CN109142497A - 一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法 - Google Patents

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何丽烂
任吉君
王惠珍
区炳庆
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Abstract

本发明提供了一种南瓜产地的检测方法，该方法先构建不同已知产地南瓜的酶电泳总图谱，再以相同的方法建立待测产地南瓜的酶电泳图谱，然后将酶电泳图谱与酶电泳总图谱进行聚类分析，计算图谱相异系数C，得到待测南瓜与已知南瓜的亲缘关系远近，图谱的迁移率Rf>0.2，相异系数C＝2w/(a+b)，w表示待测产地南瓜与已知产地南瓜中的一种两相比较类型不同的酶带数，(a+b)表示两相比较各自类型的酶带总数。本发明提供的鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，操作方便，图谱直观，能客观准确地反映待测南瓜与已知南瓜的亲缘关系远近，不受南瓜形态、大小和生长时间的限制，可以使用南瓜的不同部位来完成鉴别。

Description

一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法
技术领域
本发明属于南瓜育种技术领域，具体涉及一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法。
背景技术
南瓜(学名：Cucurbita moschata(Duch.ex Lam.)Duch.ex Poiret)葫芦科南瓜属的一个种，一年生蔓生草本植物，茎常节部生根，叶柄粗壮，叶片宽卵形或卵圆形，质稍柔软，叶脉隆起，卷须稍粗壮，雌雄同株，果梗粗壮，有棱和槽，因品种而异，外面常有数条纵沟，种子多数，长卵形或长圆形，具有良好的食疗作用。南瓜原产墨西哥到中美洲一带，世界各地普遍栽培，亚洲栽培面积最多，其次为欧洲和南美洲，中国普遍栽培。
南瓜栽培品种资源丰富，仅中国品种，就可分为蜜本南瓜、黄狼南瓜、大磨盘南瓜、小磨盘南瓜、牛腿南瓜、蛇南瓜、甘利王、红栗王和砍瓜。现有技术中，大多采用植物形态学特征判断南瓜亲缘关系的远近，通过植物形态学判断南瓜亲缘关系的远近，准确率低。
因此，为准确鉴别南瓜亲缘关系远近，尚需一种新的鉴别方法。
发明内容
为解决现有技术中，通过植物形态学特征难以准确鉴别南瓜亲缘关系远近的问题，本发明提供了一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，包括以下步骤：
(1)构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱；
(2)以与步骤(1)相同的方法建立待测南瓜的酶电泳图谱；
(3)将步骤(2)所述的酶电泳图谱与步骤(1)所述的酶电泳总图谱进行聚类分析，计算图谱相异系数C；
所述酶为多酚氧化酶；所述图谱的迁移率Rf为0.3～0.8。
优选地，步骤(1)所述构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜组织1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
进一步优选地，步骤(A)所述南瓜组织包括南瓜根、茎、叶、果实和种子中的一种。
进一步优选地，步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.5～7.5。
进一步优选地，步骤(A)所述甘油的添加量为15～25(wt)％。
进一步优选地，步骤(A)所述低温保存的温度为-15～-25℃。
进一步优选地，步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统。
进一步优选地，步骤(B)所述电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA。
进一步优选地，步骤(B)所述电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
优选地，所述相异系数C＝2w/(a+b)，w表示步骤(2)所述的待测南瓜与步骤(1)中的已知产地南瓜中的一种两相比较类型不同的酶带数，a+b表示两相比较各自类型的酶带总数。
本发明的有益效果
1、本发明提供的鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，操作方便，图谱直观，能客观准确地反映待测南瓜与已知南瓜的亲缘关系远近；
2、本发明的鉴别方法，不受南瓜形态、大小和生长时间的限制，可以使用南瓜的不同部位来完成鉴别。
说明书附图
图1是已知产地南瓜A～F的酶电泳总图谱；
图2是两种待测南瓜G和H的酶电泳图谱。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，并结合附图说明对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
实施例1
构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜根1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
实施例2
构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜茎1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
实施例3
构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜叶1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
实施例4
构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜叶1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
实施例5
构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜果实1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
实施例6
构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取十个产地南瓜种子1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
实施例7
一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，包括以下步骤：
(1)采用实施例6的方法，构建6种已知产地南瓜A～F的酶电泳总图谱，如图1；
(2)以与步骤(1)相同的方法建立两种待测南瓜G和H的酶电泳图谱，如图2；
(3)将步骤(2)所述的酶电泳图谱与步骤(1)所述的酶电泳总图谱进行聚类分析，计算图谱相异系数C，如表1所示，得到待测南瓜J的产地；
所述酶为过氧化物酶，所述图谱的迁移率Rf>0.2。
所述相异系数C＝2w/(a+b)，w表示步骤(2)所述的待测产地南瓜与步骤(1)中的已知产地南瓜中的一种两相比较类型不同的酶带数，a+b表示两相比较各自类型的酶带总数。
表1待测南瓜G和H与已知产地A～F的图谱相异系数
品种 A B C D E F
G 1 0.385 0.385 0.200 0 0.250
H 0.220 0.177 0.177 0.007 1 0
从表1可以看出，待测南瓜G与已知产地南瓜A的图谱相异系数为1，表示待测南瓜G与已知产地南瓜A的亲缘关系最远，待测南瓜G与已知产地南瓜E的图谱相异系数为0，表示待测南瓜G与已知产地南瓜E的亲缘关系最近，为同类南瓜。待测南瓜H与已知产地南瓜E的图谱相异系数为1，表示待测南瓜H与已知产地南瓜E的亲缘关系最远，待测南瓜H与已知产地南瓜F的图谱相异系数为0，表示待测南瓜H与已知产地南瓜F的亲缘关系最近，为同类南瓜。

Claims (10)

1.一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱；
(2)以与步骤(1)相同的方法建立待测南瓜的酶电泳图谱；
(3)将步骤(2)所述的酶电泳图谱与步骤(1)所述的酶电泳总图谱进行聚类分析，计算图谱相异系数C；
所述酶为多酚氧化酶；所述图谱的迁移率Rf为0.3～0.8。
2.根据权利要求1所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(1)所述构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：
(A)取南瓜组织1g，加入浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液3mL，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；
(B)采用凝胶电泳系统，对步骤(A)所述酶电泳液进行电泳；
(C)根据步骤(B)的结果绘制模式图并计算条带数。
3.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(A)所述南瓜组织包括南瓜根、茎、叶、果实和种子中的一种。
4.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(A)所述磷酸缓冲液的pH为6.5～7.5。
5.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(A)所述甘油的添加量为15～25(wt)％。
6.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(A)所述低温保存的温度为-15～-25℃。
7.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(B)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统。
8.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(B)所述电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1mA，分离胶电流为2mA。
9.根据权利要求2所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，步骤(B)所述电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。
10.根据权利要求1所述鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，其特征在于，所述相异系数C＝2w/(a+b)，w表示步骤(2)所述的待测南瓜与步骤(1)中的已知产地南瓜中的一种两相比较类型不同的酶带数，a+b表示两相比较各自类型的酶带总数。
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