CN109310648B - 用于治疗癌症的包含大麻二酚和第二治疗剂的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了对治疗癌症有效的大麻二酚(CBD)和第二治疗剂、如一种或多种ChEH/AEBS抑制剂、萘醌或其衍生物或其任何组合的协同组合。描述了含有它们的组合物及其使用方法。

Description

用于治疗癌症的包含大麻二酚和第二治疗剂的组合物
发明领域
本发明涉及有效治疗癌症的大麻二酚和第二治疗剂的组合。第二治疗剂包括一种或多种ChEH/AEBS抑制剂、萘醌或其衍生物或其组合。
发明背景
大麻二酚(CBD)是大麻的主要非精神活性成分，基于其对肿瘤细胞的体外和体内活性而被认为是抗肿瘤剂。由于缺乏精神活性，其药理学和治疗潜力正在深入研究之中。最近的研究已表明，CBD具有各种吸引人的药理活性，包括免疫抑制、抗炎、抗惊厥、抗焦虑、抗精神病、神经保护和抗恶心作用。加拿大最近批准含有大约相等量的A9-四氢大麻酚(THC)和CBD的基于大麻素的药物以减轻与多发性硬化相关的神经性疼痛，从而进一步证实了其治疗潜力。
已知癌症影响身体的许多区域，其中最常见的癌症类型包括：胆管癌、膀胱癌、骨癌、肠癌(包括结肠癌和直肠癌)、脑癌、乳腺癌、神经内分泌系统癌(通常称为类癌)、宫颈癌、眼癌、食道癌、头颈部癌(该组包括起始于形成口腔、鼻、喉、耳的内层(lining)或覆盖舌头的表层的细胞的癌)、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴结癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤、间皮瘤、骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊髓癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌。
常规的癌症治疗选择经常受限于毒性或获得性耐药性，并且需要新颖的药剂。大麻二酚(CBD)是一种有效的天然化合物，有报道对多种癌症类型有活性。CBD属于大麻素家族，一组与特定G蛋白偶联受体结合的药理活性化合物。植物大麻素(Phytocannabinoid)是来自大麻的植物衍生产物；内源性大麻素是在动物和人体组织中制成的；合成大麻素是实验室生产的。G蛋白偶联受体CB 1主要在脑和神经系统中发现，而CB2主要由免疫细胞表达。最近的数据表明，一些大麻素也能通过香草素受体引发信号，而其他大麻素可能以不依赖于受体的方式发挥功能。大麻素可以调控癌症生长和传播的核心信号通路。它们抑制细胞周期进程和趋化性，并阻断血管生成。最近的研究表明大麻素也会诱导自噬性细胞死亡。Δ9-四氢大麻酚(THC)是最好表征的大麻素之一；然而，其治疗应用受其精神作用效应的限制。
已有一些关于CBD组合疗法与选择性雌激素受体调节剂(SERM)的实用性的报道，但是关于这种治疗方案的真实用途仅有有限的信息。
仍然需要新的癌症疗法，其比迄今为止的可用药物和疗法更有效且对抗其他癌症类型有效。
在一个实施方案中，本发明提供了有效治疗癌症的包含大麻二酚(CBD)和第二治疗剂的组合物。在一个方面，第二治疗剂是萘醌或其衍生物。另一方面，第二治疗剂是ChEH/AEBS抑制剂化合物。在一些实施方案中，第二治疗剂是一种或多种的萘醌和/或其衍生物、一种或多种ChEH/AEBS抑制剂化合物或其任何组合。所述组合物预期用于治疗癌症，且在一些实施方案中，预期治疗雌激素受体阴性癌症的治疗，且在一些实施方案中，预期用于雌激素受体阳性癌症。
在一个实施方案中，本发明提供了包含大麻二酚和至少一种为ChEH/AEBS抑制剂类别的一部分的第二治疗剂的组合的组合物，以及其在治疗癌症中的用途。
ChEH/AEBS抑制剂包含不同药理学类别的天然或合成化合物。胆固醇环氧化物水解酶(ChEH)催化胆固醇-5,6-环氧化物(5,6-EC)水合为胆甾烷-3β,5α,6β-三醇。ChEH是被称为微粒体抗雌激素结合位点(AEBS)的异源-寡聚体复合物(hetero-oligomericcomplex)，其包含3b-羟基甾醇-D8-D7-异构酶(D8D7I)和3b-羟基甾醇-D7-还原酶(DHCR7)。D8D7I和DHCR7调节胆固醇生物合成和肿瘤细胞生长分化、死亡和癌症进展。
ChEH/AEBS抑制剂包含许多化合物，其中特别包括替米利芬(DPPE，N,N0-二乙基氨基-4-(苯基甲基苯氧基)-乙胺，HCl)3PBPE、PCPE、MBPE、MCPE、PCOPE、MCOPE、MCOCH2PE；σ受体配体如SR31747A、BD10008、氟哌啶醇、SR-31747A、伊菠因、AC-915、林卡唑、三氟拉嗪、胺碘酮；胆固醇生物合成抑制剂例如曲帕拉醇、特比萘芬、U-18666A、Ro 48-8071、AY9944、SKF-525A；不饱和脂肪酸例如油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸(ARA)、二十二碳六烯酸(DHA)；环B氧化固醇(ring B oxysterol)如6-酮胆甾烷醇、7-酮胆甾烷醇、7-酮胆固醇、7α-羟基胆固醇、7β-羟基胆固醇、6-酮-5-羟基胆甾烷醇，胆甾烷-3β,5α,6β-三醇(CT)和其他如本领域技术人员将会理解的那些(参见例如Silvente-Poirot S，Poirot M.Cholesterol epoxidehydrolase and cancer.Current opinion in pharmacology.2012；12(6)：696-703；deMedina P,Paillasse MR,Segala G,Poirot M,Silvente-Poirot S:Identification andpharmacological characterization of cholesterol-5,6-epoxide hydrolase as atarget for tamoxifen and AEBS ligands.Proc Natl Acad Sci USA 2010,107：13520-13525，所有这些文献均并入本文在此全部引用作为参考)。
在另一个实施方案中，第二治疗剂是萘醌或其衍生物。
本发明的组合疗法/组合物通过不依赖雌激素受体的机制具有活性，且在一些实施方案中，本发明特别考虑用于治疗雌激素受体阴性癌症/肿瘤的组合物。
根据这个方面，并且在一些实施方案中，用于所述组合疗法的ChEH/AEBS抑制剂可以包括选择性雌激素受体调节剂(SERM)，其包含阳离子氨基乙氧基侧链、如氯米芬、他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬、雷洛昔芬、硝米芬、Ru 39,411，但特别排除非阳离子抗雌激素、如氟维司群、ICI-164,384和RU-58。
