CN109280690A - B群链球菌的检测方法及所用的b群链球菌显色平板 - Google Patents

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/14—Streptococcus; Staphylococcus

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Abstract

本发明公开了一种B群链球菌的检测方法及所用的B群链球菌显色平板，其中B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨20‑85g、动物蛋白胨4‑9g、酵母粉1‑5g、氯化钠5‑10g、显色底物0.1‑1g、抗生素0.1‑0.5g、琼脂2‑6g和余量的水。B群链球菌的检测方法，包括取样、接种和培养，其中，所述接种是将样本接种至所述的B群链球菌显色平板上，培养后出现紫色菌落，则B群链球菌为阳性。本发明的有益效果是：方便使用，提高检测效率。且针对性强，能够在很大程度上避免其他菌种的混淆。

Description

B群链球菌的检测方法及所用的B群链球菌显色平板
技术领域
本发明涉及B群链球菌检测领域，具体涉及B群链球菌的检测方法及所用的B群链球菌显色平板。
背景技术
B群链球菌是一种格兰阳性球菌，于1877年首次被发现，寄居于肠道和直肠，其可以导致严重的新生儿感染，可以导致围产儿死亡，同时也是孕产妇生殖道感染的中药致病菌，可以导致泌尿系统感染、羊膜绒毛膜炎、产褥感染、孕产妇败血症和早产。目前常用的检测B群链球菌的方法是利用培养基对去的样品进行培养，但是由于样品中的细菌种类较多，B群链球菌以外的细菌对B群链球菌的生长和显色可能会造成混淆，所以一种针对性强的B群链球菌的检测方法尤其必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种B群链球菌的检测方法及所用的B群链球菌显色平板，解决目前常用的检测B群链球菌的方法容易受到嗜酸乳杆菌、和粪肠球菌等的干扰的问题。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨20-85g、动物蛋白胨4-9g、酵母粉1-5g、氯化钠5-10g、显色底物0.1-1g、抗生素0.1-0.5g、琼脂2-6g和余量的水。
作为优选的，每1L培养基中，含有胰酪胨50-65g、动物蛋白胨5-7g、酵母粉2-3g、氯化钠6-8g、显色底物0.3-6g、抗生素0.1-0.5g、琼脂2-6g和余量的水。
培养基内添加有不同种类的蛋白胨，可以为链球菌生长提供丰富的营养；酵母粉提供维生素；氯化钠维持渗透压；琼脂是培养基凝固剂。抗生素抑制大部分革兰氏阴性菌的生长。显色底物提供细菌生长分解产生色原，使B群链球菌显示紫色，肠球菌类显示深蓝色，嗜酸乳杆菌等显示亮粉色，其他菌群显示蓝色或者无色。本申请中的显色平板需在2℃～8℃保存，有效期6个月。禁止冷冻，避光保存。
一种B群链球菌的检测方法，包括取样、接种和培养，其中，所述接种是将样本接种至所述的B群链球菌显色平板上，培养后出现紫色菌落，则B群链球菌为阳性。
作为优选的，所述取样的样本为怀孕35-37周的妇女或出生0-3周的新生儿。
作为优选的，所述怀孕妇女样本采集方法：先擦去阴道分泌物，将一根无菌阴道拭子放入阴道下3/10-4/10处，旋转采取阴道分泌物；和/或使用一根棉拭子插入肛门，在肛门括约肌上2～3厘米处轻轻旋转采取直肠分泌物。
作为优选的，所述新生儿样本采集方法为：无菌拭子在新生儿鼻腔或咽部旋转取分泌物；和/或采集新生儿的脑脊液、痰液或胃吸出物。
作为优选的，所述接种采用划线接种法。
作为优选的，所述培养温度为35℃-37℃。
作为优选的，所述培养时间为18h-48h。
B群链球菌生长良好，紫色菌落；粪肠球菌生长良好，深蓝色菌落；嗜酸乳杆菌抑制或抑制性生长，亮粉色菌落；大肠埃希菌、白色念珠菌不生长。
如果平板没有按照要求进行保存，可能导致菌落显色不明显，不要放置在含二氧化碳的培养箱内培养，否则会出现假阳性。某些临床B群链球菌18h～24h菌落显示淡紫色，则需要延长至36h～48h判断结果。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：方便使用，提高检测效率。且针对性强，能够在很大程度上避免其他菌种的混淆。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
本实施例提供了一种B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨20g、动物蛋白胨9g、酵母粉1g、氯化钠5g、显色底物0.1g、抗生素0.1g、琼脂2g和余量的水。
实施例2：
本实施例提供了一种B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨85g、动物蛋白胨4g、酵母粉5g、氯化钠10g、显色底物1g、抗生素0.5g、琼脂6g和余量的水。
实施例3：
本实施例提供了一种B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨50g、动物蛋白胨7g、酵母粉2g、氯化钠6g、显色底物0.3g、抗生素0.1g、琼脂2g和余量的水。
实施例4：
本实施例提供了一种B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨65g、动物蛋白胨5g、酵母粉3g、氯化钠8g、显色底物6g、抗生素0.5g、琼脂6g和余量的水。
实施例5：
本实施例提供了一种B群链球菌显色平板，每1L培养基中，含有胰酪胨58g、动物蛋白胨6g、酵母粉2.5g、氯化钠7g、显色底物3g、抗生素0.3g、琼脂4g和余量的水。
实施例6：
本实施例提供了一种B群链球菌的检测方法，包括取样、接种和培养，其中，
所述取样的样本为怀孕35-37周的妇女，所述怀孕妇女样本采集方法：先擦去阴道分泌物，将一根无菌阴道拭子放入阴道下3/10-4/10处，旋转采取阴道分泌物；所述接种是采用划线接种法将样本接种至所述的B群链球菌显色平板上；
所述培养温度为35℃-37℃，所述培养时间为30h，培养后出现紫色菌落，则B群链球菌为阳性。
实施例6：
本实施例提供了一种B群链球菌的检测方法，包括取样、接种和培养，其中，
所述取样的样本为怀孕35-37周的妇女，所述怀孕妇女样本采集方法：使用一根棉拭子插入肛门，在肛门括约肌上2～3厘米处轻轻旋转采取直肠分泌物；
所述接种是采用划线接种法将样本接种至所述的B群链球菌显色平板上；
所述培养温度为35℃-37℃，所述培养时间为18h，培养后出现紫色菌落，则B群链球菌为阳性。
实施例6：
本实施例提供了一种B群链球菌的检测方法，包括取样、接种和培养，其中，
所述取样的样本为出生0-3周的新生儿；所述新生儿样本采集方法为：无菌拭子在新生儿鼻腔或咽部旋转取分泌物；和/或采集新生儿的脑脊液、痰液或胃吸出物；
所述接种是采用划线接种法将样本接种至所述的B群链球菌显色平板上；
所述培养温度为35℃-37℃，所述培养时间为48h，培养后出现紫色菌落，则B群链球菌为阳性。
性能指标：
1.微生物限度检查：平板在35℃～37℃条件下培养18-48h，以正常视力检查，可见污染菌生长的平板数不大于5％。
2.生长试验：白色念珠菌菌悬液浓度为105CFU/mL，其他菌株菌悬液浓度为104CFU/mL。分别接种10μL稀释的菌悬液滴至实施例1-5所述的B群链球菌显色平板，平板划线35℃～37℃培养18h～48h，生长情况均符合表1要求。
表1生长试验观察结果
质控菌株 观察结果
B群链球菌(ATCC 12386) 生长良好，紫色菌落
粪肠球菌(ATCC 29212) 生长良好，深蓝色菌落
嗜酸乳杆菌(ATCC 4356) 抑制或者抑制性生长，蓝色菌落
大肠埃希菌(ATCC 25922) 不生长
白色念珠菌(ATCC 10231) 不生长
注意：
1.本平板的原理是利用不同种类菌株的特异性酶和生化代谢原理显色，因此，①一些气单胞菌可能出现淡紫色菌落，需要延长培养时间判断并进行过氧化氢酶实验：过氧化氢酶阳性为气单胞菌、过氧化氢酶阴性为B群链球菌；②一些罕见的葡萄球菌可能出现紫色菌落，采用过氧化氢酶实验鉴别：过氧化氢酶阳性为葡萄球菌、过氧化氢酶阴性为B群链球菌。
2.大多数的A群链球菌为紫色菌落，结果出现假阳性，需要做PYR(吡咯烷酮芳基酰胺酶)进行鉴定：①PYR(+)：A群链球菌；②PYR(-)：B群链球菌。
尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。

