CN109280084B

CN109280084B - 一种胶体硒标记的抗he4抗体、试剂盒及其制备方法

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Publication number: CN109280084B
Application number: CN201810196189.4A
Authority: CN
Inventors: 王志增; 马远方; 郭亚飞; 陶宁亚; 周倩文; 张贝; 任志广; 张海龙; 张军; 刘广超; 李淑莲
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2018-03-09
Filing date: 2018-03-09
Publication date: 2022-04-29
Anticipated expiration: 2038-03-09
Also published as: CN109280084A

Abstract

本发明涉及一种胶体硒标记的抗HE4抗体、试剂盒及其制备方法。该胶体硒标记的抗HE4抗体，含有胶体硒粒子和与胶体硒粒子结合的抗HE4抗体。本发明提供的胶体硒标记的抗HE4抗体，采用胶体硒粒子和抗HE4抗体结合作为HE4检测用的显色标记抗体，其成本约为胶体金的1/27，可大大降低HE4显色标记抗体的成本，从而能够更方便的应用于卵巢癌肿瘤标志物的日常筛查中。试验表明，基于该胶体硒标记的抗HE4抗体的试剂盒的稳定性好、灵敏快速、结果易判、可靠性强，能够满足HE4的快速筛查需求。

Description

一种胶体硒标记的抗HE4抗体、试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种胶体硒标记的抗HE4抗体、试剂盒及其制备方法。

背景技术

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于宫颈癌和宫体癌，但是死亡率却居于第一位。在欧美等地区卵巢癌发病率高达十万分之十五，在我国发病率也高达十万分之五并且每年约有25％的患者死亡。近年来我国卵巢癌发病率和死亡率均呈逐年上升趋势，严重危害女性健康。卵巢癌因其早期临床症状不明显且与卵巢良性肿瘤又很难区分，目前缺乏早期诊断的有效方法，极易造成漏诊与误诊，将近七成的卵巢癌患者在确诊时，已处于癌症晚期并已扩散到其他器官，往往错过最佳治疗阶段，卵巢癌也因此被称为威胁女性健康的“沉默杀手”。在已经确诊的卵巢癌患者中，Ⅰ期卵巢癌患者的5年生存率为90％，而晚期卵巢癌患者仅为30％。因此，如能早期检出卵巢癌，可大大减少死亡率，延长患者生存时间。

目前，卵巢癌临床常用的诊断方法有：1、妇科三合诊；2、彩色B超；3、CT、MRI、PET等；4、肿瘤标志物的检测；尽管这些方法应用较为广泛，但是这些方法普遍存在价格昂贵，操作复杂，需要大型仪器设备且检测结果需要具有丰富临床经验积累的医师进行解读；另一方面，检测结果不能对肿块的良恶性做出准确的判断。与此相比，血清肿瘤标志物在肿瘤较小时就能被检测到，在卵巢癌的早期筛查、临床诊断、疗效评估、病情监测及预后判断等方面有较好的临床应用价值。

肿瘤标志物CA125被视为卵巢癌诊断的“金标准”，然而由于CA125的特异性及敏感度较低，容易出现假阴性或假阳性造成患者的漏诊或误诊，目前需要开发一种更好的标志物以尽早诊断卵巢癌。人附睾蛋白4(HE4)属于乳清酸性4-二硫化中心(WFDC)蛋白家族，具有疑似胰蛋白酶抑制剂的特性，它是一种新的卵巢癌血清标志物。正常生理情况下，HE4在人体中有非常低水平的表达，但在卵巢癌组织和患者血清中均高度表达，疾病早期HE4诊断的敏感度是82.7％，而CA125却仅有45.9％；与CA125仅20％的特异性相比，HE4的特异性高达99％，其对早期卵巢癌的敏感性和特异性均优于CA125，因此可用于卵巢癌的早期诊断、鉴别、治疗监测及预后评估。

公布号为CN106198983A的专利申请公开了一种用于卵巢癌检测的试剂盒，该试剂盒是利用免疫层析方法进行检测，试剂盒的结合垫上包被有显色标记的抗HE4抗体。对于抗HE4抗体的标记目前多采用胶体金，其制备工艺、检测效果能够满足一般的检测要求，但其成本较高，并不适用于早期卵巢癌的日常床旁快速筛查诊断和家庭自检。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胶体硒标记的抗HE4抗体，从而解决胶体金标记的抗HE4抗体的成本较高的问题。本发明还提供了一种基于上述胶体硒标记的抗HE4抗体的试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种胶体硒标记的抗HE4抗体，含有胶体硒粒子和与胶体硒粒子结合的抗HE4抗体。

