CN108896470A - 基于led阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统 - Google Patents
基于led阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108896470A CN108896470A CN201810856988.XA CN201810856988A CN108896470A CN 108896470 A CN108896470 A CN 108896470A CN 201810856988 A CN201810856988 A CN 201810856988A CN 108896470 A CN108896470 A CN 108896470A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- phase contrast
- spin cells
- microchannel
- module
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 title claims abstract description 97
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 32
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 9
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 6
- 230000029052 metamorphosis Effects 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 145
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000001093 holography Methods 0.000 description 2
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000003760 hair shine Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T5/00—Image enhancement or restoration
- G06T5/70—Denoising; Smoothing
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T5/00—Image enhancement or restoration
- G06T5/73—Deblurring; Sharpening
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T2207/00—Indexing scheme for image analysis or image enhancement
- G06T2207/10—Image acquisition modality
- G06T2207/10056—Microscopic image
Landscapes
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
发明公开了一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统,沿着光路传递方向依次包括:LED阵列、微流通道、显微镜、Cmos相机采集模块,还包括旋转细胞特征提取和识别模块、测细胞旋转量模块、细胞模糊消除模块、图像细胞旋转校正模块、旋转细胞相衬成像模块;相衬成像是透明样品成像的最有效方法,它可以获得普通强度成像无法看到的样本的轮廓细节,本发明方法能消除微流通道中在一个曝光时间内细胞快速运动造成的模糊。此发明方法中使用LED作为非对称光源来分析研究微流通道中旋转细胞图像相衬成像,在针对非对称照明情况下,微流通道所有运动形式的细胞都能得到完美的成像,辅助我们的细胞形态学分析和学习。
Description
技术领域
本发明属于显微相衬成像技术领域,具体涉及一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统。
背景技术
