CN109134533B - 一种含磷化合物及其制备和应用 - Google Patents

一种含磷化合物及其制备和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109134533B
CN109134533B CN201810291023.0A CN201810291023A CN109134533B CN 109134533 B CN109134533 B CN 109134533B CN 201810291023 A CN201810291023 A CN 201810291023A CN 109134533 B CN109134533 B CN 109134533B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
alkyl
phosphorus
phenyl
substituted
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810291023.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109134533A (zh
Inventor
沈旺
丁悦
姜浩
陈福利
汪江峰
吴兴龙
李存飞
杨立国
胡彪
姜启阳
安治星
党奎峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Weimu Biotechnology (Zhejiang) Co.,Ltd.
Original Assignee
Vivavision Biopharma Shanghai Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vivavision Biopharma Shanghai Co ltd filed Critical Vivavision Biopharma Shanghai Co ltd
Priority to US16/606,774 priority Critical patent/US11325929B2/en
Priority to EP18823397.7A priority patent/EP3647315A4/en
Priority to CA3092885A priority patent/CA3092885C/en
Priority to JP2019539245A priority patent/JP6949967B2/ja
Priority to AU2018291666A priority patent/AU2018291666B2/en
Priority to PCT/CN2018/087629 priority patent/WO2019001171A1/zh
Priority to KR1020197028357A priority patent/KR102208639B1/ko
Publication of CN109134533A publication Critical patent/CN109134533A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109134533B publication Critical patent/CN109134533B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/306—Arylalkanephosphinic acids, e.g. Ar-(CH2)n-P(=X)(R)(XH), (X = O,S, Se; n>=1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/304—Aromatic acids (P-C aromatic linkage)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/662—Phosphorus acids or esters thereof having P—C bonds, e.g. foscarnet, trichlorfon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/04—Artificial tears; Irrigation solutions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/32—Esters thereof
    • C07F9/3205—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/3229—Esters of aromatic acids (P-C aromatic linkage)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • C07F9/32—Esters thereof
    • C07F9/3205—Esters thereof the acid moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/3241—Esters of arylalkanephosphinic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/50—Organo-phosphines
    • C07F9/5022—Aromatic phosphines (P-C aromatic linkage)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/50—Organo-phosphines
    • C07F9/53—Organo-phosphine oxides; Organo-phosphine thioxides
    • C07F9/5325—Aromatic phosphine oxides or thioxides (P-C aromatic linkage)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/50—Organo-phosphines
    • C07F9/53—Organo-phosphine oxides; Organo-phosphine thioxides
    • C07F9/5329—Polyphosphine oxides or thioxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/50—Organo-phosphines
    • C07F9/53—Organo-phosphine oxides; Organo-phosphine thioxides
    • C07F9/5333—Arylalkane phosphine oxides or thioxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/572—Five-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/572—Five-membered rings
    • C07F9/5728—Five-membered rings condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/576—Six-membered rings
    • C07F9/58—Pyridine rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/576—Six-membered rings
    • C07F9/59—Hydrogenated pyridine rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/645—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6503—Five-membered rings
    • C07F9/65031—Five-membered rings having the nitrogen atoms in the positions 1 and 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
    • C07F9/65515—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a five-membered ring
    • C07F9/65517—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a five-membered ring condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having sulfur atoms, with or without selenium or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
    • C07F9/655345—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having sulfur atoms, with or without selenium or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the sulfur atom being part of a five-membered ring

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供了一种含磷化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物：

