CN109305967A - 新型嘧啶并杂环类化合物及制备方法和用途 - Google Patents

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杨玉社
钮奥
汪洋
谢华
丁健
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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Abstract

本发明公开了一种新型嘧啶并杂环类化合物及制备方法和用途，本发明的嘧啶并杂环类化合物的结构如通式I所示，各取代基的定义详见说明书和权利要求书。本发明的嘧啶并杂环类化合物，对双突变型EGFR激酶抑制活性及选择性大大优于现有AZD‑9291，可用于制备抗肿瘤药物，并克服第一代EGFR抑制剂耐药缺陷。

Description

新型嘧啶并杂环类化合物及制备方法和用途
技术领域
本发明属于药物学领域，涉及药物化学和药理学领域，更具体而言，涉及新型嘧啶并杂环类化合物的制备方法及其治疗癌症药物的应用。
背景技术
近年来，癌症的发病率呈逐年上升趋势，严重威胁着人类的生命健康。肺癌是致死人数最多的癌症，每年死于肺癌的人数可达167万人，占因癌症死亡病人的五分之一。肺癌从组织学上可分为小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer，SCLC)和非小细胞肺癌(NoneSmall Cell Lung Cancer，NSCLC)，其中非小细胞肺癌又可进一步分为鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等亚型。NSCLC的发生率占肺癌的85％。迄今为止，人们除了了解吸烟人群是NSCLC的高发人群外，尚无有效手段筛选高发人群，且多数患者发病初期症状并不明显，因此大部分病人在确证NSCLC时已经是晚期，预后很差，五年生存率仅有15％。出现了远端转移的晚期NSCLC病人，若不加以适当治疗，其中位生存期仅有4-5月，一年生存率仅有10％。然而，非小细胞肺癌普遍对化疗敏感性不高，使用传统的化疗药物进治疗时，中位生存期仅能达到6-8月，且在治疗过程中对病人有严重的副作用，病人的生存质量极差。
蛋白酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinase，PTKs)在复杂的细胞信号转导网络过程中起到核心作用，控制着细胞的生长、增殖、分化、迁移和细胞周期等多种调节作用。它们的功能都是将ATP的γ位的磷酸基团转移到蛋白质底物的酪氨酸残基的羟基上，通过对蛋白质底物的磷酸化，引起底物蛋白构象由非活化构象变为活化构象，引起细胞信号的转导，从而产生相应的生物学作用。当蛋白酪氨酸激酶出现异常的高表达或者活性异常升高，将使得细胞信号调控发生紊乱，导致异常增殖，与肿瘤的生长、转移和肿瘤血管的生成密切相关。根据PTK是否具有细胞膜外受体，可分为非受体酪氨酸激酶(None Recptor TyrosineKinase，non-RTKs)和受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinase，RTKs)。受体酪氨酸激酶(RTKs)是最早一批被发现与肿瘤发生高度相关的激酶。迄今为止共发现超过60种不同的RTKs，分属于20个不同的亚家族[9]。包括表皮生长因子受体EGFR、血小板生长因子受体(Platelet Derived Growth Factor Receptor,PDGFR)、血管内皮生长因子受体(VescularEndothelial Growth Factor Receptor,VEGFR)，神经生长因子受体(Nerve GrowthFactor Receptor,NGFR)，成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor Receptor,FGFR)等家族。其中EGFR是第一种被发现与肿瘤直接相关的受体酪氨酸激酶，属于HER家族，又被称为ErbB家族。该家族包括EGFR(HER1、ErbB1)、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)和HER4(ErBb4)，均为跨膜蛋白，是具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体。当EGFR被激活后可产生抗凋亡、促生存的生物学效应，在肿瘤的生长、增殖、转移等过程中起到关键作用。当EGFR发生突变，则可能导致肿瘤发生。如EGFR发生激活突变(Activating Mutation)，典型情况为L858R和exon 19del突变，其激酶活性可提高约50倍，致使下游细胞信号失调而发生肿瘤，这样的突变目前在部分NSCLC患者中发现。目前已经证明，在EGFR发生激活突变的NSCLC患者中，使用EGFR抑制剂进行治疗具有突出疗效。第一代EGFR抑制剂如吉非替尼(ZD1839)(AstraZeneca,2003)，厄洛替尼(OSI774)(Roche,2004)对EGFR激活突变的患者，普遍能延长一年左右的生存期，然而在EGFR抑制剂治疗9-12月后，所有病人都会发生获得性耐药。发生获得性耐药的原因有多种不同机制。其中最普遍的情况则是由于EGFR发生了第二位点的T790M突变导致的，约占50％。激活突变的EGFR对ATP的亲和力大幅提高，而第一代EGFR抑制剂均是ATP竞争性抑制剂，这导致药物分子与靶标的结合率显著下降，不能达到有效抑制。第二代不可逆EGFR抑制剂阿法替尼，与第一代可逆抑制剂相比，对EGFR激酶结构域的亲和力更强，共价连接能实现对EGFR更持久的抑制，在体外测试中对T790M突变的EGFR仍然有较高的抑制活性。但由于第二代EGFR抑制剂普遍对EGFRWT具有很强抑制活性，导致剂量限制性毒性。其靶点相关副作用如皮疹、腹泻等较为严重，治疗窗狭窄，极大地限制了第二代EGFR抑制剂的临床应用，并没有真正克服T790M突变带来的耐药问题。为了解决因T790M突变导致的耐药性问题，临床上需要对含有T790M突变具有高度抑制活性，同时对EGFRWT抑制活性较低的新型EGFR抑制剂。第三代EGFR抑制剂如AZD-9291，其对其对表达野生型EGFR的LOVO细胞IC50为480nM，而对表达L858R/T790M双突变EGFR的NCI-H1975细胞IC50为15nM，有32倍的选择比。在其三期临床试验中，9291对T790M基因型病人客观缓解率达到61％。FDA已于2015年批准AZD-9291上市，用于治疗因T790M对第一代EGFR抑制剂耐药的非小细胞肺癌病人。然而AZD-9291的三期临床试验数据显示，仍有47％的患者出现野生型EGFR靶点相关的副作用，说明其对EGFRWT的抑制作用仍然较高。
目前的EGFR抑制剂仍不能完全满足医疗需求，而且现有的可逆或不可逆EGFR抑制剂，对EGFRWT都具有一定抑制活性，导致临床使用中的靶点相关副作用。因此，迫切需要新类型的，高选择性的EGFR抑制剂药物来克服相关问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对双突变型EGFR激酶抑制活性及选择性大大优于AZD-9291的一系列新型吡啶并[2,3-d]嘧啶-7酮类化合物，可用于制备抗肿瘤药物，并克服第一代EGFR抑制剂耐药缺陷。
本发明的第一方面，提供一种通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药：
式中，*表示S构型、R构型或消旋；
R1为H、卤素、羟基、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、-(CH2)nNR5R6；
t为1、2、3或4；
各R2独立地选自：H、卤素、羟基、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、-(CH2)nNR5R6；
Y为单键或3-8元杂环基；
X为-S-、-SO2-、或-SO-；
R3为C1-C6烷基、-(CH2)nNR5R6、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基；
s为0或1；
W为3-8元杂环基、C6-C10芳基、4-10元杂芳基；
R4为H或卤素；
其中，各n独立为0、1、2、3、4或5；各R5、各R6各自独立地为C1-C6烷基；或者各R5、各R6独立与相连的N一起形成3-8元杂环基；
各所述3-8元杂环基、C6-C10芳基、4-10元杂芳基任选独立地具有选自下组的取代基：卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、-C(O)C1-C6烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基。
本发明中，所述“药学上可接受的盐”包括药学可接受的酸加成盐和药学可接受的碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其他副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和水杨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。“药学可接受的碱加成盐”，包括但不限于无机碱的盐如钠盐，钾盐，钙盐和镁盐等。包括但不限于有机碱的盐，比如铵盐，三乙胺盐，赖氨酸盐，精氨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
在另一优选例中，R1为H、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基。
在另一优选例中，各R2独立地选自：C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基。
在另一优选例中，R3为C1-C4烷基或-(CH2)nNR5R6、
n为1、2、或3；R5、R6各自独立地为C1-C4烷基；或者R5各R6与相连的N一起形成5-7元杂环基，所述5-7元杂环基任选具有选自下组的取代基：C1-C4烷基、-C(O)CH3。
在另一优选例中，W为5-7元杂环基或苯基，所述5-7元杂环基或苯基任选独立地具有选自下组的取代基：卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、-C(O)C1-C4烷基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基。
在另一优选例中，所述化合物选自下组：
本发明的第二方面，提供第一方面所述的化合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
中间体A化合物与中间体B化合物反应生成通式I所示的化合物；
各式中，R1、R2、R3、R4、W、Y、X、*、s、t定义如第一方面所述。
在一优选例中，中间体A和中间体B溶解在有机溶剂中，加入碳酸铯和金属催化剂，磷配体，在室温至溶剂回流温度下反应，经常规分离纯化的到通式I所示的化合物。
在一优选例中，所述有机溶剂选自下组：四氢呋喃，二氧六环，DMF，甲苯或其中两种以上的混合溶剂。
在一优选例中，所述金属催化剂选自下组：钯催化剂，如醋酸钯，氢氧化钯或其中两种以上的组合。
本发明的第三方面，提供一种药物组合物，包含如第一方面所述的化合物、其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药；和
药学上可接受的载体。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明的化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如抗菌药)联合给药。
使用本发明化合物或药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物施用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的第四方面，提供第一方面所述的化合物的应用，用于：
(i)制备调控EGFR酪氨酸激酶活性的药物；或者
(ii)制备预防和/或治疗EGFR相关疾病的药物。