实验室芯片(LOC)装置的最新技术最近发生了令人印象深刻的增长,它允许在微观尺度上实现了紧凑的结构,使得能够处理诸如反应剂、微细胞等的样品。在这个结构中,应用于微流器件的光学显微镜已经成为越来越多关注的问题,用于实时观察微流道中的生物化学过程、计数、速度测量等。
生物和医学方面在生物细胞样本形态分析、结构、识别等中都有着显著的成像,和在生物样本分析向微型化、细节化、活体、运动和机体样本介入式多维动态观测的振幅、相位梯度、三维信息需求,促使生物样本在微流通道中显微成像应用,比如HOM(HolographicOptofluidic Microscopy)、OFM(Optofluidic Microscopy)、DH(Digital Holography)、ML-DH(Multi-Look Digital Holography microscopy)等在微流通道方面得到应用,他们普遍采用的是LED单光源、X射线、角度调制激光光源、Mach-Zelnder调制激光光源等,实现非染色活体细胞相位梯度信息提取。这些光源在细胞相位信息获取方面可以产生调制的非对称光,普遍具有较为复杂的运动同步机械结构,且在视场较小,结构复杂(单像素、扫描式)。因此在这方面我们提出了一种全新的可编程的基于静态照明技术的LED阵列结构光源来替代这些光源,这可以使我们获得更大的FOV和高NA值的视场,以提高图像的高频细节分辨力,同时非对称光照明图样布局灵活和控制简单,在应用中更为灵活,如Laura团队关于定量相位成像(QPI)、三维多层成像、实时定量相位成像以及Zheng团队在超分辨FPM成像等一系列方面的应用,LED平台显微镜应用广泛,在同一硬件平台下能实现不同的应用需求,具有高速多模式多维度的特点。
在微流通道中,大部分悬浮样本细胞在高响应曝光时间下基本无旋转和运动情况基本一致,但是少部分细胞运动速度过快和旋转,造成最后相衬成像情况下,不能精确将旋转细胞进行匹配和校正。但是在于生物分析中,需要将更加全面和和准确的细胞相衬信息,因此,本发明中,我们创新性的提出了旋转细胞处理方法。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点,本发明的目的在于提供一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统。
为实现上述发明目的,本发明技术方案如下:
一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像系统,顺着光路传递方向依次包括:LED阵列、微流通道、显微镜、Cmos相机采集模块,还包括旋转细胞特征提取和识别模块、测细胞旋转量模块、细胞模糊消除模块、图像细胞旋转校正模块、旋转细胞相衬成像模块;
LED阵列平行设置于微流通道的上方,微流通道置于显微镜的载物平台上,Cmos相机采集模块置于显微镜的前端摄像出口;
其中LED阵列用于产生相衬成像所需的非对称光,该非对称光照射在通有流通细胞样本的微流通道,微流通道用于控制悬浮细胞液的定向运动,显微镜用于放大微流通道中样本信息,Cmos相机采集模块与LED阵列之间电压信息相互反馈控制,Cmos相机采集模块依照非对称照明花样变化顺序连续采集微流通道中旋转细胞图像信息,然后在计算机中利用旋转细胞特征提取和识别模块提取连续相邻采集两幅图像之间的旋转细胞位置信息和识别相邻两幅图中是否为同一旋转细胞,测细胞旋转量模块测量旋转细胞的旋转方向和旋转角度大小,细胞模糊消除模块对采集的细胞样本图像进行重影消除,图像细胞旋转校正模块利用同一旋转细胞之间的旋转量对连续相邻两幅图像依照旋转方向和旋转角度进行旋转细胞旋转复原,利用旋转细胞相衬成像模块对细胞图像进行上下、左右相衬对比成像观察细胞流动过程中形态变化情况。
作为优选方式,旋转细胞相衬成像模块在细胞模糊消除模块完成重影消除之后直接利用上下、左右半圆照明模式进行上下对比相衬成像和左右对比相衬成像。
作为优选方式,细胞模糊消除模块使用最小二乘法对采集的细胞样本图像进行重影消除。
作为优选方式,本系统在利用旋转细胞相衬成像模块对流动旋转细胞相衬结构成像时,是基于非对称照明方式来编辑LED照明花样,形成非对称光,使通过样本细胞光程发生差异产生相位变化,结合相衬成像原理以及利用旋转细胞特征提取和识别模块和图像细胞旋转校正模块,达到对个别旋转细胞的精确相衬成像。