Description

一种含磷化合物及其制备和应用
技术领域
本发明涉及医药化学领域，具体地，涉及一种含磷化合物及其制备方法和在治疗干眼症上的应用。
背景技术
眼泪给眼睛持久的润湿和润滑，是维持视力和眼睛舒适度的关键。眼泪由水、油脂、粘液、抗体和一些特定蛋白质(用于抵抗感染)的组成。这些组分由位于眼周围的特殊的腺体分泌。当该眼泪体系中存在不平衡时，人会感觉眼干。
干眼综合征为常见的眼表面炎性疾病。患有干眼病的人可能感觉到眼睛疼痛、光敏性、发痒、发红和视力模糊。干眼综合征有多种诱发因素，包括年龄、性别、环境、药物、手术，和全身疾病如自身免疫系统疾病、糖尿病、甲状腺疾病、淋巴瘤等。干眼病如得不到恰当的诊断和治疗可能会导致进一步的并发症如感染、眼表面角质化、角膜溃疡和结膜鳞状化等。
故而，干眼症是困扰5-10％人口的很大的疾病，特别是长期工作于计算机前，及中年以后的人群。现今眼科医生门诊超过30％是干眼症病人。中国尽管干眼症患者众多，但迄今没有被批准用于治疗干眼症的药物。病人只能已人造眼泪得到暂时的缓解。因此，急需治疗干眼症的药物。
干眼症的发病率和年龄与呈正比，50岁以上人群约20％有不同程度的干眼症；性别也影响干眼症，女性，特别是高龄女性患干眼症远高于男性，这可能和性荷尔蒙的分泌有关；白领工作人员长时间在空调环境下，另外长时间使用屏幕也造成该人群干眼症发病率高。干眼症是一连续的病理过程，病情由轻到重连续发展，且轻、中、重度之间无明显的分界线。尽管干眼症病因复杂，研究发现各种原因引发的干眼症的病理类似：免疫细胞侵润眼睛表面组织引发慢性炎症，造成眼表伤害。目前，欧美市场有两个药物被批准：(1)环孢素A悬浮液。该药是很强大免疫系统抑制药，因此有可能造成对免疫系统的伤害。同时，因为其是悬浮液，存在长期存放稳定性，以及使用时对病人眼睛刺激等问题；(2)Lifitigrast,该药2016年12月或得美国FDA批准，是免疫细胞迁徙抑制剂，通过阻止免疫细胞进入炎症部位达到治疗效果；但该药亲脂性很高，而且在临床上对>50％的病人没有效果。
发明内容
本发明为新型的免疫细胞迁徙抑制剂。有很好的亲水性，可以开发成眼药水。对免疫细胞迁徙有很强的抑制能力，可以缓解大多数干眼症病人的症状。
本发明提供的一种含磷化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000021
R1选自烷基、芳基、苄基及其衍生物；
R1中烷基选自如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、环戊基、己基、环己基等碳原子数为1-12的支链、支链或环烷基；
芳基选自如：苯基、萘基、喹啉基，或苯环上任一或任几个碳为碳原子数为1-3的烷基/苯基/卤素/硝基/氨基/磺酰基/氨基/碳原子数为1-3的烷氧基取代的苯基、萘基或喹啉基；
苄基选自如：苯环上任一或任几个碳为碳原子数为1-3的烷基/苯基/卤素/硝基/氨基/磺酰基/碳原子数为1-3的烷基取代的苄基；
R2选自羟基、烷基、氢、烷氧基、胺基、烷胺基；
R2中烷基选自如：甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、戊基、环戊基、己基、环己基等碳原子数为1-12的支链、支链或环烷基；
烷氧基选自如：甲氧基、乙氧基等碳原子数为1-12的支链、支链或环烷氧基；
n选自0或1；
X选自碳、氧、氮；
在X中，当其为碳时，此处可以为(-CH2-)，或(-C(R1R2)-,其中，R1、R2可以为相同或不相同的任意取代基团，如：氢、甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团，羟基，烷氧基，卤素等；)
在X中，当其为氮时，此处可以为(-NH-)，或(-N(RN)-，其中，RN可以为任意取代基团，如：甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团等；)
Z选自碳、氧、硫、氮；
在Z中，当其为碳时，此处可以为羰基(-(C＝O)-)、烷基(-CnH2n-，其中，n为10以下的自然数)、或(-C(R1R2)-、支链烷基，其中，R1、R2可以为相同或不相同的任意取代基团，如：氢、甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团，羟基，烷氧基，卤素等；)
在Z中，当其为氮时，此处可以为(-NH-)，或(-N(RN)-，其中，RN可以为任意取代基团，如：甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团等；)
R3为苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、芳基；
Y选自碳、氧、氮；
在Y中，当其为碳时，此处可以为(-CH2-)，或(-C(R1R2)-,其中，R1、R2可以为相同或不相同的任意取代基团，如：氢、甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团，卤素等；)
在Y中，当其为氮时，此处可以为(-NH-)，或(-N(RN)-，其中，RN可以为任意取代基团，如：甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团等)；
R4选自烷基、烷氧基、芳基、苄基及其衍生物；
R5选自氢、烷基、芳基、苄基及其衍生物；
G1和G2所代表的取代基团呈间位、对位或邻位的设置于苯环上。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、上述芳基选自苯基及其衍生物、萘基及其衍生物、N杂或O杂环苯基及其衍生物、N杂或O杂环萘基及其衍生物；
其中，上述衍生物指在芳香环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、芳基、烷基磺酰基、苯基磺酰基。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、上X选自氨(-NH-)、胺(-N(R3)-)；
上述Y选自(-NH-)、胺(-N(RN)-)、铵(-N+(R4R5)-,其中，RN可以为任意取代基团，如：甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团等)，R4、R5可以为相同或不相同的任意取代基团，如：甲基、乙基等烷基，苯基、苄基等芳香基团等，与N+配位的阴离子可选自卤素)。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、
上述R4选自如下结构所示的基团：
Figure BDA0001617513690000051
n选自0-5的整数；
上述A选自硫、碳、氮、氧；
上述R42选自芳基、烷基、烷基氨基、烷基磺酰胺基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基；
其中，上述芳基选自6-12元的芳香基及其衍生物、5-12元的芳香环上，任一或任几个碳原子为氧、氮、硫替代的杂芳基；
其中，上述衍生物指在芳香环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、磺酰基、烷基磺酰基、苯基磺酰基。
上述杂芳基上还可以具有-N-R422的结构；
上述R422为磺酰基、烷基磺酰基、烷基、羟基；
上述环烷基为3-12元的环烷基；
上述取代的环烷基为环上任一或任几取代的磺酰基、烷基磺酰基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、硝基；
上述杂环烷基为3-12元的杂环烷基上，任一或任几个碳原子为氧、氮、硫替代；
上述杂环烷基上的碳原子还可以为C＝O基和/或SO和/或SO2基替代；
上述取代的杂环烷基为环上任一或任几磺酰基、烷基磺酰基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、硝基、羰基取代的氮杂、氧杂或硫杂的四元、五元、六元或七元环的环烷基；
上述取代的杂环烷基上还可以具有-N-R422的结构；
上述R422为磺酰基、烷基磺酰基、烷基、羟基；
上述R42还可以选自如下结构的基团：
Figure BDA0001617513690000061
上述R43、R44为相同或不相同的烷基、羟基、羟基取代的碳原子数不大于5的烷基；
G3为3-12元的环；
上述G3的环上的碳原子还可以部分的为氧、硫、氮、C＝O或SO2替代；
上述R45为G3环上一个或几个取代的烷基、羟基、烷氧基、氨基。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000062
其中，上述C1和C2均为碳原子，其之间的碳键为单键、双键或三键。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000071
R11选自苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基；
R2选自羟基、烷基、烷氧基、卤素；
R3为苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、芳基；
Y1选自氢、烷基、芳基；
R41选自苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基；
R5选自氢、烷基、芳基、苄基及其衍生物。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000081
其中，X1、X2、X3、X4选自氢、烷基、卤素、羟基。
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物，还具有这样的特点：即、上述含磷化合物选自如下化合物：
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(间羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲氧基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(甲氧基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(乙氧基(间羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲氧基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(甲基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(3-甲氧基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸；
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(3-甲氧基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸。
另外，本发明还提供了上述含磷化合物的制备方法，其特征在于：
由化合物A和化合物C，依次与化合物B上的活性点位进行反应后获得；
其中，上述化合物A为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000091
上述化合物C为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000092
上述化合物B为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000101
其中，L1与L1‘以及L2与L2‘分别为一对可相互发生反应的活性基团，在反应的过程中，通过L1与L1‘反应，L2与L2‘反应获得目标产物；
R1选自烷基、芳基、苄基及其衍生物；
R2选自羟基、烷基、烷氧基、卤素；
n选自1-3的自然数；
R3为苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、芳基；
R4选自烷基、烷氧基、芳基、苄基及其衍生物；
R5选自氢、烷基、芳基、苄基及其衍生物。
进一步地，本发明提供的含磷化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述L1与L1‘以及L2与L2‘之间可以发生，取代反应、加成反应、消除反应或置换反应，从而形成L1与L1‘以及L2与L2‘之间的连接键。
进一步地，本发明提供的含磷化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述L1选自卤素、氨基、氰基、硫基、羟基、烷氧基；
上述L1‘选自卤素、炔基、羧基、氨基、氰基、酯基、烷氧基、磺酰氨基基、烷氧基磺酰基；
上述L2选自卤素、羧基、氨基、氰基、酯基、烷氧基、磺酰氨基基、烷氧基磺酰基；
上述L2‘选自卤素、氨基、硫基、羟基、烷氧基。
进一步地，本发明提供的含磷化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、上述化合物A与化合物C的摩尔比为1:0.1-10；
上述化合物C与化合物B的摩尔比为1:0.1-10。
进一步地，本发明提供的含磷化合物的制备方法，还具有这样的特点：即、具体工艺步骤如下所示：
步骤一、于磷酸二酯的衍生物中加入卤化试剂，于50-100℃的温度下反应1-5小时后，直接旋干获得底物1；
在本步骤中，旨在将磷酸二酯的衍生物制作成具有活性反应基团的底物，如直接选用具有活性基团L1的化合物A的话，可省略该步骤一。
在本发明中，磷酸二酯的衍生物为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000111
R111、R112、R113选自芳基(如：苯基、萘基、喹啉基等芳香基团)、烷基(如：甲基、乙基、丙基、异丙基、环己基、环戊基等烷基基团)；
卤化试剂一般选用二氯亚砜、光气、溴等提供卤素的试剂；
该反应优选在氮气、氩气、氦气等保护气的保护下进行。
该反应中，每100mg的磷酸二酯的衍生物，添加的卤化试剂的量为0.5-4ml。
步骤二、于0℃以下的温度下，于乙炔基苯甲酸甲酯的衍生物中，依次加入格氏试剂和底物1，反应0.1-2小时，用酸溶液淬灭反应，萃取有机相旋干，得到中间产物1；
在本发明中，乙炔基苯甲酸甲酯的衍生物为如下结构所示的化合物：
Figure BDA0001617513690000121
其中，R311选自任一或任几取代的卤素、硝基、芳基(如：苯基、萘基、喹啉基等芳香基团)、烷基(如：甲基、乙基、丙基、异丙基、环己基、环戊基等烷基基团)等；
该乙炔基和甲酸甲酯基团可以为对位、邻位或间位；
该乙炔基苯甲酸甲酯的衍生物与格氏试剂和底物1的质量比例为1:0.01-10:1:-10；
该反应优选在氮气、氩气、氦气等保护气的保护下进行；
该反应优选在醚类溶剂中进行；
用于淬灭反应的酸优选为无机酸，该酸的浓度优选为0.5-1.5mol/L，该酸的用量优选为反应物总量的0.01-10倍；
该萃取用的试剂优选为酯溶剂。
步骤三、将中间产物1和脱酯基试剂，在100-150摄氏度的温度下反应2-5小时，加入酸溶液，萃取有机相旋干，得到中间产物2；
该中间产物1和脱酯基试剂的质量比为1:0.5-3；
该反应优选在氮气、氩气、氦气等保护气的保护下进行；
用于淬灭反应的酸优选为无机酸，该酸的浓度优选为0.5-1.5mol/L，该酸的用量优选为反应物总量的0.01-10倍；
该萃取用的试剂优选为酯溶剂。
步骤四、于中间产物2中，依次加入L2为氨基的化合物C，碱性催化剂，在20-50℃的温度下，反应1-10小时，用酸溶液淬灭反应，萃取有机相旋干，得到含炔基的含磷化合物。
该中间产物2、化合物C和碱性催化剂的摩尔比为1:1-5:5-20；
用于淬灭反应的酸优选为无机酸，该酸的浓度优选为0.5-1.5mol/L，该酸的用量优选为反应物总量的0.01-10倍；
该萃取用的试剂优选为酯溶剂。
上述反应过程均适用于不提纯直接进行下一步骤的方案，其每步的产率约为50-95％，总产率约为50-80％。
上述过程的具体方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000131
进一步地，本发明提供的一种含磷化合物的制备方法，还具有这样的特点，即、上述含炔基的含磷化合物经还原反应、酯化反应、酰胺化反应、取代反应、加成反应中的一种或几种反应后,可得到相应的含磷产物。
此外，本发明还提供了上述含磷化合物的应用，其特征在于：能作为一种免疫细胞迁徙抑制剂使用。
另外，本发明还提供了上述含磷化合物的应用，其特征在于：包含有上述含磷化合物的眼药水，可用于缓解和治疗干眼症。
该眼药水制剂的制备方法可以为任何常规制剂法。
例如：将上述化合物加入到10-200倍重量的无菌生理盐水中，加入0.01-1倍的碱溶液，搅拌得到透明溶液；再向以上得到的溶液中加入缓冲溶液中直至溶液的pH在6.5-7.5之间；再向得到水溶液加入无菌生理盐水，直到总体积达到原体积的1.5-20倍。再向以上溶液通氮气，鼓泡0.5-10小时，所得溶液密封，放在5℃避光保存。分装到一次性使用的滴眼液袋中待用。其中，上述氢氧化钠和NaH2PO4饱和水溶液可以被其他缓冲溶液替代。
本发明的作用和效果：
在本发明中，合成了一类新的含磷化合物，为新型的免疫细胞迁徙抑制剂。其具有很好的亲水性，容易开发成眼药水，对免疫细胞迁徙有很强的抑制能力，可能会缓解大多数干眼症病人的症状。
具体实施方式
实施例1
Figure BDA0001617513690000151
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000152
步骤A：甲氧基苯基磷酰氯(化合物1.1)
称取150mg苯基磷酸二甲酯，加入4ml二氯亚砜，氮气保护，在75度下反应2小时后直接旋干即可。
步骤B：2,6-二氯-4-((苯基(甲氧基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸甲酯(化合物1.2)
将50mg的2,6-二氯-4-乙炔基苯甲酸甲酯溶于1ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.2ml的2mol/L的异丙基氯化镁，搅拌20分钟；将化合物1.1溶于0.5ml的四氢呋喃并加入，反应20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(50mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:382.6(M+1).
步骤C：2,6-二氯-4-((羟基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物1.3)
将化合物1.2(50mg)和碘化锂(50mg)溶于1ml吡啶中氮气保护，在120度搅拌3个小时，冷却旋干，加入10ml的1mol/L的稀盐酸溶液，用30ml的乙酸乙酯分3次萃取，合并有机相，旋干无需纯化。LCMS ESI(+)m/z:354.6(M+1).步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物1.4)
将化合物1.3溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物40mg。LCMS ESI(+)m/z:669.5(M+1).
步骤E：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物1)
将化合物1.4溶于1ml的甲醇中，加入Pd/C(10％，0.1eq)，常压氢化1h,过滤，旋干，反相制备，冻干的产物10mg。LCMS ESI(+)m/z:583.6(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.02(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H)，7.77(m,3H)，7.66(m,1H)，7.55(m,2H)，7.51(m,2H),7.29(s,2H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝15Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝15.5Hz,J＝10.4Hz,1H),2.70(m,2H),2.11(m,2H)。
实施例2
Figure BDA0001617513690000161
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000171
步骤A：(间甲氧基苯基)乙氧基磷酰氯(化合物2.1)
称取200mg间甲氧基苯基磷酸二乙酯，加入4ml二氯亚砜，氮气保护，在75度下反应12小时后直接旋干即可。
步骤B：2,6-二氯-4-(((间甲氧基苯基)(乙氧基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸甲酯(化合物2.2)
将100mg的2,6-二氯-4-乙炔基苯甲酸甲酯溶于1.5ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.7ml的2mol/L的异丙基氯化镁，搅拌20分钟；将化合物2.1溶于0.5ml的四氢呋喃并加入，反应20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(100mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:426.6(M+1).
步骤C：2,6-二氯-4-((羟基(间甲氧苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物2.3)
将化合物2.2(100mg)和碘化锂(100mg)溶于2ml吡啶中氮气保护，在120度搅拌3个小时，冷却旋干，加入10ml的1mol/L的稀盐酸溶液，用30ml的乙酸乙酯分3次萃取，合并有机相，旋干无需纯化。LCMS ESI(+)m/z:384.6(M+1).
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(间甲氧苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物2.4)
将化合物2.3溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物80mg。LCMS ESI(+)m/z:699.5(M+1).
步骤E：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物2)
将化合物2.4(40mg)溶于1ml的DCM中，氮气保护，在-40度下加入0.2ml三溴化硼(1mol/L)，然后在0度下搅拌30分钟。在-40度下加入水淬灭，用30mlEA萃取，用无水硫酸钠干燥，旋干，纯化得15mg产物。
LCMS ESI(+)m/z:595.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO),δ9.16(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.76(d,J＝7.6Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8Hz,J＝7.6Hz,1H),7.44(s,2H),7.28(m,1H),7.16(m,2H),6.77(m,1H),4.78(m,1H),3.29(m,1H),3.14(s,3H),3.01(dd,J＝14,J＝10.4,1H).
