CN109045277A - 一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种AMPs‑O油溶抗菌肽组合物及其应用，属于洗护品技术领域。AMPs‑O油溶抗菌肽组合物，包括以下重量份的组分：AMPs‑O油溶抗菌肽1～2份、辛酸/癸酸三酸甘油酯3～6份；所述AMPs‑O油溶抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。将AMPs‑O油溶抗菌肽和辛酸/癸酸三酸甘油酯复配得到的AMPs‑O油溶抗菌肽组合物，实验证明：与芦荟、连香草和藏红花等抑菌活性相比，所述组合物具有极显著的杀菌特性，杀菌率最高达到100％。

Description

一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物及其应用
技术领域
本发明属于洗护品技术领域，具体涉及一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物及其应用。
背景技术
随着人们生活水平的提高，人们对身体健康的关注越来越大。女性对清洁皮肤的要求也越来越高，女性私密护理成为个人护理的重要部分。对于女性来说，私密护理液是女性健康必不可少的生活用品。
目前，不少女性清洗剂会使用具有杀菌效果的沐浴露或香皂等清洁用品，长期使用会破坏私密处酸性环境，改变pH值使菌群失调造成其他有害菌趁虚而入，诱发多种妇科疾病。还有一些专用于女性私密护理油，例如公开号CN 107115476一种女性护理液，包括以下重量份的原料：山茶油100-150份、霍霍巴油3-8份、葡萄籽油5-10份、玫瑰精油1-3份、月见草油0.5-2.0份、苦橙花油1.0-2.5份、薰衣草精油0.5-2.5份、荆芥10-15份、香根草10-20份和黄芪10-20份，由萃取油和中药成分组成，具有较好的抑菌杀菌性能。但是对女性的健康来讲，女性护理液是并非是杀菌效果越强越好，杀菌效果强的护理液会在杀灭有害的菌的同时破坏私密处的菌群结构，造成抵抗力下降，反而损害女性健康。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物及其应用，对有害菌杀菌效果显著，能够用于提高私密护理的安全性和有效性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1～2份和辛酸/癸酸三酸甘油酯3～6份；
所述AMPs-O油溶抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。
优选的，还包括以下重量份的组分：VE醋酸酯5～10份、紫苏草油20～30份、松节油15～20份、丁香油10～15份、生育酚8～10份、桉叶油0.05～0.1份和柠檬油0.1～0.5份，所述份与权利要求1中份的基数相同。
优选的，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1.2～1.8份、辛酸/癸酸三酸甘油酯3.5～5.5份、VE醋酸酯6～8份、紫苏草油22～28份、松节油16～19份、丁香油12～14份、生育酚8.5～9.5份、桉叶油0.06～0.08份和柠檬油0.2～0.4份。
优选的，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1.5份、辛酸/癸酸三酸甘油酯4.5份、VE醋酸酯7份、紫苏草油25份、松节油18份、丁香油13份、生育酚9份、桉叶油0.07份和柠檬油0.3份。
本发明提供了所述的组合物在制备女性私密护理液中的应用。
本发明提供了一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1～2份、辛酸/癸酸三酸甘油酯3～6份；所述AMPs-O油溶抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。AMPs-O油溶抗菌肽本身具有较高的抑菌活性，实验证明，AMPs-O油溶抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌致病菌具有较高的抑菌活性，最高达到100％。将AMPs-O油溶抗菌肽和辛酸/癸酸三酸甘油酯复配得到的AMPs-O油溶抗菌肽组合物，实验证明，与芦荟、连香草和藏红花相比，所述组合物具有极显著的杀菌特性，杀菌率最高达到100％。
进一步，本发明提供的AMPs-O油溶抗菌肽组合物，进一步限定了所述组合物中还包含的组分：VE醋酸酯5～10份、紫苏草油20～30份、松节油15～20份、丁香油10～15份、生育酚8～10份、桉叶油0.05～0.1份和柠檬油0.1～0.5份。所述组合物进一步提高了对杂菌的杀菌活性。
具体实施方式
本发明提供了一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1～2份和辛酸/癸酸三酸甘油酯3～6份；所述AMPs-O油溶抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示(KWKLFKKIEKVGQRVRDAVISAGPAVATVAQATALAK)。
本发明提供了一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物，还包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1～2份、VE醋酸酯5～10份、紫苏草油20～30份、松节油15～20份、丁香油10～15份、生育酚8～10份、桉叶油0.05～0.1份和柠檬油0.1～0.5份。
