CN109232753B - 一种华美牛肝菌多糖bsf-x及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种华美牛肝菌多糖BSF‑X及其制备方法与应用，华美牛肝菌多糖是主要由β‑D–葡萄糖和α‑D–半乳糖组成，比例为2：1，平均分子量约为141309Da，具有(1→4)‑β‑D–葡萄糖的主链，6‑O上连接一个→1,6)‑α‑D–半乳糖的侧链，侧链的半乳糖2‑O上连接一个→4)‑β‑D–葡萄糖。华美牛肝菌多糖具有较强的免疫调节活性，能显著或者非常显著地促进B、T和Raw264.7三种免疫细胞的增殖；BSF‑X能促进细胞的增殖；提高巨噬细胞释放免疫因子IL‑23和TNF‑α；在体外对L929细胞有相当显著的抑制作用；体内也能抑制S180肿瘤的生长。

Description

一种华美牛肝菌多糖BSF-X及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于真菌多糖研发技术领域，具体地说，涉及一种华美牛肝菌多糖BSF-X及其制备方法与应用。
背景技术
多糖(polysaccharides)或者多聚糖，是普遍存在于生物体内的一类生物大分子，常与细胞骨架的构成和组成多种内源性生物活性分子有关。近代生物化学一直把多糖视作生物体内维持细胞结构(如纤维素和几丁质)和提供能量来源(如淀粉和糖元)的物质，没有给予足够的重视。多糖的发展较蛋白质、核酸晚得多，加上多糖本身的复杂性和多样性，对多糖结构测定、表征鉴定都提出了巨大挑战。目前，对多糖的研究明显不及蛋白质和核酸的研究。
近20年来，有许多关于多糖生物活性的研究报道，尤其是在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面。
华美牛肝菌，拉丁学名为Boletus speciosus Frost，隶属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，牛肝菌科，牛肝菌属；又称小美牛肝菌和粉盖牛肝菌，是一种美味的可食用的大型真菌。华美牛肝菌菌盖半球形，淡土黄色，有细绒毛，不粘，边缘常呈波浪状。菌肉淡黄色，菌管与菌柄离生，菌柄具网纹。孢子椭圆形，淡绿黄色。BSF常常丛生或散生于夏秋季的林中地上。
目前，对华美牛肝菌多糖BSF-X的精细结构与免疫活性和抗肿瘤研究及其应用尚未见任何报道。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种华美牛肝菌多糖BSF-X及其制备方法与应用。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种华美牛肝菌多糖BSF-X，主要由β-D–葡萄糖和α-D–半乳糖组成，它们的组成比约为2：1，平均分子量为141309Da，由(1→4)-β-D–葡萄糖连接的主链，6-O上连接一个→1,6) -α-D–半乳糖的侧链，半乳糖2-O上连接一个→4)-β-D–葡萄糖，华美牛肝菌多糖BSF-X的结构式为：
Figure GDA0002756566390000021
本发明公开了一种上述的华美牛肝菌多糖BSF-X的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、将粉碎后的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水混合，在水浴中蒸煮，蒸煮3次，收集上清液浓缩；
步骤2、在步骤1中制备得到的浓缩液中加入无水乙醇形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥得到华美牛肝菌多糖的粗提物；
步骤3、运用阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化和洗脱处理，收集洗脱液并经HPGPC法检测纯度后，制备得到华美牛肝菌多糖BSF-X。
进一步地，步骤1中的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水的体积比为1： 2-5。
进一步地，步骤1中的水浴的温度为100℃；煮沸时间为3-6小时。
进一步地，步骤2中的浓缩液与无水乙醇的体积比为1:3-1:5。
进一步地，步骤3中的洗脱条件为：用电子天平准确称量50.00g纤维素装柱，配制0.12mol/L NaCl溶液进行洗脱。
