CN109060472A - 一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，包括：固定；脱水；浸蜡；包埋；修蜡切片；展片烤片；脱蜡；染色。本发明步骤简单，成本低，使草菇菌褶细胞壁、细胞核等重要结构适于荧光染料染色并被清晰观察，从而为草菇遗传学研究提供真实有力的结构学证据，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物组织学领域，特别涉及一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法。
背景技术
草菇(Volvariellavolvacea)是我国重要的栽培食用菌之一，具有重要的食药用的价值。
细胞是组成有机体形态和功能的基本单位，是生物体的生理功能及一切生命现象的基本单位。细胞形态学观察可使生物体的遗传、发育以及生理机能理论得到发展和证实。目前在草菇的相关研究中，在子实体细胞学层面对其进行结构的研究还比较少见，这一缺失的重要细胞学例证极大限制了草菇生理、病理和形态学的研究进程。
菌褶是担子菌子实体的重要组成部分，其上的担子是孢子生长发育的重要场所，因此对菌褶的显微观察是担子菌遗传及其生活史研究的重要方法之一。传统石蜡切片中，操作中一般涉及50-60℃左右的融蜡过程，对草菇细胞壁、细胞核、染色体等存在一定伤害，不适于进行荧光染色观察。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，该方法克服了传统石蜡切片不适于进行荧光染色的缺陷。
本发明提供了一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，包括：
(1)选取新鲜草菇菌褶组织作为切片的试验材料；将所选的试验材料切块，放入FAA固定液中于室温下固定；随后将经固定的试验材料脱水；
(2)将经脱水的试验材料置于乙醇与低熔点多聚蜡的混合溶剂中，放置在烘箱中直到乙醇挥发完全；待乙醇挥发后，继续放置12～18h；
(3)对包埋盒及经步骤(2)处理的试验材料进行预热，随后先在包埋盒中加入低熔点多聚蜡，再将试验材料夹入包埋盒中，室温下静置待低熔点多聚蜡完全凝固，将石蜡块取出，进行修蜡和切片；
(4)将步骤(3)得到的切片进行展片，待切片均匀展开后，用涂有粘片剂的载玻片进行捞片；将附着有切片的载玻片进行烤片，随后放入无水乙醇中脱蜡；
(5)向脱蜡后的载玻片滴加染色液进行染色，用PBS缓冲液冲洗，在载玻片中央滴入封片剂，用盖玻片封片，即可。
所述步骤(1)中的固定时间为16-20h。
所述步骤(1)中的脱水具体操作如下：用体积浓度为30％的乙醇冲洗1～2次，然后将试验材料放置于体积浓度为50％乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70％、85％、95％的乙醇中各处理30min，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min。
所述步骤(2)和(3)中的低熔点多聚蜡的制备方法如下：将聚乙二醇-400二硬脂酸酯(Polyethlene glycol-400distearate)和十六烷醇(1-hexadecanol)按照质量比9:1混合，于40℃烘箱中充分熔化制成。
所述步骤(2)中的乙醇与低熔点多聚蜡的体积比为1:1。
所述步骤(3)中在包埋盒中加入低熔点多聚蜡的液面高度为1-1.5cm。
所述步骤(3)中的切片厚度为8～10μm。
所述步骤(4)中的烤片温度为30～35℃，烤片时间为24～36h。
所述步骤(5)中的染色具体为：滴加1μg/ml DAPI(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚，4'，6-diamidino-2-phenylindole)染色30s。
得到的草菇菌褶组织切片置于荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下，使用激发波长405nm、发射波长488nm的荧光观察。
本发明采用低熔点多聚蜡代替传统石蜡，其熔点为35-37℃，与乙醇有良好的互溶性，具有与石蜡相同的切片性质，适于草菇荧光染色观察。
有益效果
本发明快捷、安全、实用，对材料细胞伤害小，得到的结果可操作性强、可重复率高、稳定可靠，荧光显微镜下观察切片荧光信号强、质量高、效果好、组织结构清晰。本发明不仅可用于研究、观察草菇菌褶及孢子细胞组织的形态结构变化，也为草菇生理、遗传和形态学研究提供可靠方法，还可广泛应用于其它大型真菌组织荧光观察实验中，具有较好的科研应用前景。
附图说明
图1为本发明方法的示意图；其中，a为材料固定；b为脱水；c为浸蜡于低熔点多聚蜡乙醇混合液中；d为浸蜡于纯低熔点多聚蜡液中；e1为组织材料包埋；e2为低温多聚蜡凝固；f为烤片后蜡带；
图2为利用本发明方法经DAPI染色后用蔡司LSM880型激光共聚焦显微镜拍摄的草菇开伞期(a、b)菌褶切片；其中，a为明场下拍摄图片，b为使用激发波长405nm，发射波长488nm下拍摄的荧光图片；→指向草菇孢子；指向细胞核；