在另一优选例中，所述的EGFR相关疾病选自：肿瘤、糖尿病、免疫系统疾病、神经退行性疾病、心血管疾病或使用EGFR调节剂治疗期间具有获得性耐药性的疾病。
在另一优选例中，所述肿瘤为携带T790M突变肿瘤。
在另一优选例中，所述肿瘤选自：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌。
在另一优选例中，所述调控EGFR酪氨酸激酶活性是指抑制EGFR酪氨酸激酶活性。
在另一优选例中，所述EGFR为野生型EGFR、T790M突变的EGFR、L858R/T790M双突变EGFR。
在另一优选例中，所述化合物用于制备选择性抑制EGFRL858R/T790M激酶的药物。
本发明的嘧啶并杂环类化合物，可以有效抑制EGFRL858RT790M激酶。同时，对EGFRWT抑制活性较低，具有较好的选择性。本发明的嘧啶并杂环类化合物是一类新颖的能够克服现有的EGFR-TKI耐药并具有优良选择性和活性的酪氨酸激酶抑制剂。如本领域技术人员所理解的，本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐或立体异构体或其前药分子可用于制备治疗人类及其它哺乳动物的肿瘤等过度增殖性疾病。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本申请的发明人经过广泛而深入地研究，使用吡啶并[2,3-d]嘧啶-7酮作为结构母核，进行一系列结构修饰并得到多个新化合物，对它们进行了EGFR蛋白激酶抑制活性测试，发现了对双突变型EGFR激酶抑制活性及选择性大大优于AZD-9291的一系列新型吡啶并[2,3-d]嘧啶-7酮类化合物，可用于制备抗肿瘤药物，并克服第一代EGFR抑制剂耐药。在此基础上，完成了本发明。
术语
C1-C6是指具有1-6个碳原子，C6-C10是指具有6-10个碳原子，依此类推。
3-8元是指环原子数为3-8个，4-6元是指环原子数为4-6个，依此类推。
“烷基”是指直链或含支链的饱和脂族烃基团，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基等。
“卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的直链或含支链的饱和脂族烃基团，包括但不限于一氟甲基、一氯乙基、二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“烷氧基”是指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述，例如，“C1-6烷氧基”指含1-6个碳的烷基氧基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
“卤代烷氧基”是指-O-(卤代烷基)，其中卤代烷基的定义如上所述。
“杂环基”是指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃(包括螺环、稠环、桥环)取代基，其中一个或多个环原子被选自氮、氧或S的杂原子取代。
“芳基”是指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，如苯基、萘基。
“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和S，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。
除非另外说明，上述基团为任选取代的，可能的取代基包括，但不限于：C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基、C1-C10烷氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基、氨基、C1-C10烷基氨基、C1-C20二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、氰基、硝基、酰基、硫代酰基、酰氧基、羧基和羧酸酯基。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件(如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件)或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
所用制备例和实施例中，核磁共振氢谱由Bruker AVANCE III 400或Varian-MERCURY Plus-400测定，所用内标物均为TMS。低分辨ESI质谱由Finnigan LCQ-DECA型质谱仪测定。柱层析分所使用硅胶，未特殊说明均为200-300目。洗脱液的配比均为体积比。
实施例一：
(S)-8-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-2-((2-甲氧基-4-(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基吡啶[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(II-01)的合成
步骤1：叔丁基4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-碳酸乙酯(12)
将5-氟-2-硝基苯甲醚(5g，29.2mmol)和N-Boc-哌嗪(6.54g，35.2mmol)溶于DMF(50ml)，加入K2CO3(8.1g,58.7mmol)，加热至60℃，反应8h。先将滤液蒸干，用乙酸乙酯稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体12(7.4g，75％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,J＝9.3Hz,1H),6.44(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),6.33(d,J＝2.4Hz,1H),3.98(s,3H),3.67–3.58(m,4H),3.41(dd,J＝11.8,6.8Hz,4H),1.51(s,9H).MS(ESI)m/z:338.1(M+H)+
步骤2：1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-(甲磺酰基)哌嗪(13)
将化合物09(7.4g,21.9mmol)溶于二氯甲烷(75ml)，加入三氟乙酸(16ml,219.5mmol)，室温反应4小时，加入饱和碳酸钠淬灭，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干。将残余物溶于无水二氯甲烷(50ml)，滴加三乙胺(5.53g,54.75ml)，在冰浴下滴加甲基黄酰氯(3.77g,32.91mmol)，反应1h。用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到13(2.1g,30.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.91(d,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝9.4,2.3Hz,1H),6.60(d,J＝2.2Hz,1H),3.92(s,3H),3.65–3.55(m,4H),3.22(dd,J＝11.2,6.4Hz,4H),2.93(s,3H).MS(ESI)m/z:316.1(M+H)+
步骤3：2-甲氧基-4-(4-(甲磺酰基)哌嗪-1基)苯胺(14)
将化合物10(1g,3.17mmol)溶于二氯甲烷，加入钯碳催化氢化反应6h。用硅藻土过滤，用水萃取一次，饱和食盐水萃取一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到化合物14(0.68g,76％)1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.54(d,J＝6.8Hz,2H),6.34(d,J＝7.7Hz,1H),4.33(s,2H),3.75(s,3H),3.28–3.17(m,4H),3.05-3.00(m,4H),2.92(s,3H).MS(ESI)m/z:286.1(M+H)+。
步骤4：(S)-8-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-2-((2-甲氧基-4-(4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)苯基)胺基)-5-甲基吡啶[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(II-01)
将化合物03(0.045g,0.14mmol)和化合物11(0.042g,0.15mmol)溶于2-丁醇，加入三氟乙酸(0.031g,0.28mmol)，加热回流反应18h。蒸除溶剂，加入二氯甲烷，用水萃取一次，饱和食盐水萃取一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-04(0.046g,58.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.04(s,1H),8.71(s,1H),7.21(s,1H),6.75-6.65(m,2H),6.55(s,1H),6.24–6.00(m,2H),5.64(d,J＝34.4Hz,1H),3.90-3.70(m,1H)3.70(s,3H),3.50-4.40(m,2H)3.30-3.20(m,7H),2.95(s,3H),2.35(s,3H),2.00(dd,J＝14.5,6.9Hz,1H),1.70-1.40(m,2H).MS(ESI)m/z:582.2(M+H)+。
实施例二：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-02)的合成
步骤1：叔丁基(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸酯(15)
5-溴-2,4-二氯嘧啶(15.8g,69.3mmol)和N-Boc-间苯二胺(17.3g,83.2mmol)分别溶于200ml DMF,在加入K2CO3(19.1g,138mmol)，室温反应室温反应12h。向反应液加入冰水，有白色固体析出，过滤，蒸干。得到白色固体15(27g,98％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.46(s,1H),9.31(s,1H),8.45(s,1H),7.66(s,1H),7.24(td,J＝5.6,2.1Hz,2H),7.15–7.11(m,1H),1.48(s,9H).MS(ESI)m/z:399.0(M+H)+.
步骤2：叔丁基(3-(2-氯-5-甲基-7氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(16)
将化合物15(15g,37.5mmol)和巴豆酸(8.1g,94.2mmol)分别溶于甲苯(200ml),加入DIPEA(48.4g,372mmol),再加入PdCl2(PhCN)2(1g,2.6mmol),P(o-tolyl)3(1.14g,3.34mmol)，Ar保护下加热至65℃，反应6小时后，加入醋酸酐(11.5g,30mmol)，继续反应1.5小时。用硅藻土过滤，加二氯甲烷稀释，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物经硅胶柱层析得到白色固体16(7.6g,收率52％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.62(s,1H),9.10(s,1H),7.51–7.38(m,3H),6.91–6.86(m,1H),6.73(d,J＝1.3Hz,1H),2.54(s,3H),1.47(s,9H).MS(ESI)m/z:387.1(M+H)+.