所述胶体硒粒子为胶体硒溶液中的胶体粒子，所述胶体硒溶液由亚硒酸、维生素C、模板剂在水中反应制成。

本发明提供的胶体硒标记的抗HE4抗体，采用胶体硒粒子和抗HE4抗体结合作为HE4检测用的显色标记抗体，其成本约为胶体金的1/27，可大大降低HE4显色标记抗体的成本，从而能够更方便的应用于卵巢癌肿瘤标志物的日常筛查中。试验表明，基于该胶体硒标记的抗HE4抗体的试剂盒的稳定性好、灵敏快速、结果易判、可靠性强，能够满足HE4的快速筛查需求。

由于血清或血液的成分复杂，在侧向层析试剂盒检测过程中容易出现假阳性结果，为显著降低假阳性率，优选的，所述胶体硒标记的抗HE4抗体还含有工作液，所述工作液由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和吐温组成。磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/L，pH为7.2±0.2。该磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.2％-0.5％，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.05％-0.07％，NaCl的质量含量为0.1％-0.5％。进一步优选的，工作液中，牛血清白蛋白的质量终浓度为0.5％-5％。吐温的体积终浓度为0.01％-0.2％。吐温优选为Tween-20。蔗糖的质量终浓度为2％-5％。海藻糖的质量终浓度2％-5％。该工作液能够为抗体的释放、层析以及抗原抗体的免疫反应提供合适的环境条件，从而能够显著降低假阳性检测结果的出现。

每0.001mol胶体硒粒子(对应亚硒酸中Se的摩尔量)对应抗HE4抗体的用量为1-5mg。

本发明的胶体硒标记的抗HE4抗体的制备方法所采用的技术方案是：

一种胶体硒标记的抗HE4抗体的制备方法，包括以下步骤：

1)利用亚硒酸、维生素C、模板剂在水中反应，制备胶体硒；

2)将胶体硒和抗HE4抗体混合均匀，加入BSA混合，离心，弃去上清后加入工作液进行重悬，即得。

步骤1)中，为获得粒度均匀、结构稳定的胶体硒，优选的，所述模板剂为聚乙二醇和十二烷基硫酸钠。进一步优选的，聚乙二醇的质量浓度为0.1％-1％，十二烷基硫酸钠的浓度为0.001-0.01mol/L。为使亚硒酸中的Se充分转化，可加入过量的维生素C，可控制亚硒酸、维生素C的摩尔比为1：(7-9)。具体反应时，可控制亚硒酸的加料浓度为0.001-0.005mol/L。

步骤2)中，为使胶体硒与抗体的比例适宜，从而形成最佳的抗原抗体反应，每0.001mol胶体硒粒子(对应亚硒酸中Se的摩尔量)对应抗HE4抗体的用量为1-5mg。调整胶体硒和抗体混合时，体系的pH值为7.3-7.7。

加入BSA的作用是为了封闭胶体硒粒子上的裸露位点，一般控制BSA的质量浓度为0.5-5％即可，可进一步优选为1％-2％。所述工作液由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和吐温组成。磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/L，pH为7.2±0.2。该磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.2％-0.5％，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.05％-0.07％，NaCl的质量含量为0.1％-0.5％。进一步优选的，工作液中，牛血清白蛋白的质量终浓度为0.5％-5％。吐温的体积终浓度为0.01％-0.2％。吐温优选为Tween-20。蔗糖的质量终浓度为2％-5％。海藻糖的质量终浓度2％-5％。

本发明的胶体硒标记的抗HE4抗体的制备方法，制备工艺简单，成本经济，检测时间短、特异性好，在提高检测灵敏度的同时，节省了抗体的使用量。

本发明的用于检测人附睾分泌蛋白4的试剂盒所采用的技术方案是：

一种用于检测人附睾分泌蛋白4的试剂盒，包括样品垫、结合垫、反应垫及吸水垫，所述结合垫上包被有所述胶体硒标记的抗HE4抗体。

本发明的用于检测人附睾分泌蛋白4的试剂盒，是利用双抗体夹心法，基于抗原抗体免疫反应原理进行制备。在检测卵巢癌肿瘤标志物HE4时，特异性强、检测时间短，可广泛应用于早期卵巢癌的床旁快速筛查诊断和家庭自检，对于提高广大女性卵巢癌的早期防治意识，实现卵巢癌早筛查，早诊断、早治疗、有着极为重要的意义。该试剂盒操作简便、稳定性好、灵敏快速、结果易判、可靠性强，不需要专业人员操作、不需要特殊仪器、设备，可现场操作，检测成本低。

