CN109293660B - 吴茱萸次碱-no供体偶联物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了吴茱萸次碱‑NO供体偶联物，化学结构式如式Ⅰ、式II和式ⅠII所示，以及吴茱萸次碱‑NO供体偶联物在制备促降钙素基因相关肽(CGRP)释放药物中的应用及在制备治疗高血压等药物中的应用。

Description

吴茱萸次碱-NO供体偶联物及其应用

技术领域

本发明属于药物化合物和药物技术领域，具体涉及一类吴茱萸次碱-NO供体偶联物，该类化合物为活性成分的药物组合物，以及该类化合物和其药物组合物在在制备促降钙素基因相关肽(CGRP)释放药物和在制备治疗高血压等药物中的应用。

背景技术

高血压是现代社会的一种常见慢性病，也是心肌梗死、心衰、中风等心血管疾病的主要危险因素。目前中国高血压患者已突破3.3亿，每年新增高血压病例1000万(中华高血压杂志2011，701)。目前，WHO推荐的一线降压药包括噻嗪类利尿剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、β受体拮抗剂等五大类，这些药物多数是上世纪90年代以前开发出来的，近20年抗高血压药物没有创新。临床上治疗高血压以多种药物联合应用为特征的多重药物疗法为主，上述药物/疗法的应用可有效的控制血压并减少心血管并发症的发生，但用药量大，药物相互作用复杂，毒副作用严重，患者依从性差，并仍然存在15-20％难治性高血压患者。

降钙素基因相关肽(CGRP)是目前已知最强的舒血管物质，是辣椒素敏感感觉神经的主要递质，广泛分布于心血管组织。在原发性高血压患者和自发性高血压大鼠模型的血浆中CGRP的浓度显著降低，提示CGRP可能在高血压的发生发展中起到重要的作用(JHypertens 1992，10，1227；Regul.Pept.2003，114，175)。外源性给予高血压患者或动物CGRP均可显著降低血压，但其本身在血液中半衰期短(10mins)，临床应用受限。CGRP除具有强效舒血管作用外，还能有效抑制血管重构和保护血管内皮，减轻心肌缺血损伤，抑制心肌成纤维细胞增殖及心脏重构等(Eur.J.Pharmacol.2012，679，117)。因此，调节内源性CGRP的合成与释放可能是新一代抗高血压药物发现的新途径。

CGRP的合成与释放受多种因素的调节，其中瞬时受体位点通道香草酸1型受体(TRPV1)和瞬时受体位点通道锚蛋白1型受体(TRPA1)是调节CGRP合成与释放的关键受体。刺激性信号、内源性配体以及信使分子(H₂S、NO等)均通过激动感觉神经元的离子通道TRPV1或TRPA1，引起Ca²⁺内流，从而促进CGRP的合成与释放。

吴茱萸次碱(Rutaecarpine，Rut)是传统中药吴茱萸(Evodia rutaecarpa)的主要活性成分。Rut可通过激活TRPV1促进CGRP的合成与释放，从而表现出广泛的生物活性，如胡高云等报道Rut及其衍生物具有强效舒血管和降血压活性(Bioorganic and medicinalchemistry，2009，17，2351-2359)，司书毅等报道吴茱萸次碱可上调ABCA1、CLA-1/SR-B1、LXRα以及激活PPARγ的激动剂用途，用于治疗和/或预防动脉粥样硬化等疾病(专利号：ZL201110067053.1)，李岱等发现吴茱萸次碱可用于治疗银屑病(专利公开号：201010253222.6)，刘飞等报道一类硫杂吴茱萸次碱具有强效抗肿瘤作用，尤其对人乳腺癌、结肠癌、卵巢癌效果较好(专利公开号：201710616006.5)，黄志纾等报道氨基取代吴茱萸次碱可显著减少3T3-L1脂肪细胞的脂肪蓄积，并能减少高果糖诱导的FAO大鼠肝细胞脂肪蓄积，可减轻肥胖症状和缓解脂肪肝(专利号：ZL201210302084.5)。此外，最近上海壹志医药科技有限公司报道吴茱萸次碱可用于防治稻瘟病(专利公开号：201410766828.8)。