步骤3：N-(3-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(17)
将化合物16(0.5g,1.3mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入三氟乙酸(1.5g,12.7mmol),室温反应4h,加入饱和碳酸氢钠淬灭，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物再溶于无水二氯甲烷(10ml),滴加N,N-二异丙基乙胺(0.33g,2.6mmol),在冰浴下滴加丙烯酰氯(0.14g,1.5mmol)，反应1h,室温下继续反应1h。有白色固体析出，过滤，水洗，蒸干。得到白色固体17(0.3g，收率70％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.39(s,1H),9.12(s,1H),7.70(d,J＝7.5Hz,2H),7.52(dt,J＝16.1,8.1Hz,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,1H),6.75(d,J＝1.2Hz,1H),6.46(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.26(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H),2.55(s,3H).MS(ESI)m/z:341.1(M+H)+.
步骤4：2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)巯基)-N,N-二甲基乙胺(18)
5-氟-二硝基苯甲醚(4g,23.4mmol)和2-甲胺乙硫醇盐酸盐(4g,28.2mmol)分别溶于DMF(50ml)，在加入K2CO3(6.46g,46.8mmol)。加热至70℃反应8h。反应完后先过滤，将滤液蒸干，用乙酸乙酯稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色油状液体18(3.1g,50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(d,J＝8.6Hz,1H),6.96(s,1H),6.89(d,J＝8.6Hz,1H),3.98(s,3H),3.20–3.11(m,2H),2.65(t,J＝7.2Hz,2H),2.33(s,6H).MS(ESI)m/z:257.1(M+H)+.
步骤5：4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯胺(19)
将化合物18(1g,3.9mmol)溶于甲醇(30ml),加入冰醋酸5ml，在冰浴下缓慢加入锌粉(2.5g,10eq)。反应加热至50℃，反应12h。反应结束后，先用NaOH(4N)调pH至12，用硅藻土过滤，将滤液蒸干，用乙酸乙酯稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到褐色油状液体19(0.75g,85％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(d,J＝8.6Hz,1H),6.96(s,1H),6.89(d,J＝8.6Hz,1H),3.98(s,3H),3.20–3.11(m,2H),2.65(t,J＝7.2Hz,2H),2.33(s,6H).MS(ESI)m/z:211.1(M+H)+。
步骤6：N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-02)
将化合物17(0.139g,0.41mmol)和化合物19(0.072g,0.32mmol)分别溶于1,4-二氧六环(10ml),加入CS2CO3(0.26g,0.80mmol),在加入Pd(OAc)2(0.018g,0.08mmol)和Xantphos(0.047mmol,0.08mmol)。在Ar保护下，将反应液加热65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-05(0.025g,15％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.41(s,1H),8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.92–7.80(m,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝7.3Hz,2H),6.53(s,1H),6.36(d,J＝17.1Hz,1H),6.28–6.17(m,1H),5.70(d,J＝9.6Hz,1H),3.96(s,3H),3.32–3.20(m,2H),2.78–2.67(m,2H),2.56(s,3H),2.22(s,6H).MS(ESI)m/z:531.2(M+H)+。
实施例三：
(S)-8-(1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)-2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(II-03)的合成
将化合物08(0.06g,0.18mmol)和化合物19(0.064g,0.28mmol)分别溶于1,4-二氧六环(10ml),加入CS2CO3(0.26g,0.80mmol),在加入Pd(OAc)2(0.018g,0.08mmol)和Xantphos(0.047g,0.08mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水萃取一次，饱和食盐水洗一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-06(0.02g,21％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),6.59(dt,J＝3.9,2.3Hz,1H),6.43–6.38(m,1H),6.30–6.19(m,1H),5.72(ddd,J＝18.7,9.3,3.0Hz,1H),4.25–3.97(m,3H),3.88(t,J＝9.3Hz,1H),3.83–3.65(m,1H),2.86–2.68(m,1H),2.49(s,3H),2.43(ddd,J＝18.0,8.7,4.4Hz,1H),2.27–2.16(m,1H).MS(ESI)m/z:509.3(M+H)+。
实施例四：
(S)-8-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(II-04)的合成
将化合物03(0.057g,0.17mmol)和化合物19(0.05g,0.22mmol)分别溶于1,4-二氧六环(5ml)，加入CS2CO3(0.12g,0.037mmol)，在加入Pd(OAc)2(0.015g,0.067mmol)和Xantphos(0.04g,0.069mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水萃取一次，饱和食盐水洗一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-07(0.015g,17％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.06(s,1H),8.72(s,1H),7.21(s,1H),6.68-6.60(m,2H),6.55(s,1H),6.28–6.00(m,2H),5.63(dd,J＝29.8,13.0Hz,1H),4.05(t,J＝5.6Hz,2H),3.90-3.60(m,5H),3.23–3.09(m,1H),2.63(d,J＝3.0Hz,2H),2.35(s,3H),2.23(s,6H),2.00(dd,J＝14.3,6.6Hz,1H)1.50-1.40(m,1H).MS(ESI)m/z:523.2(M+H)+.
实施例五：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-05)的合成
步骤1：((3-甲氧基-4-硝基苯基)磺酰基)-N,N-二甲基乙胺(20)
将化合物18(3.05g，11.9mmol)溶于水：甲醇：四氢呋喃(60ml:30ml:30ml)的混合物溶液，加入过氧硫酸氢钾复合盐(15g,24.4mmol)，室温反应3天。反应结束后先加Na2SO3水溶液，在加入氨水调pH至8，用二氯甲烷稀释，用水萃取一次，饱和食盐水萃取一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色油状液体20(1.74g,51％)。MS(ESI)m/z:(289.1M+H)+
步骤2：4-((2-(二甲胺基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯胺(21)
将化合物20(1.74g,6.04mmol)溶于乙醇(30ml)中,加入钯碳(0.8g),加热至40℃催化氢化反应6h。反应结束后用硅藻土过滤，将滤液蒸干，用乙酸乙酯稀释，用水萃取一次，饱和食盐水萃取一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到无色油状液体21(1.5g,95％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(d,J＝8.3Hz,1H),7.67(s,1H),7.61(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),7.29(s,1H),4.06(s,3H),3.37–3.28(m,2H),2.81–2.72(m,2H),2.19(s,6H).MS(ESI)m/z:(259.1M+H)+
步骤3：N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-08)
将化合物17(0.14g,0.41mmol)和化合物21(0.07g,0.32mmol)分别溶于1,4-二氧六环(10ml),加入CS2CO3(0.26g,0.80mmol),在加入Pd(OAc)2(0.018g,0.08mmol)和Xantphos(0.047mmol,0.08mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水萃取一次，饱和食盐水萃取，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-08(0.025g,15％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.41(s,1H),8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.92–7.80(m,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝7.3Hz,2H),6.53(s,1H),6.36(d,J＝17.1Hz,1H),6.28–6.17(m,1H),5.70(d,J＝9.6Hz,1H),3.96(s,3H),3.32–3.20(m,2H),2.78–2.67(m,2H),2.56(s,3H),2.22(s,6H).MS(ESI)m/z:563.2.1M+H)+。
实施例六：
(S)-8-(1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)-2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(II-06)的合成
将化合物08(0.043g,0.13mmol)和化合物21(0.052g,0.2mmol)分别溶于1,4-二氧六环(5ml),加入CS2CO3(0.088g,0.27mmol),在加入Pd(oAc)2(0.012g,0.05mmol)和Xantphos(0.031g,0.05mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-09(0.006g,8％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.41(s,1H),8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.92–7.80(m,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝7.3Hz,2H),6.53(s,1H),6.36(d,J＝17.1Hz,1H),6.28–6.17(m,1H),5.70(d,J＝9.6Hz,1H),3.96(s,3H),3.32–3.20(m,2H),2.78–2.67(m,2H),2.56(s,3H),2.22(s,6H).MS(ESI)m/z:541.2(M+H)+。
实施例七：
(S)-8-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮](II-07)的合成
将化合物03(0.082g,0.25mmol)和化合物21(0.096g,0.37mmol)分别溶于1,4-二氧六环(5ml),加入CS2CO3(0.16g,0.5mmol),在加入Pd(oAc)2(0.022g,0.10mmol)和Xantphos(0.057g,0.10mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-10(0.014g,10％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.06(s,1H),8.72(s,1H),7.21(s,1H),6.68-6.60(m,2H),6.55(s,1H),6.28–6.00(m,2H),5.63(dd,J＝29.8,13.0Hz,1H),4.05(t,J＝5.6Hz,2H),3.90-3.60(m,5H),3.23–3.09(m,1H),2.63(d,J＝3.0Hz,2H),2.35(s,3H),2.23(s,6H),2.00(dd,J＝14.3,6.6Hz,1H)1.50-1.40(m,1H).MS(ESI)m/z:555.3(M+H)+
实施例八：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)亚磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺](II-08)的合成
步骤1：12-((3-甲氧基-4-硝基苯基)亚磺酰基)-N,N-二甲基乙胺(22)
将化合物18(1g,3.9mmol)溶于水：甲醇：四氢呋喃(40ml:20ml:20ml)的混合物溶液，加入过氧硫酸氢钾复合盐(4.8g,7.8mmol)，室温反应3h。反应结束后先加Na2SO3水溶液，在加入氨水调pH至8，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体22(0.231g,23％).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.41(s,1H),8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.92–7.80(m,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝7.3Hz,2H),6.53(s,1H),6.36(d,J＝17.1Hz,1H),6.28–6.17(m,1H),5.70(d,J＝9.6Hz,1H),3.96(s,3H),3.32–3.20(m,2H),2.78–2.67(m,2H),2.56(s,3H),2.22(s,6H).MS(ESI)m/z:547.2M+H)+
步骤2：4-((2-(二甲胺基)乙基)亚磺酰基)-2-甲氧基苯胺(23)
将化合物22(0.231g,0.85mmol)溶于甲醇(15ml)，加入冰醋酸0.24ml，在冰浴下缓慢加入锌粉(0.28g,4.2mmol)。反应加热至50℃，反应12h。反应结束后，先用NaOH(4N)调pH至12，用硅藻土过滤，将滤液蒸干，用乙酸乙酯稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到无色油状液体23(0.139g,67％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19(d,J＝1.7Hz,1H),7.04(dd,J＝8.0,1.8Hz,1H),6.76(d,J＝8.0Hz,1H),4.12(d,J＝13.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.03(ddd,J＝13.0,7.4,5.8Hz,1H),2.89–2.68(m,2H),2.50(ddd,J＝13.2,7.5,5.9Hz,1H),2.28(s,6H).MS(ESI)m/z:243.1M+H)+
步骤3：N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)亚磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-08)
将化合物17(0.094g,0.28mmol)和化合物23(0.061g,0.28mmol)分别溶于1,4-二氧六环(5ml)，加入CS2CO3(0.18g,0.55mmol),在加入Pd(OAc)2(0.025g,0.11mmol)和Xantphos(0.064g,0.11mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-11(0.06g,40％)。H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.41(s,1H),8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.92–7.80(m,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝7.3Hz,2H),6.53(s,1H),6.36(d,J＝17.1Hz,1H),6.28–6.17(m,1H),5.70(d,J＝9.6Hz,1H),3.96(s,3H),3.32–3.20(m,2H),2.78–2.67(m,2H),2.56(s,3H),2.22(s,6H).MS(ESI)m/z:547.2(M+H)+.