本发明还公开了一种华美牛肝菌多糖BSF-X在制备免疫调控药物中的应用。
本发明还公开了一种华美牛肝菌多糖BSF-X在制备抗肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：
1)在本次实验浓度范围内，华美牛肝菌多糖具有较好的免疫调节活性，能促进T、B和巨噬细胞的增殖；通过细胞周期试剂盒检测发现BSF-X主要是对其G2/M和S期有促进作用；能显著促进巨噬细胞Raw264.7的释放免疫因子IL-23和TNFα的能力；能提高巨噬细胞对NO的分泌能力和吞噬中性红的能力。
2)抗肿瘤活性结果表明，体外BSF-X对L929细胞有显著的抑制作用，当BSF-X浓度为20μg/mL时，其抑制率为38.15％；体内也能抑制S180肿瘤的生长，其抑制率高达61.35％。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1华美牛肝菌多糖BSF-X重均分子量；
图2华美牛肝菌多糖BSF-X的红外谱；
图3华美牛肝菌多糖BSF-X的1H NMR图谱；
图4华美牛肝菌多糖BSF-X的13C NMR图谱；
图5华美牛肝菌多糖BSF-X的结构式；
图6华美牛肝菌多糖BSF-X对T淋巴细胞的增殖作用，其中，A代表不同浓度的BSF-X和LPS对T淋巴细胞增殖的影响；图注：*：p＜0.05， **：p＜0.01，BSF-X组、LPS组均与Control相比；B代表不同浓度的BSF-X 和LPS对T淋巴细胞增殖的形态图。注：1为空白组，2-9为BSF-X药物组，浓度分别为0.3125μg/mL，0.625μg/mL，1.25μg/mL，2.5μg/mL，5μg/mL， 10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，10为LPS组；
图7华美牛肝菌多糖BSF-X对B淋巴细胞的增殖作用，其中，A代表不同浓度的BSF-X和LPS对B淋巴细胞增殖的影响；图注：*：p＜0.05， **：p＜0.01，BSF-X组、LPS组均与Control相比；B代表不同浓度的BSF-X 和LPS对B淋巴细胞增殖的形态图；注：1为空白组，2-9为BSF-X药物组，浓度分别为0.3125μg/mL，0.625μg/mL，1.25μg/mL，2.5μg/mL，5μg/mL， 10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，10为LPS组；
图8华美牛肝菌多糖BSF-X对巨噬细胞Raw264.7的增殖作用，其中， A代表不同浓度的BSF-X和LPS对巨噬细胞增殖的影响。图注：*：p＜0.05， **：p＜0.01，BSF-X组、LPS组均与Control相比；B代表不同浓度的BSF-X 和LPS对巨噬细胞增殖的形态图；注：1为空白组，2-8为BSF-X药物组，浓度分别为0.3125μg/mL，0.625μg/mL，1.25μg/mL，2.5μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL，9为LPS组；
图9华美牛肝菌多糖BSF-X对T淋巴细胞细胞周期的影响，其中，A 代表BSF-X和LPS对T淋巴细胞周期的影响；注：*：p＜0.05，**：p＜0.01， BSF-X组、LPS组均与Control组比，注：1为空白组，2为LPS组，3-6为 BSF-X药物组，浓度分别为2.5μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL；B 代表BSF-X和LPS对T淋巴细胞周期影响的统计分析；
图10华美牛肝菌多糖BSF-X对B淋巴细胞细胞周期的影响，其中A 代表BSF-X和LPS对B淋巴细胞周期的影响。注：*：p＜0.05，**：p＜0.01， BSF-X组、LPS组均与Control组比，注：1为空白组，2为LPS组，3-4为 BSF-X药物组，浓度分别为2.5μg/mL，5μg/mL。B代表BSF-X和LPS对B 淋巴细胞周期影响的统计分析；
图11华美牛肝菌多糖BSF-X对Raw264.7细胞细胞周期的影响，其中， A代表BSF-X和LPS对Raw264.7细胞周期的影响；注：*：p＜0.05，**： p＜0.01，BSF-X组、LPS组均与Control组比，注：1为空白组，2为LPS 组，3-5为BSF-X药物组，浓度分别为2.5μg/mL，5μg/mL，10μg/mL；B 代表BSF-X和LPS对Raw264.7细胞周期影响的统计分析；