当使用多种类型的ChEH/AEBS抑制剂(实施例1)时，本发明的组合物在实施例中如本文所呈现显示具有抗癌活性。
本发明的组合物在实施例中如本文所呈现显示同样具有抗癌活性、例如抗白血病活性，并且同样通过不依赖雌激素受体的机制清楚地介导，如与氯米芬和CBD的组合治疗抑制不含雌激素受体的CCRF-CEM系。
根据关于无雌激素受体的癌症/肿瘤的该方面，在一个实施方案中，ChEH/AEBS抑制剂是三苯基乙烯(TPE)或其衍生物。在另一个实施方案中，三苯基乙烯衍生物选自：抗雌激素(AE)、氯米芬(CL)和他莫昔芬(Tam)或其组合。
本发明提供包含大麻二酚(CBD)和至少一种ChEH/AEBS抑制剂化合物的协同组合的组合物，所述ChEH/AEBS抑制剂化合物不是SERM。在一些实施方案中，ChEH/AEBS抑制剂化合物是ChEH/AEBS的选择性抑制剂，且在一些实施方案中，ChEH/AEBS的选择性抑制剂是PBPE或者替米利芬(DPPE)。
在一些实施方案中，所述抑制剂是胆固醇生物合成抑制剂，其在一些实施方案中是曲帕拉醇、特比萘芬或U-18666A或其组合。
在一些实施方案中，抑制剂化合物是环B氧化固醇，其在一些实施方案中是6-酮胆甾烷醇、7-酮胆甾烷醇、7-酮胆固醇和胆甾烷-3b,5a,6b-三醇(CT)或其组合。
在一些实施方案中，抑制剂化合物为不饱和脂肪酸，其在一些实施方案中为油酸，花生四烯酸(ARA)或二十二碳六烯酸(DHA)或其组合。
在一些实施方案中，抑制剂化合物是萘醌或其衍生物。在一些实施方案中，该化合物是甲萘醌或其衍生物。
本发明提供包含大麻二酚(CBD)和至少一种ChEH/AEBS抑制剂化合物的协同组合的组合物，其用于治疗雌激素受体阴性癌症。
根据这个方面，并且在一些实施方案中，ChEH/AEBS抑制剂化合物是含有阳离子氨基乙氧基侧链的选择性雌激素受体调节剂(SERM)。在一些实施方案中，SERM是氯米芬、他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬、雷洛昔芬或其组合。在一些实施方案中，SERM是三苯基乙烯(TPE)或其含有阳离子氨基乙氧基侧链的衍生物或其组合。
在另一个实施方案中，本发明的组合物还包含药学上可接受的载体。
在一些实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所述的组合物。在一些实施方案中，特别排除使用具有SERM活性的ChEH/AEBS抑制剂。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗有效量的本文所述组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和ChEH/AEBS抑制剂的协同组合，所述ChEH/AEBS抑制剂化合物不是SERM。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和至少一种萘醌或其衍生物或其组合的协同组合。
在一些实施方案中，根据此方面，癌症是胆管癌、膀胱癌、骨癌、肠癌(包括结肠癌和直肠癌)、脑癌、乳腺癌、神经内分泌系统癌(通常称为类癌)、宫颈癌、眼癌、食道癌、头颈部癌(该组包括起始于形成口腔、鼻、喉、耳的内层或覆盖舌头的表层的细胞的癌)、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、白血病、急性白血病、慢性淋巴细胞白血病、肝癌、肺癌、淋巴结癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤、间皮瘤、骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊髓癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌。
在一些实施方案中，本发明提供了用于在需要的受试者中治疗患有血液或骨髓相关癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和ChEH/AEBS抑制剂的协同组合，所述ChEH/AEBS抑制剂化合物不是SERM。
在一些实施方案中，本发明提供了用于在需要的受试者中治疗患有血液或骨髓相关癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和萘醌或其衍生物的协同组合。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗患有血液或骨髓相关癌症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如本文所述的组合物。在一些实施方案中，组合物包含CBD和ChEH/AEBS抑制剂，且在一些实施方案中，组合物包含CBD和萘醌或其衍生物，且在一些实施方案中，组合物包含CBD以及ChEH/AEBS抑制剂和/或萘醌或其衍生物的组合。在一些实施方案中，特别排除使用具有SERM活性的ChEH/AEBS抑制剂。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗患有胶质母细胞瘤的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和ChEH/AEBS抑制剂的协同组合。在一些实施方案中，胶质母细胞瘤是雌激素受体阴性的。在一些实施例中，胶质母细胞瘤是雌激素受体阳性的，且ChEH/AEBS抑制剂化合物不是SERM。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗患有胶质母细胞瘤的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和萘醌或其衍生物的协同组合。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗患有胶质母细胞瘤的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如本文所述的组合物。在一些实施方案中，特别排除使用具有SERM活性的ChEH/AEBS抑制剂。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗罹患乳腺癌的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和ChEH/AEBS抑制剂的协同组合。在一些实施方案中，乳腺癌是雌激素受体阴性的。在一些实施方案中，乳腺癌是雌激素受体阳性的，且ChEH/AEBS抑制剂化合物不是SERM。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗患有乳腺癌的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的大麻二酚(CBD)和萘醌或其衍生物的协同组合。
