CN109266732A - TLR7和TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用及TLR7的抑制剂及其应用 - Google Patents

TLR7和TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用及TLR7的抑制剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及TLR7和TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用及TLR7的抑制剂在IgA肾病预防治疗中的应用。本发明通过实验证实了IgA肾病病人外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR7基因和TLR8基因的表达水平相对于健康对照者和疾病对照者显著上升，同时经TLR7和TLR8共同配基R848激活后能产生更多IgA1抗体,且IgA1抗体异常O‑糖基化程度加重。化学式为C16H19N3O2的化合物能作为TLR7的抑制剂，能抑制外周单个核血细胞合成IgA1的能力，并降低这些IgA1分子的异常O‑糖基化。TLR7和TLR8是治疗IgA肾病的新型靶点，具有很强的临床应用价值。

Description

TLR7和TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用及TLR7的抑制 剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及Toll样受体7(TLR7)和Toll样受体8TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用及TLR7的抑制剂在IgA肾病预防治疗中的应用。
背景技术
IgA肾病(IgAN)是全球范围内最常见的原发性肾小球肾病，尤其亚太区高发，据报道IgA肾病在我国占原发性肾小球疾病的45.3％。长期的跟踪研究表明，25％～30％的IgA肾病病人在发病后20～25年间进展至终末期肾衰竭(尿毒症)，给国家、社会和病人家庭带来严重的影响和沉重的经济负担。因此，探寻针对IgA肾病的靶点治疗分子，进而研发相关的治疗药物，具有重要的临床意义。
目前认为IgA肾病的发病机制有四步，第一步是上游因子(包括感染等)导致异常O-糖基化IgA分子的形成；第二步是识别O-糖基化异常IgA1分子的特异IgG抗体出现；第三步是致病性异常O-糖基化IgA1-IgG免疫复合物在循环系统中的出现及清除障碍；第四步是这些IgA1免疫复合物激活肾脏系膜细胞和补体系统造成长期肾组织损伤。其中，异常O-糖基化的IgA1抗体被证明与IgA肾病的多个疾病指标正相关，并可以作为生物标记物指示IgA肾病的病情进展。因此，异常O-糖基化的IgA1抗体形成对于疾病的发生至关重要,如果能从上游控制B细胞分泌异常O-糖基化的IgA1抗体就能从根源治疗疾病。
已有的研究表明先天免疫系统在IgA肾病中起关键作用,其中Toll样受体家族成员是先天免疫系统的重要防线，也是连接先天免疫和获得性免疫的桥梁。目前已知在人体中有10个成员(TLR1，2，3，4，5，6，7，8，9，10)，其中TLR7和TLR8识别单链的RNA病毒，两者具有序列及结构同源性，而且功能类似，可识别相同配基，识别后可激活下游MyD88/TRIF信号通路，激活多种炎症因子的合成，并调节多种细胞活性，对B细胞中IgA,IgG等抗体分子的合成也有着重要的调控作用。
目前，TLR7基因和TLR8基因在IgA肾病病人中的表达水平和作用机制并不清楚，TLR7和TLR8在IgA肾病中对IgA1合成及其异常O-糖基化的调控还未有报道。
发明内容
本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供TLR7和TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用。