为实现上述发明目的,本发明还提供一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,所述方法为:LED阵列产生相衬成像的非对称光,该非对称光照射在通有流通细胞样本的微流通道,微流通道控制悬浮细胞液的定向运动,显微镜放大微流通道中样本信息,Cmos相机采集模块与LED阵列之间电压信息相互反馈控制,Cmos相机采集模块连续采集在非对称照明下微流通道中旋转细胞图像信息,然后在计算机中利用图像中旋转细胞特征提取和识别模块提取连续相邻采集两幅图像之间的旋转细胞位置信息和识别相邻两幅图中是否为同一旋转细胞,测细胞旋转量模块测量旋转细胞的旋转方向和旋转角度大小,细胞模糊消除模块对采集的细胞样本图像进行重影消除,图像细胞旋转校正模块利用同一旋转细胞之间的旋转量对连续相邻两幅图像依照旋转方向和旋转角度进行旋转细胞旋转复原,利用旋转细胞相衬成像模块对细胞图像进行上下、左右相衬对比成像观察细胞流动过程中形态变化情况。
作为优选方式,旋转细胞相衬成像模块在细胞模糊消除模块完成重影消除之后直接利用上下、左右半圆照明模式进行上下相衬成像和左右相衬成像。
作为优选方式,细胞模糊消除模块使用最小二乘法对采集的细胞样本图像进行重影消除。
作为优选方式,本系统在利用旋转细胞相衬成像模块对流动旋转细胞相衬结构成像时,是基于非对称照明方式来编辑LED照明花样,形成非对称光,使通过样本细胞光程发生差异产生相位变化,结合相衬成像原理以及利用旋转细胞特征提取和识别模块和图像细胞旋转校正模块,达到对个别旋转细胞的精确相衬成像。
作为优选方式,所述方法包括如下步骤:
(1)基于LED阵列光源对显微镜系统进行校准,使LED灯板亮场情况下完全处于显微镜物镜视场之中;
(2)设置LED阵列照明花样,使Cmos相机采集和LED阵列照明花样变化同步;
(3)在微流通道中注入细胞悬浮液;
(4)控制相机和LED阵列照明花样变化,采集细胞通过微流通道的光强度图像;
(5)针对旋转细胞进行细胞边缘提取,识别和匹配下一幅LED照明花样采集图像中同一旋转细胞;
(6)对相匹配细胞的旋转量进行计算,并且对细胞在快速流动过程产生的模糊进行消除;
(7)基于旋转方向和旋转角度大小对连续采集两幅图像之间旋转细胞校正;
(8)利用非对称照明相衬成像原理合成这些旋转细胞相衬成像结果。
作为优选方式,步骤(1)中校准利用视场中心正方形分布的9颗LED,在4倍物镜下衍射图样呈左右上下镜像分布。
本发明利用LED阵列照明的微流道中旋转细胞暗场、DPC成像的显微方法,包括运动模糊消除、旋转细胞校正、非对称照明成像。LED非对称照明圆半径由实验中使用的物镜的最大视场下LED阵列中最大LED的颗数决定,LED阵列与相机同步,以100Hz帧速率捕获流细胞图像,并恢复和提取暗场和DPC图像。可以获取通道中的细胞的3D和层析成像信息。通过LED照明系统的驱动方式和功率的优化,相机的工作速度和灵敏度的改进,可以有效降低曝光时间,从而能更准确地检测通道中流速更快的目标特征。
本发明的有益效果为:相衬成像是透明样品成像的最有效方法,它可以获得普通强度成像无法看到的样本的轮廓细节。能消除微流通道中在一个曝光时间内细胞快速运动造成的模糊。此发明方法中使用LED作为非对称光源研究微流通道中旋转细胞图像相衬成像手段,在针对非对称照明情况下,微流通道所有运动形式的细胞都能得到很好的成像,辅助我们的细胞形态学分析和学习。
附图说明
图1是本发明中基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的设备示意图;
图2是本发明中获取采集图像信息后的旋转细胞相位信息处理流程图。
图3是本发明中LED阵列照明花样分布图。
图4是本发明中LED阵列照明源显微镜系统校准效果图。
1为LED阵列、2为微流通道、3为显微镜、4为Cmos相机采集模块、5为旋转细胞特征提取和识别模块、6为测细胞旋转量模块、7为细胞模糊消除模块、8为图像细胞旋转校正模块、9为旋转细胞相衬成像模块。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
图3是本发明中LED阵列照明花样分布图,从左往右分别为左半圆照明,右半圆照明,暗场照明,上半圆照明和下半圆照明五种模式。
图4是本发明中LED阵列照明源显微镜系统校准效果图,其校准利用视场中心正方形分布的9颗LED,在4倍物镜下获得的呈左右上下镜像分布的衍射图样。
一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像系统,顺着光路传递方向依次包括:LED阵列1、微流通道2、显微镜3、Cmos相机采集模块4,还包括旋转细胞特征提取和识别模块5、测细胞旋转量模块6、细胞模糊消除模块7、图像细胞旋转校正模块8、旋转细胞相衬成像模块9;
LED阵列1平行设置于微流通道2的上方,微流通道2置于显微镜3的载物平台上,Cmos相机采集模块4置于显微镜3的前端摄像出口。