图12华美牛肝菌多糖BSF-X对巨噬细胞Raw264.7吞噬中性红的影响；
图13华美牛肝菌多糖BSF-X对巨噬细胞Raw264.7释放NO能力的影响；
图14华美牛肝菌多糖BSF-X对巨噬细胞Raw264.7释放IL-23和TNF α能力的影响，其中，a，b分别为IL-23和TNFα的柱状图；
图15华美牛肝菌多糖BSF-X体内对S180肿瘤的抑制作用。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
实施例1华美牛肝菌多糖BSF-X的制备方法
将粉碎后的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水以1：3.7的体积比在100℃的水浴中煮沸4.5小时，煮沸3次，收集上清液浓缩至220ml。加入2.5倍体积的无水乙醇形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥得到华美牛肝菌多糖的粗提物，其粗多糖的得率为15.12％。运用阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化，用电子天平准确称量50.00g纤维素装柱，配制0.12mol/L NaCl 溶液进行洗脱，收集洗脱液并经HPGPC法检测纯度后，得到一种新型水溶性多糖——华美牛肝菌多糖BSF-X。
实施例2
将粉碎后的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水以1：2的体积比在100℃的水浴中煮沸3小时，煮沸3次，收集上清液浓缩；在制备得到的浓缩液中加入5倍体积的无水乙醇形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥得到华美牛肝菌多糖的粗提物；运用阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化，用电子天平准确称量50.00g纤维素装柱，配制0.12mol/L NaCl溶液进行洗脱，收集洗脱液并经HPGPC法检测纯度后，制备得到华美牛肝菌多糖BSF-X。
实施例3
将粉碎后的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水以1：5的体积比在100℃的水浴中煮沸6小时，煮沸3次，收集上清液浓缩；在制备得到的浓缩液中加入3倍体积的无水乙醇形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥得到华美牛肝菌多糖的粗提物；运用阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化，用电子天平准确称量50.00g纤维素装柱，配制0.12mol/L NaCl溶液进行洗脱，收集洗脱液并经HPGPC法检测纯度后，制备得到华美牛肝菌多糖BSF-X。
实施例4华美牛肝菌多糖BSF-X的结构鉴定
运用化学法(酸水解法、甲基化法分析)和光谱学技术(IR、HPLC、GC-MS、NMR)等技术手段，对华美牛肝菌多糖进行结构解析，具体操作如下：
1、分子量的测定
称取5mg纯多糖样品BSF-X加入1mL ddH2O溶解，超声处理5min，进行HPGPC分析。
BSF-X的重均分子量约为141309D(见图1)。
2、华美牛肝菌多糖BSF-X的红外谱分析
称取BSF-X样品5mg左右，与干燥的KBr粉末混合后压片，红外光谱仪中在4000cm-1-400cm-1范围内扫描。
如图2所示，华美牛肝菌多糖BSF-X在红外谱中显示3425.82cm-1为糖类分子内或分子间氢键O-H的伸缩振动峰，存在着分子内和分子间的氢键。2935.53cm-1为C-H的伸缩振动峰。1676.70cm-1处的强吸收峰为C＝O键的特征吸收峰，1401.40cm-1和1204.14cm-1处为C-H和C-O的振动吸收峰。在 1200-1000cm-1范围内，1141.20cm-1和1075.86cm-1处分别是吡喃糖的C-O-C 与C-OH的伸缩振动。在糖类的环振动区930～700cm-1处，803cm-1的吸收峰是C1-H的变角振动，这是β-吡喃环C1-H的变角振动，说明BSF-X有吡喃糖的β-糖苷键结构。