此外，众所周知，NO在心血管系统中具有强效的舒血管作用。最新研究发现，NO的舒血管作用依赖于H₂S的存在。深入机制研究发现，NO与H₂S可反应生成HNO，后者可激活TRPA1从而诱导下游的CGRP释放，发挥其舒血管作用。呋咱型NO供体是一类广泛应用的NO供体，如巴斯利尔药物公司报道呋咱并苯并咪唑类化合物用于治疗肿瘤和自身免疫性疾病(ZL200480017760.8)，陈瑛也报道一类香豆素-呋咱类衍生物可显著抑制肿瘤生长(ZL201410242359.x)，凌勇等报道苯磺酰基呋咱修饰的吉西他滨衍生物具有显著的抗肿瘤活性(ZL201510056168.6)，合肥华方医药科技有限公司报道一类苯并呋咱类化合物具有抗高血压活性(ZL201110175691.5)。

因此，瞄准促CGRP合成与释放这一新颖的抗高血压途径，将TRPV1激动剂吴茱萸次碱与TRPA1激动剂呋咱型NO供体，通过一定的极性链链接，从而设计、合成新型多靶点杂合物，并通过药效学和成药性评价，以期发现协同促CGRP合成与释放的高效、低毒、成药性好的抗高血压候选药物。

目前，现有技术中尚无Rut与呋咱型NO供体偶联物促进CGRP的合成与释放，从而发挥其生物学效应的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一类吴茱萸次碱-NO供体偶联物，以及该类化合物和其药物组合物在在制备降钙素基因相关肽(CGRP)激动剂药物和在制备治疗高血压等药物中的应用。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案加以实现的：

所述吴茱萸次碱-NO供体偶联物的化学结构式如式Ⅰ、式II和式ⅠII所示：

其中，R₁分别独立选自低级烷基、芳基、酯基、酰胺基、羧基等；所述低级烷基是指碳数为1至6之间直链或支链烷烃基团；所述芳基是指苯基、萘基、吡啶基、呋喃基、噻唑基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、哌嗪基。

R₂、R₂分别独立选自氢、低级烷基、羟基、氨基、酯基、酰胺基、羧基；所述低级烷基是指碳数为1至6之间直链或支链烷烃基团。

X＝CH₂，O，NH，S；

n＝0-5。

优选地，所述吴茱萸次碱-NO供体偶联物为化合物13a-13h、化合物17和化合物19：

上述吴茱萸次碱-NO供体偶联物及其在药理学上容许的盐可用于制备降钙素基因相关肽激动剂药物；所述在药理学上容许的盐包括与无机酸盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸，或者有机酸马来酸、富马酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、甲磺酸、对甲苯磺酸，己二酸，棕榈酸，单宁酸，或者碱金属锂，钠、钾；碱土金属钙、镁；赖氨酸碱性氨基酸成的盐。

上述吴茱萸次碱-NO供体偶联物及其在药理学上容许的盐可用于制备治疗高血压药物中的应用；所述在药理学上容许的盐包括与无机酸盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸，或者有机酸马来酸、富马酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、甲磺酸、对甲苯磺酸，己二酸，棕榈酸，单宁酸，或者碱金属锂，钠、钾；碱土金属钙、镁；赖氨酸碱性氨基酸成的盐。

本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物中含有治疗有效量的上述吴茱萸次碱-NO供体偶联物和其药学上可接受的载体。所述的药学上可接受的载体是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅料。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体。

本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。应用本发明的药物可采用的剂型是惯用的盖伦给药剂型，例如：药膏、片剂、丸剂、栓剂乳剂、输入液和注射液等。这些剂型按照众所周知的方法，使用传统的添加剂和赋型剂制得。由此制得的药物根据需要可按局部、非肠道、口服等途径给药。

本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01-10mg/kg体重，优选0.1-5mg/kg体重。可以一次或多次施用。