在一些实施方案中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗患有乳腺癌的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如本文所述的组合物。在一些实施方案中，组合物包含CBD和ChEH/AEBS抑制剂，且在一些实施方案中，组合物包含CBD和萘醌或其衍生物，且在一些实施方案中，组合物包含CBD以及ChEH/AEBS抑制剂和/或萘醌或其衍生物的组合。在一些实施方案中，特别排除使用具有SERM活性的ChEH/AEBS抑制剂。
附图的简要说明
图1.图示了大麻二酚与DPPE对抑制HL-60细胞系生长的协同作用。
图2.图示了大麻二酚与DPPE对抑制CCRF-CEM细胞系生长的协同作用。
图3.图示了大麻二酚与7-酮胆固醇对抑制HL-60细胞系生长的协同作用。
图4.图示了大麻二酚与7-酮胆固醇对抑制CCRF-CEM细胞系生长的协同作用。
图5.图示了大麻二酚与曲帕拉醇对抑制H1-60细胞系生长的协同作用。
图6.图示了大麻二酚与曲帕拉醇对抑制CCRF-CEM细胞系生长的协同作用。
图7.图示了大麻二酚与ICI 182,780对抑制H1-60细胞系生长的协同作用的缺乏。
图8.图示了大麻二酚与ICI 182,780对抑制CCRF-CEM细胞系生长的协同作用的缺乏。
图9A图示了大麻二酚对HL-60细胞的存活力的作用，所述HL-60细胞用不同浓度的大麻二酚和溶媒在5％FCS血清和无血清培养基中温育24h，用10％FCS培养基中温育24和48h。
图9B图示了大麻二酚对用不同浓度的大麻二酚和溶媒在不含血清和5％血清的培养基中温育24小时的CCRF-CEM细胞的存活力的作用。
图9C图示描述大麻二酚对用不同浓度的大麻二酚和溶媒在5％含血清培养基中温育24h的MCF-7细胞的存活力的作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图9D图示了大麻二酚对用不同浓度的大麻二酚和溶媒在5％含血清培养基中温育48小时的A-172细胞的存活力的作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图10A图示了氯米芬对用不同浓度的氯米芬和溶媒在5％含血清培养基中温育24小时的HL-60细胞的存活力的作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图10B图示了氯米芬对用不同浓度的氯米芬和溶媒在5％含血清培养基中温育24h的CCRF细胞的存活力的作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图10C图示了氯米芬对用不同浓度的氯米芬和溶媒在5％含血清培养基中温育48h的A-172细胞的存活力的作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图11A图示了他莫昔芬对用不同浓度的他莫昔芬和溶媒在5％含血清培养基中温育24h的HL-60细胞的存活力的作用。图11B图示了他莫昔芬对用不同浓度的他莫昔芬和溶媒在5％含血清培养基中温育24h的CCRF细胞的存活力的作用。
图11C图示描述了他莫昔芬对用不同浓度的他莫昔芬和赋形剂在5％含血清培养基中温育24h的MCF-7细胞的存活力的作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图12A图示了大麻二酚与氯米芬、他莫昔芬和甲萘醌(Mena)对用不同浓度的大麻二酚、氯米芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的HL-60细胞的生长抑制的协同作用。
图12B图示了大麻二酚与氯米芬、他莫昔芬和甲萘醌(Mena)对用不同浓度的大麻二酚、他莫昔芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的HL-60细胞的生长抑制的协同作用。
图12C图示了大麻二酚与氯米芬、他莫昔芬和甲萘醌(Mena)对用不同浓度的大麻二酚、甲萘醌和溶媒在5％FCS培养基中温育24小时的CCRF细胞的生长抑制的协同作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图13图示了大麻二酚与多柔比星对用不同浓度的大麻二酚、多柔比星(Dox)和溶媒在5％和10％FCS培养基中温育24小时的HL-60细胞的生长抑制的相加作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图14A图示了大麻二酚与氯米芬和他莫昔芬对用不同浓度的大麻二酚、氯米芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的CCRF-CEM细胞的生长抑制的协同作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图14B图示了大麻二酚与氯米芬和他莫昔芬对用不同浓度的大麻二酚、他莫昔芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的CCRF-CEM细胞的生长抑制的协同作用。
图15A图示了大麻二酚与他莫昔芬对用不同浓度的大麻二酚、他莫昔芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24小时的MCF-7细胞的生长抑制的协同作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图15B图示了大麻二酚与他莫昔芬对用10nM雌二醇预处理30分钟、然后用不同浓度的大麻二酚、他莫昔芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24小时的MCF-7细胞的生长抑制的协同作用。细胞活力通过XTT测定来确定。
图16图示了大麻二酚与他莫昔芬对MCF-7细胞系的生长抑制的协同作用。将A-172细胞用不同浓度的大麻二酚、氯米芬和溶媒在5％FCS培养基中温育48小时。细胞活力通过XTT测定来确定。
