CN109060986B

CN109060986B - 栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法

Info

Publication number: CN109060986B
Application number: CN201810980030.1A
Authority: CN
Inventors: 聂毅; 陈昂; 郑双双; 白敬端; 海彬; 张赛
Original assignee: Nanyang Tairui Biotechnology Co ltd; Zhengzhou Institute of Emerging Industrial Technology
Current assignee: Nanyang Tairui Biotechnology Co ltd; Zhengzhou Institute of Emerging Industrial Technology
Priority date: 2018-08-27
Filing date: 2018-08-27
Publication date: 2021-05-14
Anticipated expiration: 2038-08-27
Also published as: CN109060986A

Abstract

本发明提供了一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，以一定比例的甲醇、石油醚混合溶剂溶解栀子油，采用超声清洗机将混合溶液充分混匀，将混匀的溶液迅速进行多步温差处理。将多步温差法处理得到的溶液上清液进行过滤处理，将过滤后的上清溶液进行旋转蒸发处理，再用丙酮溶解旋转蒸发得到样品，最后采用高效液相色谱对得到的溶液进行测定。本发明方法操作简单、高效且环保；该方法灵敏度高、重现性好；采用超声处理，样品分散更加均匀；采用多步温差法可以快速缩短样品的处理时间，同时也可以较为温和地处理样品，减少样品的损失。

Description

栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法

技术领域

本发明涉及植物油中有效成分检测领域，具体涉及一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法。

背景技术

栀子果油是一种从茜草科植物栀子的果食中提取的天然植物油。相对于其他植物油，栀子油含有丰富的不饱和脂肪酸，约占其脂肪酸含量的44%；此外，栀子油还含有丰富的角鲨烯。角鲨烯是一种开链三萜类化合物，最早源于鲨鱼肝脏，作为营养剂可以提高肝功能，同时兼具提升机体免疫力、抗氧化、抗衰老等保健功效，是一种具有高附加值的食用油。

目前，现有的植物油角鲨烯检测多采用国家粮食局发布的行业标准方法（LS/T6120-2017），该方法的实施过程包括皂化反应、反复萃取、多次洗涤、氮吹浓缩等步骤，该检测方法存在一些问题亟待解决：1）操作复杂繁琐：需要控制皂化反应，如果皂化反应不完全，会引入油脂杂质；2）耗费较多时间：皂化反应和多步萃取以及多次洗涤步骤较为耗时；3）造成角鲨烯损失：反复萃取过程会造成角鲨烯损失；4）污染环境且成本较高。

基于上述问题，本发明采用超声方法，利用超声的空化效应能够将样品温和地充分混匀，后续采用多步温差处理法，能够快速、稳定除去样品中的饱和及不饱和脂肪酸，提供了一种省时、简便、有效的检测栀子油中角鲨烯含量的方法。

发明内容

本发明旨在提供一种快速、简便、灵敏度高、重现性好、成本低的栀子油中角鲨烯样品制备及检测方法。

实现本发明的技术方案是：一种栀子油中角鲨烯前处理方法，步骤如下：

（1）将栀子油用混合溶剂溶解，并利用超声混合均匀；

（2）将步骤（1）混合溶液采用多步温度处理，液氮处理样品5-10min，常温处理样品10-20min，4℃处理样品5-10min，-20℃处理样品20min；

（3）将步骤（2）处理后的溶液进行过滤，滤液进行旋转蒸发处理，得到样品；

（4）将步骤（3）的样品利用丙酮复溶，然后过滤，得到角鲨烯处理液。

所述步骤（1）中的混合溶剂为甲醇和石油醚，混合溶剂中甲醇所占体积比为50%-80%，栀子油和混合溶剂按照1：40的料液比（g/ mL）混合。

所述步骤（1）中超声混合的功率为800-1000W，超声时间为2-5min；超声反应的空化作用可以快速地使样品均匀分散在两相中。

所述步骤（3）中采用过滤或离心的方式进行过滤，旋转蒸发的温度为30-60℃，真空度为0.08~0.09MPa，时间为5-10min。

所述步骤（4）中采用0.22μm的滤膜进行过滤。

利用高效液相色谱法对栀子油中角鲨烯含量进行测定。

所述高效液相色谱法的检测条件为：色谱柱为Waters symmetry C18 5µm，流动相为乙腈，流速为2mL/min，柱温度为30±5℃，进样量为10µL，检测波长为195nm。