本发明提供的组合物包括AMPs-O油溶抗菌肽。按重量份计，所述AMPs-O油溶抗菌肽包括1～2份，优选为1.2～1.8份，更优选为1.5份。所述AMPs-O油溶抗菌肽的来源购买自北京肽康生物科技有限公司。
本发明提供的组合物包括辛酸/癸酸三酸甘油酯。所述辛酸/癸酸三酸甘油酯包括3～6份，更优选为3.5～5.5份，最优选为4.5份。本发明对所述辛酸/癸酸三酸甘油酯的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的辛酸/癸酸三酸甘油酯来源即可。
本发明提供的组合物优选包括VE醋酸酯。按重量份计，所述VE醋酸酯优选包括5～10份，更优选为6～8份，最优选为7份。本发明对所述VE醋酸酯的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的来源即可。
本发明提供的组合物优选包括紫苏草油。按重量份计，所述紫苏草油优选包括20～30份，更优选为22～28份，最优选为25份。本发明对所述紫苏草油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的紫苏草油来源即可。
本发明提供的组合物优选包括松节油。按重量份计，所述松节油优选包括15～20份，更优选为16～19份，最优选为18份。本发明对所述松节油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的松节油来源即可。
本发明提供的组合物优选包括丁香油。按重量份计，所述松节油优选包括10～15份，更优选为12～14份，最优选为13份。本发明对所述丁香油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的丁香油来源即可。
本发明提供的组合物优选包括生育酚。按重量份计，所述生育酚优选包括8～10份，更优选为8.5～9.5份，最优选为9份。本发明对所述生育酚的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的生育酚来源即可。
本发明提供的组合物优选包括桉叶油。按重量份计，所述桉叶油优选包括0.05～0.1份，更优选为0.06～0.08份，最优选为0.07份。本发明对所述桉叶油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的桉叶油来源即可。
本发明提供的组合物优选包括柠檬油。按重量份计，所述柠檬油优选包括0.1～0.5份，更优选为0.2～0.4份，最优选为0.3份。本发明对所述柠檬油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的柠檬油来源即可。
在本发明中，所述AMPs-O油溶抗菌肽组合物的制备方法，优选将上述组分充分混合即可。
本发明提供了所述的组合物在制备女性私密护理液中的应用。
下面结合实施例对本发明提供的一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
AMPs-O油溶抗菌肽1g、辛酸/癸酸三酸甘油酯3g、VE醋酸酯10g、紫苏草油20g、松节油20g、丁香油10g、生育酚10g、桉叶油0.05g和柠檬油0.5g。将上述组分混合，得到抗菌肽组合物。
实施例2
AMPs-O油溶抗菌肽2g、辛酸/癸酸三酸甘油酯6g、VE醋酸酯5g、紫苏草油30g、松节油15g、丁香油15g、生育酚8g、桉叶油0.1g和柠檬油0.1g。将上述组分混合，得到抗菌肽组合物。
实施例3
AMPs-O油溶抗菌肽1.5g、辛酸/癸酸三酸甘油酯4.5g、VE醋酸酯7g、紫苏草油25g、松节油18g、丁香油13g、生育酚9g、桉叶油0.07g和柠檬油0.3g。将上述组分混合，得到抗菌肽组合物。
实施例4
1、实验样品
1号样品：白色，1.5％抗菌肽；2号样品：透明色，1.5％抗菌肽、0.4％有益菌乳酸菌；
1.2试验菌种
大肠埃氏杆菌(Escherichia coli)，44102；
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，26003；
白色念珠球菌(白假丝酵母，Canidia albicans)，98001；
1.3试验仪器
表1试验仪器设备情况
细菌用营养液体培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，加水至1000mL，pH调至7.2±0.1，于121℃高压灭菌20min备用。细菌用营养琼脂培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，琼脂20g，加水至1000mL，pH调至7.2±0.1，于121℃高压灭菌20min备用。霉菌和酵母菌用液体培养基：蛋白胨10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，加水至1000mL，pH调至5.6±0.2，于121℃高压灭菌20min备用。霉菌和酵母菌用SDA琼脂培养基：蛋白胨10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，琼脂粉20g，加水至1000mL，pH调至5.6±0.2，于121℃高压灭菌20min备用。
3、试验方法
3.1试验用菌液的配制
3.1.1标准悬液的配制
1％硫酸9.9mL与1％氯化钡0.1mL，混合后配制成的悬液浓度为3×108CFU/mL，此悬液再做3倍稀释至1×108cfu/mL。
3.1.2细菌菌悬液的配制