实施例3
Figure BDA0001617513690000181
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(间羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000191
将化合物2.5(10mg)溶于1ml甲醇，加入1mgPd/C(10％)，常压氢化1.5h后过滤。旋干纯化得3mg产物。LCMS ESI(+)m/z:599.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.72(s,1H),9.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H,)，7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(m,1H)，7.28(s,2H),7.15(m,2H),6.93(m,1H),4.75(m,1H),3.30(m,1H),3.15(s,3H),3.01(dd,J＝10.8Hz,J＝9.6Hz,1H),2.69(m,2H),2.04(m,2H).
实施例4
Figure BDA0001617513690000192
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲氧基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000193
步骤A：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物4.1)
将化合物1.4(20mg)溶于0.5ml甲醇中，加入三甲基硅基重氮甲烷(3eq)，在常温下搅拌30分钟。加入适量的乙酸淬灭，旋干，加入5ml的稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相旋干即可。LCMS ESI(+)m/z:683.6(M+1).
步骤B：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲氧基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物4)
将化合物4.1溶于甲醇(1ml)中，加入1mgPd/C(10％)，常压氢化1h，过滤旋干，纯化得目标产物。LCMS ESI(+)m/z:597.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.75(m,3H),7.66(m,2H),7.56(m,3H),7.32(s,2H),4.75(m,1H),3.51(d,J＝11.2Hz,3H),3.28(dd,J＝14.4Hz,J＝3.6Hz,1H),3.15(s,3H),3.01(dd,J＝14.4Hz,J＝10.8Hz,1H),2.72(m,2H),2.34(m,2H).
实施例5
Figure BDA0001617513690000201
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(甲氧基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000202
将化合物4.1溶于DCM中，在-40度下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在0度下搅拌30分钟后在-40度下加水淬灭反应。用EA萃取3次，合并有机相，干燥旋干，纯化得目标产物。LCMS ESI(+)m/z:593.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.88(m,5H),7.77(m,1H),7.72(m,1H),7.67(m,1H),7.63(m,2H),7.57(m,1H),3.83(d,J＝12.4Hz,3H),3.30(m,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝13.6Hz,J＝10.4Hz,1H).
实施例6
Figure BDA0001617513690000211
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(乙氧基(间羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000212
步骤A：2,6-二氯-4-(((间羟基苯基)(乙氧基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物6.1)
将化合物2.2溶于DCM中在低温下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在0度下搅拌30分钟，后在-40度下淬灭反应，EA萃取3次，合并有机相旋干即可。
LCMS ESI(+)m/z:398.6(M+1).
步骤B：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((乙氧基(间羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物6.2)
将化合物6.1溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物。LCMS ESI(+)m/z:713.5(M+1).
步骤C：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(乙氧基(间羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物6)
将化合物6.2溶于1ml的甲醇中，加入Pd/C(10％，0.1eq)，常压氢化1h，过滤，旋干，纯化得产物。LCMS ESI(+)m/z:627.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.85(s,1H),9.05(d,J＝5.6Hz,1H),7.86(s,1H),7.76(d,J＝4.8Hz,1H),7.66(d,J＝4.8Hz,1H),7.57(dd,J＝5.2Hz,J＝5.2Hz,1H),7.35(m,1H),7.33(s,2H),7.16(m,2H),6.98(m,1H),4.75(m,1H),3.91(m,1H),3.78(m,1H),3.30(m,1H),3.15(s,3H),3.01(m,1H),2.70(m,2H),2.25(m,2H,)1.19(t,J＝4.8Hz,3H).
实施例7
Figure BDA0001617513690000221
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000231
步骤A：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(3-甲氧基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物7.1)
将化合物2.4(40mg)溶于1ml甲醇中，加入三甲基硅基重氮甲烷(3eq)，在常温下搅拌30分钟。加入适量的乙酸淬灭，旋干，加入5ml的稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相旋干即可。LCMS ESI(+)m/z:713.5(M+1).
步骤B：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物7)
将化合物7.1(30mg)溶于DCM中，在-40度下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在0度下搅拌30分钟后在-40度下加水淬灭反应。用EA萃取3次，合并有机相，干燥旋干，纯化得目标产物15mg。LCMS ESI(+)m/z:609.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ10.05(s,1H),7.85(s,3H),7.76(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8Hz,J＝7.6Hz,1H),7.42(m,1H),7.29(m,1H),7.25(m,1H),7.07(m,1H),4.75(m,1H),3.80(d,J＝12.4Hz,3H),3.30(m,1H),3.15(s,3H),3.04(m,1H).
实施例8
Figure BDA0001617513690000241
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲氧基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000242
将化合物7.2(10mg)溶于甲醇(1ml)中，加入1mgPd/C(10％)，常压氢化1h，过滤旋干，纯化得目标产物4mg。LCMS ESI(+)m/z:613.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.87(s,1H),9.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8Hz,J＝7.6Hz,1H),7.37(m,1H),7.34(s,2H),7.15(m,2H),7.00(m,1H),4.75(m,1H),3.50(d,J＝11.6Hz,3H),3.27(m,1H),3.15(s,3H),3.01(m,1H),2.72(m,2H),2.30(m,2H).
实施例9
Figure BDA0001617513690000243
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(甲基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000251
步骤A：甲基苯基磷酰氯(化合物9.1)
称取500mg甲基苯基磷酸甲酯，加入10ml二氯亚砜，氮气保护，在75度下反应2小时后直接旋干即可。
步骤B：2,6-二氯-4-((苯基(甲基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸甲酯(化合物9.2)
将200mg的2,6-二氯-4-乙炔基苯甲酸甲酯溶于2ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.66ml的2mol/L的异丙基氯化镁，搅拌20分钟；将化合物9.1溶于0.5ml的四氢呋喃并加入，反应20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(200mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:366.6(M+1).
步骤C：2,6-二氯-4-((甲基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物9.3)
将化合物9.2(200mg)和碘化锂(200mg)溶于2ml吡啶中氮气保护，在120度搅拌3个小时，冷却旋干，加入10ml的1mol/L的稀盐酸溶液，用40ml的乙酸乙酯分3次萃取，合并有机相，旋干无需纯化(150mg)。LCMS ESI(+)m/z:352.6(M+1).
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物9.4)
将化合物9.3溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。纯化，得目标产物150mg。LCMS ESI(+)m/z:667.5(M+1).
步骤E：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物9)
将化合物9.4(20mg)溶于DCM中在低温下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在0度下搅拌30分钟，后在-40度下淬灭反应，EA萃取3次，合并有机相旋干纯化的目标产物10mg。LCMS ESI(+)m/z:577.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(m,2H),7.86(s,1H),7.80(s,2H),7.77(d,J＝4.4Hz,1H),7.67(m,2H),7.62(m,2H),7.57(m,1H),4.80(m,1H),3.29(m,1H),3.15(s,3H),3.03(m,1H),2.02(d,J＝14.8Hz,3H),2.11(m,2H).
实施例10
Figure BDA0001617513690000261
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000262
将化合物9.4(10mg)溶于甲醇(1ml)中，加入1mgPd/C(10％)，常压氢化1h，过滤旋干，纯化得目标产物3mg。LCMS ESI(+)m/z:581.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.78(m,3H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(m,4H),7.31(s,2H),4.75(m,1H),3.27(m,1H),3.15(s,3H),3.01(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.79(m,2H),2.29(m,2H),1.67(d,J＝13.4Hz,3H.)。
实施例11
Figure BDA0001617513690000271
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000272
步骤A：(间甲氧基苯基)甲基磷酸乙酯(化合物11.1)
在化合物间甲氧基磷酸二乙酯(2g)加入二氯亚砜(10ml)，在75度下搅拌过夜，旋干后在0度下加入3mol/L的甲基氯化镁(5ml)，搅拌30分钟后在0度下用稀盐酸溶液淬灭反应，用EA萃取，干燥旋干，纯化得目标产物(1.2g，68％)。LCMS ESI(+)m/z:214.6(M+1).
步骤B:(间甲氧基苯基)甲基磷酰氯(化合物11.2)
在化合物11.1(150mg)中加入二氯亚砜，在70度下搅拌3个小时，旋干即得目标产物。
步骤C：2,6-二氯-4-(((间甲氧基苯基)(甲基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸甲酯(化合物11.3)
将100mg的2,6-二氯-4-乙炔基苯甲酸甲酯溶于1.5ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.7ml的2mol/L的异丙基氯化镁，搅拌20分钟；将化合物11.2溶于0.5ml的四氢呋喃并加入，反应20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(90mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:396.6(M+1).
步骤D：2,6-二氯-4-((甲基(间羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物11.4)
将化合物11.3(90mg)溶于2ml的DCM中，氮气保护，在-40度下加入0.4ml三溴化硼(1mol/L)，然后在0度下搅拌30分钟。在-40度下加入水淬灭，用30mlEA萃取，用无水硫酸钠干燥，旋干，得80mg目标产物ESI(+)m/z:368.6(M+1).
步骤E:(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物11.5)
化合物11.4溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物70mg。LCMS ESI(+)m/z:683.5(M+1).
步骤F：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物11)
将化合物11.5(20mg)溶于1ml的DCM中，氮气保护，在-40度下加入0.5ml三溴化硼(1mol/L)，然后在0度下搅拌30分钟。在-40度下加入水淬灭，用30mlEA萃取，用无水硫酸钠干燥，旋干，纯化得8mg产物。
LCMS ESI(+)m/z:593.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO),δ9.98(s,1H),9.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.79(s,2H),7.77(m,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.58(dd,J＝8Hz,J＝7.6Hz,1H),7.40(m,1H),7.31(m,1H),7.26(m,1H),7.02(m,1H),4.80(m,1H),3.32(m,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝14,J＝10.8,1H),1.97(d,J＝14.8Hz,3H).
实施例12
Figure BDA0001617513690000291
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(3-甲氧基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000292
将化合物7.1(10mg)溶于1ml的DCM中，氮气保护，在-40度下加入0.5ml三溴化硼(1mol/L)，搅拌30分钟后加入水淬灭，用30mlEA萃取，用无水硫酸钠干燥，旋干，纯化得3mg产物。LCMS ESI(+)m/z:623.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(d,J＝7.6Hz,1H),7.87(s,2H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.55(m,2H),7.44(m,1H),7.30(m,2H),4.80(m,1H),3.84(d,J＝12.4Hz,3H),3.83(s,3H),3.30(m,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝14,J＝9.4,1H).
实施例13
Figure BDA0001617513690000301
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(3-甲氧基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000302
将化合物7.1(10mg)溶于1ml的THF中，取氢氧化锂(20mg)溶于0.5ml水中，常温搅拌5分钟。浓盐酸调PH＝1旋干，纯化得4mg产物。
LCMS ESI(+)m/z:609.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.85(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),7.66(d,J＝9.4Hz,1H),7.65(s,2H),7.57(dd,J＝8Hz,J＝7.6Hz,1H),7.43(m,1H),7.38(m,1H),7.28(m,1H),7.14(m,1H),4.79(m,1H),3.30(dd,J＝14.8Hz,J＝4.8Hz,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝14.4,J＝10.8,1H).
实施例14
Figure BDA0001617513690000311
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
Figure BDA0001617513690000312
将化合物11.5(10mg)溶于甲醇(1ml)中，加入1mgPd/C(10％)，常压氢化1h，过滤旋干，纯化得目标产物3mg。LCMS ESI(+)m/z:597.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.79(s,1H),9.05(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(s,2H),7.33(m,1H),7.17(m,2H),6.93(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.00(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.78(m,2H),2.23(m,2H),1.97(d,J＝13.2Hz,3H)。
实施例15
Figure BDA0001617513690000313
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(4-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
采用实施例11中完全相同的步骤，将“间甲氧基磷酸二乙酯”替换为“对甲氧基磷酸二乙酯”制备出实施例15。LCMS ESI(+)m/z:594.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ10.39(s,1H),9.21(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H),7.77(s,2H),7.71-7.66(m,3H),7.57(t,J＝8Hz,1H),6.94(d,J＝7.6Hz,2H),4.79(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.02(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),1.94(d,J＝13.2Hz,3H)。
实施例16
Figure BDA0001617513690000321
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯
采用实施例13中完全相同的步骤，将“化合物7.1”替换为“化合物1.4”制备出实施例16。LCMS ESI(+)m/z:580.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.16(d,J＝8Hz,1H),7.84(s,1H),7.81-7.76(m,3H),7.66(d,J＝8Hz,1H),7.59(s,2H),7.57-7.47(m,5H),4.80(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.14(s,3H),3.02(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H)
实施例17
Figure BDA0001617513690000322