其中LED阵列用于产生相衬成像所需的非对称光,该非对称光照射在通有流通细胞样本的微流通道2,微流通道2用于控制悬浮细胞液的定向运动,显微镜3用于放大微流通道中样本信息,Cmos相机采集模块4与LED阵列1之间电压信息相互反馈控制,Cmos相机采集模块4依照非对称照明花样变化顺序连续采集微流通道2中旋转细胞图像信息,然后在计算机中利用旋转细胞特征提取和识别模块5提取连续相邻采集两幅图像之间的旋转细胞位置信息和识别相邻两幅图中是否为同一旋转细胞,测细胞旋转量模块6测量旋转细胞的旋转方向和旋转角度大小,细胞模糊消除模块7对采集的细胞样本图像进行重影消除,图像细胞旋转校正模块8利用同一旋转细胞之间的旋转量对连续相邻两幅图像依照旋转方向和旋转角度进行旋转细胞旋转复原,利用旋转细胞相衬成像模块9对细胞图像进行上下、左右相衬对比成像观察细胞流动过程中形态变化情况。
旋转细胞相衬成像模块9在细胞模糊消除模块7完成重影消除之后直接利用上下、左右半圆照明模式进行上下对比相衬成像和左右对比相衬成像。
细胞模糊消除模块7使用最小二乘法对采集的细胞样本图像进行重影消除。
本系统在利用旋转细胞相衬成像模块9对流动旋转细胞相衬结构成像时,是基于非对称照明方式来编辑LED照明花样,形成非对称光,使通过样本细胞光程发生差异产生相位变化,结合相衬成像原理以及利用旋转细胞特征提取和识别模块5和图像细胞旋转校正模块8,达到对个别旋转细胞的精确相衬成像。
本实施例还提供一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,所述方法为:LED阵列产生相衬成像的非对称光,该非对称光照射在通有流通细胞样本的微流通道2,微流通道2控制悬浮细胞液的定向运动,显微镜3放大微流通道中样本信息,Cmos相机采集模块4与LED阵列1之间电压信息相互反馈控制,Cmos相机采集模块4连续采集在非对称照明下微流通道2中旋转细胞图像信息,然后在计算机中利用图像中旋转细胞特征提取和识别模块5提取连续相邻采集两幅图像之间的旋转细胞位置信息和识别相邻两幅图中是否为同一旋转细胞,测细胞旋转量模块6测量旋转细胞的旋转方向和旋转角度大小,细胞模糊消除模块7对采集的细胞样本图像进行重影消除,图像细胞旋转校正模块8利用同一旋转细胞之间的旋转量对连续相邻两幅图像依照旋转方向和旋转角度进行旋转细胞旋转复原,利用旋转细胞相衬成像模块9对细胞图像进行上下、左右相衬对比成像观察细胞流动过程中形态变化情况。
所述方法具体包括如下步骤:
(1)基于LED阵列光源对显微镜系统进行校准,使LED灯板亮场情况下完全处于显微镜物镜视场之中;
(2)设置LED阵列照明花样,使Cmos相机采集和LED阵列照明花样变化同步;
(3)在微流通道中注入细胞悬浮液;
(4)控制相机和LED阵列照明花样变化,采集细胞通过微流通道的光强度图像;
(5)针对旋转细胞进行细胞边缘提取,识别和匹配下一幅LED照明花样采集图像中同一旋转细胞;
(6)对相匹配细胞的旋转量进行计算,并且对细胞在快速流动过程产生的模糊进行消除;
(7)基于旋转方向和旋转角度大小对连续采集两幅图像之间旋转细胞校正;
(8)利用非对称照明相衬成像原理合成这些旋转细胞相衬成像结果。
作为优选方式,步骤(1)中校准利用视场中心正方形分布的9颗LED,在4倍物镜下衍射图样呈左右上下镜像分布。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像系统,其特征在于:顺着光路传递方向依次包括:LED阵列(1)、微流通道(2)、显微镜(3)、Cmos相机采集模块(4),还包括旋转细胞特征提取和识别模块(5)、测细胞旋转量模块(6)、细胞模糊消除模块(7)、图像细胞旋转校正模块(8)、旋转细胞相衬成像模块(9);
LED阵列(1)平行设置于微流通道(2)的上方,微流通道(2)置于显微镜(3)的载物平台上,Cmos相机采集模块(4)置于显微镜(3)的前端摄像出口;
其中LED阵列用于产生相衬成像所需的非对称光,该非对称光照射在通有流通细胞样本的微流通道(2)上,微流通道(2)用于控制悬浮细胞液的定向运动,显微镜(3)用于放大微流通道中样本信息,Cmos相机采集模块(4)与LED阵列(1)之间电压信息相互反馈控制,Cmos相机采集模块(4)依照非对称照明花样变化顺序连续采集微流通道(2)中旋转细胞图像信息,然后在计算机中利用旋转细胞特征提取和识别模块(5)提取连续相邻采集两幅图像之间的旋转细胞位置信息和识别相邻两幅图中是否为同一旋转细胞,测细胞旋转量模块(6)测量旋转细胞的旋转方向和旋转角度大小,细胞模糊消除模块(7)对采集的细胞样本图像进行重影消除,图像细胞旋转校正模块(8)利用同一旋转细胞之间的旋转量对连续相邻两幅图像依照旋转方向和旋转角度进行旋转细胞旋转复原,利用旋转细胞相衬成像模块(9)对细胞图像进行上下、左右相衬对比成像观察细胞流动过程中形态变化情况。