对超声后的混合溶液采用液氮超低温处理-常温处理-4℃处理--20℃处理，该多梯度的温度差异处理流程，其目的在于较低的温度可以除去样品中的饱和及不饱和脂肪酸，防止脂肪酸对液相色谱柱的污染，相比于单一的低温处理方法，采用多步温差法可以快速缩短样品的处理时间，同时也可以较为温和地处理样品，减少样品的损失。

本发明的有益效果是：①该方法操作简单、高效且环保；②该方法灵敏度高、重现性好；③采用超声处理，样品分散更加均匀；④采用多步温差法可以快速缩短样品的处理时间，同时也可以较为温和地处理样品，减少样品的损失。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明角鲨烯标准曲线图。

图2为角鲨烯标样色谱图。

图3为栀子油中角鲨烯色谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

仪器设备：

1）高效液相色谱仪，配制：脱气泵、四元泵、自动进样器、柱温箱和紫外检测器(美国waters公司）

2）超声清洗机（江苏昆山）

3）电子天平（梅特勒）

4）旋转真空蒸发器：ZFQ-3型(上海亚荣生化仪器厂）

5）各种实验室通用玻璃器皿

试剂：

1）角鲨烯标品（中检所）

2）甲醇（色谱级）

3）乙腈（色谱级）

4）石油醚（色谱级）

5）丙酮（色谱级）

工作标准曲线制作：

配制浓度分别为20，40，60，80，100mg/L的角鲨烯标准液，采用高效液相色谱仪进行检测。分析条件：流动相为乙腈，流速为2mL/min，柱温为30+5℃，检测波长为195nm，进样量为10 µL，色谱柱为C18（5µm，4.6*250mm）。检测结果以标液浓度为横坐标，检测峰面积为纵坐标，经线性拟合建立标准曲线。角鲨烯浓度与峰面积的线性回归方程为 y=12484x -65379，R²=0.9991。

实施例1

一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，步骤如下：

（1）采用精密天平称取0.500g山栀子果油，加入甲醇-石油醚（v:v=1：1）混合溶剂20mL，将得到的溶液进行超声处理，超声功率为1000W，超声时间为2min；

（2）将超声后的样品迅速进行液氮冷冻，冷冻时间为5min，将液氮冷冻后的样品放置于室温10min，然后将样品在4℃条件下进行处理，时间为5min；紧接着将样品转入到-20℃温度下进行冷藏处理，处理时间为20min；

（3）对-20℃冷藏的样品进行旋蒸，旋蒸温度为30℃，真空度为0.08MPa，旋蒸时间为10min。用5mL丙酮充分溶解旋蒸后的样品；

（4）吸取溶解后的样品，用0.22µm的滤膜过滤，利用标准曲线法对滤液进行液相测定，样品终浓度为0.45mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.45%。

实施例2

一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，步骤如下：

（1）采用精密天平称取0.500g 山栀子果油，加入甲醇-石油醚（v:v=4：1）混合提取液20mL，将得到的溶液进行超声处理，超声功率为800W，超声时间为5min；

（2）将超声后的样品迅速进行液氮冷冻，冷冻时间为8min，将液氮冷冻后的样品放置于室温15min，然后将样品在4℃条件下进行处理，时间为8 min；紧接着将样品转入到-20℃温度下进行冷藏处理，处理时间为20min；

（3）对-20℃冷藏的样品进行旋蒸，旋蒸温度为40℃，真空度为0.085MPa，旋蒸时间为7min；

（4）用5mL 丙酮充分溶解旋蒸后的样品。吸取溶解后的样品，用0.22µm的滤膜过滤，利用标准曲线法对滤液进行液相测定，样品终浓度为0.44mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.44%。

实施例3

一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，步骤如下：

（1）采用精密天平称取0.500g精炼山栀子油，加入甲醇-石油醚（v:v=3：1）混合提取液20mL，将得到的溶液进行超声处理，超声功率为850W，超声时间为4min；

（2）将超声后的样品迅速进行液氮冷冻，冷冻时间为10min，将液氮冷冻后的样品放置于室温20min，然后将样品在4℃条件下进行处理，时间为10min；

（3）紧接着将样品转入到-20℃温度下进行冷藏处理，处理时间为20min。对-20℃冷藏的样品进行旋蒸，旋蒸温度为60℃，真空度为0.09MPa，旋蒸时间为5min；

（4）用5mL 丙酮充分溶解旋蒸后的样品。吸取溶解后的样品，用0.22µm的滤膜过滤，利用标准曲线法对滤液进行液相测定，样品终浓度为0.36mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.36%。

实施例4

一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，步骤如下：

（1）采用精密天平称取0.500g精炼山栀子油，加入甲醇-石油醚（v:v=2：1）混合提取液20mL，将得到的溶液进行超声处理，超声功率为900W，超声时间为3min；