Claims (9)

1.一种B群链球菌显色平板，其特征在于：每1L培养基中，含有胰酪胨20-85g、动物蛋白胨4-9g、酵母粉1-5g、氯化钠5-10g、显色底物0.1-1g、抗生素0.1-0.5g、琼脂2-6g和余量的水。
2.根据权利要求1所述的B群链球菌显色平板，其特征在于，每1L培养基中，含有胰酪胨50-65g、动物蛋白胨5-7g、酵母粉2-3g、氯化钠6-8g、显色底物0.3-6g、抗生素0.1-0.5g、琼脂2-6g和余量的水。
3.一种B群链球菌的检测方法，其特征在于，包括取样、接种和培养，其中，所述接种是将样本接种至权利要求1-2任意一项所述的B群链球菌显色平板上，培养后出现紫色菌落，则B群链球菌为阳性。
4.根据权利要求1所述的B群链球菌的检测方法，其特征在于，所述取样的样本为怀孕35-37周的妇女或出生0-3周的新生儿。
5.根据权利要求1所述的B群链球菌的检测方法，其特征在于，所述怀孕妇女样本采集方法：先擦去阴道分泌物，将一根无菌阴道拭子放入阴道下3/10-4/10处，旋转采取阴道分泌物；和/或使用一根棉拭子插入肛门，在肛门括约肌上2～3厘米处轻轻旋转采取直肠分泌物。
6.根据权利要求1所述的B群链球菌的检测方法，其特征在于，所述新生儿样本采集方法为：无菌拭子在新生儿鼻腔或咽部旋转取分泌物；和/或采集新生儿的脑脊液、痰液或胃吸出物。
7.根据权利要求1所述的B群链球菌的检测方法，其特征在于，所述接种采用划线接种法。
8.根据权利要求1所述的B群链球菌的检测方法，其特征在于，所述培养温度为35℃-37℃。
9.根据权利要求1所述的B群链球菌的检测方法，其特征在于，所述培养时间为18h-48h。
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