本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供TLR7的抑制剂。
本发明的目的之三在于针对现有技术的不足，提供TLR7的抑制剂在抑制IgA1合成及缓解IgA1异常糖基化的应用。
为了实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案：
提供TLR7和TLR8作为IgA肾病治疗靶点的应用。
其中，人TLR7基因检测的上游引物为:5'GATGCCTTCCAGTTGCGATA3'；人TLR7基因检测的下游引物为5'TCCGTATGGTTAACCCACCA 3'。其中，人TLR8基因检测的上游引物为:5'CTCATGCAGAGCATCAACCA3'；人TLR8基因检测的下游引物为5'ACACTGGCTCCAGCAGGATA 3'。
为了实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案：
提供TLR7的抑制剂，其化学式为C16H19N3O2，并具有式I表示化学结构：
为了实现上述目的之三，本发明采用如下技术方案：
提供TLR7的抑制剂在制备治疗和预防IgA肾病药物中的应用。
提供TLR7的抑制剂在抑制人合成IgA1中的应用。
提供TLR7的抑制剂在缓解人IgA1分子异常O-糖基化的应用。
本发明与现有技术相比较，有益效果在于：
(1)本发明提供的TLR7和TLR8作为IgA肾病治疗靶点的应用，两者表达均在IgA肾病病人中显著升高，而且同时激活后导致IgA肾病病人IgA1合成增加，IgA1抗体分子的O-糖基化异常程度增加，可以根据这两个靶点研发针对IgA肾病的靶向药物。TLR7和TLR8是治疗IgA肾病的新型靶点，具有很强的临床应用价值。
(2)本发明提供的TLR7的抑制剂，能够抑制人外周血单个核细胞中TLR7激活后IgA1抗体的合成，并缓解IgA1分子的O-糖基化异常，具有治疗IgA肾病的前景。
(3)本发明提供的TLR7的抑制剂的应用，能够应用于制备治疗和预防IgA肾病药物，能够应用于抑制人合成IgA1，并能够应用于缓解人IgA1分子异常O-糖基化，具有很强的临床应用价值。
附图说明
附图1是TLR7和TLR8在IgA肾病病人及对照者的外周血单个核细胞中的表达图。
附图2是TLR7在IgA肾病病人肾脏组织中高表达图。
附图3是TLR7和TLR8同时激活后IgA肾病病人及对照者的外周血单个核细胞合成IgA1的产量；TLR7和TLR8同时激活后IgA肾病病人及对照者的外周血单个核细胞所合成IgA1的O-糖基化程度图。
图4是TLR7的抑制剂在一定的浓度梯度范围内对外周血单个核细胞的细胞活性和合成IgA1的影响图。
附图5是TLR7抑制剂处理后人外周血单个核细胞合成IgA1的产量及其O-糖基化程度图。
附图6是TLR8抑制剂处理后人外周血单个核细胞合成IgA1的产量及其O-糖基化程度图。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明涉及TLR7和TLR8作为IgA肾病治疗靶点的用途，同时涉及TLR7抑制剂在治疗和预防IgA肾病中的应用，并提供一种新型化合物作为TLR7抑制剂用于降低IgA1合成并缓解IgA1异常O-糖基化的应用。本发明通过实验证实了IgA肾病病人外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR7基因和TLR8基因的表达水平相对于健康对照者和疾病对照者显著上升，同时经TLR7和TLR8共同配基R848激活后可以产生更多的IgA1抗体,而且这些IgA1抗体异常O-糖基化程度加重。同时，本申请发现化学式为C16H19N3O2的化合物能作为TLR7的抑制剂，能够抑制外周单个核血细胞合成IgA1的能力，并且降低这些IgA1分子的异常O-糖基化。TLR7和TLR8是治疗IgA肾病的新型靶点，具有很强的临床应用价值。
实施例1。
提供TLR7和TLR8作为IgA肾病治疗靶点的应用。
其中，人TLR7基因检测的上游引物为:5'GATGCCTTCCAGTTGCGATA