3、华美牛肝菌多糖BSF-X的核磁共振分析
取BSF-X样品10mg(1HNMR谱)或50mg(13CNMR谱)，用0.5mLD2O 溶解后加入核磁管中，核磁共振仪上常温测定。
在氢谱中(见图3)，异头氢信号δ4.998和δ4.915，提示有两种单糖，δ4.7为重水的氢信号。在碳谱中13C NMR 95–105ppm区域的共振信号峰中，有5个异头碳信号，分别位于δ102.99，δ101.5，δ101.47，δ97.92，δ97.88，表明存在于BSF-X中的单体存在α和β异头构型。(见图4，表1)。
表1华美牛肝菌多糖BSF-X的13C NMR图中的化学位移
Figure GDA0002756566390000071
4、华美牛肝菌多糖BSF-X的硅烷化衍生与甲基化分析
将BSF-X样品甲基化后，经TFA完全酸水解后，对干燥后的水解产物用无水吡啶完全溶解后，加六甲基二硅氮烷和三甲基氯硅烷进行硅烷化衍生，50℃温育20min，10000rpm离心20min后，取上层溶液用于甲基化分析。
5、华美牛肝菌多糖BSF-X的GC-MS谱分析
GC条件：色谱柱为Rtx-5sil MS；
升温程序：80℃(维持3min)，以10℃/min升至250℃，维持30min。
从华美牛肝菌中获得一个新型结构的杂多糖，华美牛肝菌多糖BSF-X 是由β-D-葡萄糖和α-D-半乳糖两个单糖组成，以2:1的比例组成，平均分子量约为141309D，具有(1→4)-β-D–葡萄糖的主链，6-O上连接一个→1,6) -α-D–半乳糖的侧链，侧链的半乳糖2-O上连接一个→4)-β-D–葡萄糖(表 2)，综上可初步推断华美牛肝菌多糖BSF-X的结构(见图5)。
表2华美牛肝菌多糖BSF-X的甲基化GC-MS数据
Figure GDA0002756566390000081
实施例5华美牛肝菌多糖BSF-X的免疫调节活性研究
1.1 BSF-X对巨噬细胞、B细胞和T细胞的增殖作用
用CCK-8法测定BSF-X对巨噬细胞、B细胞和T细胞的增殖影响。2× 105/mL浓度的细胞悬液接种在96孔培养板，每孔100μL，置于37℃、5％ CO2加湿的培养箱中培养24小时。空白对照和实验组各依次加入100μL细胞培养液、LPS(阳性对照)以及BSF-X(0.3125-40μg/mL，8个不同浓度)，继续培养24小时。然后每孔加入10μL CCK-8溶液继续培养3小时，测定450nm下吸光值，记录结果。
1.2 BSF-X对B细胞、T细胞和巨噬细胞的细胞周期影响
用流式细胞仪技术检测BSF-X对三种细胞的细胞周期影响。将经细胞培养液(空白对照组)、LPS(5μg/mL，阳性对照组)、BSF-X(2.5μg/mL、 5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)刺激24h后的细胞收集起来，PBS洗三次，70％乙醇固定，再用碘化丙啶染色液染色后，用Accuri C6流式细胞仪进行分析。
1.3 BSF-X对RAW264.7细胞的吞噬中性红能力的影响
用中性红法检测BSF-X对巨噬细胞吞噬能力的影响。细胞接种，每孔加入100μL 2×105/mL细胞，CO2培养箱中培养24小时。BSF-X处理24 小时后，弃培养液，每孔100μL0.075％中性红溶液，吞噬1-2h，弃中性红。 PBS洗3次，100μL/孔细胞裂解液(乙醇:乙酸＝1:1，v)裂解2h，用酶标仪检测波长540nm处的OD值。
1.4 BSF-X对RAW264.7细胞的释放NO能力的影响
RAW264.7细胞稀释成浓度为2.0×105/mL，每孔100μL接种在96孔板中，37℃培养24h。每孔100μL的BSF-X，LPS和细胞培养液，5％CO2， 37℃继续培养1天。收集上清液，按照NO试剂盒说明书操作，酶标仪检测波长540nm处的OD值。
1.5 BSF-X对RAW264.7细胞的释放IL-23和TNFα能力的影响
收集药物组(LPS、BSF-X)和空白对照组的上清，按照ELISA免疫试剂盒说明书进行操作，酶标仪测量450nm处的吸光度值。
2.华美牛肝菌多糖BSF-X的抗肿瘤活性研究
2.1华美牛肝菌多糖BSF-X体外对L929细胞生长的抑制作用
同三种免疫细胞的增殖实验操作类似，其抑制率(％)＝A1/A0×100％
A1：OD(空白对照组)-OD(实验组)