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(2-噻吩酰胺基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000331
步骤A：3-(2-噻吩酰胺基)-N-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯(化合物17.1)
将((S)-3-氨基-2-((1,1-二甲基乙氧基)酰胺基)丙酸甲酯，HCl盐(2.55g,10mmol)溶解在水(30mL)中，放进冰浴并搅拌。向所得溶液加入THF(20mL)，NaOH(1.0M水溶液，25mL)，2-Thiophenecarbonyl chloride(11mmol)。反应搅拌10分钟后，向其中加入EtOAc(100mL)，水层分离掉，有机层用水(25mL),饱和NaCl水溶液洗，然后用无水MgSO4干燥，过滤，旋干得到纯的化合物17.1(3.3g,100％)。LCMS ESI(+)m/z:329(M+1).
步骤B：(S)-2-氨基-3-(2-噻吩酰胺基)丙酸甲酯(化合物17.2)
将化合物17.1(1.0g)溶于DCM(20ml)中，加入HCl-dioxane溶液(4.0M，5mL)，反应搅拌2h，旋干，得到的产物(盐酸盐)直接用于下一步反应。LCMS ESI(+)m/z:229(M+1).
步骤C：2,6-二氯-4-(((间甲氧基苯基)(乙氧基)磷酰基)乙基)苯甲酸甲酯(化合物17.3)
将化合物2.2(2.0g)溶于甲醇(20ml)中，加入100mg Pd/C(5％)，常压氢化2h，过滤旋干，纯化得目标产物2.0g.LCMS ESI(+)m/z:401.1(M+1)
步骤D：2,6-二氯-4-(((间羟基苯基)(乙氧基)磷酰基)乙基)苯甲酸甲酯(化合物17.4)
将化合物11.3(500mg)溶于10ml的DCM中，氮气保护，在-40度下加入3.0ml三溴化硼(1mol/L)，然后在0度下搅拌30分钟。在-40度下加入水淬灭，用30mlEA萃取3次，用无水硫酸钠干燥，旋干，得450mg目标产物ESI(+)m/z:373(M+1).
步骤E：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(2-噻吩酰胺基)丙酸甲酯(化合物17.5)
化合物17.4(100mg)溶于DMF(3mL)中，加入化合物17.4(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物70mg。LCMS ESI(+)m/z:583(M+1).
步骤F:(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(2-噻吩酰胺基)丙酸(化合物17)
将化合物17.5(10mg)溶于1ml的THF中，取氢氧化锂(20mg)溶于0.5ml水中，混合，常温搅拌5分钟。浓盐酸调PH＝1旋干，高压液相纯化得5.2mg产物。LCMS ESI(+)m/z:569(M+1)
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.69-7.67(m,2H),7.42-7.37(m,1H),7.26(s,2H),7.23-7.12(m,3H),7.03(m,J＝8.4Hz,1H),4.98(m,1H),3.88-3.84(m,2H),2.93-2.86(m,1H),2.77-2.73(m,1H),2.42-2.32(m,2H),1.78(m,J＝13.2Hz,3H)。
实施例18
Figure BDA0001617513690000351
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(1-(甲磺酰胺)-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000352
步骤A：(S)-2-((叔丁基氧羰基)氨基)-3-(1-甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)丙酸甲酯)(化合物18.1)
化合物:Boc-3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸甲酯(2.8g,10mmol)溶解在乙醇(40mL)中，向溶液中加入甲基碘(2mL),反应在40度搅拌，直到反应结束。反应温度降低到0度，向溶液中分批加入硼氢化钠(2g)。反应搅拌1小时后，向反应中加入5ml丙酮，加入EtOAc(100mL)。所得有机溶液用饱和NH4Cl水溶液(20mL)，水(30mL),饱和食盐水溶液洗。用无水MgSO4干燥，过滤，旋干。所得粗产品用硅胶柱纯化(0-10％的MeOH/DCM)得到化合物18.1.
步骤B:(S)-2-((叔丁基氧羰基)氨基)-3-(1-(甲磺酰胺)-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(化合物18.2)
化合物18.1(1.5g,5mmol)溶解在DCE(20mL)中，加入1-氯乙基氯甲酸酯(7.5mmol)，反应加热到40度2小时，旋干。加入干燥的甲醇(20mL),反应回流1小时，再旋干。向得到的中间产物中加入DCM(20ml)，TEA(15mmol)，降温到0度，向反应中加入甲磺酰氯(7.5mmol)。搅拌1小时候，反应用EtOA(80ml)稀释，水洗两次，干燥，过滤，旋干得到化合物18.2
步骤C：(S)-2-氨基-3-(1-(甲磺酰胺)-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(化合物18.3)
将化合物18.2(100mg)溶于DCM(5ml)中，加入HCl-dioxane溶液(4.0M，1mL)，反应搅拌2h，旋干，得到的产物(盐酸盐)直接用于下一步反应。LCMS ESI(+)m/z:229(M+1).
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(1-(甲磺酰胺)-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)丙酸(化合物18)
从化合物17.4制备化合物17的同样的方法被用来从17.4制备化合物18，其中化合物17.3被化合物18.2置换掉。
实施例19
Figure BDA0001617513690000361
(2s)-3-((R)-N’-氰基-3-羟基四氫吡咯-1-甲脒基)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000362
步骤A：1-氰基-9，9-二甲基-2-(甲硫基)-7-羰基-8-氧基-1，3，6-三氮癸-1-烯-5-羧酸甲酯(化合物19.1)
将3-氨基-N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸甲酯，HCl salt(2.55g,10mmol)溶解在乙醇(30mL)中，加入N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸二甲酯(10mmol),DIPEA(3mL)。反应搅拌6小时后，向其中加入EtOAc(100mL)，用水(25mL),饱和NaCl水溶液洗，然后用无水MgSO4干燥，过滤，旋干得到纯的化合物18.1，直接用于下一步反应。
步骤B：1-氰基-2-((R)-3-羟基四氫吡咯-1-基)-9，9-二甲基-7-羰基-8-氧基-1，3，6-三氮癸-1-烯-5-羧酸甲酯。
所得的化合物19.1溶解在乙腈(20ml)中，加入(R)-pyrrolidin-3-ol(20mmol)，硝酸银(20mmol)。反应回流8小时，用硅胶过滤，旋干。粗产品用硅胶柱分离，用100/5/1的DCM/MeOH/TEA分离得到产品。
步骤C：(2s)-2-氨基-3-((R)-N’-氰基-3-羟基四氫吡咯-1-甲脒基)苯甲酰氨基)丙酸(化合物19.3)
将化合物19.2(100mg)溶于DCM(5ml)中，加入HCl-dioxane溶液(4.0M，1mL)，反应搅拌2h，旋干，得到的产物(盐酸盐)直接用于下一步反应。
步骤D：
(2s)-3-((R)-N’-氰基-3-羟基四氫吡咯-1-甲脒基)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸(化合物19)
从化合物17.4制备化合物17的同样的方法被用来从17.4制备化合物19，其中化合物17.3被化合物19.3置换掉。LC-MS:m/z 595.7(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.40-7.35(m,1H),7.28-7.27(m,2H),7.21-7.12(m,2H),7.05-7.02(m,1H),4.80-4.86(m,1H),4.60-4.29(m,4H),3.45-3.41(m,1H),3.27-3.24(m,1H),3.15-2.71(m,3H),2.44-2.32(m,2H),2.05-1.74(m,5H)。
实施例20
Figure BDA0001617513690000381
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(乙基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000382
步骤A：乙基(3-甲氧基苯基)磷酸甲酯(化合物20.1)(3-甲氧基苯基)磷酸二甲酯(2.16g，10mmol)溶解在无水THF(30mL)中，溶液冷却到-78度，加入EtMgBr(1.0M，10.5ml)。反应渐渐升温到室温(升温过程约2小时)，反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭，加入EtOAc(100mL)，水洗一次，加无水MgSO4干燥，过滤，旋干。粗产物硅胶柱分离得到目标产物。
步骤B：乙基(3-甲氧基苯基)磷酰氯(化合物20.2)
化合物20.1溶解在DCE(10mL)中，加入草酰氯(5ml)，所得溶液回流5小时，反应溶液旋干，得到目标产物，直接使用在下一步。
步骤C：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(乙基(3-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物20)
制备化合物2的完全相同的步骤用了制备化合物20，其中化合物20.2用来取代化合物2.1。
实施例21
Figure BDA0001617513690000391
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(乙基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例3的完全相同的方法用来制备实施例21，其中化合物20取代化合物2.LCMS ESI(+)m/z:612.1(M+1).1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.75(s,1H),9.03(d,J＝8Hz,1H),7.85(s,1H),7.78(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.43(m,1H),7.41(s,2H),7.16-7.12(m,2H),6.93(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.00(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.78-2.50(m,2H),2.26(m,2H),1.86(m,2H),0.93(dt,J＝13.0Hz,7.2Hz,3H)。
实施例22
Figure BDA0001617513690000392
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(环丙基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例21的完全相同的方法用来制备实施例22，其中环丙基格氏试剂取代乙基格氏试剂。LCMS ESI(+)m/z:624.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),9.03(d,J＝8Hz,1H),7.85(s,1H),7.78(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(s,2H),7.40(m,1H),7.18-7.23(m,2H),6.93(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.02(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.80(m,1H),2.60(m,1H),2.26(m,2H),1.22(m,1H),0.82(m,2H),0.71(m,1H),0.52(m,1H)。
实施例23
Figure BDA0001617513690000401
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(丁基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例21的完全相同的方法用来制备实施例23，其中丁基格氏试剂取代乙基格氏试剂。LCMS ESI(+)m/z:630.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.75(s,1H),9.03(d,J＝8Hz,1H),7.85(s,1H),7.78(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(m,1H),7.41(s,2H),7.18-7.12(m,2H),6.93(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.00(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.78(m,1H),2.52(m,1H),2.26(m,2H),1.83(m,2H),1.45(m,2H),1.24-1.20(m,3H),0.80(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例24
Figure BDA0001617513690000411
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000412
步骤A：苯并呋喃-6-基磷酰酸二乙酯(化合物24.1)
化合物6-溴苯并呋喃(2.0g，10mmol)溶解亚磷酸二乙酯(6mL)，加入Pd(OAc)2(200mg),TEA(1ml)。反应在微波反应器上加热到200度，30分钟。加入EtOAc(80ml)，水洗两次，干燥，过滤，旋干。粗产物用硅胶柱分离，0-10％的MeOH/DCM为流动相，得到目标产物24.1。
步骤B：甲基(苯并呋喃-6-基)磷酰酸乙酯(化合物24.2)
化合物24.1(1.27g)溶解在THF(20ml)中溶液冷却到-78度，加入MeMgBr(1.0M，5ml)。反应渐渐升温到室温(升温过程约2小时)，反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭，加入EtOAc(100mL)，水洗一次，加无水MgSO4干燥，过滤，旋干。粗产物硅胶柱分离得到目标产物。
步骤C：甲基(苯并呋喃-6-基)磷酰氯(化合物24.3)
化合物24.2溶解在二氯亚砜中(5ml)，所得溶液回流5小时，反应溶液旋干，得到目标产物，直接使用在下一步。
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物24)
制备化合物2的完全相同的步骤用来制备化合物24，其中化合物24.3用来取代化合物2.1。LCMS ESI(+)m/z:619.4(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.85-7.74(m,5H),7.70-7.63(m,2H),7.59-7.44(m,2H),7.40-7.33(m,1H),7.57-7.47(m,5H),4.80(m,1H),3.30(dd,J＝19Hz,J＝4.8Hz,1H),3.14(d,J＝3.2Hz,3H),3.02(m,1H),2.16(d,J＝16Hz,3H)。
实施例25
Figure BDA0001617513690000421
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例3的完全相同的方法用来制备实施例2，其中化合物24取代化合物2。LCMS ESI(+)m/z:622.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.04(d,J＝8Hz,1H),8.16(s,1H),8.03(d,J＝11Hz,1H)7.87(s,1H),7.83(d,J＝8Hz,1H),7.78(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(s,1H),7.32(s,2H),7.07(s,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.16(s,3H),3.02(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.88(m,1H),2.68(m,1H),2.34(m,2H),1.71(d,J＝13.2Hz,3H)。
实施例26
Figure BDA0001617513690000431
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(苯并呋喃-2-基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备化合物25的完全相同的步骤用来制备化合物26，其中2-苯并呋喃用来取代6-苯并呋喃。LCMS ESI(+)m/z:623.6(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.03(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H),7.76(d,J＝8Hz,2H),7.67(t,2H),7.60(s,1H),7.56(t,1H),7.45(t,1H),7.38(s,2H),7.34(t,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝18.4Hz,J＝4.4Hz,1H),3.01(dd,J＝20.4Hz,J＝10.4Hz 1H),2.85(m2H),2.39(m,2H),1.84(d,J＝14Hz,3H)。
实施例27
Figure BDA0001617513690000432
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(1H-吲哚-5-基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备化合物25的完全相同的步骤用来制备化合物26，其中1-Ms-5-Br-indole用来取代6-苯并呋喃。
实施例28
Figure BDA0001617513690000441
(2S)-2-(2,6-二氯-4-(((甲基(苯基)磷酰基)氧基)甲基)苯甲酰氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000442
步骤A：2,6-二氯-(4-羟甲基)苯甲酸甲酯(化合物28.1)
2,6-二氯对苯二甲酸二甲酯(2.63g，10mmol)溶解在THF(50ml)中，慢慢加入硼氢化锂(12mmml)，反应搅拌1小时后，加入丙酮(1ml),EtOAc(100ml)。所得溶液水洗二次，无水Na2SO4干燥，过滤，旋干，粗产物直接用于下一步。步骤B：2,6-二氯-(4-羟甲基)苯甲酸(化合物28.2)
化合物28.1溶解在吡啶(20ml)中，加入碘化锂(15mmml)，反应回流搅拌5小时后，旋干，粗产物用硅胶柱纯化，流动相95/5/0.5(v/v/v)的DCM/MeOH/AcOH。
步骤C：(S)-2-(2,6-二氯-4-(羟甲基)苯甲酰胺基)-3-(3-(3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸甲酯(化合物28.3)
化合物28.2溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸甲酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物.
步骤D：(S)-2-(2,6-dichloro-4-(羟甲基)苯甲酰胺基)-3-(3-(3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物28.4)
化合物28.3溶于THF中，加入LiOH(2eq)。在常温下搅拌4h，加入稀盐酸溶液值得pH约2-3，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。得到目标产物，该产物不经纯化，直接用于下一步。
步骤E：(2S)-2-(2,6-二氯-4-(((甲基(苯基)磷酰基)氧基)甲基)苯甲酰氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物28)。
化合物28.4溶解在DCM中，冷却的0度，加入TEA(10eq)，再加入甲基苯基膦酰氯(5eq)。反应在室温搅拌5小时，加水(20eq)淬灭，旋干。粗产物用反相制备HPLC纯化，得到目标产物。
实施例29
Figure BDA0001617513690000451
(2S)-2-(2,6-二氯-4-(((3-羟基苯基)(甲基)磷酰基)甲基)氨基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000452
步骤A：(氯甲基)(3-甲氧基苯基)(甲基)氧化磷(化合物29.1)
氯甲基(甲基)次磷酰氯(10mmol)溶于无水THF(30ml),冷却到-78度，加入(3-甲氧基)苯基锂(1.01eq)。反应搅拌1小时后，在-78度用稀盐酸淬灭。反应回到室温后，加入EtOAc(80ml)，水洗一次，干燥，过滤，旋干。粗产品用硅胶柱纯化，流动相是0-10％MeOH/DCM(v/v)。
步骤B：2,6-二氯-4-((((3-甲氧基苯基)(甲基)磷酰基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物29.2)
化合物29.1(1eq)，4-氨基-2,6-二氯苯甲酸甲酯(1.5eq)溶于无水DMF(30ml),加入碘化钠(0.1eq)冷却到0度，加入钠氢(3eq)。反应在室温下搅拌值得化合物29.1消失，在-78度用饱和NH4Cl水溶液淬灭。反应回到室温后，加入EtOAc(80ml)，水洗三次，干燥，过滤，旋干。粗产品用硅胶柱纯化，流动相是0-10％MeOH/DCM(v/v)。
步骤C：2,6-二氯-4-((((3-甲氧基苯基)(甲基)磷酰基)甲基)氨基)苯甲酸(化合物29.3)