其中，人TLR8基因检测的上游引物为:5'CTCATGCAGAGCATCAACCA3'；人TLR8基因检测的下游引物为5'ACACTGGCTCCAGCAGGATA 3'。
实施例2。
提供TLR7的抑制剂，其化学式为C16H19N3O2，并具有式I表示化学结构：
其中，式I的中文名称为1-(2(二乙氨基)乙基)铬诺[3,4-D]咪唑-4(1H)-酮。
其中，式I的英文名称为1-(2-(diethylamino)ethyl)chromeno[3,4-d]imidazol-4(1H)-one。
实施例3。
提供TLR7的抑制剂在制备治疗和预防IgA肾病药物中的应用。
提供TLR7的抑制剂在抑制人合成IgA1中的应用。
提供TLR7的抑制剂在缓解人IgA1分子异常O-糖基化的应用。
实验：
利用IgA肾病病人及对照者的外周血单个核细胞，检测TLR7基因和TLR8基因表达的mRNA水平；利用IgA肾病病人外周血单个核细胞，检测TLR7和TLR8蛋白经共同配基激活后IgA1抗体合成及其O-糖基化水平，具体检测步骤如下：
步骤一、利用密度梯度离心方法分离人外周血单个核细胞；
步骤二、提取步骤一所得细胞的mRNA，并反转为cDNA；
步骤三、利用步骤二所得的cDNA进行荧光定量PCR扩增，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因为看家基因，得到TLR7基因和TLR8基因的相对表达结果；
步骤四、利用步骤一所得细胞，体外进行培养，并加入TLR7和TLR8共同激动剂R848,12天后收集细胞培养上清；
步骤五、利用ELISA方法检测步骤四所得到的细胞培养上清中IgA1抗体含量；
步骤六、利用凝集素ELISA方法检测步骤四所得到的细胞培养上清中IgA1抗体的O-糖基化程度。
步骤七，利用IgA肾病病人及对照者的肾脏穿刺标本，能够检测TLR7蛋白在IgA肾病病人和对照者的肾脏组织中的表达情况。
利用具有式I结构的TLR7的抑制剂，体外处理IgA肾病病人外周血单个核细胞，检测此新型化合物作为TLR7抑制剂对人外周血单个核细胞合成IgA1抗体及其异常O-糖基化的改善，具体检测步骤如下：
步骤一、利用密度梯度离心方法分离人外周血单个核细胞；
步骤二、利用步骤一所得细胞，体外进行培养，TLR7和TLR8的共同激动剂R848或者TLR7的特异激动剂Loxoribine,同时加入具有式I结构的TLR7的抑制剂，12天后收集细胞培养上清；
步骤三、利用步骤一所得细胞，体外进行培养，TLR7和TLR8的共同激动剂R848，同时加入具有TLR8特异抑制剂CU-CPT8m，12天后收集细胞培养上清；
步骤四、利用ELISA方法检测步骤二和三所得到的细胞培养上清中IgA1抗体含量；
步骤五、利用凝集素ELISA方法检测步骤二和三所得到的细胞培养上清中IgA抗体的O-糖基化程度。
实验一、IgA肾病患者及对照者的筛选入组。
IgA肾病病人的纳入标准：年龄14～60岁，性别不限；临床和肾活检确诊为原发性IgA肾病，排除继发原因；蛋白尿和镜下血尿至少一项为阳性；est GFR≥40ml/min/1.73m2；签署书面同意书，未满18岁患者，需要同时有法定监护人签署之情同意书。排除标准：近两周内急性感染，近一个月严重感染史；乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒病毒、艾滋病病毒感染；自身免疫性疾病(系统性红斑狼疮、I型糖尿病、甲亢)；紫癜性肾炎、乙肝相关性肾病等继发性IgA肾病；急性病毒感染期(乙肝、丙肝、巨细胞病毒等)；慢性活动性肝病(乙肝、丙肝等)、有肝功能损害者(天门冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶或胆红素高于正常水平上限2.5倍)；恶性肿瘤；急进性肾炎综合征、急性肾衰竭，快速进展型的IgA肾病即肾功能急剧恶化的IgA肾病，组织学上为坏死性血管炎和新月体形成(≥30％)；使用其他免疫抑制剂。