图3为利用本发明方法经DAPI染色后用蔡司LSM880型激光共聚焦显微镜拍摄的草菇蛋形期菌褶切片；其中，a为明场下拍摄图片，b为使用激发波长405nm，发射波长488nm下拍摄的荧光图片；指向细胞核。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
(1)固定：选取新鲜草菇菌褶组织作为切片的试验材料；将所选的试验材料切成长为0.45～0.60cm的小块，放入FAA固定液中，于室温下固定16h。
(2)脱水：将经步骤(1)处理后的试验材料用体积浓度为30％的乙醇冲洗1～2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50％乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70％、85％、95％的乙醇中各处理30min，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min。
(3)浸蜡：将聚乙二醇-400二硬脂酸酯和十六烷醇按照9：1的质量比混合，于40℃烘箱中充分熔化制成低熔点多聚蜡。将经步骤(2)脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与低熔点多聚蜡的混合溶剂中，放置在40℃烘箱中直到乙醇挥发完全。待乙醇挥发后，将材料放置于纯低熔点多聚蜡中，40℃放置12h。
(4)包埋：首先对包埋盒及经步骤(3)处理的试验材料进行预热，预热温度为40℃，先在包埋纸盒中加入低熔点多聚蜡液，液面高度为1-1.5cm，将试验材料夹入包埋纸盒中，室温下静置待低熔点多聚蜡完全凝固，将石蜡块取出。
(5)修蜡与切片：对步骤(4)得到的低熔点多聚蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm。
(6)展片与烤片：将展片机进行预热，预热温度为25℃，将步骤(5)得到切片进行展片，待切片均匀展开后，用涂有粘片剂的载波片进行捞片；将附着有切片的载玻片放置在30-35℃的烘箱中进行烤片24h。
(7)脱蜡：将步骤(6)烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入无水乙醇脱蜡3次，每次2h。
(8)染色与封片：向经步骤(7)脱蜡后的载玻片滴加1μg/ml DAPI进行染色30s，用PBS缓冲液冲洗3次，在载玻片中央滴入封片剂，用盖玻片封片，置于荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下，使用激发波长405nm，发射波长488nm的荧光观察。不同生长时期的草菇菌褶切片荧光观察效果见图2和图3。
图2a表明，本发明的组织切片方法可清晰观察到开伞期草菇菌褶及其附着孢子；图2b表明经DAPI染色后可清晰的观察到孢子中细胞核的存在，由此证明该方法可成功适用于草菇菌褶切片的荧光染色观察。
图3a表明，本发明的组织切片方法可在明场中清晰观察到蛋形期草菇菌褶结构；图3b表明经DAPI染色后可清晰的观察到蛋形期草菇菌褶结构和减数分裂期的细胞核形态，由此证明该方法不仅可成功适用于草菇菌褶切片的细胞结构荧光染色观察，也可以清晰鉴别细胞核形态。利用ZenBlue软件测量草菇担子平均长度为20.80μm，担子纵切面面积为70.67μm2，减数分裂期细胞核大小为3.67μm2。
Claims (10)
1.一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，包括：
(1)选取新鲜草菇菌褶组织作为切片的试验材料；将所选的试验材料切块，放入FAA固定液中于室温下固定；随后将经固定的试验材料脱水；
(2)将经脱水的试验材料置于乙醇与低熔点多聚蜡的混合溶剂中，放置在烘箱中直到乙醇挥发完全；待乙醇挥发后，继续放置12～18h；
(3)对包埋盒及经步骤(2)处理的试验材料进行预热，随后先在包埋盒中加入低熔点多聚蜡，再将试验材料夹入包埋盒中，室温下静置待低熔点多聚蜡完全凝固，将石蜡块取出，进行修蜡和切片；
(4)将步骤(3)得到的切片进行展片，待切片均匀展开后，用涂有粘片剂的载玻片进行捞片；将附着有切片的载玻片进行烤片，随后放入无水乙醇中脱蜡；
(5)向脱蜡后的载玻片滴加染色液进行染色，用PBS缓冲液冲洗，在载玻片中央滴入封片剂，用盖玻片封片，即可。
2.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的固定时间为16-20h。
3.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的脱水具体操作如下：用体积浓度为30％的乙醇冲洗1～2次，然后将试验材料放置于体积浓度为50％乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70％、85％、95％的乙醇中各处理30min，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min。