本发明的用于检测人附睾分泌蛋白4的试剂盒的制备方法所采用的技术方案是：

一种用于检测人附睾分泌蛋白4的试剂盒的制备方法，包括使用样品垫处理液对样品垫基体进行处理，干燥，得到样品垫的步骤；所述样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、血清、Tween-20和蔗糖组成。

所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/L，pH为7.2±0.2。样品垫处理液中，血清的体积终浓度为3％-20％，优选为5％-15％。血清可以为小牛血清或胎牛血清，进一步优选为胎牛血清。Tween-20的体积终浓度为0.01％-0.2％，优选为0.03％-0.1％。蔗糖的质量终浓度为2％-10％，优选为4％-8％。采用该样品垫处理液对样品垫基体进行处理，可配合本发明的结合垫，起到增强硒标抗体的稳定性和结合力的作用，从而能够进一步降低假阳性率，降低抗体的使用量，提高检测结果的准确性。

将胶体硒标记的抗HE4抗体均匀涂在结合垫基体上，经干燥即可制备结合垫。

反应垫、吸水垫的制备均可采用现有技术。如可将捕捉抗体(鼠源抗HE4单克隆抗体)和羊抗鼠IgG分别用无菌磷酸盐缓冲液稀释(0.01mol/L，pH 7.2)后，使用划膜喷金仪划膜包被于硝酸纤维素膜表面，干燥后作为T检测线和C质控线。

将制备好的样品垫、结合垫、反应垫、吸水垫依次搭接在支撑底板上，然后放入卡壳中，即得用于检测人HE4的试剂盒。

本发明的用于检测人HE4的试剂盒的制备方法，制备过程简单、制备成本低，对人卵巢癌早期标志物HE4检测的特异性强，可用于人全血或血清中HE4的高灵敏度、高准确性检测。

附图说明

图1为本发明的试剂盒的结构示意图；

图2为本发明的试剂盒的检测结果判定图；

图3为实施例1的试剂盒的灵敏度试验检测结果图；

图4为实施例1的试剂盒的特异性试验检测结果图；

图5为实施例1的试剂盒的稳定性试验检测结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的实施方式作进一步说明。以下实施例中，抗人附睾分泌蛋白4单克隆抗体(HE4-Ab)购自Medix Biochemica公司，浓度为5mg/mL。聚乙二醇为PEG-20000。

实施例1

本实施例的胶体硒标记的抗HE4抗体，采用以下步骤进行制备：

1)胶体硒的制备：取17mL超纯水置于50mL的小烧杯中，加入0.1g PEG，室温搅拌10min后加入1mL浓度为0.1mol/L的十二烷基硫酸钠溶液，搅拌20min后加入1mL浓度为0.04mol/L的亚硒酸溶液，室温搅拌20min后加入1mL浓度为0.32mol/L的维生素C溶液，室温搅拌20min，即得胶体硒；

2)抗体的标记：取1mL胶体硒，加入10μL浓度为1mol/L的碳酸钾溶液，调节体系的pH值为7.5；加入2μL的抗HE4-Ab(抗体浓度为2mg/mL)，室温混合30min，使HE4-Ab单克隆抗体充分的结合到胶体硒粒子上，完成抗HE4抗体的标记；

3)封闭：加入BSA，控制其质量终浓度为1％，室温混匀30min，以封闭胶体硒纳米粒子上的裸露位点；

4)重悬：在10000rpm下离心10min，弃去上清，沉淀用120μL的工作液重悬，即得。所述工作液由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和Tween-20组成，其中磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2；牛血清白蛋白的质量终浓度为2％，蔗糖的质量终浓度为3％，海藻糖的质量终浓度为3％，Tween-20的体积终浓度为0.1％。磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.3％，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.06％，NaCl的质量含量为0.3％。

本实施例的用于抗HE4抗体检测的试剂盒，如图1所示，包括支撑底板1，支撑底板1的一侧表面上平铺有长度沿前后方向延伸的反应垫4，反应垫4的前端搭接有结合垫3、后端搭接有吸水垫5，结合垫3上远离反应垫4的一端的下表面与支撑底板贴合、上表面搭接有样品垫2，样品垫2及吸水垫5的远离反应垫4的端部均与支撑底板贴合，样品垫2与结合垫3的搭接长度为2mm，结合垫3与反应垫4的搭接长度为1mm，反应垫4与吸水垫5的搭接长度为2mm。反应垫4上由前向后方向上依次包被有含有捕捉抗体的检测线41和含有羊抗鼠IgG的质控线42。该检测卡的各部件的制备过程描述如下：

