CN108904508B - Polymerase I 抑制剂的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体公开了Polymerase I抑制剂的新用途。本发明在细胞水平和动物实验水平上研究Polymerase I抑制剂的新作用，结果发现Polymerase I抑制剂可以抑制IL‑2、NFATc2、NFkB及IFN‑γ的活性，从而抑制T细胞的增生，进而调控T细胞的活化从而调控机体的免疫反应，抑制器官异体移植的免疫排斥反应。所述Polymerase I抑制剂可用来制备抑制IL‑2、NFATc2、NFkB及IFN‑γ的活性、抑制T细胞增生、抑制T细胞活化或抑制器官异体移植的免疫排斥反应的药剂，具有较大的应用前景。

Description

Polymerase I 抑制剂的新用途
技术领域
本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及Polymerase I 抑制剂在制备免疫抑制剂中的应用。
背景技术
免疫系统的存在是为了防止病原菌的侵袭，但有些个体内的细胞、组织蛋白或是其他成分会与免疫系统发生异常的免疫反应，个体会产生攻击自己细胞或是细胞外任何蛋白质的T细胞或自体抗体而造成病变，即为自体免疫疾病。引起自体免疫疾病之病因极为复杂，所以目前临床上治疗仅能由其表象之症状着手，例如给予患者免疫抑制剂以减轻其痛苦。广义上能够将免疫能力降低的药物称为免疫抑制剂，服用或注射后能够将免疫能力降低。因此，免疫抑制剂主要用于器官移植抗排斥反应和自身免疫病如类风湿性关节炎、红斑狼疮、皮肤真菌病、膜肾球肾炎、炎性肠病和自身免疫性溶血贫血。利用移植健康组织来取代有缺失的器官组织一直是医界所致力的目标之一，但经常因为接受移植者因自身因免疫反应而排斥外来个体的移植物，因此当器官移植前必须先使用免疫抑制剂来避免在器官移植后降低个体的免疫能力，降低接受移植者自身排斥来自其他个体的移植物，延长移植物在其体内存留的时间，增加移植后的存活率。部分自己免疫疾病是因为免疫能力过强的T细胞所造成，所以也可以使用免疫抑制剂来治疗。
免疫抑制剂是对机体的免疫反应具有抑制作用的药物，能抑制与免疫反应有关细胞（T细胞和B细胞等巨噬细胞）的增殖和功能，能降低抗体免疫反应。T细胞是免疫反应中最重要的防御细胞，当T细胞表面的抗原接受器接受到抗原刺激时，会引起一连串从细胞膜、细胞质及细胞核的分子改变，最终执行T细胞的功能，如IL-2接受器的表现量增加，用以选择性的快速活化并增生，以提供足够的T细胞对峙病原发动有效之免疫反应。活化的T细胞核内因子（nuclear factor of activated T-cells，NFAT）是一类转录因子家族，最初是在活化的T细胞中作为一种能够结合在人白介素-2（interleukin-2，IL-2）的启动子上的快速诱导其表达的转录因子而被发现。研究人员发现能够破坏CN与NFAT相互作用的化合物，就能够有效地阻止在疾病中过度活化的CN/NFAT信号通路以及下游细胞因子的表达，比如非常经典的免疫抑制药物环孢菌素A（cyclosporin A）和他克莫司（tacrolimus，FK506），CsA和FK506分别能够招募细胞内各自的免疫亲和素蛋白CyPA和FKBP结合，这种CyP/CsA、FK506/FKBP复合体与CN两个亚基的接触面相连，阻断了底物与CN活性位点的相互作用，从而抑制其磷酸酶活性，阻断NFAT的活化。在科研工作中，CsA及FK506都被当做阻断calcineurin/NFAT信号通路的工具药或者阳性对照而广泛使用。当细胞受到佛波酯PMA以及钙离子载体ionomycin刺激以后，可有效提高细胞内的钙离子浓度，激活CN，活化NFAT入核，其携带的绿色荧光就会在细胞核中聚集，该方法可视性较强，常被作为非常好的NFAT活化的定性指标；还有一种方式是利用NFAT的报告基因，比如监控其下游基因IL-2的转录表达，从而判断NFAT是否活化，这个结果更能够说明NFAT作为转录因子的功能变化。
CX-5461是一种rRNA synthesis抑制剂，具有选择性抑制Pol I驱动的rRNA转录。目前文献指出Cx5461能透过P53路径来调控细胞凋亡，从核仁应急压力路径，核醣体蛋白（RPs）的释放，RPL5和RPL11键结在MDM2从和减缓抑制p53的活性。此外还有人研究Cx5461透过ATM/ATR来调控肿瘤细胞周期阻滞、衰老和自噬。
但是，关于CX-5461在免疫抑制中的作用目前还未见报道。
发明内容
本发明为了解决上述现有技术的缺陷和不足，提供Polymerase I抑制剂在免疫抑制方面的新用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
本发明在细胞水平和动物实验水平上发现，Polymerase I抑制剂可以抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ的活性，从而抑制T细胞的增生，进而调控T细胞的活化从而调控机体的免疫反应，抑制器官异体移植的免疫排斥反应。
因此本发明首先提供Polymerase I抑制剂的如下新用途：
Polymerase I抑制剂在制备免疫抑制剂中的应用。
Polymerase I抑制剂在制备抑制T细胞活化的药剂中的应用。
Polymerase I抑制剂在制备抑制T细胞增生的药剂中的应用。
Polymerase I抑制剂在制备抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ活性的药剂中的应用。
Polymerase I抑制剂在制备抑制器官异体移植排斥的药剂中的应用。
优选地，所述T细胞为人T淋巴细胞。
更优选地，所述T淋巴细胞具体为外周血白血病T细胞及外周血单个核细胞。
本发明同时还提供如下几种包含Polymerase I抑制剂的药剂：
一种免疫抑制剂，所述药剂包含Polymerase I抑制剂。
一种抑制T细胞活化的药剂，所述药剂包含Polymerase I抑制剂。
一种抑制T细胞增生的药剂，所述药剂包含Polymerase I抑制剂。
一种抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ活性的药剂，所述药剂包含Polymerase I抑制剂；
一种抑制器官异体移植排斥的药剂，所述药剂包含Polymerase I抑制剂。
优选地，所述Polymerase I抑制剂为Cx5461。
更优选地，所述Cx5461的浓度为1×10-6M。
更优选地，所述Cx5461的用量为为0.5 mg.kg-1、1.0 mg.kg-1和2.0 mg.kg-1。
本发明实验证明Cx5461能够通过抑制T细胞活化从而推迟皮肤异体移植的排斥现象。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明在细胞水平和动物实验水平上研究Polymerase I抑制剂的新作用，结果发现Polymerase I抑制剂可以抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ的活性，从而抑制T细胞的增生，进而调控T细胞的活化从而调控机体的免疫反应，抑制器官异体移植的免疫排斥反应。所述Polymerase I抑制剂可用来制备抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ的活性、抑制T细胞增生、抑制T细胞活化或抑制器官异体移植的免疫排斥反应的药剂，具有较大的应用前景。
附图说明
图1是Cx5461在外周血白血病T细胞（Jurkat T）及外周血单个核细胞对T细胞（PBMC）活化的影响。
图1中A为激光共聚焦显微镜检测NFATc2在细胞中的定位结果，红光代表NFATc2；蓝光代表细胞核；Merge为将前两张图片迭加的结果。其中，对照组为（Control）细胞，实验组P/I为（PMA/Ionmycin）细胞，实验组P/I+FK506为（PMA/Ionmycin+FK506）细胞，实验组P/I+Cx5461（PMA/Ionmycin+Cx5461）细胞。
图1B及C为荧光定量PCR分别检测Jurkat T细胞中IL-2及NFkB的mRNA水平的变化结果。实验组P/I为（PMA/Ionmycin）细胞，实验组P/I+FK506为（PMA/Ionmycin+FK506）细胞，实验组P/I+Cx5461（PMA/Ionmycin+Cx5461）细胞。
左起第一个柱子对照组为(Control)细胞，左起第二个柱子实验组P/I为（PMA/Ionmycin）细胞，左起第三个柱子实验组P/I+FK506为（PMA/Ionmycin+FK506）细胞，左起第四个柱子实验组P/I+Cx5461（PMA/Ionmycin+Cx5461）)细胞。
图1D及E为ELISA酶联免疫吸附测定检测Cx5461影响PBMC细胞中IL-2及IFN-g的分泌情况。左起第二个柱子实验组P/I为（PMA/Ionmycin）细胞，左起第三个柱子实验组P/I+FK506为（PMA/Ionmycin+FK506）细胞，左起第四个柱子实验组P/I+Cx5461（PMA/Ionmycin+Cx5461）细胞。
图1F及G为利用CCK-8检测Cx5461处理后Jurkat T细胞及PBMC细胞增生情况。对照组为（Control）细胞，实验组P/I为（PMA/Ionmycin）细胞，实验组P/I+FK506为（PMA/Ionmycin+FK506）细胞，实验组P/I+Cx5461（PMA/Ionmycin+Cx5461）细胞。图2是Cx5461在动物实验水平上检测Cx5461对对皮肤异体移植排斥的影响，小鼠背部皮肤移植具体取部分C56BL/6背部皮肤移植BALB/c小鼠背上。
图2A中为移植排斥评分（graft rejection score），依序为对照组（Saline）、Cx5461低剂量为0.5 mg·kg-1、中剂量为1.0 mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
图2B中为各组别处理后体重的变化，依序为对照组（Saline）、Cx5461低剂量为0.5mg·kg-1、中剂量为1.0 mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
图2C及D中为小鼠牺牲后取出的胸腺及脾脏的重量，依序为对照组(Saline)、Cx5461低剂量为0.5 mg·kg-1、中剂量为1.0 mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
图2E和F为ELISA酶联免疫吸附测定检测小鼠皮肤移植4天的IFN-g及IL-12的分泌情况。由左至右依序为对照组（Saline）、Cx5461低剂量为0.5 mg·kg-1、中剂量为1.0 mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
图2G和H为ELISA酶联免疫吸附测定检测小鼠皮肤移植12天的IFN-g及IL-12的分泌情况。由左至右依序为对照组（Saline）、Cx5461低剂量为0.5 mg·kg-1、中剂量为1.0mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
图2I为检测皮肤移植后CD4+和CD8+细胞比例分析。左至右依序为对照组（Saline）、Cx5461低剂量为0.5 mg·kg-1、中剂量为1.0 mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
图2J为皮肤病理切片，由左至右依序为对照组（Saline）、Cx5461低剂量为0.5mg·kg-1、中剂量为1.0 mg·kg-1、高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1、FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1 FK506。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
下述实施例中的人急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat T购买自ATCC，外周血单个核细胞PBMC分离来自健康人血分离。
下述实施例中的含10%胎牛血清的RPMI1640培养基是向RPMI1640培养基（Gibco）中加入胎牛血清（Gibco）至胎牛血清的体积浓度为10%得到的培养基。