实施例九：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-氧代-5-(三氟甲基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-09)的合成
步骤1：乙基4-((3-((二碳酸二叔丁酯)胺基)苯基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-碳酸乙酯(24)
4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(23.6g,106mmol)和N-Boc-间苯二胺(21.1g,101mmol)分别溶于DMF(200ml),在加入K2CO3(28g,203mmol)，加热60℃反应12h。向反应液加入冰水，有白色固体析出，过滤，蒸干。得到白色固体24(38.6g,94％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.23(s,1H),9.45(s,1H),8.73(s,1H),7.90(s,1H),7.34(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(t,J＝8.2Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),2.49(s,3H),1.49(s,9H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H).MS(ESI)m/z:405.2(M+H)+.
步骤2：叔丁基(3-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸酯(25)
将化合物24(5g,24mmol)溶于无水四氢呋喃(50ml)，Ar保护反应瓶，在-40℃缓慢滴加四氢铝锂(0.094g,24.7mmol)，反应3h。将温度缓慢升至0℃，再室温下反应1h。反应结束后，将15％NaOH水溶液缓慢滴加，室温搅拌10min,用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水和饱和食盐水分别洗涤，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体25(2.77g,62％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(s,1H),7.78(s,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.22(t,J＝8.1Hz,1H),6.97(d,J＝8.0Hz,1H),6.64(s,1H),4.57(s,2H),3.58(s,1H),2.51(s,3H),,1.53(s,10H).MS(ESI)m/z:363.1(M+H)+
步骤3：叔丁基(3-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸酯(26)
将化合物25(6.4g，17.7mmol)溶于二氯甲烷(100ml)，加入二氧化锰(4.6g,52.8mmol)，加热回流反应12h。反应结束后用硅藻土过滤，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到白色固体26(5.3g,82.8％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.61(s,1H),9.77(s,1H),8.44(s,1H),7.99(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.30–7.27(m,1H),7.06(d,J＝7.9Hz,1H),6.64(s,1H),2.60(s,3H),1.54(s,9H).MS(ESI)m/z:361.1(M+H)+.
步骤4：叔丁基(3-((2-甲硫基)-5-(2,2,2-三氟醚-1-羟乙基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸酯(27)
将化合物26(1.9g,5.27mmol)溶于无水四氢呋喃(50ml)，加入CsF(0.16g,1.05mmol)，三氟甲基三甲基硅烷(4.8g,33.8mmol),Ar保护下室温反应6h。反应结束后用稀盐酸(0.5N)淬灭，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到白色固体27(0.613g,50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),7.89(s,1H),7.84(s,1H),7.25(s,2H),6.95(s,1H),6.57(s,1H),,2.53(s,3H),1.55(s,9H).MS(ESI)m/z:431.3(M+H)+.
步骤5：叔丁基(3-((2-(甲硫基)-5-(2,2,2-三氟乙酰基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)胺基甲酸酯(28)
将化合物27(2.879g,6.68mmol)溶于二氯甲烷(30ml),加入Dess-Martin试剂(4.255g,10mmol),室温反应30min。反应结束后用NaOH(1N)调pH至12，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体28(1.3g,45％)。MS(ESI)m/z:428.1(M+H)+.
步骤6：叔丁基(3-(2-(甲硫基)-7氧代-5-(三氟甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(29)
在Ar保护下，将NaH(0.47g,1.16mmol)加入无水四氢呋喃(10ml),冰浴下缓慢滴加磷酸乙酸三乙酯(0.26g,1.16mmol),反应30min。将化合物28溶于无水四氢呋喃(10ml)，缓慢加入到反应液中，在加热回流反应6h。反应结束后，先用冰水淬灭，加入二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到白色固体29(0.187g,80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.88(s,1H),7.56(s,1H),7.47(t,J＝7.9Hz,1H),7.29(s,2H),7.08(s,1H),6.93(d,J＝8.1Hz,1H),6.64(s,1H),2.20(s,3H),1.52(s,9H).MS(ESI)m/z:453.1(M+H)+
步骤7：叔丁基(3-(2-(甲磺酰基)-7氧代-5-(三氟甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(30)
将化合物29(1.5g,3.3mmol)溶于无水二氯甲烷(15ml),在0℃下加入m-CPBA(1.14g,1.6mmol)。在Ar保护下室温反应4h。反应结束后，加入Na2S2O3和NaHCO3混合溶液淬灭，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到白色固体29(0.7g,44％)。MS(ESI)m/z:485.1(M+H)+.
步骤8：叔丁基(3-(2-((4-(2-(二甲胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-氧代-5-(三氟甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(31)
将化合物30(0.5g,1mmol)和化合物19(0.28g,1.2mmol)溶于仲丁醇(10ml)，加入三氟乙酸(0.14g,1.2mmol)，加热回流，反应18h。蒸除溶剂，加入二氯甲烷，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体32(0.306g，61％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(s,1H),8.08(s,1H),7.64(s,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,2H),7.42(dd,J＝8.3,1.2Hz,1H),7.04–6.96(m,3H),6.92(s,1H),6.87(d,J＝1.7Hz,1H),6.59(s,1H),3.88(s,3H),3.05–2.97(m,2H),2.61–2.51(m,3H),1.45(s,9H).MS(ESI)m/z:584.2(M+H)+.
步骤9：N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-氧代-5-(三氟甲基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-09)
将化合物32(0.306g,0.5mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入三氟乙酸(0.55g,5mmol),室温反应4h,加入饱和碳酸氢钠淬灭，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物再溶于无水二氯甲烷(10ml)，滴加N,N-二异丙基乙胺(0.12g,1mmol)，在冰浴下滴加丙烯酰氯(0.053g,0.6mmol)，反应1h,室温下继续反应1h。加入碳酸氢钠水溶液淬灭，水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-13(0.07g，收率25％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.41(s,1H),8.78(s,1H),8.62(s,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),7.07(d,J＝8.7Hz,1H),6.97(s,1H),6.91(d,J＝1.7Hz,1H),6.45(dd,J＝17.0,10.1Hz,2H),6.26(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.80–5.74(m,1H),3.81(s,3H),2.99(dd,J＝7.6,4.9Hz,2H),2.44(t,J＝7.3Hz,2H),2.17(s,6H).MS(ESI)m/z:589.2(M+H)+.