样品垫的制备：把GF-08玻璃纤维膜裁剪成220mm×100mm，浸泡在样品垫处理液中5min，然后在40℃的鼓风干燥箱中干燥12h，取出，放入自封袋中备用。样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、小牛血清、蔗糖和Tween-20组成，其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2，小牛血清的体积终浓度为10％，Tween-20的体积终浓度为0.05％，蔗糖的质量浓度为7％。磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.3％，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.06％，NaCl的质量含量为0.3％。

结合垫的制备：将本实施例的胶体硒标记的抗HE4抗体均匀的铺在GF-06玻璃纤维膜上(2.8mm×75mm，硒标抗体用120μL工作液重悬，此时抗体浓度为33μg/mL，结合垫承载工作液为58μL/cm²)，然后在40℃的鼓风干燥箱中干燥3h，使标记单抗的胶体硒粒子固化在玻璃纤维膜上，取出放入自封袋，加入干燥剂，密封保存。

反应垫的制备：将硝酸纤维素膜(NC膜)裁剪成25mm×100mm的规格，贴在支撑底板(PVC板)的相应位置上，然后用PBS(0.01mol/L，pH为7.2)把HE4-Ab单克隆抗体稀释至浓度为1mg/mL，作为T检测线包被抗体；用PBS把羊抗鼠IgG稀释为2mg/mL，作为C质控线包被二抗；用喷金划膜仪以1μL/cm划膜，置于40℃鼓风干燥箱干燥3h，取出放入自封袋，备用。

吸水垫采用相应规格的吸水纸。

将结合垫贴在反应垫的前端，压反应垫1mm，再将样品垫贴在反应垫的前端，压住结合垫2mm，最后将吸水纸(180mm×100mm)的前端贴在反应垫的后端，压反应垫2mm，另一端贴在PVC板的末端，即完成试纸条的组装。将组装好的试纸条放入切条机中，切成4mm宽，放入卡壳中，可得HE4快速检测试剂盒。

HE4快速检测试剂盒的结果评判方法如图2所示，当C质控带1和T检测带2均显色时，则被检测样品中含有有灵敏度以上的人附睾分泌蛋白4(对应图2中3)；当C质控带1显色，而T检测带2不显色时，说明被检样品中不含或含有灵敏度以下的人附睾分泌蛋白4(对应图2中4)；如C质控带1不显色，无论T检测带2显色与否，则检测效果无效(对应图2中5)。

实施例2

本实施例的胶体硒标记的抗HE4抗体，制备过程与实施例1基本相同，区别仅在于，步骤2)中，抗HE4-Ab单克隆抗体的加入体积为3μL；步骤3)中，控制BSA的质量终浓度为2％；步骤4)中，工作液的用量为125μL，工作液中，牛血清白蛋白的质量终浓度为5％，蔗糖的质量终浓度为5％，海藻糖的质量终浓度为5％，Tween-20的体积终浓度为0.2％。

本实施例的用于抗HE4抗体检测的试剂盒，参考实施例1的方法进行制备，区别仅在于，制备样品垫过程中，样品垫处理液的由磷酸盐缓冲液、胎牛血清、蔗糖和Tween-20组成，其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH为7.2，胎牛血清的体积终浓度为15％，蔗糖的质量终浓度为8％，Tween-20的体积终浓度为0.1％。

实施例3

本实施例的胶体硒标记的抗HE4抗体，制备过程与实施例1基本相同，区别仅在于，步骤2)中，抗HE4-Ab单克隆抗体的加入体积为1μL；步骤3)中，控制BSA的质量终浓度为1.5％；步骤4)中，工作液的用量为115μL，工作液中，牛血清白蛋白的质量终浓度为0.5％，蔗糖的质量终浓度为2％，海藻糖的质量终浓度为2％，Tween-20的体积终浓度为0.01％。

本实施例的用于抗HE4抗体检测的试剂盒，参考实施例1的方法进行制备，区别仅在于，制备样品垫过程中，样品垫处理液的由磷酸盐缓冲液、胎牛血清、蔗糖和Tween-20组成，其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.03mol/L，pH为7.2，胎牛血清的体积终浓度为5％，蔗糖的质量终浓度为4％，Tween-20的体积终浓度为0.03％。

对比例1

对比例1的胶体硒标记的抗HE4抗体及试剂盒的制备方法，与实施例1基本相同，区别仅在于，工作液由磷酸盐缓冲液和Tween-20组成，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2；Tween-20的体积终浓度为0.1％。

相应的试剂盒在制备时，样品垫处理液由磷酸盐缓冲液和Tween-20组成，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2；Tween-20的体积终浓度为0.1％。