将冻存管按0.4％的接种量，接入细菌菌株至LB液体培养基中，37℃恒温培养24小时。取已培养好的活性菌液2ml于灭菌离心管中，3000转离心10分钟，弃去上清液，加入适量灭菌生理盐水使菌体悬浮，充分振荡摇匀。用移液枪从离心管中吸取菌液作稀释，浊度和标准悬液的浊度(3×108CFU/mL)相同为止；此时的稀释菌液再做3倍稀释，即为所需的1×108CFU/mL的菌悬液，做细菌总数确定细菌数。
3.1.3真菌菌悬液的配制
将霉菌和酵母菌种已培养好的活性菌种，用灭菌的生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中，充分振荡摇匀；用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作依次的10倍稀释，每次的稀释用血球计数板计数，必须5个中格的霉菌和酵母总数在190～210，落在此范围内的菌悬液为我们所需的1×108CFU/mL的真菌菌悬液，做霉菌和酵母总数确定霉菌和酵母数。
3.2试验方法
采用单菌接种法，即每种测试菌株单独做一个试验。将待测样品按重量分别接入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌，确保接入的细菌/真菌数量级在104。用干净的无菌勺子搅拌均匀后盖上盖子，每个菌种分别进行5min、10min、20min后的涂布计数。
3.3平板涂布和计数
3.3.1初始菌液稀释及涂布
取1ml菌液加入99mL无菌生理盐水，稀释后取1mL样品液，加入9mL灭菌生理盐水中，做依次稀释，分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等稀释度；取三个合适稀释度的样液，分别吸取1mL样液加入已灭菌的平皿中，做菌落计数，并做三个平行。
5株菌种分别稀释并涂布，细菌平板放置于32.5±2.5℃的培养箱中培养，接种霉菌和酵母的平板放置在22.5±2.5℃的培养箱中培养24h后观察计数。
3.3.2样品稀释及涂布
取0.25g样品直接加入已灭菌的平皿中，涂布均匀，并做4个平行。5株菌种分别稀释并涂布，细菌平板放置于32.5±2.5℃的培养箱中培养，接种霉菌和酵母的平板放置在22.5±2.5℃的培养箱中培养24h后观察计数。
3.3.3菌落计数
菌落计数的标准方法：
①先选取平均菌落数在30～300之间的平皿作为细菌菌落总数测定范围，选取平均菌落数在5～50之间的平皿作为霉菌菌落总数测定范围；
②有两个稀释度在30～300之间，求比值。若比值≤2，报告平均数；若比值＞2，以其中较小的稀释度计算细菌总数；
③所有稀释度都大于300，以稀释度最高的平均菌落数计算；
④所有稀释度都小于30，以稀释度最低的平均菌落数计算；
⑤所有稀释度均在30～300之外，其中一个大于300，而相邻的加一稀释度小于30，则以最接近30或300的平均菌落数计算。
3.4评价标准
根据一次性使用卫生用品卫生标准GB15979-2002执行。
杀菌率＝(接入菌数-剩余菌数)/接入菌数×100％
对各菌的杀菌率≥90％，则产品具有杀菌作用。
4结果与讨论
4.1接入样品的活菌数
表2接入样品的活菌计数
菌种名称 总菌数，CFU/ml
大肠杆菌 1.40×10<sup>4</sup>
金黄色葡萄球菌 1.80×10<sup>4</sup>
白色念珠球菌 5.95×10<sup>4</sup>
表2为样品分别接入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌的活菌计数结果。由此可见，各样品中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠球菌的数量级为104，符合一次性使用卫生用品卫生规范的使用菌种数量级规定。
4.22计数结果
表3 1号、2号样品对大肠杆菌在不同时间段的抑菌性能测试结果
由表3知，1号样品对大肠杆菌作用5min的杀菌率为73.4％，10min为90.4％，20min为96.4％；2号样品对大肠杆菌作用5min的杀菌率为85.9％，10min为91.4％，20min为99.6％；2号样品对大肠杆菌的杀菌性能明显强于1号样品。
表4 1号、2号样品对金黄色葡萄球菌在不同时间段的抑菌性能测试结果
由表4知：1号样品对金黄色葡萄球菌作用5min的杀菌率为79.1％，10min为96.9％，20min为100％；2号样品对金黄色葡萄球菌作用5min、10min、20min的杀菌率均为100％；2号样品对金黄色葡萄球菌的杀菌性能明显强于1号样品。
表5 1号、2号样品对白色念珠球菌在不同时间段的抑菌性能测试结果
由表5知：1号样品对金黄色葡萄球菌作用5min的杀菌率为88.6％，10min为88.8％，20min为93.9％；2号样品对金黄色葡萄球菌作用5min的杀菌率为94.6％，10min为94.6％，20min为93.4％，均高于90％；2号样品对白色念珠球菌的杀菌性能强于1号样品。
实施例5
抗菌肽和辛酸\癸酸甘油三酯按1:3混合，得到A型油。将抗菌肽和辛酸\葵酸甘油三酯按1.5:4.5混合，得到B型油。
以芦荟、藏红花和连香草作为对照组，检测杀菌性能。具体方法如下：
1、采用单菌接种法，即每种测试菌株单独做一个试验。按照样品重量分别接入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，确保接入的细菌/真菌数量级在104左右。试验菌种中大肠埃氏杆菌(Escherichia coli)，44102；金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，26003；白色念珠球菌(白假丝酵母，Canidia albicans)，98001；用干净的无菌勺子搅拌均匀后盖上盖子，5min、10min、20min后进行涂布计数。