将化合物29.2溶于DCM中在0度下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在25度下搅拌30分钟，后在-40度下淬灭反应，EA萃取3次，合并有机相旋干。得到的粗产物直接用于下一步。
步骤D：(2S)-2-(2,6-二氯-4-((((3-羟基苯基)(甲基)磷酰基)甲基)氨基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸甲酯(化合物29.4)
化合物11.4溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸甲酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物.
步骤E：(2S)-2-(2,6-二氯-4-(((3-羟基苯基)(甲基)磷酰基)甲基)氨基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物29)
化合物29.4溶于THF中，加入LiOH(3eq)。在常温下搅拌4h，加入稀盐酸溶液值得pH约2-3，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。粗产物用反相HPLC纯化得到纯的目标产物。
实施例30和实施例31
Figure BDA0001617513690000471
手性制备HPLC用来拆分实施例14所得的化合物。手性柱为Chiralcel OZ-H型号，流动相为Hexane/EtOH/TFA,比例60/40/0.1(V/V/V)。两个异构体得到很好的分离。LCMS与1HNMR数据同化合物14.
实施例32
(S,E)-2-(4-(2-(3-羟基苯基)膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000481
步骤A：(E)-2,6-二氯-4-(2-(二乙氧基膦酰基)乙烯基)苯甲酸甲酯(化合物32.1)
2,6-二氯-4-醛基苯甲酸甲酯1g和亚甲基二磷酸四乙酯2.1g，溶于20ml DMF，加入K2CO3固体2g，搅拌2h,除去溶剂，纯化得产物。
步骤B:(E)-2,6-二氯-4-(2-(氯乙氧基膦酰基)乙烯基)苯甲酸甲酯(化合物32.2)
1g化合物32.1溶于10ml SOCl2，加热至70度反应4h，除去溶剂，得到产物。步骤C:(E)-4-(2-(3-甲氧基苯基)膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸甲酯(化合物32.3)
1g化合物32.2，溶于20ml THF，降温至0度，加入间甲氧基苯基溴化镁，室温搅拌4h，除去THF，纯化得产物。
步骤D：(E)-4-(2-(3-羟基苯基)乙氧膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸(化合物32.4)
200mg化合物32.3，溶于20ml CH2Cl2，降温至0度，加入BBr3，反应2h后，加入水，用EA萃取后干燥，旋干得产物。
步骤E:(S,E)-2-(4-(2-(3-羟基苯基)乙氧膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物32.5)
50mg化合物32.4与(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐40mg和DIPEA 40mg溶于DMF 5ml，加入HATU 60mg，搅拌过夜，除去DMF，纯化得产物。
步骤F：(S,E)-2-(4-(2-(3-羟基苯基)乙氧膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物32)
15mg化合物32.5溶于1ml THF,加入LiOH水溶液0.2ml，搅拌5min，除去溶剂，纯化得产物。LCMS ESI(+)m/z:629.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.85(s,1H),7.82(s,2H),7.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.58(t,1H),7.37(m,2H),7.18(m,3H)7.01(d,J＝6Hz,1H),4.80(m,1H),3.92(m,2H),3.3(m,2H),3.14(s,1H),1.24(t,J＝7.8Hz，3H)。
实施例33
Figure BDA0001617513690000491
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(4-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
采用实施例14中完全相同的步骤，将“实施例16”转变为实施例33。
LCMS ESI(+)m/z:597.6(M+1).1H-NMR(400MHz,DMSO)δ10.05(s,1H),9.04(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.56(m,3H),7.31(s,2H),6.88(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.02(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.78(m,1H),2.60(m,1H),2.18(m,2H),1.59(d,J＝13.2Hz,3H).
实施例34
Figure BDA0001617513690000501
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(3-羟基苯甲酰胺基)丙酸
实施例17中的2-噻吩羧酸置换成3-羟基苯甲酸制得实施例34。
LC-MS:m/z 579.2(M+H)+
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.40-7.30(m,1H),7.26-7.20(m,5H),7.19-7.16(m,1H),7.30(d,J＝8.8,1H),7.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.95-6.92(m,1H),4.95(t,J＝4.0Hz,1H),3.84(d,J＝4.4,2H),2.92-2.87(m,1H),2.74-2.71(m,1H),2.38-2.30(m,2H),1.75(d,J＝8.4,3H).
实施例35
Figure BDA0001617513690000502
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-(3，5-二羟基苯甲酰胺基)丙酸
实施例17中的2-噻吩羧酸置换成3，5-二羟基苯甲酸制得实施例35。
LC-MS:m/z 595.2(M+H)+
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.41-7.37(m,1H),7.27(s,2H),7.22-7.14(m,2H),7.04-7.01(m,J＝5.2Hz,1H),6.73(d,J＝1.6Hz,2H),6.45(t,J＝1.6Hz,1H),4.97(m,1H),3.80-3.87(m,2H),2.95-2.88(m,1H),2.78-2.71(m,1H),2.43-2.29(m,2H)1.78(d,J＝8.8Hz,3H)。
实施例36
Figure BDA0001617513690000511
2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(3，5-(二甲磺酰基)苯基)丙酸
将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为2-氨基-3-(3，5-(二甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐制备得到实施例36。LCMS ESI(+)m/z:583.6(M+1)。
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.78(d,J＝8Hz,1H),8.25(d,J＝7.6Hz,2H),7.34(s,2H),7.18(m,2H)，6.95(m,2H)，4.89(m,1H),3.45(dd,J＝15Hz,J＝4.4Hz,1H),3.29(s,6H),3.22(dd,J＝15.5Hz,J＝10.4Hz,1H),2.70(m,2H),2.11(m,2H)，1.65(d，J＝13.2，3H)。
实施例37
Figure BDA0001617513690000521
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-6-(甲磺酰胺)己酸
将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-6-(甲磺酰胺)己酸甲酯盐酸盐制备得到实施例37.LC-MS:m/z 578.1(M+H)+1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.40(m,1H),7.29(s,2H),7.21-7.17(s,2H),7.22(m,1H),7.17(m,J＝8.8Hz,1H),7.02(d,J＝5.2Hz,1H),4.02(m,1H),3.41(t,J＝4.4Hz,2H),3.96-3.91(m,1H),2.97(s,3H),2.95-2.90(m,1H),2.82-2.72(m,1H),2.47-2.32(m,2H),1.92-1.90(m,1H),1.79(d,J＝8.8,3H),1.79(m,5H).
实施例38
Figure BDA0001617513690000522
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(5-(甲磺酰基)吡啶-3-基)丙酸
将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-3-(5-(甲磺酰基)吡啶-3-基)丙酸盐酸盐制备得到实施例38.LCMS ESI(+)m/z:600.4(M+1).
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ8.96(s,1H),8.83(s,1H),8.39(s,1H),7.38(m,H),7.24(s,2H),7.17(m,2H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),5.08(m,1H),3.52(m,1H),3.20(s,1H),2.88(m,1H),2.74(m,1H),2.33(m,2H),1.79(d,J＝13.2Hz,3H)
实施例39
Figure BDA0001617513690000531
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(1-(甲磺酰基)-1H-吡咯-3-基)丙酸将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-3-(1-(甲磺酰基)-1H-吡咯-3-基)丙酸盐酸盐制备得到实施例39.
实施例40
Figure BDA0001617513690000532
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-3-基)丙酸将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-3-(1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-3-基)丙酸盐酸盐制备得到实施例40.
实施例41
Figure BDA0001617513690000541
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)丙酸
将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-3-(1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)丙酸盐酸盐制备得到实施例41.
实施例42
Figure BDA0001617513690000542
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-3-(1-(甲磺酰基)吡咯烷-3-基)丙酸
将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-3-(1-(甲磺酰基)吡咯烷-3-基)丙酸盐酸盐制备得到实施例42.LC-MS:m/z591.1(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.43-7.37(m,1H),7.30(s,2H),7.25-7.20(m,2H),7.04-7.01(m,1H),4.71-4.63(m,1H),3.68-3.55(m,1H),3.50-3.44(m,1H),3.30-3.28(m,1H),3.05-2.90(m,2H),2.89(d,J＝2.0Hz,3H),2.88-2.75(m,1H),2.52-2.50(m,1H),2.50-2.10(m,3H),2.09-1.82(m,2H),1.79(d,J＝9.2Hz,3H),1.69(m,1H)。
实施例43
Figure BDA0001617513690000551
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)-3-((S)-3-羟基吡咯烷-1-羧酰胺)丙酸
实施例17中的2-噻吩羧酸置换成(s)-3-羟基吡咯烷-1-羰酰氯制得实施例43。
LC-MS:m/z 595.7(M+H)+.
1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.39-7.35(m,1H),7.26(s,2H),7.19-7.12(m,2H),7.01(d,J＝8.4,1H),4.78-4.74(m,1H),4.36-4.40(m,1H),3.66-3.64(m,2H),3.45-3.41(m,3H),3.27-3.25(m,1H),2.95-2.85(m,1H),2.79-2.69(m,1H),2.39-2.27(m,2H),2.05-1.92(m,2H),1.77(d,J＝12.4,1H)。
实施例44
Figure BDA0001617513690000552
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲氨基)-5(甲磺酰胺)戊酸
将实施例14和11中的(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐替换为(2s)-2-氨基-5(甲磺酰胺)戊酸甲酯盐酸盐制备得到实施例44
LC-MS:m/z 565.1(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.39-7.36(m,1H),7.27(s,2H),7.21-7.17(m,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H)7.00(d,J＝5.6Hz,1H),4.05(m,1H),3.42-3.40(m,2H),2.95(s,3H),2.91-2.87(m,1H),2.74-2.72(m,1H),2.39-2.28(m,2H),2.04-2.02(m,1H),1.81-1.74(m,6H)。
实施例45
Figure BDA0001617513690000561
(2s)-3-((反式)-N’-氰基-3，4-二羟基吡咯烷-1-甲脒基)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸
实施例19中的(R)-3-吡咯烷醇置换成(反式)-3，4-吡咯烷二醇制得实施例45。LC-MS:m/z 611.7(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.41-7.39(m,1H),7.30-7.28(m,2H),7.24-7.20(m,2H),7.05-7.03(m,1H),5.11(dd,J＝10.4,4.4,1H),4.11-4.18(m,1H),4.04-4.01(m,1H),3.79-3.72(m,1H),3.51-3.56(m,1H),3.26-3.25(m,1H),3.23-3.22(m,1H),3.17-3.13(m,1H),3.07-3.03(m,1H),3.00-2.96(m,1H),2.94-2.86(m,1H),2.77-2.66(m,1H),2.45-2.33(m,2H),1.79-1.75(m,3H)。
实施例46
Figure BDA0001617513690000571
(2s)-3-(2-氰基-3，3-二(2-羟基乙基)胍基)-2-(2，6-二氯-4-(2-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸
实施例19中的(R)-3-吡咯烷醇置换成二乙醇胺制得实施例46。
LC-MS:m/z 595.6(M-OH)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.38-7.37(m,1H),7.30-7.27(m,2H),7.21-7.17(m,2H),7.01-6.99(m,1H),5.71(dd,J＝10.0,4.0,1H),4.07-4.04(m,1H),3.96-3.91(m,1H),3.79-3.43(m,8H),2.99-2.90(m,1H),2.82-2.72(m,1H),2.47-2.36(m,2H),1.75(d,J＝12.8,3H)。
实施例47
Figure BDA0001617513690000572
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(2-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000581
步骤A：2,6-二氯-4-(((邻甲氧基苯基)(乙氧基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸甲酯(化合物47.2)
将100mg的2,6-二氯-4-乙炔基苯甲酸甲酯溶于1.5ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.7ml的2mol/L的异丙基氯化镁，搅拌20分钟；将化合物47.1溶于0.5ml的四氢呋喃并加入，反应20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(100mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:426.6(M+1).
步骤B：2,6-二氯-4-((羟基(邻甲氧苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物47.3)
将化合物47.3(100mg)和碘化锂(100mg)溶于2ml吡啶中氮气保护，在120度搅拌3个小时，冷却旋干，加入10ml的1mol/L的稀盐酸溶液，用30ml的乙酸乙酯分3次萃取，合并有机相，旋干无需纯化。LCMS ESI(+)m/z:384.6(M+1).
步骤C：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(邻甲氧苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物47.4)
将化合物47.3溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物85mg。LCMS ESI(+)m/z:699.5(M+1).
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(2-甲氧基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物47.5)
将化合物47.4(40mg)溶于1ml甲醇中，加入三甲基硅基重氮甲烷(3eq)，在常温下搅拌30分钟。加入适量的乙酸淬灭，旋干，加入5ml的稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相旋干即可。LCMS ESI(+)m/z:713.5(M+1).
步骤E：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲氧基(2-羟基苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物47)
将化合物47.5(30mg)溶于DCM中，在-40度下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在0度下搅拌30分钟后在-40度下加水淬灭反应。用EA萃取3次，合并有机相，干燥旋干，纯化得目标产物15mg。LCMS ESI(+)m/z:609.5(M+1).1H-NMR(400MHz,DMSO),δ10.57(s,1H),9.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.88(s,1H),7.78(s,2H),7.67(m,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,1H),5.96(m,2H),4.80(m,1H),3.77(d,J＝12.4Hz,3H),3.30(m,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝14,J＝9.4,1H).
实施例48
Figure BDA0001617513690000591
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((甲基(4-羟基-3-氯苯基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
采用实施例11中完全相同的步骤，将“间甲氧基磷酸二乙酯”替换为“4-甲氧基-3-氯磷酸二乙酯”制备出实施例48。LCMS ESI(+)m/z:628.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.15(s,1H),9.21(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H),7.79-7.82(m,4H),7.68(m,2H),7.57(t,J＝8Hz,1H),7.15(dd,J＝7.6Hz,4.0Hz,1H),4.79(m,1H),3.30(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),1.99(d,J＝13.2Hz,3H).
实施例49
Figure BDA0001617513690000601
(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
Figure BDA0001617513690000602
步骤A：2,6-二氯-4-(((苯并呋喃-6-基)(乙氧基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸甲酯(化合物49.1)
将100mg的2,6-二氯-4-乙炔基苯甲酸甲酯溶于1.5ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.7ml的2mol/L的异丙基氯化镁，搅拌20分钟；将化合物24.3溶于0.5ml的四氢呋喃并加入，反应20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(100mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:437.1(M+1).
步骤B：2,6-二氯-4-((羟基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙炔基)苯甲酸(化合物49.2)
将化合物49.1(100mg)和碘化锂(100mg)溶于2ml吡啶中氮气保护，在120度搅拌3个小时，冷却旋干，加入10ml的1mol/L的稀盐酸溶液，用30ml的乙酸乙酯分3次萃取，合并有机相，旋干无需纯化。
步骤C：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙炔基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物49.3)
将化合物49.2溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物85mg。LCMS ESI(+)m/z:710.1(M+1).
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-((羟基(苯并呋喃-6-基)磷酰基)乙炔基)苯甲氨基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物49)
将化合物49.3(30mg)溶于DCM中，在-40度下加入1mol/L的三溴化硼(10eq)，在0度下搅拌30分钟后在-40度下加水淬灭反应。用EA萃取3次，合并有机相，干燥旋干，纯化得目标产物15mg。LCMS ESI(+)m/z:620.0(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.19(d,J＝8Hz,1H),8.17(s,1H),7.98(d,J＝248Hz,1H),7.86(s,1H),7.79-7.76(m,2H),7.55-7.66(m,3H),7.57(t,J＝8Hz,1H),7.07(s,1H),4.79(m,1H),3.30(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.02(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H).
实施例50
Figure BDA0001617513690000621
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(1-羟基2-(羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000622
步骤A：2，6-二氯-4-(1-羟基2-(甲氧基(3-甲氧基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酸甲酯(化合物50.1)
称取300mg甲基(3-甲氧基苯基)膦酸乙酯溶于10ml干燥四氢呋喃中，氮气保护，冰浴下，加入1.1mL(2M)的LDA，在冰浴下搅拌1小时后，加入419mg的2，6-二氯-4-甲酰基苯甲酸甲酯，在常温下搅拌2小时，饱和NH4Cl在冰浴下淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，柱纯化得到产物(100mg，23％)。LCMS ESI(+)m/z:432.8。
步骤B：2，6-二氯-4-(1-羟基2-(羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酸(化合物50.2)
将化合物50.1(100mg)溶于8ml二氯甲烷中氮气保护，-40℃下，加入1mL的三溴化硼，-40℃下搅拌4个小时，加入10ml的水淬灭，用20ml的二氯甲烷分3次萃取，合并有机相，旋干无需纯化，粗品70mg。LCMS ESI(+)m/z:390.8(M+1)。
步骤C：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(1-羟基2-(羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物50.3)
将化合物50.2溶于DMF中，加入(2s)-2-氨基-3-(3，5-(二甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(2eq)，后加入DIPEA(10eq)，HATU(2.5eq)。在常温下搅拌4h，加入10ml稀盐酸溶液，用EA萃取3次，合并有机相，旋干。用反相制备纯化，45度减压旋干得目标产物40mg。LCMSESI(+)m/z:705.7
(M+1).
步骤D：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(1-羟基2-(羟基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物50)
将化合物1.3溶于2ml的甲醇和0.3mL的水中，冰浴下加入2eq的一水合氢氧化锂，室温下搅拌1h,1N的盐酸调节pH＝6，20mL乙酸乙酯旋分3次萃取，水洗，干燥，旋蒸，反相制备，冻干的产物5mg。LCMS ESI(+)m/z:583.6(M+1)；
1H-NMR(400MHz,CD3OD-d4)δ7.95(s,1H),7.86(d,J＝5.6Hz,1H),7.73(d,J＝4.8Hz,1H)，7.62(t,J＝5.2Hz,1H)，7.31(m,2H),7.26(s,2H)，7.21(dd,J＝5.2Hz,J＝5.2Hz,1H)，7.08(d,J＝8.4Hz,1H)，6.96(t,J＝5.2Hz,1H)，5.10(m,1H),4.91(m,1H),3.50(dd,J＝3.2Hz,J＝3.2Hz,1H),3.22(dd,J＝2.8Hz,J＝3.2Hz,1H),3.29(s,3H),2.39(m,2H)。
实施例51
Figure BDA0001617513690000641
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(2-(羟基(间羟基苯基)磷酰基)乙烯基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000642
将化合物32溶于5ml的四氢呋喃中，加入LiOH水溶液1ml，室温搅拌5h，旋干，纯化得产物。LCMS ESI(+)m/z:599.4(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.73(s,1H),9.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,2H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.31(m,2H),7.16(m,2H),7.02(m,2H),6.98(m,1H),4.78(m,1H),3.15(s,3H),3.03(m,1H).
实施例52
Figure BDA0001617513690000643
(S,E)-2-(4-(2-(二(3-羟基苯基)膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000651
步骤A:(E)-4-(2-(二(3-甲氧基苯基)膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸甲酯(化合物52.1)
1g化合物32.2，溶于20ml THF，降温至0度，加入5当量间甲氧基苯基溴化镁溶液，室温搅拌4h，除去THF，纯化得产物。
步骤B：(E)-4-(2-(二(3-羟基苯基)膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸(化合物52.2)
160mg化合物52.1，溶于10ml CH2Cl2，降温至0度，加入BBr3，反应2h后，加入水，用EA萃取后干燥，旋干得产物。
步骤C:(S,E)-2-(4-(2-(二(3-羟基苯基)膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物52.3)
50mg化合物52.2，(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐40mg和DIPEA 40mg溶于DMF 5ml，加入HATU 60mg，搅拌过夜，除去DMF，纯化得产物。
步骤D：(S,E)-2-(4-(2-(二(3-羟基苯基)膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物52)
15mg化合物52.3溶于1ml THF,加入LiOH水溶液0.2ml，搅拌0.5h，除去溶剂，纯化得产物。LCMS ESI(+)m/z:675.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.81(s,2H),7.87(s,1H),7.89(s,2H),7.86(s,1H),7.58(t,1H),7.76(d,J＝4.6Hz,2H),7.66(m,2H),7.51(t,1H),7.34(m,3H),7.13(m,4H),6.94(d,J＝4.4Hz,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.01(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H)。
实施例53
Figure BDA0001617513690000661
(S,E)-2-(4-(2-(二(3-羟基苯基)膦酰基)乙基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000662
12mg化合物52溶于0.5ml MeOH,加入10％钯碳1mg，通入H2，反应3h，过滤，纯化得产物。LCMS ESI(+)m/z:677.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ10.63(s,2H),8.67(s,1H),8.59(d,J＝8.4Hz,1H),8.50(d,J＝8Hz,1H),8.40(t,1H),8.18(s,2H),8.16(m,3H)，8.01(m,5H),7.75(dd,J＝10Hz,2Hz,2H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.01(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.81(m,2H),2.11(m,2H).
实施例54
Figure BDA0001617513690000671
(S,E)-2-(4-(2-(4-羟基苯基)膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例32的完全相同的方法用来制备实施例54，其中对甲氧基溴化镁取代间甲氧基溴化镁。LCMS ESI(+)m/z:629.5(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.15(d,J＝8Hz,1H),7.87(s,1H),7.73(t,3H),7.60(d,J＝6Hz,1H),7.58(d,J＝7.2Hz,1H),7.58(t,1H),7.18(m,3H),6.91(dd,J＝10.4Hz,2Hz,2H),4.80(m,1H),3.92(m,2H),3.3(m,2H),3.12(s,1H),1.26(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例55
Figure BDA0001617513690000672
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(1-羟基2-(甲基(苯并呋喃-3-基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000673
步骤A：二甲基(苯并呋喃-3-基)氧膦(化合物55.1)
将100mg的甲基(苯并呋喃-3-基)膦酰氯溶于2ml四氢呋喃中，氮气保护，并在0度下加入0.7ml的3mol/L的甲基基溴化镁，搅拌20分钟。用1mol/L的稀盐酸溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，旋干，纯化得产物(100mg，60％)。LCMS ESI(+)m/z:195.1(M+1).
步骤B：(2s)-2-(2，6-二氯-4-(1-羟基2-(甲基(苯并呋喃-3-基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物55)
采用实施例50中完全相同的步骤，将“甲基(3-甲氧基苯基)膦酸乙酯”替换为“二甲基(苯并呋喃-3-基)氧膦”制备出化合物55。
LCMS ESI(+)m/z:638.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.09(d,J＝8Hz,1H),8.16(s,1H),8.01(t,J＝8Hz,1H)，7.87(s,1H),7.77-7.82(m,2H),7.68(m,2H),7.57(t,J＝8Hz,1H),7.38(s,2H),7.05(dd,J＝7.6Hz,4.0Hz,1H),4.90(m,1H),4.77(m,1H),3.30(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.03(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.40(m,2H),1.80(d,J＝13.2Hz,3H).
实施例56
Figure BDA0001617513690000681
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(异丙基(3-羟基苯基)磷酰基)乙基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例21的完全相同的方法用来制备实施例56，其中异丙基格氏试剂取代乙基格氏试剂。LCMS ESI(+)m/z:626.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.76(s,1H),9.03(d,J＝8Hz,1H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.31-7.35(m,3H),7.12-7.17(m,2H),6.94(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(m,1H),3.29(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.01(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),2.74(m,1H),2.50(m,1H),2.29(m,2H),2.07(m,1H),1.10(dd,J＝16Hz,7.0Hz,3H),0.88(dd,J＝16Hz,7.0Hz,3H).
实施例57
Figure BDA0001617513690000691
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(环丙基(3-羟基苯基)磷酰基)乙烯基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0001617513690000692
步骤A:(E)-4-(2-(3-甲氧基苯基)氯膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸甲酯(化合物57.1)
1g化合物32.3，溶于20ml SOCl2，80度加热3小时，浓缩得产物。
步骤B：(E)-4-(2-(3-甲氧基苯基)环丙基膦酰基乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸甲酯(化合物57.2)
10毫升1M环丙基氯化镁的THF溶液，加入0.5g氯化铈，再加入1g化合物57.1，室温反应1h后加氯化铵溶液淬灭，萃取纯化后得产物。
步骤C：(E)-4-(2-((3-羟基苯基)环丙基膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯甲酸(化合物57.3)
160mg化合物57.2，溶于10ml CH2Cl2，降温至0度，加入BBr3，反应2h后，加入水，用EA萃取后干燥，旋干得产物。
步骤D:(S,E)-2-(4-(2-(3-羟基苯基)环丙基膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯(化合物57.4)50mg化合物57.3，(2s)-2-氨基-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐40mg和DIPEA 40mg溶于DMF 5ml，加入HATU 60mg，搅拌过夜，除去DMF，纯化得产物。
步骤E：(S,E)-2-(4-(2-(3-羟基苯基)环丙基膦酰基)乙烯基)-2,6-二氯苯酰胺)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸(化合物57)
15mg化合物57.4溶于1ml THF,加入LiOH水溶液0.2ml，搅拌0.5h，除去溶剂，纯化得产物。LCMS ESI(+)m/z:622.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),9.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.82(s,2H),7.78(d,J＝8Hz,2H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.17-7.37(m,5H),6.96(m,1H),4.79(m,1H),3.30(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.04(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),1.25(m,1H),0.66-0.89(m,4H).
实施例58
Figure BDA0001617513690000711
(2s)-2-(2，6-二氯-4-(甲基(3-羟基苯基)磷酰基)乙烯基)苯甲酰胺基)-3-(3-(甲磺酰基)苯基)丙酸
制备实施例57的完全相同的方法用来制备实施例58，其中甲基格氏试剂取代环丙基格氏试剂。LCMS ESI(+)m/z:596.1(M+1).
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),9.14(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.78(m,3H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.58(t,J＝7.6Hz,1H),7.38(m,1H),7.25(d,J＝20Hz,2H),7.15-7.18(m,2H),6.96(m,1H),4.79(m,1H),3.30(dd,J＝14Hz,J＝4.4Hz,1H),3.15(s,3H),3.04(dd,J＝14Hz,10.4Hz,1H),1.73(d,,J＝13.2Hz 3H).
细胞粘和抑制实验：
使用人类T淋巴细胞株Jurkat(ATCC TIB-152)进行T-细胞粘附试验：在PBS中将山羊Anti-Human IgG(Fc specific)(Sigma I8885)稀释至10μg/ml，在4℃每孔100uL/96孔板培育12小时.倾倒掉孔板中的液体，用200uL 1％的BSA在37℃封闭90分钟，再用用PBS洗板3次。每孔加入50uL的1ug/mL的ICAM-1(含0.1％BSA，0.01％Tween20)，在37℃培育3小时。用assay的缓冲液(20mM HEPES pH 7.6,140mM NaCl,1mM MgCl2,1mM MnCl2,0.2％glucose)洗板3次。
Jurkat细胞仪100-G离心处理，重新将细胞混悬入37℃的assay的缓冲液(20mMHEPES pH 7.6,140mM NaCl,1mM MgCl2,1mM MnCl2,0.2％glucose)，每mL的细胞悬浮液中加入2μl 1mM of BCECF-AM。在37℃培育30分钟，培育过程中，每10分钟搅拌一次。培育完后，细胞用37℃的assay缓冲液洗一下。将细胞悬浮到6x106/mL的浓度。
在测定缓冲液中将抑制剂稀释至2X终浓度，并在室温下取50uL的化合物溶液和60uL的Jurkat细胞混合，在37℃培育30分钟。将100μL/孔的细胞和抑制剂加入到板中并在室温下培养1小时。用荧光仪测量总荧光度:ex:485；em:530；cutoff:530来测量总荧光度。将板用assay缓冲液洗一次，再用荧光仪测量荧光度:ex:485；em:530；cutoff:。得出结果绘成抑制-浓度关系图，并用标准方法计算出EC50。表一显示了用此办法测得的部分EC50值。
表一：细胞粘和抑制的EC50
实施例 EC50(nM) 实施例 EC50(nM)
1 30 21 7.3
2 9.4 22 22
3 8.5 23 61
4 11 24 10.2
5 22 25 63
6 17 26 23
7 7.2 27 NA<sup>*</sup>
8 6.2 28 NA<sup>*</sup>
9 11.8 29 NA<sup>*</sup>
10 78 30 7.2
11 13.5 31 7.1
12 29 32 3.7
13 29 33 10.8
14 8.5 34 12.5
15 1.8 35 3.8
16 7.2 36 30
17 15 37 >1000
18 NA<sup>*</sup> 38 24
19 230 39 NA<sup>*</sup>
20 NA<sup>*</sup> 40 NA<sup>*</sup>
表一(继续)
实施例 EC50(nM) 实施例 EC50(nM)
41 NA 51 4.2
42 150 52 74
43 69 53 22
44 NA<sup>*</sup> 54 9.6
45 >1000 55 19
46 >1000 56 63
47 340 57 5.3
48 6.8 58 1.9
49 10.8
50 16
*NA:没有数据
实施例：制剂
实施例11所得到的化合物，5.0g加入90mL的无菌生理盐水中，加入0.7g的NaOH，搅拌得到透明溶液；向以上得到的溶液中加入NaH2PO4饱和水溶液，直到溶液的pH在6.75-7.25之间。向得到水溶液加入无菌生理盐水，直到总体积达到100.0mL。向以上溶液通氮气，鼓泡1小时，所得溶液密封，放在5℃避光保存。分装到一次性使用的滴眼液袋中，每个含60mL的制剂溶液。根据具体化合物性质和使用要求的需要，该制剂的方法和具体比例还可按需调整。

Claims (13)

1.一种含磷化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000011
R1选自烷基、芳基、苄基及芳基衍生物、苄基衍生物；R2选自羟基、烷基、氢、烷氧基；n选自0和1；
X选自碳、氧、氮；在X中，当其为碳时，此处为-CH2-，或-C(R1R2)-,其中，R1、R2为相同或不相同的烷基，苄基，芳香基团，羟基，烷氧基，卤素；在X中，当其为氮时，此处为-NH-，或-N(RN)-，其中，RN为烷基、苄基、芳香基团；
Z选自羰基、亚烷基、磺酰基、氮、氧、硫；在Z中，当其为氮时，此处为-NH-，或-N(RN)-，其中，RN为烷基、苄基、芳香基团；
R3为苯环上任一或任几取代的氢、卤素；
Y选自碳、氧、氮；在Y中，当其为碳时，此处为-CH2-，或-C(R1R2)-,其中，R1、R2为相同或不相同的烷基、苄基、芳香基团、卤素；在Y中，当其为氮时，此处为-NH-，或-N(RN)-，其中，RN为烷基、苄基、芳香基团；
R4选自烷基、芳基、苄基及芳基衍生物、苄基衍生物；
R5为氢；G1和G2所代表的取代基团呈间位、对位或邻位的设置于苯环上；
上述衍生物指在芳香环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、芳基、烷基磺酰基、苯基磺酰基。
2.如权利要求1所述的一种含磷化合物，其特征在于：
所述芳基及芳基衍生物选自苯基及其衍生物、萘基及其衍生物，或所述芳基及芳基衍生物被N杂或O杂环苯基及其衍生物、N杂或O杂环萘基及其衍生物所替代；
其中，所述衍生物指在苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、芳基、烷基磺酰基、苯基磺酰基。
3.如权利要求1所述的一种含磷化合物，其特征在于：
所述R4被如下结构所示的基团所替代：
Figure FDA0002531484040000021
n选自0-5的整数；
所述A选自硫、CH2、NH、氧；
所述R42选自芳基、烷基、烷基氨基、烷基磺酰胺基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基；
其中，所述芳基选自6-12元的芳香基及其衍生物、5-12元的芳香环上，任一或任几个碳原子为氧、氮、硫替代的杂芳基；
其中，所述衍生物指在芳香环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基、磺酰基、烷基磺酰基、苯基磺酰基；
所述杂芳基上还可以具有-N-R422的结构；
所述R422为磺酰基、烷基磺酰基、烷基、羟基；
所述环烷基为3-12元的环烷基；
所述取代的环烷基为环上任一或任几取代的磺酰基、烷基磺酰基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、硝基；
所述杂环烷基为3-12元的杂环烷基上，任一或任几个碳原子为氧、氮、硫替代；所述杂环烷基上的碳原子还可以为C＝O基和/或SO和/或SO2基替代；
所述取代的杂环烷基为环上任一或任几磺酰基、烷基磺酰基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、硝基、羰基取代的氮杂、氧杂或硫杂的四元、五元、六元或七元环的环烷基；
所述取代的杂环烷基上还可以具有-N-R422的结构；
所述R422为磺酰基、烷基磺酰基、烷基、羟基；
所述R42还可以选自如下结构的基团：
Figure FDA0002531484040000031
所述R43、R44为相同或不相同的烷基、羟基、羟基取代的碳原子数不大于5的烷基；
G3为3-12元的环；
所述G3的环上的碳原子还可以部分的为氧、硫、氮、C＝O或SO2替代；
所述R45为G3环上一个或几个取代的烷基、羟基、烷氧基、氨基。
4.如权利要求1所述的一种含磷化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000032
其中，X-Z键被C1…C2所代替；
所述C1…C2为CH2-CH2、CH＝CH或C≡C。
5.如权利要求4所述的一种含磷化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000041
R11选自苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基；
R2选自羟基、烷基、烷氧基；
Y1选自氢、烷基；
R41选自苯环上任一或任几取代的氢、烷基、烷氧基、烷基磺酰基、苯基磺酰基、卤素、氨基、氰基、羟基、硝基；
R5为氢。
6.一种含磷化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000042
其中，X1、X2、X3、X4选自氢、烷基、卤素、羟基、烷氧基，其他取代基的定义与权利要求5相同。
7.如权利要求1-4任一所述的一种含磷化合物的制备方法，其特征在于：
由化合物A和化合物C，依次与化合物B上的活性点位进行反应后获得；
其中，所述化合物A为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000051
所述化合物C为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000052
所述化合物B为如下结构所示的化合物：
Figure FDA0002531484040000053
其中，L1与L1’以及L2与L2’分别为一对可相互发生反应的活性基团，在反应的过程中，通过L1与L1’反应，L2与L2’反应获得目标产物；
所述L1与L1’以及L2与L2’之间发生取代反应；
所述L1为卤素；
所述L1’为炔基；
所述L2为氨基；
所述L2’为羟基。
8.如权利要求7所述的一种含磷化合物的制备方法，其特征在于：
所述化合物A与化合物C的摩尔比为1:0.1-10；
所述化合物C与化合物B的摩尔比为1:0.1-10。
9.如权利要求7所述的一种含磷化合物的制备方法，其特征在于，具体工艺步骤如下所示：
步骤一、于磷酸二酯的衍生物中加入卤化试剂，于50-100℃的温度下反应1-5小时后，直接旋干获得底物1；
步骤二、于0℃以下的温度下，于乙炔基苯甲酸甲酯的衍生物中，依次加入格氏试剂和底物1，反应0.1-2小时，用酸溶液淬灭反应，萃取有机相旋干，得到中间产物1；
步骤三、将中间产物1和脱酯基试剂，在100-150摄氏度的温度下反应2-5小时，加入酸溶液，萃取有机相旋干，得到中间产物2；
步骤四、于中间产物2中，依次加入L2为氨基的化合物C，碱性催化剂，在20-50℃的温度下，反应1-10小时，用酸溶液淬灭反应，萃取有机相旋干，得到含炔基的含磷化合物。
10.如权利要求9所述的一种含磷化合物的制备方法，其特征在于：
所述含炔基的含磷化合物经还原反应后,可得到相应的含磷产物。
11.一种含磷化合物的应用，其特征在于：如权利要求1-6任一所述的含磷化合物在用于制备一种免疫细胞迁徙抑制剂中的应用。
12.如权利要求11所述的一种含磷化合物的应用，其特征在于：所述免疫细胞迁徙抑制剂为包含有如权利要求1-6任一所述的含磷化合物的眼药水。
13.如权利要求12所述的一种含磷化合物的应用，其特征在于：
所述的含磷化合物的眼药水的制备方法为：将如权利要求1-6任一所述的含磷化合物加入无菌生理盐水中后，加入氢氧化钠搅拌得到透明溶液；向以上得到的溶液中加入NaH2PO4饱和水溶液，直到溶液的pH在6.75-7.25之间，用无菌生理盐水定容后，向以上溶液通氮气，鼓泡0.1-5小时，所得溶液密封，放在5℃避光保存待用。
CN201810291023.0A 2017-06-27 2018-04-03 一种含磷化合物及其制备和应用 Active CN109134533B (zh)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18823397.7A EP3647315A4 (en) 2017-06-27 2018-05-21 COMPONENT CONTAINING PHOSPHORUS, ASSOCIATED PREPARATION AND USE
CA3092885A CA3092885C (en) 2017-06-27 2018-05-21 Phosphorus-containing compound and preparation and use thereof
JP2019539245A JP6949967B2 (ja) 2017-06-27 2018-05-21 リン含有化合物及びその製造並びにそれを用いた医薬品
AU2018291666A AU2018291666B2 (en) 2017-06-27 2018-05-21 Phosphorus-containing compound and preparation and use thereof
US16/606,774 US11325929B2 (en) 2017-06-27 2018-05-21 Phosphorus-containing compound and preparation and use thereof
PCT/CN2018/087629 WO2019001171A1 (zh) 2017-06-27 2018-05-21 一种含磷化合物及其制备和应用
KR1020197028357A KR102208639B1 (ko) 2017-06-27 2018-05-21 인 함유 화합물 및 이의 제조와 약제