图17A图示了大麻二酚、氯米芬和甲萘醌对HL-60细胞凋亡的诱导。显示了大麻二酚、氯米芬和甲萘醌对用大麻二酚和溶媒在5％FCS培养基中温育24h和48h的HL-60细胞诱导凋亡的剂量响应作用。
图17B图示了大麻二酚、氯米芬和甲萘醌对HL-60细胞凋亡的诱导。显示了大麻二酚、氯米芬和甲萘醌对用大麻二酚、氯米芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的HL-60细胞诱导凋亡的剂量响应作用。
图17C图示了大麻二酚、氯米芬和甲萘醌对HL-60细胞凋亡的诱导。显示了大麻二酚、氯米芬和甲萘醌对用大麻二酚、甲萘醌和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的HL-60细胞诱导凋亡的剂量响应作用。
图18A图示了大麻二酚、氯米芬和他莫昔芬在用大麻二酚和溶媒在无血清和5％FCS培养基中温育24h的CCRF-CEM细胞中对CCRF-CEM细胞凋亡的诱导。
图18B图示了大麻二酚、氯米芬和他莫昔芬在用大麻二酚、氯米芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的CCRF-CEM细胞中对CCRF-CEM细胞凋亡的诱导。
图18C图示了大麻二酚、氯米芬和他莫昔芬在用大麻二酚、他莫昔芬和溶媒在5％FCS培养基中温育24h的CCRF-CEM细胞中对CCRF-CEM细胞凋亡的诱导。
图19是描绘正常HL-60细胞的形态学特征的显微照片，且通过荧光显微镜观察凋亡细胞。用CBD处理24小时的细胞中的原始放大倍数X400。
图20描绘了大麻二酚和氯米芬在用20μM大麻二酚处理所示时间点的CCRF-CEM细胞中对Mcl-1下调的作用。收集细胞并用PBS洗涤两次，然后使用RIPA缓冲液制备细胞裂解物。将蛋白质进行SDS-PAGE并用针对MCl-1和钙网蛋白(CRN)用抗体进行免疫印迹。
图21A图示了在移植了HL-60细胞的小鼠异种移植模型中大麻二酚、氯米芬和大麻二酚+氯米芬对肿瘤体积的影响。用卡尺每周测量一次肿瘤体积(n＝6)。(*:P<0.05；**:P<0.01)。
图21B描绘了在移植有HL-60细胞的小鼠异种移植模型中大麻二酚、氯米芬和大麻二酚+氯米芬对肿瘤体积的影响，其中收集肿瘤，并显示每组中肿瘤的代表性图像。
图22A图示了大麻二酚和氯米芬对在有和无氯米芬的情况下温育24小时的AML原代细胞的作用。通过XTT减少来测量细胞活力。
图22B图示了大麻二酚和氯米芬对在有和无大麻二酚的情况下温育24h的CLL原代细胞的作用。通过XTT减少来测量细胞活力。
发明详述
在一个实施方案中，本发明是包含大麻二酚(CBD)和至少一种ChEH/AEBS抑制剂的组合物，其有效治疗恶性肿瘤，例如但不限于血癌、骨髓相关癌症、乳腺癌和胶质母细胞瘤。
本发明提供了包含大麻二酚(CBD)和至少一种萘醌或其衍生物的组合物，其有效治疗恶性肿瘤，例如但不限于血癌、骨髓相关癌症、乳腺癌和胶质母细胞瘤。
如本文所用的术语“大麻二酚”(CBD)是指由大麻种产生的植物大麻素。在一些实施方案中，本发明中使用的CBD为纯化形式。在其他实施方案中，CBD是植物提取物的组分。在一些实施方案中，植物提取物包含至少10％至95％的CBD。在一些实施方案中，植物提取物包含至少20％至80％的CBD。在一些实施方案中，植物提取物包含至少30％至70％的CBD。在一些实施方案中，植物提取物包含至少40％至60％的CBD。
在另一个实施方案中，CBD是植物药物质(BDS)。“植物药物质”或“BDS”在2000年8月的美国健康和人类服务部药物评价和研究食品和药物管理中心的工业植物药物产品指导草案指南中定义为：“药物衍生自一种或多种植物、藻类或微观真菌。其由植物原料通过以下一种或多种工序制备：粉碎、煎煮、压榨、水提、乙醇提取或其他类似工艺。植物药物质不包括源自天然来源的高度纯化或化学修饰的物质。
在另一个实施方案中，当使用合成CBD时，该术语旨在包括化合物、代谢物或其衍生物、以及CBD的药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含完全脱羧的CBD的化学修饰的衍生物，其保留了期望的活性，或更优选根据药物化学标准原理制备的显示改善的活性的天然衍生物。在一些实施方案中，完全脱羧的CBD衍生物可以显示出比原料更低的活性程度，只要它们保持足够的活性以治疗有效或表现出药学活性剂期望的性质的改善，例如改善的溶解性、增强的摄取或降低的毒性。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含萘醌或其衍生物。萘醌是一类衍生自萘的有机化合物。萘醌的非限制性实例是：1,2-萘醌、1,4-萘醌、甲萘醌、2,6-萘醌、六羟基-1,4-萘二酮、5-羟基-1,4-萘二酮、2-甲氧基-1,4-萘醌、五羟基-1,4-萘二酮和2,3,5,7-四羟基-1,4-萘二酮。
如本文所用的术语“ChEH/AEBS抑制剂”是指如本文所述的化合物，并且如本领域已知的被鉴定为相同含义。
在一些方面，ChEH/AEBS抑制剂包含不同药理学类别的天然或合成化合物。胆固醇环氧化物水解酶(ChEH)催化胆固醇-5,6-环氧化物(5,6-EC)水合为胆甾烷-3β,5α,6β-三醇。ChEH是被称为微粒体抗雌激素结合位点(AEBS)的异源-寡聚体复合物，其包含3b-羟基甾醇-D8-D7-异构酶(D8D7I)和3b-羟基甾醇-D7-还原酶(DHCR7)。D8D7I和DHCR7调节胆固醇生物合成和肿瘤细胞生长分化、死亡和癌症进展。
ChEH/AEBS抑制剂包含许多化合物，其中特别包括替米利芬(DPPE，N,N0-二乙基氨基-4-(苯基甲基苯氧基)-乙胺，HCl)3PBPE、PCPE、MBPE、MCPE、PCOPE、MCOPE、MCOCH2PE；σ受体配体如SR31747A、BD10008、氟哌啶醇、SR-31747A、伊菠因、AC-915、林卡唑、三氟拉嗪、胺碘酮；胆固醇生物合成抑制剂例如曲帕拉醇、特比萘芬、U-18666A、Ro 48-8071、AY9944、SKF-525A；不饱和脂肪酸例如油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸(ARA)、二十二碳六烯酸(DHA)；环B氧化固醇如6-酮胆甾烷醇、7-酮胆甾烷醇、7-酮胆固醇、7α-羟基胆固醇、7β-羟基胆固醇、6-酮-5-羟基胆甾烷醇，胆甾烷-3β,5α,6β-三醇(CT)和其他如本领域技术人员将会理解的那些(参见例如Silvente-Poirot S，Poirot M.Cholesterol epoxide hydrolase andcancer.Current opinion in pharmacology.2012；12(6)：696-703；de Medina P，Paillasse MR，Segala G，Poirot M，Silvente-Poirot S:Identification andpharmacological characterization of cholesterol-5,6-epoxide hydrolase as atarget for tamoxifen and AEBS ligands.Proc Natl Acad Sci USA 2010,107：13520-13525，所有这些文献均并入本文在此全部引用作为参考)。