健康对照者的纳入标准:年龄14～60岁，性别不限；临床检查肝功能及肾功能正常；蛋白尿和镜下血阴性；签署书面同意书，未满18岁患者，需要同时有法定监护人签署之情同意书。排除标准:近两周内急性感染，近一个月严重感染史；乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒病毒、艾滋病病毒感染；自身免疫性疾病(系统性红斑狼疮、I型糖尿病、甲亢)。
疾病对照的纳入标准:年龄14～60岁，性别不限；临床和肾活检确诊为原发性膜性肾病或者微小病变肾病，排除继发原因；est GFR≥40ml/min/1.73m2；签署书面同意书，未满18岁患者，需要同时有法定监护人签署之情同意书。排除标准:近两周内急性感染，近一个月严重感染史；乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒病毒、艾滋病病毒感染；自身免疫性疾病(系统性红斑狼疮、I型糖尿病、甲亢)；使用免疫抑制剂。
实验二、TLR7和TLR8基因在IgA肾病病人及对照者外周血单个核细胞中的表达。
采集入选病人及对照者EDTA-K2抗凝外周血10mL，以Ficoll梯度分离外周血单个核细胞，然后用PBS洗涤3次，收集的细胞利用Trizol方法提取总RNA，消化DNA后反转录为cDNA，配制SYRB-Green荧光定量PCR反应，在ABI7900荧光定量PCR仪进行反应及检测，应用SDS2.4软件分析，以看家基因GAPDH为对照，计算TLR7和TLR8基因的相对表达水平。
结果：如附图1所示，IgA肾病病人的外周血单个核细胞的TLR7和TLR8基因的mRNA水平相对于健康对照和疾病对照都显著升高，*p<0.05,**P<0.01，***p<0.001。
实验三、TLR7在IgA肾病病人及对照者肾脏组织的表达。
入选的IgA肾病病人及对照者的肾穿组织经石蜡包埋并切成4μM的组织片后，经二甲苯及梯度酒精处理后高压修复抗原，PBS洗涤，利用3％BSA/0.03％Triton-X100/PBS室温封闭1小时，PBS洗涤1次，一抗室温4小时，PBS洗涤3次，荧光二抗室温1小时，DAPI染核3分钟，PBS充分洗涤，最后封片干燥,在Zeiss LSM880荧光显微镜下观察并拍照。
结果：如附图2A所示，IgA肾病病人的肾脏组织TLR7在肾小球周围侵润的炎症细胞中有丰富的表达，肾小管中也有中度的表达；而在正常健康对照和疾病对照的肾组织中TLR7表达很弱。如图2B所示，TLR7在IgA肾病病人肾脏中的淋巴细胞中有高度表达，CD3阳性细胞，CD20阳性细胞和CD68阳性细胞都有的表达。
实验四、IgA肾病病人及对照者外周血单个核细胞中的培养体系。
采集入选病人及对照者EDTA-K2抗凝外周血10mL，以Ficoll梯度分离外周血单个核细胞，然后用PBS洗涤3次，收集的细胞悬于培养基(RPMI1640培养基,10％胎牛血清,100μg/mL青霉素及链霉素,2mM L-谷氨酰胺,100mM丙酮酸钠,55mMβ-巯基乙醇)中，细胞培养板用抗IgM抗体预处理过夜，细胞2.5×10e5/孔的密度铺于预处理96孔板中，然后培养于37℃的5％CO2培养箱。
实验五、TLR7和TLR8激活后IgA肾病病人及对照者外周血单个核细胞所合成IgA1的产量。
按照实验四方法，细胞铺板后即加入TLR7和TLR8的共同激动剂R848(5μg/mL)，细胞培养12天后收取培养上清。为了检测细胞培养上清的IgA1含量,利用IgA1捕捉抗体预处理96孔酶标板过夜，然后用封闭剂(PBS添加1％牛血清白蛋白，2％胎牛血清)于37℃封闭1小时，洗涤剂(PBS添加0.05％吐温20)洗涤2遍，加入封闭剂稀释的样品或者标准品于37℃温育3小时，洗涤剂洗涤4遍，加入生物素标记的IgA1抗体于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(Molecular Device)测定OD450吸光值。
结果：如附图3A所示，IgA肾病病人外周血单个核细胞经TLR7和TLR8共同激动剂R848激活后，相对于健康对照和疾病对照，产生了更多的IgA1分子。*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。
实验六、TLR7和TLR8激活后IgA肾病病人及对照者外周血单个核细胞所合成IgA1的O-糖基化程度。