本发明所述的吴茱萸次碱-NO供体偶联物，作为一类新颖的高效、高特异性促CGRP释放剂，在制备治疗高血压等药物中有很好的应用前景。

附图说明

图1为制备吴茱萸次碱衍生物的反应流程图；

图2为制备C3位连接的Rut-呋咱类偶联物的反应流程图；

图3为制备C10位和C13位连接的Rut-呋咱类偶联物的反应流程图；

图4为Rut-呋咱类偶联物的浓度-效应曲线图；

图5为Rut-呋咱类偶联物的降血压作用(平均值±REM，n＝5，*P<0.05，**P<0.01)。

具体实施方式

为了更好的理解本发明实质，下面将用本发明的实施例、试验例、制剂实施例来说明本发明的通式Ⅰ所示的吴茱萸次碱-呋咱类偶联物的制备方法和药理作用结果，但本发明的技术方案并不局限于此，任何采用类似本发明技术方案，不需要本领域普通技术人员创造性劳动即可做出的方案均认为属于本发明技术方案范畴。实施例中涉及到的化合物的结构式见图1至图3，结果见图4和图5。

本发明的具体实验方法：

图1是制备吴茱萸次碱衍生物的反应流程图；试剂及反应条件为：(i)ethylformate，reflux，100％；(ii)POCl₃，DCM，0℃；(iii)EDCI，DMF，air，80℃；

图2是制备C3位连接的Rut-呋咱类偶联物的反应流程图；试剂及反应条件为(i)Malonic acid，piperidine，DMF，80℃；(ii)BH₃-THF(1M in THF)，0℃ to R.T.；(iii)NaNO₂(aq.)，AcOH，0℃ to R.T.；(iv)MsCl，TEA，DCM，0℃ to R.T.；(v)step 1:MsCl，TEA，DCM，0℃ to R.T.；step 2:NaN₃，ethanol，reflux；(vi)MsCl，TEA，DCM，0℃ to R.T.；(vii)K₂CO₃，DMF，80℃；(viii)H₂，Pd/C，MeOH，R.T.；(ix)9a-9g，K₂CO₃，CH₃CN，60℃；

图3是制备C10位和C13位连接的Rut-呋咱类偶联物的反应流程图；试剂及反应条件为(i)BBr₃，DCM，-78℃-0℃；(ii)(Boc)₂O，DMAP，TEA，DCM；(iii)NaOH，CH₃CN，70℃；(iv)step 1:H₂，Pd/C，MeOH，R.T.；step 2:9a，K₂CO₃，CH₃CN，60℃。

实施例1

化合物5a-5c的制备(以化合物5a的制备为例)：

第一步：向乙酸甲酯(100mL)中加入化合物1a(7.6g)，该混悬液加热至回流反应12小时后，TLC检测反应完毕后，减压浓缩得到化合物2a直接用于下一步反应。

第二步：在冰水浴、氮气氛围下，向化合物2a(8.72g)的无水DCM(30mL)溶液中，逐滴加入POCl3(10mL)，滴完后升至室温反应，TLC检测反应完毕后，向体系中加冰水(50mL)淬灭，用10％AcOH萃取三次(100mL/次)，合并水相，再用DCM洗，用氨水调pH值到9，然后再用DCM萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1.5:1)，得化合物3a，无需进一步纯化直接用于下一步反应。

第三步：向化合物3a(4.0g)和邻氨基苯甲酸(2.74g)的DMF(40mL)溶液中，加入EDCI(5.35g)，80度条件下反应，TLC检测反应完毕，向体系中加水(100mL)稀释，形成的混悬液过滤，滤渣依次用水和乙醇洗，得到的固体真空干燥后用DCM重结晶，得化合物5a(35％总产率)

实施例2

化合物14的制备：在-78度、氮气氛围下，向化合物5a(634mg)的无水DCM(20mL)溶液中，逐滴加入BBr3(2.0g)，滴完后缓慢升至室温反应，TLC检测反应完毕后，在冰浴条件下向体系中加饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，用DCM萃取三次(30mL/次)，合并有机相，依次用饱和NaHCO3溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析，得化合物14(485mg，80％)。

实施例3

化合物9a-9g的制备(以化合物9a的制备为例)：

第一步：向苯甲醛(2.12g)和丙二酸的吡啶(40mL)溶液中，加入哌啶(2.55g)，加热至80度反应6小时，TLC检测反应完毕后，减压浓缩，粗品用NaOH溶液(200mL)稀释，用EtOAc洗涤，用稀盐酸调pH至1，再用EtOAc萃取三次(50mL/次)，合并有机相，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得化合物7a(1.93g，65％)

第二步：在0度、氮气氛围下，向化合物7a(1.48g)的无水THF(50mL)溶液中，滴加BH3-THF溶液(1M，15mL)，滴完后升至室温条件下反应，TLC检测反应完毕后，向体系中加水淬灭，用EtOAc(80mL/次)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)，得化合物8a(0.9g，67％).

第三步：在0度、氮气氛围下，向化合物9a(670mg)的AcOH(1.0mL)溶液中，滴加NaNO2饱和溶液(1.04g)，室温条件下搅拌过夜，向体系中加水稀释后，用EtOAc(50mL/次)萃取三次，合并有机相，用饱和NaHCO3溶液、饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1—5:1)，得化合物直接用于下一步反应。

第四步：在0度、氮气氛围下，向前述产物(134mg)的DCM(5.0mL)溶液中，依次滴加三乙胺(151mg)、甲磺酰氯(125mg)，室温条件下搅拌1.5小时，加压浓缩后柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)，得化合物9a(0.9g，67％)。

实施例4

化合物11的制备

第一步：在0度条件下，向三聚乙二醇(4.5g)的无水DCM(80mL)溶液中，依次滴加三乙胺(4.55g)、甲磺酰氯(3.42g)，然后升至室温反应，TLC检测反应完毕后，滤除不溶物，然后减压浓缩，粗产品溶于EtOH(100mL)中，向其中分五批加入NaN3(975mg)，混合物加热至回流过夜，减压浓缩后，向体系中加水稀释，用DCM(100mL/次)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析，得叠氮三聚乙二醇。

第二步：向叠氮三聚乙二醇(5.25g)的DCM(100mL)溶液中，依次滴加依次滴加三乙胺(4.55g)、甲磺酰氯(3.42g)，然后升至室温反应，TLC检测反应完毕后，滤除不溶物，然后减压浓缩后柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)，得化合物11(30％产率)。

实施例5

化合物13a的制备:向化合物5b(60mg)和化合物9a(54mg)的MeCN(2.0mL)溶液中，加入K2CO3(41mg)，加热至80度反应，TLC监测反应完毕后，向体系中加水稀释后，用EtOAc(50mL/次)萃取三次，合并有机相，用饱和NaHCO3溶液、饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(DCM)，得化合物13a(62％产率)。

化合物13a:62％产率，¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆):δ11.83(s，1H)，7.85(dd，J＝8.1，1.5Hz，2H)，7.70(d，J＝3.0Hz，1H)，7.68–7.57(m，5H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.44(dd，J＝8.9，3.0Hz，1H)，7.26(t，J＝11.7，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，5.37(s，2H)，4.45(t，J＝6.9Hz，2H).

实施例6

化合物13b-13h，17，19的制备(以化合物13b的制备为例)

第一步：:向化合物5b(1.51g)和化合物11(1.27g)的DMF(2.0mL)溶液中，加入K2CO3(1.04g)，加热至80度反应，TLC监测反应完毕后，减压蒸去溶剂，向体系中加水稀释后，用DCM(80mL/次)萃取三次，合并有机相，用饱和NaHCO3溶液、饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(DCM:MeOH＝150:1)，得中间体。

将上述产品(1.89g)和Pd/C(189mg)溶于MeOH中，抽换气(H2)，室温搅拌至TLC监测不到原料，过滤后减压浓缩，粗产品柱层析纯化得到化合物12(67％产率)。

第二步：向化合物12(87mg)的无水CH3CN(2.0mL)溶液中，加入化合物9a(51mg)，升至60度反应，TLC检测反应完毕后，减压浓缩后柱层析(DCM:MeOH＝150:1)，得化合物13b(71mg，58％)。

(13b)，was obtained in 58％yield as a yellow solid.¹H-NMR(500M Hz，DMSO-d₆):δ11.82(s，1H)，7.98–7.88(m，2H)，7.67–7.52(m，6H)，7.48(dd，J＝8.2，2.4Hz，1H)，7.40(dt，J＝8.8，3.1Hz，1H)，7.30–7.21(m，1H)，7.08(td，J＝7.9，2.9Hz，1H)，4.44(dd，J＝6.6，3.6Hz，2H)，4.17(d，J＝2.1Hz，2H)，3.81(d，J＝3.1Hz，2H)，3.76(d，J＝1.8Hz，2H)，3.60–3.55(m，2H)，3.50(d，J＝4.7Hz，2H)，3.44(d，J＝3.3Hz，2H)，3.16(dd，J＝6.4，3.7Hz，2H)，2.65(d，J＝3.2Hz，2H)。

(13c)，was obtained in 56％yield as a yellow solid.¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆):δ11.82(s，1H)，7.89–7.83(m，1H)，7.79(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66–7.59(m，3H)，7.53(d，J＝2.9Hz，1H)，7.48(d，J＝8.2Hz，1H)，7.46(d，J＝2.5Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.9，3.0Hz，1H)，7.29–7.23(m，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，4.45(t，J＝6.8Hz，2H)，4.20–4.15(m，2H)，3.82(s，2H)，3.79–3.74(m，2H)，3.58(dd，J＝5.9，3.5Hz，2H)，3.51(dd，J＝5.8，3.5Hz，2H)，3.45(t，J＝5.4Hz，2H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，2.67(t，J＝5.5Hz，2H)。

(13d)，67％产率.¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆):δ11.82(s，1H)，7.62(dd，J＝8.4，2.9Hz，2H)，7.58–7.53(m，2H)，7.53–7.46(m，2H)，7.41(dd，J＝8.9，2.9Hz，1H)，7.25(t，J＝7.6Hz，1H)，7.19(d，J＝8.4Hz，1H)，7.09(q，J＝7.6Hz，2H)，4.45(t，J＝6.8Hz，2H)，4.22–4.15(m，2H)，4.11(q，J＝6.9Hz，2H)，3.78–3.73(m，2H)，3.71(s，2H)，3.55–3.49(m，2H)，3.42(s，2H)，3.29(t，J＝5.4Hz，2H)，3.16(t，J＝6.8Hz，2H)，2.48(d，J＝5.4Hz，2H)，1.27(t，J＝7.0Hz，3H)。

(13e)，61％产率.¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆):δ11.83(s，1H)，7.85(d，J＝8.3Hz，2H)，7.63(dd，J＝11.7，8.5Hz，2H)，7.55(d，J＝3.0Hz，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.45–7.39(m，3H)，7.28–7.23(m，1H)，7.09(dd，J＝11.4，4.2Hz，1H)，4.45(t，J＝6.8Hz，2H)，4.24–4.14(m，2H)，3.81(s，2H)，3.79–3.74(m，2H)，3.51(dd，J＝5.7，3.6Hz，2H)，3.45(t，J＝5.4Hz，2H)，3.16(t，J＝6.8Hz，2H)，2.95(dt，J＝13.8，6.9Hz，1H)，2.67(t，J＝5.4Hz，2H)，1.21(d，J＝6.9Hz，6H)。

(13f)，57％产率.¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆):δ11.83(s，1H)，8.17(t，J＝7.8Hz，1H)，8.09–8.01(m，2H)，7.89(dt，J＝5.9，2.9Hz，1H)，7.68(dt，J＝13.5，6.7Hz，1H)，7.66–7.60(m，4H)，7.55(d，J＝2.9Hz，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.43–7.39(m，1H)，7.25(dd，J＝11.7，4.5Hz，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，4.45(t，J＝6.8Hz，2H)，4.20–4.12(m，2H)，3.74–3.69(m，2H)，3.67(s，2H)，3.49–3.44(m，2H)，3.35–3.33(m，2H)，3.22(dd，J＝13.3，7.8Hz，2H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，2.47(t，J＝5.3Hz，2H)。

(13g)，55％产率.¹H-NMR(500MHz，CDCl₃):δ10.02(s，1H)，7.65(d，J＝14.6Hz，2H)，7.58(dd，J＝30.1，8.4Hz，2H)，7.29(q，J＝7.7Hz，3H)，7.15(t，J＝5.9Hz，2H)，6.58(s，1H)，4.58(t，J＝6.6Hz，2H)，4.21(s，2H)，4.05(s，2H)，3.87(s，2H)，3.71(t，J＝3.1Hz，2H)，3.64(t，J＝3.3Hz，2H)，3.62–3.57(m，2H)，3.21(t，J＝6.6Hz，2H)，2.84(t，J＝4.3Hz，2H)。

(13h)，66％产率.¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆):δ11.81(s，1H)，7.94(dd，J＝3.7，1.0Hz，1H)，7.89(dd，J＝5.0，0.9Hz，1H)，7.63(d，J＝8.1Hz，1H)，7.61(d，J＝8.9Hz，1H)，7.54(d，J＝2.9Hz，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.9，3.0Hz，1H)，7.28(dd，J＝5.0，3.8Hz，1H)，7.25(d，J＝7.2Hz，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，4.45(t，J＝6.8Hz，2H)，4.24–4.15(m，2H)，3.87(s，2H)，3.81–3.75(m，2H)，3.60(dd，J＝5.9，3.5Hz，2H)，3.53(dd，J＝5.7，3.6Hz，2H)，3.47(t，J＝5.4Hz，2H)，3.16(t，J＝6.8Hz，2H)，2.70(t，J＝5.5Hz，2H)。

(17):35％产率.¹H-NMR(500MHz，DMSO):δ11.73(s，1H)，8.17(dd，J＝7.9，1.2Hz，1H)，7.94(dd，J＝7.5，2.0Hz，1H)，7.84–7.80(m，2H)，7.68(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(d，J＝7.2Hz，2H)，7.48(t，J＝7.5Hz，2H)，7.37(d，J＝8.9Hz，1H)，7.12(d，J＝2.3Hz，1H)，6.92(dd，J＝8.9，2.4Hz，1H)，4.44(t，J＝6.8Hz，2H)，4.11–4.07(m，2H)，3.82(s，2H)，3.77–3.73(m，2H)，3.59–3.56(m，2H)，3.52–3.50(m，2H)，3.46–3.43(m，2H)，3.14(t，J＝6.9Hz，2H)，2.66(t，J＝5.5Hz，2H)。

(19)，44％产率.¹H-NMR(500MHz，CDCl₃):δ8.35–8.29(m，1H)，7.83(dd，J＝7.4，2.0Hz，2H)，7.75–7.70(m，1H)，7.67–7.63(m，1H)，7.60(d，J＝8.0Hz，1H)，7.58–7.54(m，1H)，7.53–7.48(m，3H)，7.43(dd，J＝13.1，6.0Hz，1H)，7.36(t，J＝7.5Hz，1H)，7.17(t，J＝7.5Hz，1H)，5.03(t，J＝5.9Hz，2H)，4.54(dd，J＝12.4，5.7Hz，2H)，4.04–3.99(m，2H)，3.82(d，J＝7.4Hz，2H)，3.62–3.57(m，2H)，3.54–3.50(m，2H)，3.47(t，J＝5.0Hz，2H)，3.16(t，J＝6.7Hz，2H)，2.72(t，J＝5.0Hz，2H)。

以下通过试验例来进一步阐明本发明吴茱萸次碱-呋咱类偶联物的药理作用(表1和表2)：

1、血管环实验方法：

采用离体大鼠动脉血管环模型进行，具体实验方法如下：SD大鼠，腹腔注射水合氯醛(10％)麻醉后，迅速取出胸主动脉段，置于预冷4℃的Krebs液中，小心清除结缔组织和血液，剪成约一3-4mm长的血管环。将血管环悬挂于两只平行的不锈钢钩上，浸入含10mLKrebs液(37℃，pH 7.4，95％O₂和5％CO₂)的恒温浴槽中，一端固定于浴槽，另一端连接张力换能器，经Maclab A/D转换器与计算机相连，连续记录血管张力变化。