在一些方面，特别是关于用于治疗雌激素受体阴性癌的组合物、方法和应用的方面，ChEH/AEBS抑制剂包括三苯基乙烯(TPE)衍生物，如抗雌激素(AE)、氯米芬(CL)和他莫昔芬(Tam)。
在另一个实施方案中，术语“癌症”是血癌。在另一个实施方案中，术语“癌症”是骨髓癌症或骨髓相关癌症。在另一个实施方案中，术语“癌症”是乳腺癌。在另一个实施方案中，术语“癌症”是胶质母细胞瘤。在另一个实施方案中，血癌是白血病。在另一个实施方案中，血癌是急性早幼粒细胞白血病(AML)。在另一个实施方案中，血癌是原粒细胞性白血病。在另一个实施方案中，血癌是非霍奇金淋巴瘤。在另一个实施方案中，血癌是骨髓瘤。在另一个实施方案中，血癌是淋巴瘤。在另一个实施方案中，骨髓癌是骨髓增生性疾病。
在一些实施方案中，本发明的组合物用于治疗罹患癌症的受试者。在一些实施方案中，与单独使用每种化合物的组合效果相比，使用本发明的组合物治疗患有癌症的受试者诱导协同作用。协同作用是两种或更多种化合物的协调或相关作用，因此组合作用大于各化合物单独作用的总和。当与CBD共同施用时具有协同作用的本发明化合物的非限制性实例是DPPE、7-酮胆固醇、曲帕拉醇或其组合。在一些实施方案中，当与CBD共同施用时在雌激素受体阴性癌症中具有协同作用的本发明化合物的非限制性实例包括三苯乙烯(TPE)衍生物，如抗雌激素(AEs)、氯米芬(CL)和他莫昔芬(Tam)。在一些实施方案中，与CBD共同施用时的协同作用包括萘醌衍生物甲萘醌。
在其他实施方案中，与单独施用各化合物的组合的作用相比，用CBD和ChEH/AEBS抑制剂和/或萘醌或其衍生物的组合来治疗罹患癌症的受试者诱导的作用大于相加作用。术语相加作用是指两种或多种化合物的组合作用等于各化合物分开作用的总和。
参考实施例1和图1-6，无论使用选择性ChEH/AEBS抑制剂(DPPE)或例如环B氧化固醇(7-酮胆固醇)或胆固醇生物合成类别的抑制剂(曲帕拉醇)，都证实代表性的ChEH/AEBS抑制剂具有抗癌活性，当与CBD联合使用时，表现出真正的协同作用。
参考实施例2，代表性的萘醌或其衍生物、甲萘醌也显示具有抗癌活性，当与CBD组合使用时，表现出真正的协同作用。
如图13所示，当与CBD共同施用时具有相加作用的其他化合物的实例是多柔比星和蒽环霉素(anthracyline)。
在一些实施方案中，本发明组合物在治疗癌症中的协同作用为通过分别施用相同组合物的化合物治疗癌症时的相加作用的至少1.1倍高。
在一些实施方案中，使用本发明的组合物治疗癌症的协同作用为通过分别施用相同组合物的化合物治疗癌症时的相加作用的1.1倍至2倍高、2倍至3倍高、3倍至4倍高、4倍至5倍高。
在一些实施方案中，使用本发明的组合物治疗癌症的协同作用为通过分别施用相同组合物的化合物治疗癌症时的相加作用的5倍以上高。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和ChEH/AEBS抑制剂的组合，其中CBD与ChEH/AEBS抑制剂的摩尔比为50:1至1:50(CBD:ChEH/AEBS抑制剂)。在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和萘醌或其衍生物的组合，其中CBD与萘醌或其衍生物的摩尔比在50:1至1:50之间(CBD:萘醌或其衍生物)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和ChEH/AEBS抑制剂的组合，其中CBD与ChEH/AEBS抑制剂的摩尔比为30:1至1:30(CBD:ChEH/AEBS抑制剂)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和萘醌或其衍生物的组合，其中CBD与萘醌或其衍生物的摩尔比为30:1至1:30(CBD:萘醌或其衍生物)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和ChEH/AEBS抑制剂的组合，其中CBD与ChEH/AEBS抑制剂的摩尔比为10:1至1:10(CBD:ChEH/AEBS抑制剂)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和萘醌或其衍生物的组合，其中CBD与萘醌或其衍生物的摩尔比为10:1至1:10(CBD:萘醌或其衍生物)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和ChEH/AEBS抑制剂的组合，其中CBD与萘醌的摩尔比为5:1至1:5(CBD:ChEH/AEBS抑制剂)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和萘醌或其衍生物的组合，其中CBD与萘醌或其衍生物的摩尔比为5:1至1:5(CBD:萘醌或其衍生物)
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和ChEH/AEBS抑制剂的组合，其中CBD与ChEH/AEBS抑制剂的摩尔比为2:1至1:2(CBD:ChEH/AEBS抑制剂)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和萘醌或其衍生物的组合，其中CBD与萘醌或其衍生物的摩尔比为2:1至1:2(CBD:萘醌或其衍生物)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和ChEH/AEBS抑制剂的组合，其中CBD与ChEH/AEBS抑制剂的摩尔比为1:1(CBD:ChEH/AEBS抑制剂)。
在一些实施方案中，本发明的组合物是CBD和萘醌或其衍生物的组合，其中CBD与萘醌或其衍生物的摩尔比为1:1(CBD:萘醌或其衍生物)。
在另一个实施方案中，本发明的组合物被配制为药物组合物，其还包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