按照实验四的方法，细胞铺板后加入TLR7和TLR8的共同激动剂R848(5μg/mL)，细胞培养12天后收取培养上清。设立实验板和对照板，利用IgA1捕捉抗体预处理96孔酶标板过夜，然后使用封闭剂于37℃封闭1小时，洗涤剂(0.05％Tween-20/PBS)洗涤2遍，加入含有100ng IgA1的样品或者标准品于4℃温育24小时以上，洗涤剂洗涤4遍。实验板加入神经唾液酸酶于37℃温育3小时，洗涤剂洗涤4遍，再加入生物素标记的蜗牛凝集素于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(MolecularDevice)测定OD450吸光值。对照板不应用神经唾液酸酶及其余下步骤，而加入生物素标记的IgA1抗体于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(Molecular Device)测定OD450吸光值。实验板与对对照板的比值(OD450HAA/OD450 IgA1)作为IgA1分子的异常糖基化O-糖基化程度。
结果：如附图3B所示，IgA肾病病人外周血单个核细胞经TLR7和TLR8共同激动剂R848激活后产生的IgA分子相对于健康对照和疾病对照，具有更强的异常O-糖基化。*p<0.05。
实验七、TLR7抑制剂在一定浓度梯度范围内对外周血单个核细胞的细胞活性影响。
按照实验四的方法，细胞铺板后即加入TLR7和TLR8的共同激动剂R848(5μg/mL)，同时加入一系列浓度梯度的具有化学式1的TLR7抑制剂(溶剂对照/10/33/100/300/900μM),培养72小时后，收集细胞，PBS洗涤2次，加入细胞活性染色剂(FVD eFlour 780,Thermo65-0865)染色后，PBS洗涤1次，用流式细胞仪(Cytoflex)检测死细胞和活细胞比例。
结果：如附图4A所示，正常对照者的人外周血单个核细胞经TLR7抑制剂处理后，在300μM浓度范围内对细胞没有明显的毒性作用。
实验八、TLR7抑制剂在一定浓度梯度范围内对外周血单个核细胞的合成IgA1的影响。
按照实验四的方法，细胞铺板后即加入TLR7和TLR8的共同激动剂R848(5μg/mL)，同时加入一系列浓度梯度的具有化学式1的TLR7抑制剂(溶剂对照/10/33/100/300/900μM)，细胞培养12天后收取培养上清。为了检测细胞培养上清的IgA1含量,利用IgA1捕捉抗体预处理96孔酶标板过夜，然后用封闭剂(PBS添加1％牛血清白蛋白，2％胎牛血清)于37℃封闭1小时，洗涤剂(PBS添加0.05％吐温20)洗涤2遍，加入封闭剂稀释的样品或者标准品于37℃温育3小时，洗涤剂洗涤4遍，加入生物素标记的IgA1抗体于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(Molecular Device)测定OD450吸光值。
结果：如附图4B所示，正常对照者的人外周血单个核细胞经TLR7抑制剂处理后，在100μM开始对细胞合成IgA1表现出明显抑制作用。
实验九、TLR7抑制剂处理后人外周血单个核细胞合成IgA1的产量及其糖基化程度。
按照实验四的方法，细胞铺板后即加入TLR7和TLR8的共同激动剂R848(5μg/mL)或者TLR7的特异激动剂Loxoribine(0.5mM)，同时加入具有化学式1表示结构的TLR7抑制剂(100μM)，细胞培养12天后收取培养上清,如实验五方法检测IgA1含量。同时为了检测IgA1的O-糖基化程度，设立实验板和对照板，利用IgA1捕捉抗体预处理96孔酶标板过夜，然后于37℃封闭1小时，洗涤剂(PBS添加0.05％吐温20)洗涤2遍，加入含有100ng IgA1的样品或者标准品于4℃温育24小时以上，洗涤剂洗涤4遍。实验板加入神经唾液酸酶37℃温育3小时，洗涤剂洗涤4遍，再加入生物素标记的蜗牛凝集素于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(Molecular Device)测定OD450吸光值。对照板不应用神经唾液酸酶及其余下步骤，而加入生物素标记的IgA1抗体于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(MolecularDevice)测定OD450吸光值。实验板与对对照板的比值(OD450HAA/OD450 IgA1)作为IgA1分子的异常糖基化O-糖基化程度。