2、平板涂布和计数
2.1初始菌液稀释及涂布
取1ml菌液加入99mL无菌生理盐水，稀释后取1mL样品液，加入9mL灭菌生理盐水中，做依次稀释，分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等稀释度；取三个合适稀释度的样液，分别吸取1mL样液加入已灭菌的平皿中，做菌落计数，并做三个平行。
2株菌种分别稀释并涂布，细菌平板放置于32.5±2.5℃的培养箱中培养，接种霉菌和酵母的平板放置在22.5±2.5℃的培养箱中培养24h后观察计数。
2.2样品稀释及涂布
取0.25g样品直接加入已灭菌的平皿中，涂布均匀，并做4个平行。
2株菌种分别稀释并涂布，细菌平板放置于32.5±2.5℃的培养箱中培养，接种霉菌和酵母的平板放置在22.5±2.5℃的培养箱中培养24h后观察计数。
2.3菌落计数
菌落计数的标准方法：
①先选取平均菌落数在30～300之间的平皿作为细菌菌落总数测定范围，选取平均菌落数在5～50之间的平皿作为霉菌菌落总数测定范围；
②有两个稀释度在30～300之间，求比值。若比值≤2，报告平均数；若比值＞2，以其中较小的稀释度计算细菌总数；
③所有稀释度都大于300，以稀释度最高的平均菌落数计算；
④所有稀释度都小于30，以稀释度最低的平均菌落数计算；
⑤所有稀释度均在30～300之外，其中一个大于300，而相邻的加一稀释度小于30，则以最接近30或300的平均菌落数计算。
2.4评价标准
根据一次性使用卫生用品卫生标准GB15979-2002执行。
杀菌率＝(接入菌数-剩余菌数)/接入菌数×100％
对各菌的杀菌率≥90％，则产品具有杀菌作用。
3、结果
3.1接入样品的活菌数
表6接入样品的活菌计数
菌种名称 总菌数，CFU/ml
金黄色葡萄球菌 2.66×10<sup>4</sup>
大肠杆菌 2.95×10<sup>4</sup>
白色念珠球菌 1.40×10<sup>4</sup>
表6为样品分别接入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌的活菌计数结果。由此可见，各样品中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌的数量级为104，符合一次性使用卫生用品卫生规范的使用菌种数量级规定。3.2计数结果
表7各样品对大肠杆菌的杀菌性能测试结果
表8各样品对金黄色葡萄球菌的杀菌性能测试结果
表9各样品对白色念珠球菌的杀菌性能测试结果
A型油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌作用20min的抑菌率分别为95.8％、92.3％和92.7％；B型油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌作用20min的抑菌率分别为99.7％、100％和95.3％；芦荟对对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌作用20min的抑菌率分别为30.8％、65.9％和53.8％；藏红花对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌作用20min的抑菌率分别为49.5％、97.3％和20.0％；莲香草对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌作用20min的抑菌率分别为62.9％、90.2％和6.8％。
实施例6
临床试验，30人，0.5h，12h，24h，进行人体斑贴试验，试验结果对人体无不良反应。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种AMPs-O油溶抗菌肽组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1～2份和辛酸/癸酸三酸甘油酯3～6份；
所述AMPs-O油溶抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。
2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，还包括以下重量份的组分：VE醋酸酯5～10份、紫苏草油20～30份、松节油15～20份、丁香油10～15份、生育酚8～10份、桉叶油0.05～0.1份和柠檬油0.1～0.5份。
3.根据权利要求1或2所述组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1.2～1.8份、辛酸/癸酸三酸甘油酯3.5～5.5份、VE醋酸酯6～8份、紫苏草油22～28份、松节油16～19份、丁香油12～14份、生育酚8.5～9.5份、桉叶油0.06～0.08份和柠檬油0.2～0.4份。
4.根据权利要求3所述组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：AMPs-O油溶抗菌肽1.5份、辛酸/癸酸三酸甘油酯4.5份、VE醋酸酯7份、紫苏草油25份、松节油18份、丁香油13份、生育酚9份、桉叶油0.07份和柠檬油0.3份。
5.权利要求1～4任意一项所述的组合物在女性私密护理液中的应用。
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Title
马振友等主编: "《皮肤美容化妆品制剂手册 第2版》", 31 January 2015, 中医古籍出版社 *

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