在一些实施方案中，本文使用的术语“治疗”是指对哺乳动物、特别是人的医学病症的任何应答或预测，并且包括但不限于：预防受试者发生医学病症，所述受试者可能或不可能易患有该病症但尚未诊断出该病症，因此该治疗构成对该病症的预防性治疗；抑制医学病症，例如阻止、减缓或延迟医学病症的发作、发展或进展；或缓解医疗状况，例如引起医学病症的消退或减轻医疗状况的症状。
在另一个实施方案中，术语“受试者”是指患有癌症的人。在另一个实施方案中，术语“受试者”是指患有癌症的哺乳动物、例如宠物或农场动物。
在另一个实施方案中，本文使用的术语“施用”包括通过任何适当的方法将组合物或一种或多种药物活性成分递送至受试者，所述方法用于将组合物或其活性成分或其他药学上可接受的有效成分递送至受试者。在另一个实施方案中，施用方法可根据各种因素而变化，例如药物组合物的组分或药物活性或惰性成分的性质、潜在或实际疾病的部位、受试者的年龄和身体状况。向受试者施用本发明组合物的方法的一些非限制性例子包括：口服、静脉内、局部、呼吸系统内、腹膜内、肌内、胃肠外、舌下、透皮、鼻内、气雾剂、眼内、气管内、直肠内、阴道、皮肤贴剂、滴眼剂、滴耳剂或漱口水。
如本文所用，“治疗有效量”是指将一定量的本发明组合物施用于有需要的受试者，其在有需要的受试者中实现癌症的预防、抑制或消退。
在一些实施方案中，施用于受试者的组合物中CBD的量为0.1mg/kg(体重)/天至50mg/kg(体重)/天。在一些实施方案中，本发明组合物中CBD的量为10mg/kg(体重)/天至1000mg/kg(体重)/天。在一些实施方案中，本发明组合物中CBD的量为50mg/kg(体重)/天至500mg/kg(体重)/天。在一些实施方案中，本发明组合物中CBD的量为500mg/kg(体重)/天至2000mg/kg(体重)/天。
在一些实施方案中，施用于受试者的组合物中一种或多种ChEH/AEBS抑制剂的量或萘醌或其衍生物的量为0.1mg/kg(体重)/天至50mg/kg(体重)/天。在一些实施方案中，本发明组合物中一种或多种ChEH/AEBS抑制剂的量或萘醌或其衍生物的量为10mg/kg(体重)/天至1000mg/kg(体重)/天。在一些实施方案中，本发明组合物中一种或多种ChEH/AEBS抑制剂的量或萘醌或其衍生物的量为50mg/kg(体重)/天至500mg/kg(体重)/天。在一些实施方案中，本发明组合物中一种或多种ChEH/AEBS抑制剂的量或萘醌或其衍生物的量为500mg/kg(体重)/天至2000mg/kg(体重)/天。
在另一个实施方案中，治疗的持续时间为24小时至14天。在另一个实施方案中，治疗的持续时间为24小时至30天。在另一个实施方案中，治疗的持续时间为1至12个月。在另一个实施方案中，该方法用于治疗患有慢性癌症的受试者，且治疗的持续时间是受试者一生的时间。
在一些实施方案中，向患有癌症的受试者施用本发明的组合物诱导癌细胞凋亡，从而治疗受试者。癌细胞的细胞凋亡通过本领域已知的方法定量，例如但不限于下文在材料和方法部分中描述的XTT分析。
在一些实施方案中，向患有癌症的受试者施用本发明的组合物抑制肿瘤生长，从而治疗受试者。在一些实施方案中，抑制肿瘤生长是指在施用本发明的组合物后，减缓或防止肿瘤大小的增长。在一些实施方案中，将肿瘤生长与本领域已知的治疗癌症的相关临床数据进行比较。在一些实施方案中，将肿瘤生长与治疗的受试者的治疗前的肿瘤大小和/或体积进行比较。通过本领域已知的方法测量肿瘤的大小。
实施例
通常，本文使用的命名法和本发明中使用的实验室程序包括分子学、生物化学、微生物学和重组DNA技术。这些技术在文献中有充分的解释。参见，例如，"MolecularCloning:A laboratory Manual"Sambrook等人,(1989)；"Current Protocols inMolecular Biology"第I-III卷Ausubel,R.M.编撰(1994)；Ausubel等人,"CurrentProtocols in Molecular Biology",John Wiley and Sons,Baltimore,Maryland(1989)；Perbal,"A Practical Guide to Molecular Cloning",John Wiley&Sons,New York(1988)；Watson等人,"Recombinant DNA",Scientific American Books,New York；Birren等人(编撰)"Genome Analysis:A Laboratory Manual Series",第1-4卷,Cold SpringHarbor Laboratory Press,New York(1998)；在美国专利号4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659和5,272,057中阐述的方法学；"Cell Biology:A Laboratory Handbook",第I-III卷Cellis,J.E.编撰(1994)；"Culture of Animal Cells-A Manual of BasicTechnique"Freshney,Wiley-Liss,N.Y.(1994),第三版；"Current Protocols inImmunology"第I-III卷Coligan J.E.编撰.(1994)；Stites等人(编撰),"Basic andClinical Immunology"(第八版),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994)；Mishell和Shiigi(编撰),"Selected Methods in Cellular Immunology",W.H.Freeman and Co.,New York(1980)；可用的免疫测定在专利和科学文献中有广泛的描述，参见，例如美国专利号3,791,932；3,839,153；3,850,752；3,850,578；3,853,987；3,867,517；3,879,262；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074；4,098,876；4,879,219；5,011,771和5,281,521；"Oligonucleotide Synthesis"Gait,M.J.编撰.(1984)；"Nucleic AcidHybridization"Hames,B.D.和Higgins S.J.编撰(1985)；"Transcription andTranslation"Hames,B.D.和Higgins S.J.编撰(1984)；"Animal Cell Culture"Freshney,R.I.编撰(1986)；"Immobilized Cells and Enzymes"IRL Press,(1986)；"A PracticalGuide to Molecular Cloning"Perbal,B.,(1984)和"Methods in Enzymology"第1-317卷,Academic Press；"PCR Protocols:A Guide To Methods And Applications",Academic Press,San Diego,CA(1990)；Marshak等人,"Strategies for ProteinPurification and Characterization-A Laboratory Course Manual"CSHL Press(1996)；所有这些都通过引用并入。本文档中提供了其他一般参考。
材料和方法
试剂：试剂购自商业供应商，溶于100％DMSO中并储存于-20℃。最终的DMSO浓度为0.1％。在PBS中以1mg/ml的浓度制备吖啶橙/溴化乙锭染色剂。XTT和所有其他化学品均购自Sigma(密苏里州圣路易斯)。对照培养物含有本身不起作用的溶媒。
细胞培养：将人HL-60、原粒细胞性白血病和CCRF-CEM、急性淋巴细胞白血病细胞系在补充有10％(v/v)热灭活胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640中培养。将MCF-7、乳腺癌和A-172、胶质母细胞瘤细胞系在补充有10％(v/v)热灭活胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM中培养。将培养物保持在37℃、含有5％CO2的潮湿空气中，并且每2-3天通过转移至新鲜培养基保持在指数期。实验在无血清培养基和5％或10％FCS培养基中进行。在光学显微镜下使用血细胞计数器进行细胞计数，使用台盼兰染料排除法[17]。
细胞活力的测定：通过其(2,3-[-二-2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基]-2H-四唑-5-甲酰基苯胺(2,3[-bis-2-methoxy-4-nitro-5-sulphophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxianili de)、内盐(XTT)还原活性来评价HL-60、CCRF-CEM、A-172和MCF-7细胞的细胞活力分析。将100μl 2.5×105个细胞/ml在指定时间处理温育。在温育期结束时，加入25μl1mg.ml XTT溶液(含0.2mM的吩嗪硫酸甲酯(PMS))，将细胞再温育1h。使用ELISA读数器在450nm处测量OD值，参考波长为650nm，数据表示为三次平行测定的平均百分比，归一化到未处理的溶媒。
细胞凋亡的形态学定量：为了测定细胞凋亡，收获细胞(650g，7min)，并用终浓度为0.05mg/ml的吖啶橙/溴化乙锭染色。该方法可区分活细胞、坏死细胞和凋亡细胞(图11)。如果细胞核呈现正常形态且为绿色，则将细胞评分为活的。表现出正常形态和橙色的细胞被标示为坏死。如果它们的细胞核表现出染色质的凝缩和/或核碎裂，则细胞被评分为凋亡。在荧光显微镜下计数至少100个细胞并计算受影响细胞的百分比。
蛋白质印迹分析：对于蛋白质印迹分析，将5x107个细胞/ml用或不用20μM CBD和20μM氯米芬(CL)处理指定的时间段。将细胞用冰冷的PBS洗涤两次，并在冰上在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl,0.1％NP-40,1mM DTT,0.25M蔗糖,2mM MgCl2,pH 7.4)中裂解30分钟。离心后，将含有细胞可溶性级分的核后上清液载至12％SDS-PAGE凝胶上。电泳后，将凝胶印迹至PVDF膜(Bio-Rad，Hercules，CA)上，用5％(w/v)牛奶在4℃温度封闭过夜，在Tris-缓冲盐水Tween-20(TBST)中短暂洗涤，然后在4℃用抗小鼠人类抗MCl-1和钙网蛋白(CRN)一抗探测过夜。根据制造商的说明，用缀合辣根过氧化物酶的抗小鼠IgG(JacksonImmunoresearch，Avondale，PA)检测一抗结合，并通过增强化学发光(ECL)(BiologicalIndustries，Israel)使其可见。针对MCl-1和钙网蛋白(CRN)的抗体购自美国加利福尼亚州圣克鲁斯市。
CBD和CL的体内抗肿瘤效力：将NOD/SCID小鼠培育并饲养在以色列Negev的Ben-Gurion大学的动物设施中。所有动物均在7-8周龄使用。为了诱导肿瘤，用2.7Gy的X射线照射小鼠2分钟。接下来的5小时，将小鼠在右侧面注射100万个活HL-60细胞。监测小鼠的肿瘤发生。在14天内测量肿瘤，并且如(d2XD)/2(其中d是肿瘤的最短直径，D是肿瘤的最长直径，以mm表示)计算其体积(mm3)。一天后，将小鼠分成四组(6只小鼠/组)：溶媒组(veh)，大麻二酚组(CBD组)，氯米芬(CL组)和组合组(CBD+CL组)。CBD组小鼠肿瘤旁注射5mg CBD/kg，CL组注射10mg CL/kg，且CBD+CL组注射5mg CBD+10mg CL(溶于0.1ml补充有5mg/ml脱脂和透析的牛血清白蛋白的无菌PBS中)或其溶媒。注射每天重复一次，每周5天，每周检查两次肿瘤体积，直到溶媒消逝并且将剩余的动物处死。
数据表达和统计分析：活力实验一式三份进行，并且实验重复至少两次或三次。进行统计分析时，通过学生t检验进行评估。一些数据显示在所提供的图中，具有统计学显著性差异*p<0.05，**p<0.01。
实施例1
大麻二酚和ChEH/AEBS抑制剂的组合导致癌细胞活力的降低
检测了大麻二酚和ChEH/AEBS抑制剂的组合暴露对体外HL-60和CCRF-CEM、A-172和MCF-7细胞系活力的效应。为此，将肿瘤细胞在补充有10％FCS的培养基中培养，并且暴露于在含有5％FCS的培养基中的不同浓度的大麻二酚(1、5、10和30μM)48小时和1、5、10和30μΜChEH/AEBS抑制剂(图1、2、3和4)。
关于HL-60测定，结果显示当与ChEH/AEBS抑制剂组合时暴露于浓度为1μM或更高的大麻二酚达48h处理导致存活细胞数量显著减少。细胞活力的降低是剂量响应性的，即使在非常低的浓度1μM或5μM下也对细胞活力降低具有极大影响。
类似地，在雌激素受体缺陷型CCRF-CEM细胞系中，当与ChEH/AEBS抑制剂组合时，暴露于浓度为1μM或更高的大麻二酚的组合的结果显示存活细胞的数量显著减少。细胞活力的降低是剂量响应性的，即使在各自非常低的浓度1μM或5μM下也对细胞活力降低具有极大影响。
这些结果表明，当与CBD组合提供时，代表性的ChEH/AEBS抑制剂(无论选择性抑制剂(DPPE)还是例如环B氧化固醇(7-酮胆固醇))表现出强效的抗癌活性。
为了进一步阐述CBD与使用广泛的ChEH/AEBS抑制剂的组合疗法应用是有效的，对另一种代表性的ChEH/AEBS抑制剂与CBD组合抗HL-60和CCRF-CEM活性进行活性评估(图5和6)。在这种情况下，选择和使用浓度为30、60、100和200μM的胆固醇生物合成类抑制剂的ChEH/AEBS抑制剂(曲帕拉醇)。尽管评估了较高浓度的曲帕拉醇，但存活细胞的数量显著减少，最佳曲帕拉醇浓度为10μM和1-10μM的CBD。
图7和8提供了这些研究的阴性对照的结果，即CBD与ICI-182,780(1、5、10和30μM)非阳离子抗雌激素的组合治疗，其与CBD的组合不提供额外益处。
因此，当作为与CBD的组合疗法提供时，代表性类别的ChEH/AEBS抑制剂表现出显著的抗癌活性。
实施例2
大麻二酚、TPEs(氯米芬和他莫昔芬)和甲萘醌导致细胞活力下降
检测大麻二酚-暴露对体外HL-60和CCRF-CEM、A-172和MCF-7细胞系活力的影响。为此，将肿瘤细胞在补充有10％FCS的培养基中培养，并暴露于在含10％或5％FCS的培养基中的各种浓度的大麻二酚(5、10、15、20和30μΜ)达24h和48h和在无血清培养基中的0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和5μΜ的CBD达24h(图9A、9B、9C和9D)。结果显示，暴露于浓度为5μM或更高的大麻二酚24小时和48小时的处理导致活细胞数量显著减少(图9A、9B、9C和9D)。在24和48h暴露下细胞生存力的降低都是剂量响应(图9A，9B，9C和9D)。即使在无血清条件下以非常低的浓度0.2μM暴露24小时，CBD也对降低细胞活力具有极大影响。48小时后在10％FCS培养基中获得16μM的IC50值。随着培养基中血清浓度(5％FCS)的降低，IC50也在24h内获得。在无血清培养基中，24h的IC50为0.26μM。在10％的FCS培养基中，细胞被证明对CBD较不敏感24h。细胞活力降低的统计学显著性为P<0.05。
还检测了氯米芬和他莫昔芬对HL-60、CCRF-CEM、A-172和MCF-7细胞系的作用。为此，使用在5％血清补充培养基中的氯米芬观察细胞活力的剂量依赖性降低，对于HL-60、CCRF-CEM进行24h且对于A-172细胞系进行48h(图10和11)。发现在HL-60、A-172和CCRF-CEM细胞系中氯米芬的IC 50值分别为14、11和15μM。发现他莫昔芬对HL-60、CCRF-CEM和MCF-7的IC 50值分别为12、16和12μM。
实施例3
CBD与TPE和萘醌的协同作用
在该研究中，CBD与氯米芬、他莫昔芬和甲萘醌具有协同抗癌作用(图12A、B、C)。如图4所示，CBD、氯米芬、他莫昔芬和甲萘醌的组合有效降低了HL-60细胞的活力。发现最有效的组合为5μM CBD和15μM氯米芬(图12A)，10μM CBD和10μM他莫昔芬(图12B)。在高浓度的甲萘醌时，甲萘醌和CBD显示细胞活力的降低大于相加作用(图12C)。常规化疗药蒽环霉素、多柔比星在减少HL-60细胞活力方面与CBD具有相加作用(图13)。
检查了CBD和TPE(氯米芬和他莫昔芬)在雌激素受体(ER)阴性细胞系CCRF-CEM、A-172和ER阳性细胞系MCF-7中的作用。如图14A和B所示，与HL-60细胞系相似，使用CBD与TPE引起CCRF-CEM细胞活力的协同降低。这一发现支持大麻二酚与TPE相互作用而不依赖于ER参与的减少细胞活力机制的观点。发现最有效的组合为10μM CBD和10μM他莫昔芬，其协同降低MCF-7细胞活力(图15)。还发现在5％血清培养基中暴露于CBD和氯米芬48小时后协同降低了人类胶质母细胞瘤细胞系、A-172细胞活力(图16)。
为了评估使用CBD和他莫昔芬的组合在MCF-7的细胞活力中ER参与的作用，在药物治疗前30分钟加入β雌二醇以阻断ER。有趣的是，β雌二醇治疗组和未治疗组之间的细胞活力没有显著差异(图15A和15B)。因此，这些结果强烈表明这些药物在降低细胞活力方面独立于ER起作用。
实施例4
核形态变化是细胞凋亡的特征
检查了CBD对癌细胞系凋亡的影响。CBD在HL-60和CCRF-CEM细胞系中均显示出细胞凋亡的剂量和时间依赖性诱导(图17A和图18A)。CBD与TPE的组合在凋亡的诱导中具有协同作用，而与甲萘醌，CBD在诱导HL-60细胞系的细胞凋亡的诱导中显示出超过相加作用(图17B和17C)。CCRF-CEM细胞系也发现了类似的结果(图18)。代表性的显微照片如图19所示。
实施例5
用CBD下调Mcl-1
Mcl-1的过度表达与白血病细胞的存活相关；CBD下调CCRF-CEM细胞中的Mcl-1表达。CBD显示通过3小时处理的Mcl-1的下调(图20)。
实施例6
在移植了HL-60细胞的小鼠异种移植模型中肿瘤生长的抑制
用5mg/kg CBD、10mg/kg CL单独和组合处理异种移植的小鼠导致从第7天至第14天显著抑制HL-60肿瘤生长(图21)。
实施例7
CBD和氯米芬对AML和CLL原代细胞的影响
还评估了CBD和氯米芬对AML和CLL原代细胞的细胞毒性作用。5μM氯米芬和10μMCBD在24小时内协同诱导细胞死亡(图22)。

Claims (7)

1.包含大麻二酚和替米利芬的协同组合的组合物在用于制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症选自急性白血病、慢性淋巴细胞白血病、乳腺癌和胶质母细胞瘤，其中大麻二酚和替米利芬的摩尔比为50:1至1:50。
2.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。
3.权利要求1或2的用途，其中大麻二酚和替米利芬的摩尔比为30:1至1:30。
4.权利要求1或2的用途，其中大麻二酚和替米利芬的摩尔比为10:1至1:10。
5.权利要求1或2的用途，其中大麻二酚和替米利芬的摩尔比为5:1至1:5。
6.权利要求1或2的用途，其中大麻二酚和替米利芬的摩尔比为2:1至1:2。
7.权利要求1或2的用途，其中大麻二酚和替米利芬的摩尔比为1:1。
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