外周血单个核细胞PBMC细胞分离方式为取6 mL健康的人体血液，置于含EDTA的抗凝血离心管中；先于离心管放3 mL Ficoll分离液，随后加入6 mL血液，室温离心，3000rpm，30 min；缓慢将离心管取出，里用枪头将上层液体移除，取出中间混浊乳白层液体，置于15 mL离心管中，加入同比例的RPMI1640，上下均匀混和，室温离心，3000 rpm，10 min，去除上清，再次加入5 mL RPMI1640，上下均匀混和，室温离心，3000 rpm，10 min；最后加入R10培养基（RPMI 1640，10% FBS，L-glutamine, penicillin/streptomycin），打散细胞，并计算其细胞数目。
实施例1Cx5461通过抑制T细胞的增生来影响T细胞活化
将Cx5461溶于二甲基亚砜（DMSO）中制成Cx5461溶液进行下述实验：
1、将Jurkat T细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基的六孔板中，均分为四组。
（1）刺激组（P/I）：每孔加入PMA/Ionmycin溶液；
（2）正对照组（P/I+FK506）：每孔加入FK506溶液至FK506的浓度为1×10-6M；
（3）实验组（P/I+Cx5461）：每孔加入Cx5461溶液至Cx5461的浓度为1×10-6M；
（4）对照组（Con）：每孔加入等体积的DMSO；
将上述四组于37℃培养6小时后进行免疫荧光实验。将Jurkat T细胞悬浮于50 mL培养基当中，在细胞甩片器上安装滤纸及固定玻片，随后加细胞液，每个孔约50 mL，利用甩片机进行甩片，2000 g，15 min，让细胞贴附于载玻片上，取出后利用荧光笔圈定细胞位置，加入甲醇固定5 min，用预冷PBS清洗细胞2次，使用3% BSA室温封闭1 h，利用3% BSA稀释的一抗，于4℃孵育过夜，隔天用PBS清洗2次，利用3% BSA稀释的二抗（FITC或是Rodamine，以1:50稀释），在暗处室温孵育1 h，随后PBS清洗2次，加入5 mg/mL DAPI染细胞核10 min，PBS清洗3次，封片，并于激光共聚焦显微镜下进行拍照观察。红光代表NFATc2；蓝光代表细胞核；Merge为将前两张图片迭加的结果。
结果显示：对照组（Con）细胞中DAPI染的是细胞核，NFATc2分布在细胞质中，在细胞核部分是较少；刺激组（P/I）的NFATc2大部分皆分布在细胞核中，与DAPI的染色位置基本一致；在实验组（P/I+Cx5461）看到NFATc2在细胞核中的分布大量减少，两张图片叠加之后在DAPI的染色位置只有微量NFATc2分布；而正对照组（P/I+FK506）看到NFATc2在细胞核中的分布也是大量减少，说明Cx5461处理细胞后抑制NFATc2的入核（图1A）。NFATc2在细胞核中是活化形式，出核进入细胞质后成为失活形式，因此Cx5461抑制T细胞活化。
2、将细胞分成四组：
（1）对照组为（Control）细胞；
（2）刺激组P/I为（PMA/Ionmycin）细胞；
（3）正对照组P/I+FK506为（PMA/Ionmycin+FK506）细胞；
（4）实验组P/I+Cx5461为（PMA/Ionmycin+Cx5461）细胞。
3、同时提取2中不同试验组细胞的总RNA，用PrimeScript RT-PCR Kit（TaKaRa）进行反转录实验得到cDNA。用荧光定量的方法检测IL-2、NFATc2及NFkB的转录水平，即IL-2、NFATc2及NFkB的mRNA水平的变化。其中，荧光定量PCR检测以GAPDH为内参基因；
荧光定量PCR检测内参GAPDH基因的PCR引物序列为：
正向引物F：5’-CCAGAACATCATCCCTGCCTCTACT-3’；
反向引物R：5’-GGTTTTTCTAGACGGCAGGTCAGGT-3’；
荧光定量PCR检测IL-2的转录水平的引物为：
正向引物F：5’- ATTACAAGAATCCCAAACTC-3’；
反向引物R：5- ATTGCTGATTAAGTCCCT-3’；
荧光定量PCR检测NFkB的转录水平的引物为：
正向引物F：5’- AACAGAGAGGATTTCGTTTCCG-3’；
反向引物R：5’- TTTGACCTGAGGGTAAGACTTCT-3’。
荧光定量PCR结果显示，实验组（P/I+Cx5461）细胞的IL-2及NFkB的mRNA水平是刺激组（P/I组）细胞的IL-2及NFkB的mRNA水平分别为0.7倍、0.2倍、0.67倍及0.83倍。表明Cx5461抑制IL-2及NFkB的mRNA水平（图1中B和C）。