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2017105026533 2017-06-27
CN201710502653 2017-06-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109134533A CN109134533A (zh) 2019-01-04
CN109134533B true CN109134533B (zh) 2020-08-11

Family

ID=64801570

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810291023.0A Active CN109134533B (zh) 2017-06-27 2018-04-03 一种含磷化合物及其制备和应用

Country Status (7)

Country Link
US (1) US11325929B2 (zh)
EP (1) EP3647315A4 (zh)
JP (1) JP6949967B2 (zh)
KR (1) KR102208639B1 (zh)
CN (1) CN109134533B (zh)
AU (1) AU2018291666B2 (zh)
CA (1) CA3092885C (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024104422A1 (en) * 2022-11-17 2024-05-23 Vivavision Biotech, Inc. Phosphorus-containing compounds for treating inflammatory bowel diesease

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1700923A (zh) * 2002-02-28 2005-11-23 田纳西大学研究基金会 多取代的选择性雄激素受体调节剂及其使用方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2609053C (en) * 2005-05-17 2017-04-25 Sarcode Corporation Compositions and methods for treatment of eye disorders
WO2012082568A1 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Allergan, Inc. Phosphorous derivatives as chemokine receptor modulators
CA3133264A1 (en) * 2013-03-06 2014-09-12 Allergan, Inc. Use of agonists of formyl peptide receptor 2 for treating ocular inflammatory diseases
KR101692578B1 (ko) * 2013-04-18 2017-01-03 삼진제약주식회사 레바미피드 또는 이의 전구체를 포함하는 안구건조증의 예방 또는 치료를 위한 경구용 약제학적 조성물
JP2014210747A (ja) 2013-04-19 2014-11-13 アンジェスＭｇ株式会社 細胞性免疫誘導能が改善された経口ワクチン

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1700923A (zh) * 2002-02-28 2005-11-23 田纳西大学研究基金会 多取代的选择性雄激素受体调节剂及其使用方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Design and one-pot synthesis of new α-aminophosphonates and antimicrobial activity;Zahra Rezaei, Soghra等;《Journal of Pharmaceutical Negative Results》;20111231;第2卷(第2期);第78-86页 *
治疗干眼症新药——利非斯特(1ifitegrast);陈本川等;《医药导报》;20170228;第36卷(第2期);第236页及第I-V页 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2020519563A (ja) 2020-07-02
EP3647315A1 (en) 2020-05-06
EP3647315A4 (en) 2020-10-28
CA3092885A1 (en) 2019-01-03
KR102208639B1 (ko) 2021-01-28
US20200131206A1 (en) 2020-04-30
AU2018291666B2 (en) 2020-05-21
AU2018291666A1 (en) 2019-12-12
CA3092885C (en) 2024-01-16
JP6949967B2 (ja) 2021-10-13
CN109134533A (zh) 2019-01-04
KR20190125370A (ko) 2019-11-06
US11325929B2 (en) 2022-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2003242542B2 (en) (IMIDAZOL-1-YL-METHYL)-Pyridazine as NMDA receptor blocker
CN104136032B (zh) 可用于抗菌治疗的三环类硼化合物
EA023775B1 (ru) Гидроксиметиларилзамещенные пирролотриазины в качестве ингибиторов alk1
CN109071554B (zh) 吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物
JP3118738B2 (ja) （チオ）ウレア誘導体
US9975856B2 (en) Process for the preparation of (E)-3-(4-((E)-2-(2-chloro-4-fluorophenyl)-1-(1H-indazol-5-yl)but-1-en-1-yl)phenyl)acrylic acid
WO2012142268A1 (en) Phenyl bicyclic methyl azetidine derivatives as sphingosine-1 phosphate receptors modulators
AU2020394597B2 (en) 1,2,4-oxadiazole derivatives as liver X receptor agonists
WO2020063854A1 (zh) 作为vap-1抑制剂的喹啉类衍生物
CN109134533B (zh) 一种含磷化合物及其制备和应用
WO2023139534A1 (en) Spirocyclic piperidinyl derivatives as complement factor b inhibitors and uses thereof
CN115304583A (zh) 靶向抑制clk2的5-吡啶-1h-吲唑类化合物及其应用
WO2019001171A1 (zh) 一种含磷化合物及其制备和应用
CA2819106C (en) Kat ii inhibitors
EP2528908B1 (en) Therapeutic agents for treatment of ocular hypertension
US9353079B2 (en) Solid forms of an alpha, omega di-substituted dihydroxy cyclopentyl compound and methods for the preparation and use thereof
KR20190036550A (ko) 폐 섬유증 치료용 조성물
JP3116256B2 (ja) （チオ）ウレア誘導体
US20120264718A1 (en) Bicyclic methyl amine derivatives as sphingosine-1 phosphate receptors modulators
CN110483437B (zh) 一种含五元环的化合物及其制备和应用
CN101747253B (zh) 三取代的手性内酰胺类衍生物及其制备方法和用途
US20140235592A1 (en) Substituted 6-methoxy-4-amino-n-phenyl-2-naphtamides as sphingosine receptor modulators
WO2014138075A1 (en) Phosphonic acid compounds as sphingosine-1-phosphate receptor modulators

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1261734

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 325006, Room 4020, Building B, Gene Medicine Valley North District, Ouhai District, Wenzhou City, Zhejiang Province

Patentee after: Weimu Biotechnology (Zhejiang) Co.,Ltd.

Address before: 201203 rooms 207 and 209, building 5, No. 334 Edison Road, China (Shanghai) pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai

Patentee before: VIVAVISION BIOPHARMA (SHANGHAI) Co.,Ltd.