对比例2

对比例1的胶体硒标记的抗HE4抗体及试剂盒的制备方法，与实施例1基本相同，区别仅在于，工作液由磷酸盐缓冲液和BSA组成，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2；BSA的质量终浓度为2％。

相应的试剂盒在制备时，样品垫处理液由磷酸盐缓冲液和BSA组成，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2；BSA的质量终浓度为2％。

试验例1

本试验例进行实施例1的试剂盒的灵敏度试验。将HE4标准品用阴性血清分别稀释成浓度为10ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.5ng/mL的标准溶液，阴性为不加HE4标准品的阴性血清。将80μL不同浓度为标准溶液分别加入试剂盒中，阴性结果为T检测线不显色，C质控线显色，阳性结果为T检测线和C质控线均显色，检出阳性结果的最低标准液浓度即为该试剂盒的灵敏度，具体检测结果如图3所示。

图3中，1为阴性血清检测结果，显示为阴性，2-5的浓度分别为10ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.5ng/mL的人附睾分泌蛋白4标准品溶液的检测结果。由图可知，以双抗体夹心法制备的人附睾分泌蛋白4胶体硒早期检测试剂盒的灵敏度为2.5ng/mL(即100pmol/L)，达到并优于中国健康女性卵巢癌诊断总体参考值的105.1pmol/L。

试验例2

本试验例进行实施例1的试剂盒的特异性试验。用阴性血清分别配制2500U/mL的CA125标准溶液、10ng/mL的HE4标准品溶液，用于试剂盒的特异性检测。将80μL的上述样品溶液滴加入试剂盒中，具体检测结果如图4所示。

图4中，1为阴性血清的检测结果，显示为阴性，2为HE4标准品溶液的检测结果，显示为阳性，3为CA125标准溶液，可以明显看出，图4中3号试剂盒的T检测线不显色，C质控线显色，上述检测说明CA125与抗HE4抗体两者之间不存在交叉反应，实施例所制得的试剂盒的特异性良好。

试验例3

本实施例考察实施例1的试剂盒的稳定性。将同一批次的在40℃保存两周后，分别用阴性血清，浓度为10ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.5ng/mL的HE4标准溶液进行检测，结果如图5所示。

图5中，1为阴性血清的检测结果，显示为阴性，2-5的浓度分别为10ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.5ng/mL的HE4标准品溶液的检测结果。由图5可知，该试剂盒的显色正常，灵敏度仍然能够达到2.5ng/mL的标准，证明其稳定性良好。

试验例4

本试验例对比实施例1和对比例1、对比例2的试剂盒的检测效果。在相同条件下，使用实施例1、对比例1和对比例2的试剂盒按照试验例1的方法进行检测，实施例1的试剂盒检测阴性血清样品时显示为阴性，在检测HE4标准品溶液浓度大于2.5ng/mL的样品时显示为阳性，检测结果正常。而对比例1、对比例2的试剂盒在检测阴性血清样品时出现假阳性结果。

由以上试验例可知，本发明的试剂盒通过硒标抗体与样品垫处理液、工作液的设计，使抗体的释放、层析以及与抗原的特异性反应的得以优化，不会产生非特异性干扰，降低了假阴性及假阳性结果，使检测顺利进行，提高了检测结果的准确性。

在本发明的其他实施例中，可参考实施例1的方法，在本发明限定的范围内，通过改变胶体硒粒子与抗体的比例、硒标抗体与工作液的比例以及工作液的组分组成，来获得相应的胶体硒标记的抗HE4抗体。在此基础上，也可通过调整样品垫处理液中，不同组分的配比，来获得不同的样品垫，由其组装成的试剂盒的检测效果与实施例1的检测盒的检测效果相当，可同样起到对人全血或血清中抗HE4抗体快速检测的效果，从而方便用于家庭自检和床旁检测过程中。

Claims

1.一种用于检测人附睾分泌蛋白4的试剂盒，包括样品垫、结合垫、反应垫及吸水垫，其特征在于，将胶体硒标记的抗HE4抗体均匀涂在结合垫基体上，经干燥即可制备结合垫；胶体硒标记的抗HE4抗体含有工作液，所述工作液由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和吐温组成；其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2±0.2；牛血清白蛋白的质量终浓度为2％，Tween-20的体积终浓度为0.1％，蔗糖的质量终浓度为3％，海藻糖的质量终浓度3％；

使用样品垫处理液对样品垫基体进行处理，干燥，得到样品垫；所述样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、血清、吐温和蔗糖组成；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2±0.2；样品垫处理液中，小牛血清的体积终浓度为10％，Tween-20的体积终浓度为0.05％，蔗糖的质量终浓度为7％；

所述磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.3％，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.06％，NaCl的质量含量为0.3％。