实施例十：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)磺酸基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-氧代-5-(三氟甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-10)的合成
将化合物II-09(0.052g,0.089mmol)溶于水：甲醇：四氢呋喃(10ml:5ml:5ml)的混合物溶液，加入过氧硫酸氢钾复合盐(0.055g,0.089mmol)，室温反应1天。反应结束后先加Na2SO3水溶液，在加入氨水调pH至8，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-14(0.022g,41％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.41(s,1H),8.78(s,1H),8.62(s,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),7.07(d,J＝8.7Hz,1H),6.97(s,1H),6.91(d,J＝1.7Hz,1H),6.45(dd,J＝17.0,10.1Hz,2H),6.26(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.80–5.74(m,1H),3.81(s,3H),2.99(dd,J＝7.6,4.9Hz,2H),2.44(t,J＝7.3Hz,2H),2.17(s,6H).
实施例十一：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-11)的合成
步骤1：叔丁基(3-(2-氯-7氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(33)
将化合物15(5g,12.5mmol)和丙烯酸(2.25g,31.5mmol)分别溶于甲苯(50ml),加入DIPEA(8.07g,62.5mmol),再加入PdCl2(PhCN)2(0.48g,1.25mmol),P(o-tolyl)3(0.43g,1.25mmol)，Ar保护下加热至65℃，反应6小时后，加入醋酸酐(3.83g,37.5mmol)，继续反应1.5小时。用硅藻土过滤，加二氯甲烷稀释，水萃取一次，饱和食盐水萃取一次，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物经硅胶柱层析得到白色固体33(0.98g,收率21％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.62(s,1H),9.08(s,1H),8.13(d,J＝9.6Hz,1H),7.52(s,1H),7.45–7.39(m,2H),6.95–6.89(m,1H),6.86(d,J＝9.6Hz,1H),1.47(s,9H).MS(ESI)m/z:327.1(M+H)+
步骤2：N-(3-(2-氯-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(34)
将化合物33(0.981g,2.63mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，加入三氟乙酸(3g,26.3mmol)，室温反应4h，加入饱和碳酸氢钠淬灭，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物再溶于无水二氯甲烷(10ml)，滴加N,N-二异丙基乙胺(0.68g,5.3mmol)，在冰浴下滴加丙烯酰氯(0.286g,3.2mmol)，反应1h,室温下继续反应1h。有白色固体析出，过滤，水洗，蒸干。得到白色固体34(0.53g，收率62％)。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.39(s,1H),9.09(s,1H),8.15(d,J＝9.3Hz,1H),7.81–7.66(m,2H),7.52(t,J＝7.9Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,1H),6.88(d,J＝9.7Hz,1H),6.47(dd,J＝16.9,10.0Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,1.7Hz,1H),5.84–5.74(m,1H).MS(ESI)m/z:373.1(M+H)+
步骤3：N-(3-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-11)
将化合物33(0.166g,0.51mmol)和化合物19(0.115g,0.51mmol)分别溶于1,4-二氧六环(10ml),加入CS2CO3(0.331g,1mmol),在加入Pd(OAc)2(0.023g,0.10mmol)和Xantphos(0.059g,0.10mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-10(0.043g,15％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.38(s,1H),8.82(s,1H),8.30(s,1H),7.95(d,J＝9.5Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(s,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.04(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(d,J＝1.9Hz,1H),6.51(d,J＝9.5Hz,1H),6.43(dd,J＝16.9,10.1Hz,2H),6.25(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.76(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H),3.81(s,3H),3.01–2.93(m,2H),2.42(t,J＝7.3Hz,2H),2.15(s,6H).MS(ESI)m/z:517.2(M+H)
实施例十二：
N-(3-(2-((2-(二甲氨基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)胺基)-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-12)的合成
将化合物34(0.2g,0.612mmol)和化合物19(0.151g,0.585mmol)分别溶于1,4-二氧六环(10ml),加入CS2CO3(0.4g,1.23mmol),在加入Pd(oAc)2(0.027g,0.12mmol)和Xantphos(0.071g,0.123mmol)。在Ar保护下，将反应液加热至65℃，反应8h。反应结束后，先用硅藻土过滤，用二氯甲烷稀释，用水萃取一次，饱和食盐水萃取一次，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到淡黄色固体II-10(0.03g,10％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.38(s,1H),8.82(s,1H),8.30(s,1H),7.95(d,J＝9.5Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(s,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.04(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(d,J＝1.9Hz,1H),6.51(d,J＝9.5Hz,1H),6.43(dd,J＝16.9,10.1Hz,2H),6.25(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.76(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H),3.81(s,3H),3.01–2.93(m,2H),2.42(t,J＝7.3Hz,2H),2.15(s,6H).MS(ESI)m/z:549.2(M+H)+
实施例十三：
N-((2-氯-5-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-13)的合成
步骤1：叔丁基(5-((5-氯-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2-氯苯基)胺基甲酸酯(35)
将5-溴-2,4-二氯嘧啶(1g,4.4mmol)和叔丁基(5-胺基-2-氯苯基)碳酸乙酯(1.1g,4.5mmol)分别溶于DMF(20ml),在加入K2CO3(1.2g,8.77mmol)，室温反应室温反应12h。向反应液加入冰水，有白色固体析出，过滤，蒸干。得到白色固体35(1.67g,95％)。MS(ESI)m/z:533.0(M+H)+。
步骤2：叔丁基(2-氯-5-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)胺基甲酸酯(36)
将化合物35(1.67g,3.8mmol)和巴豆酸(0.82g,9.5mmol)分别溶于甲苯(20ml),加入DIPEA(4.96g,38.5mmol)，再加入PdCl2(PhCN)2(0.3g,0.78mmol),P(o-tolyl)3(0.23g,0.77mmol)，Ar保护下加热至65℃，反应6小时后，加入醋酸酐(1.2g,3mmol)，继续反应1.5小时。用硅藻土过滤，加二氯甲烷稀释，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物经硅胶柱层析得到白色固体36(0.78g收率48％)。MS(ESI)m/z:421.1(M+H)+。
步骤3：N-(2-氯-5-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(37)
将化合物36(0.78g,1.9mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入三氟乙酸(2.1g,19mmol),室温反应4h,加入饱和碳酸氢钠淬灭，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物再溶于无水二氯甲烷(10ml),滴加N,N-二异丙基乙胺(0.48g,3.7mmol)，在冰浴下滴加丙烯酰氯(0.2g,2.2mmol)，反应1h,室温下继续反应1h。有白色固体析出，过滤，水洗，蒸干。得到白色固体37(0.21g，收率30％)。MS(ESI)m/z:375.1(M+H)+。
步骤4：N-((2-氯-5-(2-((4-((2-(二甲胺基)乙基)巯基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-13)
将化合物37(0.21g,0.56mmol)和化合物19(0.19g,0.8mmol)溶于仲丁醇(10ml)，加入三氟乙酸(0.64g,5.6mmol)，加热回流，反应18h。蒸除溶剂，加入二氯甲烷，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-17(0.025g，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.61(s,1H),8.80(s,1H),8.17(s,1H),7.50(s,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,1H),6.99(d,J＝7.9Hz,1H),6.67(s,1H),6.63–6.51(m,2H),6.31(s,1H),6.25–6.17(m,1H),5.73(d,J＝10.6Hz,1H),3.99(t,J＝5.8Hz,2H),3.77(s,3H),2.64(d,J＝23.1Hz,2H),2.45(s,3H),2.23(s,6H).MS(ESI)m/z:565.2(M+H)+.
实施例十四：
N-(3-(2-((4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H))苯基)-2-氟丙烯酰胺(II-14)的合成
步骤1:N-(3-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-氟丙烯酰胺(42)
在50mL茄型瓶中加入2-氟丙烯酸113.07mg(1.26mmol)。加入10mL干燥的二氯甲烷使其悬浮其中。加入草酰氯115μL(1.36mmol)和一滴DMF，氩气充分置换后置于室温下反应2h，制备2-氟丙烯酰氯，反应完成后将其装入恒压滴液漏斗。在另一50mL茄型瓶中加入化合物41 300mg(1.05mmol)，用10mL干燥的二氯甲烷溶解，加入913μL(5.23mmol)DIPEA，氩气置换后置于冰浴条件下缓慢滴加酰氯溶液。滴加完成后反应1h。TLC监测反应完成后，将反应液分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷:甲醇＝100:1)。得到产物(42)247.00mg，为白色固体，收率：65.80％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.83(d,J＝1.4Hz,1H),8.13(s,1H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.4,1.9Hz,1H),7.52(t,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,1H),6.68(s,1H),5.88–5.71(m,1H),5.24(dd,J＝15.5,3.3Hz,1H),2.56(d,J＝1.6Hz,3H).