结果：如附图5A所示，正常对照者的人外周血单个核细胞经TLR7抑制剂处理后，IgA1产量呈现明显下降趋势。在R848刺激组，13人中有11人的IgA1分泌量在TLR7抑制剂处理后出现了下降；在Loxoribine刺激组，13人中有12人的IgA1分泌量在TLR7抑制剂处理后出现了下降。
如附图5B所示，人外周血单个核细胞经TLR7抑制剂处理后，IgA1分子的异常O-糖基化程度呈现减轻趋势。在R848刺激组，8人中有5人的IgA1分子的异常O-糖基化程度改善；在Loxoribine刺激组，8人中有7人的IgA1分子的异常O-糖基化程度改善。
实验十、TLR8抑制剂处理后人外周血单个核细胞合成IgA1的产量及其糖基化程度。
按照实验四的方法，细胞铺板后即加入TLR7和TLR8的共同激动剂R848(5μg/mL)，同时加入TLR8抑制剂CU-CTP8m(1μM)，细胞培养12天后收取培养上清,如实验五方法检测IgA1含量。同时为了检测IgA1的O-糖基化程度，设立实验板和对照板，利用IgA1捕捉抗体预处理96孔酶标板过夜，然后于37℃封闭1小时，洗涤剂(PBS添加0.05％吐温20)洗涤2遍，加入含有100ng IgA1的样品或者标准品于4℃温育24小时以上，洗涤剂洗涤4遍。实验板加入神经唾液酸酶37℃温育3小时，洗涤剂洗涤4遍，再加入生物素标记的蜗牛凝集素于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(Molecular Device)测定OD450吸光值。对照板不应用神经唾液酸酶及其余下步骤，而加入生物素标记的IgA1抗体于37℃温育2小时，洗涤剂洗涤4遍，加入辣根过氧化物酶标记的链亲和素于37℃温育1小时，洗涤剂洗涤4遍，然后用3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色，用2N盐酸终止，于Spectra Max M5(Molecular Device)测定OD450吸光值。实验板与对对照板的比值(OD450HAA/OD450 IgA1)作为IgA1分子的异常糖基化O-糖基化程度。
结果：如附图6A所示，正常对照者的人外周血单个核细胞经R848激活并用TLR8抑制剂处理后，IgA1的合成无明显的上升或者下降趋势。如附图6B所示，TLR8抑制剂处理后，IgA1的O-糖基化程度也并没有一致的变化趋势。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.TLR7作为IgA肾病预防治疗靶点的应用。
2.根据权利要求1所述的TLR7作为IgA肾病治疗靶点的应用，其特征在于：人TLR7基因检测的上游引物为:5'GATGCCTTCCAGTTGCGATA 3'；人TLR7基因检测的下游引物为5'TCCGTATGGTTAACCCACCA 3'。
3.TLR8作为IgA肾病预防治疗靶点的应用。
4.根据权利要求3所述的TLR8作为IgA肾病治疗靶点的应用，其特征在于：人TLR8基因检测的上游引物为:5'CTCATGCAGAGCATCAACCA3'；人TLR8基因检测的下游引物为5'ACACTGGCTCCAGCAGGATA 3'。
5.TLR7和TLR8共同作为IgA肾病预防治疗靶点的应用。
6.TLR7的抑制剂，其特征在于：其化学式为C16H19N3O2，并具有式I表示化学结构：
7.权利要求6所述的TLR7的抑制剂在制备治疗和预防IgA肾病药物中的应用。
8.权利要求6所述的TLR7的抑制剂在抑制人合成IgA1中的应用。
9.权利要求6所述的TLR7的抑制剂在缓解人IgA1分子异常O-糖基化的应用。
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