调节胸主动脉环的静息张力为2g，平衡60分钟(期间每隔15分钟更换Krebs液1次，加用KCl(60mM)预收缩血管环，达到最大收缩高度后，用Krebs液冲洗3次后，重新平衡血管环30分钟。然后加入苯肾上腺素(2μM)收缩血管环，收缩稳定后累积加入不同浓度的吴茱萸次碱或其偶联衍生物(10^-9-10^-6M，浓度设置如上所示)，连续记录血管张力变化，观察其舒血管效应，测定血管舒张百分率，绘制曲线图。

2、体内降血压活性方法：

SD大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg)麻醉后，颈动脉插入聚乙烯(PE50)导管，导管连接压力换能器，经Maclab A/D转换器与Power Macintosh 7220型计算机相连，连续记录血压变化。手术结束后至少稳定10min再给药进行降压实验。

实验分组：健康SD大鼠，按体重随机分为6组(n＝5)

第1组：生理盐水对照组，单次腹腔注射生理盐水0.125mL/kg；

第2组：溶媒对照组，单次腹腔注射溶媒0.125mL/kg；

第3-4组：低剂量、高剂量吴茱萸次碱组，单次腹腔注射。

第5-6组：低剂量、高剂量Rut-呋咱类偶联药物组，单次腹腔注射。

3、从上述活性实验结果，可以看出：

(1)呋咱型NO供体的与吴茱萸次碱的链接位置对活性有一定的影响：3位和10位连接对活性影响不大，而13位连接对活性影响较大。

2)吴茱萸次碱与呋咱型NO供体的连接链长度对活性有明显的影响：链较短对活性有利；

3)呋咱片段芳环对活性有明显的影响：吸电子取代基对活性有利，可能是吸电子取代基使呋咱更易释放出NO。

制剂实例1

按实施例5－6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

制剂实例2

按实施例5-6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

制剂实例3

将实施例5-6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

制剂实例4

将实施例5-6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:5-1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。

制剂实例5

将实施例5-6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。

制剂实例6

将实施例5-6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

制剂实例7

将实施例5－6的方法先制得Rut-呋咱类偶联物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

表1.Rut-呋咱类偶联物的舒血管活性

^aE_max±REM(％)，n＝5，*P<0.5vs吴茱萸次碱，*P<0.01vs吴茱萸次碱.

表2缩写表

Ac 乙酰基

t-Bu 叔丁基

DCM 二氯甲烷

DEAD 偶氮二甲酸二乙酯

DMAP 4-N，N-二二甲氨基吡啶

DMF N，N-二甲氨基甲酰胺

EA 乙酸乙酯

EDCI 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

Ms 甲磺酰基

PE 石油醚

TEA 三乙胺

THF 四氢呋喃

Ts 对甲苯磺酰基

Claims (4)

1.吴茱萸次碱-NO供体偶联物，其特征在于，所述吴茱萸次碱-NO供体偶联物的化学结构式如式Ⅰ和式Ⅲ所示：

其中，R₁为芳基，所述芳基选自苯基、

萘基、呋喃基、噻吩基；

R₂、R₃为氢；

X＝CH₂，O，NH，S；

n＝0-5。

2.吴茱萸次碱-NO供体偶联物，其特征在于，所述吴茱萸次碱-NO供体偶联物为化合物13a-13h和化合物19：

3.如权利要求1或2任一项所述的吴茱萸次碱-NO供体偶联物及其在药理学上容许的盐在制备治疗高血压药物中的应用；所述在药理学上容许的盐包括与无机酸、有机酸、碱金属、碱土金属或碱性氨基酸成的盐；所述无机酸为盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸；所述有机酸为马来酸、富马酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、甲磺酸、对甲苯磺酸，己二酸，棕榈酸，单宁酸；所述碱金属为锂，钠、钾；所述碱土金属为钙、镁；所述碱性氨基酸为赖氨酸。

4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中含有治疗有效量的如权利要求1或2任一项所述的吴茱萸次碱-NO供体偶联物和其药学上可接受的载体。

Images