步骤2：N-(3-(2-((4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H))苯基)-2-氟丙烯酰胺(II-14)
在50mL茄型瓶中加入化合物42 100mg(0.28mmol),加入10mL 2,2,2-三氟乙醇溶解，再加入化合物19 63mg(0.28mmol)，置于油浴中加热至78℃下回流反应36h。TLC监测到反应完成后，将其冷却至室温，减压浓缩干，用二氯甲烷重新溶解，并用水和饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，柱层析纯化洗脱剂：二氯甲烷:甲醇＝20:1)。得到产物91.03mg，为白色固体，收率：59.53％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.67(s,1H),8.45(d,J＝4.6Hz,1H),7.92(s,1H),7.82(dd,J＝8.2,2.3Hz,2H),7.65(d,J＝2.3Hz,1H),7.55(t,J＝8.1Hz,2H),7.08(dd,J＝7.3,2.0Hz,2H),6.84(d,J＝2.0Hz,1H),6.54(s,1H),6.42(d,J＝1.5Hz,1H),5.76(dd,J＝47.3,3.3Hz,1H),5.20(dd,J＝15.1,3.4Hz,2H),3.84(s,3H),2.97(td,J＝6.8,1.3Hz,2H),2.56–2.50(m,2H),2.48(d,J＝1.2Hz,3H),2.28(s,7H).LRMS(ESI)m/z:549.1(M+H)+.
实施例十五：
N-(3-(2-((4-((2-(二甲氨基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)氨)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)-2-氟丙烯酰胺(II-15)的合成
在50mL茄型瓶中加入化合物42 118.0mg(0.33mmol)，化合物21 127.0mg(0.49mmol)，醋酸钯29.5mg(0.13mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)38.2mg(0.065mmol)和碳酸铯214mg(0.66mmol)，加入干燥的二氧六环10mL使反应物悬浮其中。氩气充分置换后，置于油浴中加热至80℃反应3.5h。TLC监测到反应完全后，冷却至室温，加入水和乙酸乙酯分液。有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷:甲醇＝20:1)。得到产物(II-22)42.1mg，为白色固体，收率：26.01％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.76(s,1H),8.49(d,J＝4.4Hz,1H),8.16(s,1H),7.90–7.78(m,2H),7.72–7.65(m,1H),7.59(t,J＝8.0Hz,1H),7.15–7.10(m,1H),7.08(d,J＝8.2Hz,1H),6.50(d,J＝1.4Hz,1H),5.77(dd,J＝47.4,3.4Hz,1H),5.21(dd,J＝15.1,3.4Hz,1H),3.96(s,3H),3.29(td,J＝6.8,2.1Hz,2H),2.80–2.71(m,2H),2.53(d,J＝1.1Hz,3H),2.25(s,6H).
实施例十六：
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-吗啉代乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)苯基)丙烯酰胺(II-16)的合成
步骤1：2-吗啉代乙烷-1-硫醇(43)
在100mL茄型瓶中加入吗啉1.00g(11.48mmol)，用20mL甲苯溶解，加入环硫乙烷1.38g(22.96mmol)。用氩气充分置换后，加热至80℃反应过夜。TLC监测到反应完全后，冷却至室温。直接减压浓缩干并用柱层析纯化，(洗脱剂：二氯甲烷:甲醇＝50:1)。得到产物(43)1.30g，为无色透明油状物，收率：76.92％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ3.78–3.64(m,4H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H),2.57(ddd,J＝7.9,5.9,1.5Hz,2H),2.46(dd,J＝5.6,3.5Hz,4H),1.79(t,J＝6.9Hz,1H).
步骤2：4-(2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)硫基)乙基)吗啉(44)
合成方法参考化合物18。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.87(d,J＝8.6Hz,1H),6.92(d,J＝1.9Hz,1H),6.87(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),3.96(s,3H),3.77–3.68(m,4H),3.20–3.09(m,2H),2.75–2.65(m,2H),2.52(dd,J＝5.7,3.6Hz,4H).
步骤2:2-(甲氧基-4-((2-吗啉代乙基)硫基)苯胺(YN-25)
合成方法参考19。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.95–6.89(m,2H),6.64(dd,J＝7.5,0.6Hz,1H),3.85(s,3H),3.72–3.67(m,4H),2.96–2.87(m,2H),2.61–2.54(m,2H),2.48–2.40(m,4H).
步骤3：(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-吗啉代乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)氨基甲酸酯(46)
合成方法参考II-05。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.65(s,1H),7.98–7.83(m,1H),7.57(s,1H),7.54–7.38(m,3H),7.01(s,1H),6.95(dt,J＝7.1,1.9Hz,1H),6.83(d,J＝2.0Hz,1H),6.61(dd,J＝16.9,8.1Hz,1H),6.41(d,J＝1.5Hz,1H),3.84(s,3H),3.76–3.69(m,5H),2.99(td,J＝7.2,3.9Hz,2H),2.60(t,J＝7.5Hz,2H),2.52–2.42(m,7H),1.47(s,9H).
步骤4：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-吗啉代乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)苯基)丙烯酰胺(II-16)
合成方法参考化合物17。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ10.38(s,1H),8.86(s,1H),8.24(s,1H),7.87–7.78(m,1H),7.65(t,J＝1.9Hz,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),7.05–6.99(m,1H),6.92(d,J＝2.0Hz,1H),6.49–6.39(m,2H),6.38(d,J＝1.5Hz,1H),6.25(dd,J＝17.0,2.1Hz,1H),5.76(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.82(s,3H),3.55(t,J＝4.6Hz,4H),3.00(td,J＝7.0,3.9Hz,2H),2.50(dt,J＝3.7,1.9Hz,3H),2.47(t,J＝2.3Hz,4H).LRMS(ESI)m/z:573.2(M+H)+.
实施例十七：
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-吗啉代乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)苯基)2-氟丙烯酰胺(II-17)的合成
合成方法参考化合物42。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.68(s,1H),8.26(s,1H),7.93(s,1H),7.85(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),7.64–7.53(m,2H),7.10(dt,J＝8.2,1.2Hz,1H),6.84(d,J＝2.0Hz,1H),6.56(s,1H),6.42(d,J＝1.4Hz,1H),5.78(dd,J＝47.5,3.4Hz,1H),5.22(dd,J＝15.1,3.4Hz,1H),3.85(s,3H),3.71(t,J＝4.6Hz,4H),2.98(dd,J＝9.8,6.0Hz,2H),2.59(t,J＝7.4Hz,2H),2.49(d,J＝1.2Hz,3H),2.47(s,4H).LRMS(ESI)m/z:591.3(M+H)+.
实施例十八：
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-18)的合成
步骤1：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-硫醇(47)
合成方法参考化合物43。1H NMR(400 MHz,Chloroform-d)δ2.66–2.58(m,3.9Hz,2H),2.58–2.52(m,2H),2.53–2.38(m,4H),2.27(s,3H).
步骤2：1-(2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)硫基)乙基)-4-甲基哌嗪(48)
参考化合物18的合成方法。1H NMR(400 MHz,Chloroform-d)δ8.01(s,1H),7.86(d,J＝8.6 Hz,1H),6.91(d,J＝1.8 Hz,1H),6.86(dd,J＝8.6,1.9 Hz,1H),3.95(s,3H),3.18–3.10(m,2H),2.73–2.67(m,2H),2.65–2.36(m,8H),2.29(s,3H).
LRMS(ESI)m/z:342.2(M+H)+.
步骤3：2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙烷-1-硫醇(49)
参考化合物19的合成方法。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ6.83(d,J＝1.9 Hz,1H),6.76(dd,J＝8.0,1.9 Hz,1H),6.56(d,J＝8.0 Hz,1H),4.85(s,2H),3.75(s,3H),2.88–2.80(m,2H),2.46–2.39(m,2H),2.38–2.17(d,J＝31.5 Hz,8H),2.12(s,3H).
步骤4：叔丁基(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)氨基甲酸酯(50)
合成方法参考II-05。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.68(s,1H),7.93(s,1H),7.56(s,1H),7.50(d,J＝7.9Hz,1H),7.46–7.38(m,1H),7.04–6.91(m,2H),6.85(d,J＝1.9Hz,1H),6.61(s,1H),6.43(d,J＝1.3Hz,1H),3.87(s,4H),3.01(dd,J＝8.8,6.4Hz,2H),2.71–2.53(m,12H),2.49(d,J＝1.2Hz,3H),2.36(s,3H),1.49(s,9H).
步骤5：N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-18)
合成方法参考化合物17。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.77(s,1H),8.66(s,1H),7.94–7.86(m,2H),7.76(s,1H),7.56–7.47(m,1H),7.44(t,J＝8.0Hz,1H),6.97–6.88(m,1H),6.76(d,J＝1.9Hz,1H),6.45(dd,J＝16.9,10.1Hz,2H),6.37(d,J＝1.3Hz,1H),6.32(dd,J＝16.9,1.9Hz,1H),5.61(dd,J＝10.0,1.9Hz,1H),3.81(s,3H),3.61(hept,J＝6.7Hz,4H),3.06(q,J＝7.4Hz,4H),2.96(dd,J＝8.5,6.2Hz,2H),2.67–2.60(m,2H),2.52(s,3H),2.46(d,J＝1.2Hz,3H).LRMS(ESI)m/z:584.4(M-H)-.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC31H35N7O3S(M-H)-:584.2499,found:584.2457.