4.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)和(3)中的低熔点多聚蜡的制备方法如下：将聚乙二醇-400二硬脂酸酯和十六烷醇按照质量比9:1混合，于40℃烘箱中充分熔化制成。
5.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的乙醇与低熔点多聚蜡的体积比为1:1。
6.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中在包埋盒中加入低熔点多聚蜡的液面高度为1-1.5cm。
7.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的切片厚度为8～10μm。
8.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的烤片温度为30～35℃，烤片时间为24～36h。
9.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中的染色具体为：滴加1μg/ml DAPI染色30s。
10.根据权利要求1所述的一种适于荧光染色的草菇菌褶组织切片的制备方法，其特征在于：得到的草菇菌褶组织切片置于荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下，使用激发波长405nm、发射波长488nm的荧光观察。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110426259A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-08 | 武汉赛维尔生物科技有限公司 | 聚乙二醇用于动物组织切片油脂染色的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1314999A (zh) * | 1998-08-26 | 2001-09-26 | 赛福伦公司 | 调节多谱系激酶蛋白 |
| CN102967493A (zh) * | 2012-10-27 | 2013-03-13 | 山西农业大学 | 植物组织快速石蜡制片的方法 |
| CN103528872A (zh) * | 2013-10-14 | 2014-01-22 | 中国农业大学 | 一种植物根组织活体组织切片的荧光染色技术及其应用 |
| CN105832738A (zh) * | 2011-04-20 | 2016-08-10 | 国防教育研究基金会 | 无/低副作用的抗结核病药物复方 |
-
2018
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1314999A (zh) * | 1998-08-26 | 2001-09-26 | 赛福伦公司 | 调节多谱系激酶蛋白 |
| CN105832738A (zh) * | 2011-04-20 | 2016-08-10 | 国防教育研究基金会 | 无/低副作用的抗结核病药物复方 |
| CN102967493A (zh) * | 2012-10-27 | 2013-03-13 | 山西农业大学 | 植物组织快速石蜡制片的方法 |
| CN103528872A (zh) * | 2013-10-14 | 2014-01-22 | 中国农业大学 | 一种植物根组织活体组织切片的荧光染色技术及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| /: ""组织石蜡包埋和切片技术"", 《百度文库：HTTPS://WENKU.BAIDU.COM/VIEW/6E17DB1614791711CC791700.HTML》 * |
| 万佳宁 等: ""草菇子实体发育过程担子细胞的核相变化观察 "", 《食用菌学报》 * |
| 全雪丽 等: ""长白山区松口蘑与栎松口蘑子实体解剖学研究"", 《食用菌》 * |
| 安丽华 等: ""一种用于 DAPI染色的方法—Steedman’s wax包埋切片法"", 《西北植物学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110426259A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-08 | 武汉赛维尔生物科技有限公司 | 聚乙二醇用于动物组织切片油脂染色的应用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181221 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |