CN109307540A - 一种酶标板单孔残液的体积测量方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酶标板单孔残液的体积测量方法，首先将酶按每孔a1ul、a2ul、a3ul、......an ul分别加入空白酶标板的包被孔中,并加入等量的底物液和显色剂的混合物，然后加入终止液，用酶标仪测量每孔OD值后建立标准曲线；用酶代替洗板机洗液，对空白酶标板进行清洗；在酶标板包被孔中加入等量的底物液和显色剂的混合物，然后加入终止液，用酶标仪测量每孔的OD值；将每孔的OD值依次带入标准曲线，求得酶标板中各包被孔的残液体积。本发明的优点在于方法简单，能准确测量洗板机清洗后酶标板每一包被孔中的残液体积，必要时可测量到2 ul以下极微量体积，保证了酶标板清洗数据精确可靠，同时为医学检验提供了可靠的数据。

Description

一种酶标板单孔残液的体积测量方法

技术领域

本发明涉及体外诊断用酶标板，尤其是涉及一种酶标板单孔残液的体积测量方法。

背景技术

酶标板是体外诊断检测实验中使用的反应板，实验结束后，常用酶标板清洗装置---洗板机对其进行清洗。

使用洗板机对酶标板进行清洗后，依然会有一定量的洗液残留在酶标板包被孔中，行业内将包被孔中留存残液体积的多少作为判断洗板机性能的一个指标。洗板机一般和酶标仪/发光仪配套使用，广泛地被用于医院、血站、卫生防疫站、试剂厂家、研究室的酶标板清洗工作。与最终的读数相比，洗板环节在实验过程中是一个非常不起眼的环节，它不产生最终分析结果，因此很容易被人忽视。但是，它们的性能也与最终结果息息相关。尤其是96孔的洗板机，洗头的平整度直接影响到残液的体积，而一般洗板都需要洗涤5-6遍，残液效果累计下来，直接影响整板实验的精密性结果。有些洗板机不能达到足够低的残留体积，也会导致背景高或标准偏差大。为确保酶标板清洗数据准确可靠，同时为医学检验提供更可靠的数据，对洗板机洗涤后酶标板单孔进行残液体积的测量具有非常重要的意义。

由于96孔板每孔的容量很小，约350-400ul/孔，液体残留微量，如果使用移液器量取残液，则非常费时费力，且不能全面反应出洗板机残液的性能情况，因此只能将酶标板整块清洗之后称重测量整板增加液体的重量，估算出整板的残液情况，但不能检测单孔残液的体积。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶标板单孔残液的体积测量方法，该方法操作简单、结果准确。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的发光板单孔残液的体积测量方法，包括以下步骤：

第一步，将酶按每孔a1ul、a2ul、a3ul、......an ul分别加入空白酶标板的包被孔中,其中a1＜a2＜a3......＜an，n≥5；在添加酶的包被孔中分别加入等量的底物液和显色剂的混合物，然后加入终止液，用酶标仪测量每孔的OD值；

第二步，以酶的体积量为横坐标，OD值为纵坐标，建立标准曲线；

第三步，用酶代替洗板机洗液，对空白酶标板进行清洗；

第四步，清洗结束后，在酶标板各包被孔中加入等量的底物液和显色剂的混合物，然后加入终止液，用酶标仪测量每孔的OD值；

第五步，将每孔的OD依次带入第二步建立的标准曲线，求得酶标板中各包被孔的残液体积。

本发明的优点在于方法简单，能准确测量洗板机清洗后酶标板每一包被孔中的残液体积，必要时可测量到2 ul以下极微量体积，保证了酶标板清洗数据精确可靠，同时为医学检验提供了可靠的数据。

附图说明

图1实施例中的加样布局图示。

图2是 拟合的标准曲线。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明方法做更加详细的说明，以便于本领域技术人员的理解。

本发明酶标板单孔残液的体积测量方法包括以下具体步骤：

第一步，取1ml酶，加入到50ml缓冲液中，混合均匀后，将混匀后的酶按照图1所示的加样布局（图1中的0、2、5、7、10、15分别代表酶的加样量为0ul、2ul、5ul、7ul、10ul、15ul）加入到空白酶标板的包被孔内，然后在添加酶的包被孔中分别加入50ul通用底物+50ul通用显色剂，5min之后加入50ul终止液，用酶标仪测量每孔的OD值；当底物、显色剂和终止液的量是固定的时候，酶的量和酶标仪检测的OD值呈正比关系；

第二步，以酶的体积量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴），采用四参数拟合,建立标准曲线，如图2所示；

第三步，用第一步稀释的酶代替洗液，对空白酶标板进行清洗（按试剂盒说明书进行正常清洗）；

第四步，清洗结束后，在酶标板包被孔中分别加入50ul底物+50ul显色剂，5min之后加入50ul终止液，然后再用酶标仪测量每孔OD值；

第五步，将每孔的OD值依次带入第二步建立的标准曲线，即可求得酶标板中各包被孔内的残液体积。

Claims (1)

1.一种酶标板单孔残液的体积测量方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步，将酶按每孔a1ul、a2ul、a3ul、......an ul分别加入空白酶标板的包被孔中,其中a1＜a2＜a3......＜an，n≥5；在添加酶的包被孔中分别加入等量的底物液和显色剂的混合物，然后加入终止液，用酶标仪测量每孔的OD值；

第二步，以酶的体积量为横坐标，OD值为纵坐标，建立标准曲线；

第三步，用酶代替洗板机洗液，对空白酶标板进行清洗；

第四步，清洗结束后，在酶标板各包被孔中加入等量的底物液和显色剂的混合物，然后加入终止液，用酶标仪测量每孔的OD值；

第五步，将每孔的OD值依次带入第二步建立的标准曲线，求得酶标板中各微孔的残液体积。