实施例十九:
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)2-氟丙烯酰胺(II-19)的合成
合成方法参考化合物42。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,2H),8.96–8.81(m,1H),8.66(s,1H),8.01–7.85(m,2H),7.71–7.62(m,1H),7.54(t,J＝8.1Hz,1H),7.04(dd,J＝7.8,2.0Hz,1H),6.79(d,J＝1.9Hz,1H),6.58–6.47(m,1H),6.38(d,J＝1.4Hz,1H),5.74(dd,J＝47.0,3.4Hz,1H),5.19(dd,J＝15.0,3.4Hz,1H),3.83(s,3H),3.68–3.57(m,2H),3.13–3.00(m,10H),2.76(s,3H),2.49–2.41(m,3H).LRMS(ESI)m/z:604.3(M+H)+.
实施例二十：
N-(3-(2-((4-((2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)硫基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-20)的合成
步骤1：1-(4-(2-巯基乙基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(51)
合成方法参考43。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ3.69–3.59(m,2H),3.53–3.42(m,2H),2.71–2.55(m,4H),2.46(dt,J＝14.9,5.1Hz,4H),2.10(s,3H).
步骤2：1-(4-(2-((3-甲氧基-4-硝基苯基)硫基)乙基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(52)
合成方法参考化合物18。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.87(d,J＝8.6Hz,1H),6.92(d,J＝1.8Hz,1H),6.87(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),3.96(s,3H),3.68–3.60(m,2H),3.53–3.45(m,2H),3.16(dd,J＝8.1,6.3Hz,2H),2.78–2.68(m,2H),2.50(dt,J＝12.8,5.2Hz,4H),2.09(s,3H).
步骤3:1-(4-(2-((4-氨基-3-甲氧基苯基)硫基)乙基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(53)
合成方法参考化合物19。LRMS(ESI)m/z:310.2(M+H)+.
步骤4：(3-(2-((4-((2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)硫基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)氨基甲酸酯(54)。
合成方法参考化合物II-05。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.66(s,1H),7.93(s,1H),7.60(s,1H),7.52–7.41(m,3H),6.96(dt,J＝6.7,2.2Hz,1H),6.84(d,J＝2.0Hz,1H),6.79(s,1H),6.42(d,J＝1.6Hz,1H),3.85(d,J＝2.8Hz,4H),3.62(s,3H),3.53–3.38(m,3H),3.00(t,J＝7.5Hz,2H),2.63(d,J＝7.8Hz,2H),2.53–2.38(m,7H),2.09(s,3H),1.47(s,9H).
步骤5：N-(3-(2-((4-((2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)硫基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-20)
合成方法参考化合物17。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.03(s,1H),8.69(s,1H),7.93(s,1H),7.78–7.63(m,1H),7.53(s,1H),7.40(t,J＝8.1Hz,1H),6.94–6.84(m,1H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),6.49(s,1H),6.42(d,J＝1.5Hz,1H),6.30(dd,J＝16.9,1.9Hz,1H),6.16(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),5.60(dd,J＝10.0,1.9Hz,1H),3.83(s,3H),3.78–3.42(m,4H),3.11–2.95(m,2H),2.79–2.62(m,2H),2.62–2.37(m,7H),2.08(s,3H).LRMS(ESI)m/z:614.3(M+H)+.
实施例二十一：
N-(3-(2-((4-((2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)硫基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)苯基)2-氟丙烯酰胺(II-21)的合成
合成方法参考化合物42。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.68(s,1H),8.50(s,1H),7.92(s,1H),7.88–7.79(m,1H),7.63–7.56(m,1H),7.56(s,1H),7.11–7.04(m,1H),6.82(d,J＝2.0Hz,1H),6.55(d,J＝11.0Hz,1H),6.41(d,J＝1.5Hz,1H),5.75(dd,J＝47.3,3.3Hz,1H),5.19(dd,J＝15.1,3.3Hz,1H),3.84(s,3H),3.71–3.54(m,2H),3.53–3.41(m,2H),3.05–2.93(m,2H),2.62(t,J＝7.5Hz,2H),2.53–2.37(m,7H),2.08(s,3H).LRMS(ESI)m/z:632.3(M+H)+.
实施例二十二：
N-(5-(2-((4-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d])-基)-2-甲基苯基)丙烯酰胺(II-22)的合成
步骤1：叔丁基(5-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2-甲苯基)胺基甲酸酯(41)
将5-溴-2,4-二氯嘧啶(1.5g,6.6mmol)和叔丁基(5-胺基-2-甲苯基)碳酸乙酯(1.5g,4.7mmol)分别溶于DMF(20ml),在加入K2CO3(1.5g,1.1mmol)，室温反应12h。向反应液加入冰水，有白色固体析出，过滤，蒸干。得到白色固体41(1.7g,63％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.30(d,J＝0.6Hz,1H),7.47(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),7.41(d,J＝2.3Hz,1H),7.26(d,J＝7.9Hz,2H),2.22(s,3H),1.46(s,9H).MS(ESI)m/z:413.1(M+H)+。
步骤2：叔丁基(5-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-甲苯基)碳酸乙酯(42)
将化合物35(1.7g,4.1mmol)和巴豆酸(0.7g,8.1mmol)分别溶于甲苯(20ml),加入DIPEA(5.3g,41mmol),再加入PdCl2(PhCN)2(0.25g,0.65mmol),P(o-tolyl)3(0.34g,0.11mmol),Ar保护下加热至65℃，反应6小时后，加入醋酸酐(1g,9.8mmol)，继续反应1.5小时。用硅藻土过滤，加二氯甲烷稀释，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物经硅胶柱层析得到白色固体42(0.8g,收率53％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.80(s,1H),7.92(s,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),6.66(d,J＝1.2Hz,1H),6.48(s,1H),2.53(d,J＝1.3Hz,3H),2.29(s,3H),1.47(s,9H).MS(ESI)m/z:401.1(M+H)+。
步骤3：N-(5-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-甲苯基)丙烯酰胺(43)
将化合物42(0.8g,2.0mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，加入三氟乙酸(2.6g,23mmol),室温反应4h,加入饱和碳酸氢钠淬灭，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物再溶于无水二氯甲烷(20ml),滴加N,N-二异丙基乙胺(0.59g,4.6mmol),在冰浴下滴加丙烯酰氯(0.31g,3.5mmol)，反应1h,室温下继续反应1h。有白色固体析出，过滤，水洗，蒸干。得到白色固体43(0.51g，收率72％)。MS(ESI)m/z:355.1(M+H)+。
步骤4：N-(5-(2-((4-(2-(二甲胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)甲苯基)丙烯酰胺(II-14)
将化合物43(0.12g,0.34mmol)和化合物05(0.11g,0.51mmol)溶于仲丁醇(10ml)，加入三氟乙酸(0.058g,5.1mmol)，加热回流，反应18h。蒸除溶剂，加入二氯甲烷，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-18(0.046g,26％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.61(s,1H),8.80(s,1H),8.17(s,1H),7.50(s,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,1H),6.99(d,J＝7.9Hz,1H),6.67(s,1H),6.63–6.51(m,2H),6.31(s,1H),6.25–6.17(m,1H),5.73(d,J＝10.6Hz,1H),3.99(t,J＝5.8Hz,2H),3.77(s,3H),2.64(d,J＝23.1Hz,2H),2.45(s,3H),2.36(s,3H),2.23(s,6H).
MS(ESI)m/z:529.3(M+H)+.
实施例二十三：
N-(5-(2-((4-((2-(二甲基氨基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d])-基)-2-甲基苯基)丙烯酰胺(II-23)的合成
合成方法参考II-05。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.73(s,1H),8.14(s,1H),8.09(s,1H),7.88(s,1H),7.49–7.35(m,2H),7.25(d,J＝2.2Hz,2H),7.04–6.94(m,2H),6.49(d,J＝1.4Hz,1H),6.33(d,J＝3.1Hz,1H),5.74(s,1H),3.93(s,3H),3.26–3.17(m,2H),2.72–2.64(m,2H),2.51(d,J＝1.2Hz,3H),2.46(s,3H),2.19(s,6H)。
实施例二十四：
N-(3-(2-((2-(二氟甲氧基)-4-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(II-24)的合成
步骤1：2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基苯(57)
在100mL茄型瓶中加入2.00g(12.73mmol)4-氟-2-硝基苯酚，加入30mL DMF溶解，加入二氟氯乙酸钠3.88g(25.46mmol)，无水碳酸钾2.10g(15.25mmol)。置于油浴中加热至100℃下反应4.5h。反应结束后，冷却至室温，加入4M的盐酸室温搅拌2h。加水用MTBE萃取。有机相用1M的氢氧化钠水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝25:1)。得到产物1.42g，为黄色油状物，收率53.86％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.06(dd,J＝9.1,5.6Hz,1H),7.19–7.09(m,2H),6.67(t,J＝72.3Hz,1H),2.07(s,1H).