（2）将超声后的样品迅速进行液氮冷冻，冷冻时间为10min，将液氮冷冻后的样品放置于室温20min，然后将样品在4℃条件下进行处理，时间为10min，紧接着将样品转入到-20℃温度下进行冷藏处理，处理时间20min；

（3）对-20℃冷藏的样品进行旋蒸，旋蒸温度为50℃，真空度为0.085MPa，旋蒸时间为5min。用5mL 丙酮充分溶解旋蒸后的样品；

（4）吸取溶解后的样品，用0.22µm的滤膜过滤，利用标准曲线法对滤液进行液相测定，样品终浓度为0.38mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.38%。

实施例5

一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，步骤如下：

（1）采用精密天平称取0.500g水栀子果油，加入甲醇-石油醚（v:v=1：1）混合提取液20mL，将得到的溶液进行超声处理，超声功率为850W，超声时间为4min；

（2）将超声后的样品迅速进行液氮冷冻，冷冻时间为10min，将液氮冷冻后的样品放置于室温15min，然后将样品在4℃条件下进行处理，间为10min；紧接着将样品转入到-20℃温度下进行冷藏处理，处理时间为20min；

（3）对-20℃冷藏的样品进行旋蒸，旋蒸温度为52℃，真空度为0.086MPa，旋蒸时间为5min。

（4）用5mL 丙酮充分溶解旋蒸后的样品，吸取溶解后的样品，用0.22µm的滤膜过滤，利用标准曲线法对滤液进行液相测定，样品终浓度为0.41mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.41%。

实施例6

一种栀子油中角鲨烯前处理方法及检测方法，步骤如下：

（1）采用精密天平称取0.500g水栀子果油，精密加入甲醇-石油醚（v:v=3：1）混合提取液20mL，将得到的溶液进行超声处理，超声功率为800W，超声时间为5min；

（2）将超声后的样品迅速进行液氮冷冻，冷冻时间为10min，将液氮冷冻后的样品放置于室温20min，然后将样品在4℃条件下进行处理，时间为10min；紧接着将样品转入到-20℃温度下进行冷藏处理，处理时间为20min；

（3）对-20℃冷藏的样品进行旋蒸，旋蒸温度为40℃，真空度为0.08MPa，旋蒸时间为8min。用5mL 丙酮充分溶解旋蒸后的样品；

（4）吸取溶解后的样品，用0.22µm的滤膜过滤，利用标准曲线法对滤液进行液相测定，样品终浓度为0.42mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.42%。

对比例1

采用精密天平称取0.500g 山栀子果油，按照国家粮食局发布的行业标准方法（LS/T 6120-2017）对样品进行处理检测，样品终浓度为0.20mg/mL，经计算转换，样品角鲨烯含量为0.40%。

对比例1与实施例1和实施例2相比较，操作步骤较为复杂并且在处理过程中，损失了样品中部分角鲨烯，造成了最终角鲨烯的检测含量要明显低于实施例1和实施例2，可见本发明公布的方法在操作和减少样品损失方面要优于传统的检测方法。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.栀子油中角鲨烯前处理方法，其特征在于步骤如下：

（1）将栀子油用混合溶剂溶解，并利用超声混合均匀；所述步骤（1）中的混合溶剂为甲醇和石油醚，混合溶剂中甲醇所占体积比为50%-80%，栀子油和混合溶剂按照1：40的料液比混合；

2.根据权利要求1所述的栀子油中角鲨烯前处理方法，其特征在于：所述步骤（1）中超声混合的功率为800-1000W，超声时间为2-5min。

3.根据权利要求1所述的栀子油中角鲨烯前处理方法，其特征在于：所述步骤（3）中采用过滤或离心的方式进行过滤，旋转蒸发的温度为30-60℃，真空度为0.08~0.09MPa，时间为5-10min。

4.根据权利要求1所述的栀子油中角鲨烯前处理方法，其特征在于：所述步骤（4）中采用0.22μm的滤膜进行过滤。

5.栀子油中角鲨烯的检测方法，其特征在于：利用高效液相色谱法对栀子油中角鲨烯含量进行测定，栀子油中角鲨烯利用权利要求1-4任一项所述的方法进行前处理。

6.根据权利要求5所述的栀子油中角鲨烯的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的检测条件为：色谱柱为Waters symmetry C18 5µm，流动相为乙腈，流速为2mL/min，柱温度为30±5℃，进样量为10µL，检测波长为195nm。