A0：OD(空白对照组)-OD(空白组)
注：实验组即为阳性对照组和三个BSF-X组
2.2华美牛肝菌多糖BSF-X体内对S180肿瘤的抑制作用
对KM小鼠(雌性)的前肢右腋皮下接种S180肿瘤细胞。实验共设置 5组(每组6只)，接种7天后，以20mg/kg和40mg/kg BSF-X的剂量灌胃小鼠。设置空白组(不接种肿瘤)、阳性(6000mg/kg甘露聚糖肽) 和阴性对照(生理盐水)用于比较。1周后处死动物，记录每只小鼠的体重，肿瘤，脾脏和肝脏，并计算肿瘤抑制率：抑制率(％)＝[1-B/A]×100，其中A 和B分别是阴性对照和处理组的平均肿瘤重量。
3.统计与分析
所有数据均用mean±SD表示，用t-test检验差异的显著性，与对照组对比显著用*表示，P<0.05，极显著用**表示，P<0.01。
4结果
4.1 BSF-X对T细胞增殖的影响
T细胞增殖效果如图6A所示，在0.3125-10μg/mL浓度下，其OD值与药物的浓度剂量呈正相关关系；但超过最适浓度后，在10-40μg/mL浓度下，就与浓度剂量呈负相关关系，图6B显示，在0.3125-40μg/mL浓度范围内， BSF-X刺激下的T淋巴细胞数量增加达到了极显著。
4.2 BSF-X对B细胞增殖的影响
B细胞效应如图7A所示，与空白组相比，药物组与LPS阳性对照能极显著地促进B细胞增殖，并呈一定的剂量关系。当BSF-X浓度在20μg/mL 时，其增值率达到最大，为60.01％。图7B显示，与空白组相比，药物组的 B细胞成团明显增大，数量显著增加，当浓度在10μg/mL时，细胞成团最大，数量最多。
4.3 BSF-X对Raw264.7细胞增殖的影响
巨噬细胞增殖效果如图8A所示，当加药(BSF-X和LPS)刺激时，巨噬细胞的增加明显高于未加药的空白组。而且巨噬细胞数量的增加与BSF-X 的浓度呈剂量依赖关系。但仍然不及LPS对巨噬细胞的增殖影响强，20μg/mL 的BSF-X组中，巨噬细胞的增殖明显低于5μg/mL的LPS组。由图8B可看出，在药物刺激下，Raw264.7数量增加十分明显。
4.4 BSF-X对T淋巴细胞周期的影响
如图9A所示，在药物(LPS和BSF-X)刺激下，处于S期的巨噬细胞数量均有明显的提高，而G2/M期也有极显著的变化。图9B显示，与空白组相比，当BSF-X浓度为2.5～20μg/mL时，细胞处于G0/G1期的细胞数量显著减少，分别从46.9％下降到44.8％，最大可下降到44.2％。而处于S期的细胞数量显著增加，从16.1％增加到18.1％，处于S期的细胞比空白组的增加了28.09％；说明BSF-X能促进T淋巴细胞进入细胞周期循环，使细胞快速分裂繁殖。但当LPS浓度为5μg/mL时，巨噬细胞处于G0/G1期、S 期以及G2/M期的细胞数量均有极显著的变化，这与BSF-X和LPS对巨噬细胞的增殖作用具有一定的相关关系。
4.5 BSF-X对B淋巴细胞周期的影响
结果表明(如图10)，在LPS和BSF-X两种药物的刺激下，G0/G1期的B淋巴细胞数量有显著的降低；而S期和G2/M期的细胞量均有所增加，且效果显著；但当BSF-X在2.5μg/mL时，G2/M期无明显变化。由此可见， BSF-X可调节B淋巴细胞的周期使细胞量有显著的增殖作用。
4.6 BSF-X对Raw264.7细胞周期的影响
结果如图11所示，与空白组相比，当BSF-X浓度为2.5-10μg/mL时，细胞处于G2/M期的细胞数量显著减少，分别从25.8％下降到22.1％，最大可下降到18.7％。而处于S期的细胞数量显著增加，从14.4％增加到20.2％。说明BSF-X能促进巨噬细胞S期的数量，加速遗传物质DNA和相关蛋白质的合成，从而使细胞快速分裂繁殖。
4.7 BSF-X对Raw264.7细胞吞噬中性红能力的影响结果如图12所示，在LPS(5μg/mL)或者BSF-X(0.3125、0.625、1.25、 2.5、5、10、20μg/mL)刺激下，RAW264.7细胞吞噬中性红的能力明显提高，当BSF-X在20μg/mL时，药物组的OD值最大，表明此时巨噬细胞的吞噬能力很高；而阳性对照组是在LPS 5μg/mL刺激下，其OD值为0.39，相较于空白组，有一定程度的提高。
4.8 BSF-X对巨噬细胞释放NO能力的影响实验结果如图13所示，当BSF-X溶液的浓度在0.3125～20μg/mL范围之间时，NO释放量随BSF-X浓度的增加而极显著增加(P<0.01)，有一定的剂量依赖关系。且在BSF-X的浓度为20μg/mL时，NO释放量达到最高。