4、将PMMC细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基的六孔板中，先加入PMA/Ionmycin，37℃培养6小时后再加入FK506溶液至FK506的浓度为1×10-6M培养2小时；另一组为实验组37℃培养6小时后再加入Cx5461溶液至Cx5461的浓度为1×10-6M培养2小时。待培养结束，收集细胞上清液，并用细胞刮刀将细胞刮取，加入细胞裂解液裂解，并做蛋白定量。利用ELISA试剂盒的说明书对细胞分泌的IL-2和IFN-γ的含量进行测定。
结果显示，Cx5461皆能抑制PBMC分泌IL-2和IFN-γ细胞因子，由此再次证明Cx5461可以抑制T细胞的活化（图1中D和F）。
5、将Jurkat T细胞及PBMC细胞以2×103数量接种于96孔板中，分别加入上述测定药物或是刺激物，待不同时间点（0、1、2、3、4、5天）收取细胞，并于前2 h加入10 mL CCK-8溶液，并于450 nm波长酶标仪中测定其吸光值。
结果显示，Jurkat T细胞及PBMC细胞在刺激组P/I能刺激细胞增生，而另外正对照组（P/I+FK506）及实验组（P/I+Cx5461）细胞增生情控明显受到抑制（图1F及1G）。细胞增生是T细胞活化的一种现象，由此可以证明Cx5461能够抑制T细胞的增生进而抑制T细胞的活化。
综上所述，Cx5461可以抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ的活性，从而抑制T细胞的增生，进而调控T细胞的活化。
实施例2Cx5461在动物实验水平上对皮肤异体移植排斥推迟作用
取2 g Cx5461溶于1 mL DMSO的液体中，待溶解完全后加生理盐水补充体积，使Cx5461终浓度为0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L，得到Cx5451溶液，进行下述实验：
1、小鼠皮肤移植实验
（1）小鼠皮肤移植模型建立
实验室用6～8周龄C57BL/6及C57BL/6购买广东省医学实验动物中心，并饲养在清华大学深圳研究生院的饲养室。于手术前两天先将受体的C57BL/6小鼠脱毛；BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠经10%戊巴比妥钠，麻醉后，先用75%的乙醇对供体及受体小鼠的背部皮肤进行消毒。将供体小鼠的背部皮肤取下，置于冰冷的无菌PBS中备用。将受体小鼠背部一侧皮肤的表皮剪下（直径约1 cm），将供体小鼠的背部皮肤内侧皮肤，分离面朝下，贴到受体小鼠背部创口处，用剪刀将未完全吻合的皮肤进行剔除修理，接着缝合固定，再用无菌创口贴包扎。4天后，将创口贴轻轻剪下，暴露移植部位，对移植排斥反应进行评价。在本实验中，异种皮肤移植（allograft）将BALB/c小鼠皮肤移植到C57BL/6小鼠身上。将BALB/c小鼠分为5组，每组10只。
（2）药物配制及给药
移植计为第0天，移植前三天开始给药，给药方式采用腹腔注射，每天注射1次，连续注射12天，将Cx5461注射液根据给药剂量用生理盐水进行稀释。注射组别分为：空白对照组注射生理盐水；Cx5461高剂量组给药量为2.0 mg·kg-1，中剂量为1.0 mg·kg-1，低剂量为0.5 mg·kg-1；FK506药量为2.0 mg·kg-1及1.0 mg·kg-1 Cx5461混合2.0 mg·kg-1FK506。
（3）移植排斥评分（graft rejection score）
当皮肤移植排斥达到皮肤周围脱落时，我们定义为移植的皮肤死亡，并根据皮肤排斥脱落的动物数量，计算其移植皮肤的存活率。移植皮肤存活率/%=（每组总动物数-皮肤排斥动物数）/每组总动物数×100%。
（4）血清中IL-12和IFN-γ含量的测定
小鼠于眼窝采血，随后离心取出血清，分装后冻存于-80℃冰箱。测定前，融化后按照ELISA试剂盒的说明书对血清中的IL-12和IFN-γ的含量进行测定。
（5）CD4 +和CD8+细胞比例分析
Figure 955288DEST_PATH_IMAGE001