步骤2：2-((3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)硫基)-N，N-二甲基乙胺(58)
化合物58的合成方法参考化合物18。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.91(d,J＝9.2Hz,1H),7.22–7.16(m,2H),6.63(t,J＝73.2Hz,1H),3.13(t,J＝7.8,6.4Hz,2H),2.64(t,J＝7.7,6.4Hz,2H),2.31(s,6H).
步骤3：2-(二氟甲氧基)-4-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)苯胺(59)
合成方法参考化合物19。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.16–7.09(m,2H),6.71(d,J＝8.1Hz,1H),6.47(t,J＝74.1Hz,1H),3.91(s,2H),2.89(t,2H),2.52–2.45(m,2H),2.24(s,6H).
步骤4：N-(3-(2-((2-(二氟甲氧基)-4-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d]8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(YN-E4)的合成
合成方法参考化合物II-05。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.72(s,1H),8.68(s,1H),7.70(d,J＝9.6Hz,2H),7.66–7.51(m,2H),7.42(t,J＝8.0Hz,1H),7.05(s,1H),6.96–6.89(m,1H),6.77–6.26(m,4H),6.17(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),5.69–5.58(m,1H),2.97(t,J＝7.3Hz,2H),2.59–2.48(m,5H),2.30(s,6H).
LRMS(ESI)m/z:567.3(M+H)+.
实施例二十五：
N-(5-(2-((4-((2-(二甲基氨基)乙基)磺酰基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-7-氧代吡啶并[2,3-d])-基)-2-氟苯基)丙烯酰胺(II-25)的合成
步骤1：叔丁基(5-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2-氟苯基)胺基甲酸酯(60)
将5-溴-2,4-二氯嘧啶(1g,4.4mmol)和叔丁基(5-胺基-2-氟苯基)碳酸乙酯(1.5g,6.7mmol)分别溶于DMF(20ml),在加入K2CO3(1.2g,8.77mmol)，室温反应12h。向反应液加入冰水，有白色固体析出，过滤，蒸干。得到白色固体38(1.74g,98％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.29(s,1H),8.13(dd,J＝7.0,2.7Hz,1H),7.56(dt,J＝8.8,3.8Hz,1H),7.25(s,1H),7.11(t,J＝10.7,8.9Hz,1H),6.79(s,1H),1.54(s,9H).MS(ESI)m/z:417.1(M+H)+
步骤2：叔丁基(5-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氟苯基)碳酸乙酯(61)
将化合物38(1.74g,4.2mmol)和巴豆酸(0.9g,10.5mmol)分别溶于甲苯(20ml),加入DIPEA(5.4g,42mmol)，再加入PdCl2(PhCN)2(0.32g,0.84mmol),P(o-tolyl)3(0.26g,0.84mmol),Ar保护下加热至65℃，反应6小时后，加入醋酸酐(1.3g,12.6mmol)，继续反应1.5小时。用硅藻土过滤，加二氯甲烷稀释，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物经硅胶柱层析得到白色固体39(0.71g,收率42％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.81(s,1H),8.07(s,1H),7.23(dd,J＝10.7,8.7Hz,1H),6.83(ddd,J＝8.7,4.4,2.6Hz,1H),6.66(q,J＝1.2Hz,1H),2.54(d,J＝1.3Hz,3H),1.49(s,9H).MS(ESI)m/z:405.1(M+H)+
步骤3：N-(5-(2-氯-5-甲基-7-氧代吡啶[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氟苯基)丙烯酰胺(62)
将化合物39(0.71g,1.8mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入三氟乙酸(2.1g,18mmol)，室温反应4h，加入饱和碳酸氢钠淬灭，水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干。残余物再溶于无水二氯甲烷(10ml),滴加N,N-二异丙基乙胺(0.46g，3.6mmol)，在冰浴下滴加丙烯酰氯(0.24g,2.7mmol)，反应1h,室温下继续反应1h。有白色固体析出，过滤，水洗，蒸干。得到白色固体40(0.22g，收率34％)。MS(ESI)m/z:359.1(M+H)+
步骤4：N-(5-(2-((4-(2-(二甲胺基)乙氧基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-甲基-7-酮基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)氟苯基)丙烯酰胺(II-25)
将化合物40(0.22g,0.61mmol)和化合物05(0.19g,0.92mmol)溶于仲丁醇(10ml)，加入三氟乙酸(0.14g,1.22mmol)，加热回流，反应18h。蒸除溶剂，加入二氯甲烷，用水洗，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，滤除干燥剂后将溶剂蒸干，柱层析得到黄色固体II-25(0.026g,8％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.76(s,1H),8.54(d,J＝6.9Hz,1H),8.14(s,1H),8.04(s,1H),7.93(s,1H),7.35(dd,J＝10.6,8.7Hz,1H),7.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.14–6.98(m,3H),6.51(d,J＝1.4Hz,1H),6.40–6.36(m,1H),5.79(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),3.97(s,3H),3.28–3.21(m,2H),2.77–2.68(m,2H),2.54(d,J＝1.2Hz,3H),2.23(s,6H).
实施例二十六
ELISA激酶活性检测
用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测激酶磷酸化底物的能力，计算化合物对激酶活性的抑制作用。野生型EGFR购自Eurofins公司，EGFRT790M/L858R突变激酶购自BPS公司。
主要步骤如下：酶反应底物Poly(Glu,Tyr)4:1用无钾离子的PBS(10mM磷酸钠缓冲液，150mM NaCl,pH 7.2-7.4)稀释成20μg/mL，37℃反应12-16h包被酶标板。每孔加入用反应缓冲液(50mM HEPES pH 7.4,50mM MgCl2,0.5mM MnCl2,0.2mM Na3VO4,1mM DTT)稀释的ATP(终浓度5μM)溶液，加入化合物或溶剂对照，然后加入激酶启动反应，37℃摇床反应1h。反应结束后，用T-PBS洗板三次，加入抗体PY99于37℃摇床反应0.5h。T-PBS洗板后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠的IgG，37℃摇床反应0.5h。再次洗板后，加入2mg/mL的OPD显色液，25℃避光反应1-10min。加入2M H2SO4终止反应，用可调波长式微孔板酶标仪SPECTRAMAX 190读数，波长为492nm。根据抑制曲线，IC50值由四参数法计算得到，计算结果见表1。
表1
由表1的数据可知，本发明化合物嘧啶类化合物对EGFRL858R/T790M激酶有很强的抑制活性和很高选择性。其中，化合物II-02，II-05，II-08，II-22，II-23，II-24对EGFRL858R/T790M双突变EGFR激酶保持较优的抑制活性，同时对野生型和突变型激酶的选择性明显优于AZD-9291。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药：
式中，*表示S构型、R构型或消旋；
R1为H、卤素、羟基、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、-(CH2)nNR5R6；
t为1、2、3或4；
各R2独立地选自：H、卤素、羟基、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、-(CH2)nNR5R6；
Y为单键或3-8元杂环基；
X为-S-、-SO2-、或-SO-；
R3为C1-C6烷基、-(CH2)nNR5R6、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基；
s为0或1；
W为3-8元杂环基、C6-C10芳基、4-10元杂芳基；
R4为H或卤素；
其中，各n独立为0、1、2、3、4或5；各R5、各R6各自独立地为C1-C6烷基；或者各R5、各R6独立与相连的N一起形成3-8元杂环基；
各所述3-8元杂环基、C6-C10芳基、4-10元杂芳基任选独立地具有选自下组的取代基：卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、-C(O)C1-C6烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1为H、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，各R2独立地选自：C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R3为C1-C4烷基或-(CH2)nNR5R6、
n为1、2、或3；R5、R6各自独立地为C1-C4烷基；或者R5各R6与相连的N一起形成5-7元杂环基，所述5-7元杂环基任选具有选自下组的取代基：C1-C4烷基、-C(O)CH3。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，W为5-7元杂环基或苯基，所述5-7元杂环基或苯基任选独立地具有选自下组的取代基：卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、-C(O)C1-C4烷基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自下组：
7.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
中间体A化合物与中间体B化合物反应生成通式I所示的化合物；
各式中，R1、R2、R3、R4、W、Y、X、*、s、t定义如权利要求1所述。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药；和
药学上可接受的载体。
9.如权利要求1所述的化合物的应用，其特征在于，用于：
(i)制备调控EGFR酪氨酸激酶活性的药物；或者
(ii)制备预防和/或治疗EGFR相关疾病的药物。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的EGFR相关疾病选自：肿瘤、糖尿病、免疫系统疾病、神经退行性疾病、心血管疾病或使用EGFR调节剂治疗期间具有获得性耐药性的疾病。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022042755A1 (zh) * 2020-08-28 2022-03-03 华东理工大学 抑制突变型egfr的化合物及其应用
CN115348963A (zh) * 2021-03-08 2022-11-15 暨南大学 吡啶并嘧啶类化合物及其应用

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