4.9 BSF-X对RAW264.7细胞的释放IL-23和TNFα能力的影响
从图14-A (A ，B 分别为IL-23和TNFα的柱状图)中可看出，BSF-X药物组与LPS阳性对照组均能促进巨噬细胞分泌IL-23，并呈一定的剂量关系。当BSF-X的药物浓度为2.5-5μg/mL时，虽然巨噬细胞分泌IL-23的量有所增加，但与空白组相比，并没有显著性增加；但在10μg/mL时，却有极显著的增加效果。从图14-B 可看出，巨噬细胞的TNFα分泌量与BSF-X药物浓度呈一定的剂量依赖关系，在2.5-20μg/mL浓度范围内，在20μg/mL时分泌量达到最大，且LPS为5μg/mL时，其分泌量明显高于BSF-X。
4.10 BSF-X对L929细胞的存活率影响
实验结果如表3，结果表明：LPS和BSF-X均能明显的抑制L929细胞的增殖。阳性对照组LPS浓度为5μg/mL时，抑癌率可达58.97％；药物组随着BSF-X浓度的增加，抑癌率也呈上升的趋势，抑癌率与BSF-X呈一定的剂量依赖关系。当BSF-X浓度为20μg/mL时，抑癌率能达到38.15％。
表3 BSF-X体外对L929细胞的增殖抑制影响
Figure GDA0002756566390000121
4.11 BSF-X对S180肿瘤的抑制作用
实验结果总结在表4中，在一定浓度范围内，抑瘤率与BSF-X呈剂量依赖关系，随着BSF-X的给药浓度增加，抑瘤率提高，当BSF-X的浓度为 40mg/kg时，抑瘤率高达61.35％，而作为阳性对照组的甘露聚糖肽才能有 50.72％的抑瘤率(图15)。
表4.BSF-X对S180肿瘤的抗肿瘤活性(平均±SD，N＝6)
Figure GDA0002756566390000131
该华美牛肝菌多糖BSF-X的结构，免疫调控活性及抗肿瘤活性方面申请予以保护。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.一种华美牛肝菌多糖BSF-X，其特征在于，主要由β-D–葡萄糖和α-D–半乳糖组成，它们的组成比为2：1，平均分子量为141309Da，由(1→4)-β-D–葡萄糖连接的主链，6-O上连接一个→1,6)-α-D–半乳糖的侧链，半乳糖2-O上连接一个→4)-β-D–葡萄糖，华美牛肝菌多糖BSF-X的结构式为：
Figure FDA0002756566380000011
2.一种权利要求1所述的华美牛肝菌多糖BSF-X的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将粉碎后的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水混合，在水浴中煮沸，煮沸3次，收集上清液浓缩；
步骤2、在步骤1中制备得到的浓缩液中加入无水乙醇形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥得到华美牛肝菌多糖的粗提物；
步骤3、运用阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化和洗脱处理，收集洗脱液并经HPGPC法检测纯度后，制备得到华美牛肝菌多糖BSF-X。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的华美牛肝菌子实体粉末和蒸馏水的体积比为1：2-5。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的水浴的温度为100℃；煮沸时间为3-6小时。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的浓缩液与无水乙醇的体积比为1:3-1:5。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3中的洗脱条件为：用电子天平准确称量50.00g纤维素装柱，配制0.12mol/L NaCl溶液进行洗脱。
7.权利要求1所述的华美牛肝菌多糖BSF-X在制备免疫调控药物中的应用。
8.权利要求1所述的华美牛肝菌多糖BSF-X在制备抗肿瘤药物中的应用。
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