小鼠脾淋巴细胞分离
迅速脱颈椎牺牲小鼠，将小鼠用75%的乙醇浸泡消毒（2～3 min）。随后在超净工作台中以无菌操作打开腹腔，取出脾脏，去除其周围的脂肪组织，并用Hank’s溶液清洗1～2次，转入放于含预冷Hank’s溶液的无菌培养皿中；将脾脏置于200目筛网上用剪刀剪碎后；倒入Hank’s溶液清洗，得到脾脏细胞悬液；将细胞悬液4℃离心10 min，1000 rpm；随后弃上清，再加入2 mL裂红液（ACK lysis buffer）裂解红细胞3～5 min加入5 mL Hank’s试剂清洗三次，4℃离心10 min，1000 rpm；最后用含10% FBS的RPMI 1640培养基打散细胞，并计算其细胞浓度。
Figure 796730DEST_PATH_IMAGE002
CD4+和CD8+细胞计数
将脾淋巴细胞浓度调整为5×106·mL-1，取每个待测样品100 μL，向待测样品中分别加入1 μL PE-CD4抗体、1 μL APC-CD8 抗体、1μL FITC-CD3抗体。混匀后，室温下避光孵育30 min，用流式细胞仪对CD4+和CD8+细胞数进行测定。
（6）脏器系数计算
小鼠牺牲后，解剖，取出胸腺和脾脏称重，利用公式：脏器系数=脏器重量（g）/体重（100 g），计算脏器系数。
（7）病理组织学检查
将移植皮肤取下，用4%的甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色后进行病理切片观察。与皮肤移植排斥评分方法一致，将移植皮肤坏死情况进行病理学评分。
从实验结果中得到在Cx5461药物处理后明显能推迟皮肤移植的免疫排斥，而且呈现剂量依赖性（图2A）。
而在体重方面，在Cx5461处理后老鼠的体重并没有什么太大差异（图2B）。在老鼠牺牲后，取出胸腺及脾脏，并秤量其重量，发现胸腺的重量有明显降低（图2C），而脾脏并没什么变化（图2D）。胸腺为新的T淋巴细胞生产地方，当胸腺减少将使细胞免疫的功能降低，使移植进来的异体皮肤被排斥的可能性减小，因而更易成活，因此在Cx5461药物处理后胸腺减少使得皮肤移植排斥现象减缓。
在移植的第4天及第12天分别从眼窝取血并检测其血清中的IL-12及IFN-g含量，结果发现Cx5461在第4天及第12天皆能抑制IL-12分泌（图2E及F），也能抑制IFN-g分泌（图2G及H），与正对照组FK506结果相同，而且是呈现剂量依赖性。
将分离出来的脾脏细胞进行流式分析，从结果中显示在Cx5461药物处理后与正对照组FK506结果相同，CD4及CD8比例明显受到抑制（图2I及表1）。
表1 Cx5461影响脾脏内CD4/CD8 T细胞比例
Figure 779729DEST_PATH_IMAGE003
从HE染色的结果发现（图2J），Saline对照组和0.5 mg·kg-1 Cx5461给药组移植皮肤的皮下结缔组织中有大量炎症细胞浸润，主要为淋巴细胞和部分中性粒细胞,组织水肿疏松，下方有较多炎症细胞沿异物呈带状集聚，局部有灶性炎症，细胞坏死，形成微小脓肿，中央坏死使组织分离呈小空腔。在下方深部皮下脂肪结缔组织及肌层有较大量炎症细胞广泛浸润。1.0 mg·kg-1 Cx5461移植皮肤的有部分淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，组织结构疏松。2.0 mg·kg-1 Cx5461组、FK506联合给药组和FK506组，皮下组织有轻度炎症细胞浸润，组织结构较紧密。
综上所述，Cx5461可以抑制IL-2、NFATc2、NFkB及IFN-γ的活性，从而抑制T细胞的增生，进而调控T细胞的活化，并且也能推迟在皮肤移植排斥现象的发生。

Claims (1)

1.Polymerase I抑制剂在制备抑制器官异体移植排斥的药剂中的应用，所述Polymerase I 抑制剂为Cx5461,所述Cx5461是2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-((5-甲基吡嗪-2-基)甲基)-5-氧代-5H-苯并[4,5]噻唑并[3,2-a][1,8]萘啶-6-甲酰胺，所述器官为皮肤。
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