CN109298059A - 一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法。与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明采用四硼酸钠、乳酸钙、硫酸镁、氯化钠和EDTA配制运行缓冲液，能够显著的提高人精浆蛋白检测的分辨率；采用毛细管区带电泳技术，制作成商品化的检测人精浆蛋白的产品，简化了检测过程，提高了检测效率。

Description

一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法。
背景技术
毛细管电泳是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。毛细管电泳所用的石英毛细管柱，在pH值>3的情况下，其内表面带负电，与缓冲液接触时形成双电层，在高压电场作用下，形成双电层一侧的缓冲液由于带正电而向负极方向移动，从而形成电渗流。同时，在缓冲溶液中，带电粒子在电场作用下，以各自不同速度向其所带电荷极性相反方向移动，形成电泳。带电粒子在毛细管缓冲液中的迁移速度等于电泳和电渗流的矢量和。各种粒子由于所带电荷多少、质量、体积以及形状不同等因素引起迁移速度不同而实现分离。
毛细管区带电泳是毛细管电泳最常见的模式，用以分析带电溶质。样品中各个组分因为迁移率不同而分成不同的区带。为了降低电渗流和吸附现象，常将毛细管内壁做化学修饰。
精浆是精液的一大组成部分(精液由精浆与精子构成，精子由睾丸产生)，精浆由前列腺液、精囊液、附睾液和尿道球腺分泌的少量液体一起组成。精浆是输送精子的必须介质，并为精子提供能量和营养物质。精浆里含有果糖和蛋白质，是精子的营养物质。另外，精浆中还含有前列腺素和一些酶类物质。正常的精液呈乳白色或淡黄色，每毫升为精液中的精子数一般在6千万至2亿个。有活动能力的精子占总数的60％以上。畸形精子应总数的10％以下。在室温下精子活动力持续3－4小时。
人精浆蛋白检测具有重要的临床意义，现有技术存在检测方法分辨率低，检测过程繁琐的问题。
发明内容
针对上述现有技术存在的不足，本发明一方面提供一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法；另一方面提供一种检测人精浆蛋白的产品。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案，一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法，包括以下步骤：
步骤一，运行缓冲液配制，将0.05mol/L四硼酸钠、0.05mol/L乳酸钙、0.02mol/L硫酸镁、0.02mol/L氯化钠和0.02mol/L EDTA按照体积比1：(0.3-0.5)：(0.1-0.3)：(0.1-0.2)：(0.2-0.5)混合，充分混匀后得到运行缓冲液；
步骤二，待测样本稀释，将待测人精液样本与步骤一得到的运行缓冲液按照1：(50-100)的体积比混合，充分混匀后得到稀释待测样本；
步骤三，电泳检测，取毛细管用0.1mol/L HCL冲洗20-30min，然后用0.1mol/LNaOH冲洗20-30min，然后用步骤一得到的运行缓冲液冲洗20-30min，取步骤二得到的稀释待测样本于毛细管入口处，气压进样10-20s，电泳30-40min，扫描200nm光吸收值，做电泳图，计算人血清蛋白各组分的百分含量。
优选地，所述步骤一中0.05mol/L四硼酸钠、0.05mol/L乳酸钙、0.02mol/L硫酸镁、0.02mol/L氯化钠和0.02mol/L EDTA混合的体积比为1：(0.3-0.5)：(0.1-0.3)：(0.1-0.2)：(0.2-0.5)，优选为为1：(0.3-0.4)：(0.2-0.3)：(0.1-0.15)：(0.2-0.3)，最优为1：0.4：0.3：0.15：0.3。
一种检测人精浆蛋白的产品，所述产品包括样本稀释液、毛细管冲洗液、毛细管和毛细管电泳仪。
与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明采用四硼酸钠、乳酸钙、硫酸镁、氯化钠和EDTA配制运行缓冲液，能够显著的提高人精浆蛋白检测的分辨率；采用毛细管区带电泳技术，制作成商品化的检测人精浆蛋白的产品，简化了检测过程，提高了检测效率。
附图说明
图1本发明实施例中精浆蛋白扫描结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1
1.准备
毛细管电泳仪、石英毛细管、精液等
2.精浆蛋白检测
2.1运行缓冲液配制，将0.05mol/L四硼酸钠、0.05mol/L乳酸钙、0.02mol/L硫酸镁、0.02mol/L氯化钠和0.02mol/L EDTA按照体积比1：1：0.4：0.3：0.15：0.3混合，充分混匀后，调节pH至9.0，得到运行缓冲液；
步骤二，待测样本稀释，将待测人精液样本与步骤一得到的运行缓冲液按照1：60的体积比混合，充分混匀后得到稀释待测样本；
步骤三，电泳检测，取毛细管用0.1mol/L HCL冲洗30min，然后用0.1mol/L NaOH冲洗30min，然后用步骤一得到的运行缓冲液冲洗30min，取步骤二得到的稀释待测样本于毛细管入口处，气压进样10s，电泳30min，扫描200nm光吸收值，做电泳图，计算人血清蛋白各组分的百分含量，20余种蛋白扫描结果如图1。
从以上实施例可以看出，本发明检测分辨率高，操作快速简便，适用于人精浆蛋白的批量检测。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的简单修改或变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (3)

1.一种采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，运行缓冲液配制，将0.05mol/L四硼酸钠、0.05mol/L乳酸钙、0.02mol/L硫酸镁、0.02mol/L氯化钠和0.02mol/L EDTA按照体积比1：(0.3-0.5)：(0.1-0.3)：(0.1-0.2)：(0.2-0.5)混合，充分混匀后得到运行缓冲液；
步骤二，待测样本稀释，将待测人精液样本与步骤一得到的运行缓冲液按照1：(50-100)的体积比混合，充分混匀后得到稀释待测样本；
步骤三，电泳检测，取毛细管用0.1mol/L HCL冲洗20-30min，然后用0.1mol/L NaOH冲洗20-30min，然后用步骤一得到的运行缓冲液冲洗20-30min，取步骤二得到的稀释待测样本于毛细管入口处，气压进样10-20s，电泳30-40min，扫描200nm光吸收值，做电泳图，计算人血清蛋白各组分的百分含量。
2.根据权利要求1所述的采用毛细管区带电泳技术测定人精浆蛋白的方法，其特征在于，所述步骤一中0.05mol/L四硼酸钠、0.05mol/L乳酸钙、0.02mol/L硫酸镁、0.02mol/L氯化钠和0.02mol/L EDTA混合的体积比为1：(0.3-0.5)：(0.1-0.3)：(0.1-0.2)：(0.2-0.5)，优选为为1：(0.3-0.4)：(0.2-0.3)：(0.1-0.15)：(0.2-0.3)，最优为1：0.4：0.3：0.15：0.3。
3.一种检测人精浆蛋白的产品，其特征在于，所述产品包括样本稀释液、毛细管冲洗液、毛细管和毛细管电泳仪。
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