黏度为＞35至≤100mPa*s。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的液体组合物，其中所述稳定化氨基酸和黏度降低氨基酸的总浓度为100至400mM，优选150至350mM，更优选200至300mM，特别是225至275g/L。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的液体组合物，其中
-所述稳定化氨基酸是甘氨酸，且所述黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸；或者
-所述稳定化氨基酸是脯氨酸，且所述黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸；或者
-所述稳定化氨基酸是甘氨酸或脯氨酸，且所述黏度调节氨基酸是精氨酸和组氨酸；或者
-所述稳定化氨基酸是甘氨酸和脯氨酸，且所述黏度调节氨基酸是精氨酸或组氨酸；或者
-所述稳定化氨基酸是甘氨酸和脯氨酸，且所述黏度调节氨基酸是精氨酸和组氨酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的液体组合物，其中稳定化氨基酸的浓度为130至220mM，优选150至200mM，优选160至190mM，特别是170至180mM。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的液体组合物，其中黏度调节氨基酸的浓度为50至100mM，优选60至90mM，优选65至85mM，特别是70至80mM。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的液体组合物，其中脯氨酸的浓度为140至160mM，且精氨酸的浓度为70至100mM。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的液体组合物，其中制剂在2至8℃下具有至少40个月、优选至少60个月、更优选至少69个月的储存稳定性。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的液体组合物，其中所述组合物含有优选10至30mM、更优选约20mM的乙酸钠和/或优选10至30mM、更优选约20mM的氯化钠。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的液体组合物，其含有一种或更多种选自表面活性剂、洗涤剂或糖类或者其组合的赋形剂。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的液体组合物，其中当通过直接库姆斯试验测定时，所述组合物对于抗A具有≤16的血凝素效价，且对于抗B具有≤8的血凝素效价。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的液体组合物，其中当用150至210mM甘氨酸和50至105mM精氨酸配制时，所述组合物是免疫球蛋白G含量为185至215g/L、pH值为5.5至5.9且动态黏度为＞12直至30mPa*s的免疫球蛋白G组合物。
15.用于医学治疗的液体组合物，其中所述液体组合物根据权利要求1至14中任一项所定义，并且其中所述治疗包括通过肌内注射或皮下注射向患者施用所述液体组合物。
16.配制高度浓缩多克隆免疫球蛋白组合物的方法，其包括以下步骤：
-提供高度浓缩多克隆免疫球蛋白组合物，
-将所述组合物的pH调节至5.5至5.9的值，
-添加至少一种选自甘氨酸和脯氨酸的稳定化氨基酸，以及
-添加至少一种选自精氨酸和组氨酸的黏度调节氨基酸。
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