2.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的系统,其特征在于:旋转细胞相衬成像模块(9)在细胞模糊消除模块(7)完成重影消除之后直接利用上下、左右半圆照明模式进行上下对比相衬成像和左右对比相衬成像。
3.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的系统,其特征在于:细胞模糊消除模块(7)使用最小二乘法对采集的细胞样本图像进行重影消除。
4.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的系统,其特征在于:本系统在利用旋转细胞相衬成像模块(9)对流动旋转细胞相衬结构成像时,是基于非对称照明方式来编辑LED照明花样,形成非对称光,使通过样本细胞光程发生差异产生相位变化,结合相衬成像原理以及利用旋转细胞特征提取和识别模块(5)和图像细胞旋转校正模块(8),达到对个别旋转细胞的精确相衬成像。
5.一种基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,其特征在于:
LED阵列产生相衬成像的非对称光,该非对称光照射在通有流通细胞样本的微流通道(2),微流通道(2)控制悬浮细胞液的定向运动,显微镜(3)放大微流通道中样本信息,Cmos相机采集模块(4)与LED阵列(1)之间电压信息相互反馈控制,Cmos相机采集模块(4)连续采集在非对称照明下微流通道(2)中旋转细胞图像信息,然后在计算机中利用图像中旋转细胞特征提取和识别模块(5)提取连续相邻采集两幅图像之间的旋转细胞位置信息和识别相邻两幅图中是否为同一旋转细胞,测细胞旋转量模块(6)测量旋转细胞的旋转方向和旋转角度大小,细胞模糊消除模块(7)对采集的细胞样本图像进行重影消除,图像细胞旋转校正模块(8)利用同一旋转细胞之间的旋转量对连续相邻两幅图像依照旋转方向和旋转角度进行旋转细胞旋转复原,利用旋转细胞相衬成像模块(9)对细胞图像进行上下、左右相衬对比成像观察细胞流动过程中形态变化情况。
6.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,其特征在于:旋转细胞相衬成像模块(9)在细胞模糊消除模块(7)完成重影消除之后直接利用上下、左右半圆照明模式进行上下相衬成像和左右相衬成像。
7.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,其特征在于:细胞模糊消除模块(7)使用最小二乘法对采集的细胞样本图像进行重影消除。
8.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,其特征在于:本方法在利用旋转细胞相衬成像模块(9)对流动旋转细胞相衬结构成像时,是基于非对称照明方式来编辑LED照明花样,形成非对称光,使通过样本细胞光程发生差异产生相位变化,结合相衬成像原理以及利用旋转细胞特征提取和识别模块(5)和图像细胞旋转校正模块(8),达到对个别旋转细胞的精确相衬成像。
9.根据权利要求1的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)基于LED阵列光源对显微镜系统进行校准,使LED灯板亮场情况下完全处于显微镜物镜视场之中;
(2)设置LED阵列照明花样,使Cmos相机采集和LED阵列照明花样变化同步;
(3)在微流通道中注入细胞悬浮液;
(4)控制相机和LED阵列照明花样变化,采集细胞通过微流通道的光强度图像;
(5)针对旋转细胞进行细胞边缘提取,识别和匹配下一幅LED照明花样采集图像中同一旋转细胞;
(6)对相匹配细胞的旋转量进行计算,并且对细胞在快速流动过程产生的模糊进行消除;
(7)基于旋转方向和旋转角度大小对连续采集两幅图像之间旋转细胞校正;
(8)利用非对称照明相衬成像原理合成这些旋转细胞相衬成像结果。
10.根据权利要求9的基于LED阵列的微流通道旋转细胞相衬成像的方法,其特征在于:步骤(1)中校准利用视场中心正方形分布的9颗LED,在4倍物镜下衍射图样呈左右上下镜像分布。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810856988.XA CN108896470B (zh) | 2018-07-31 | 2018-07-31 | 基于led阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810856988.XA CN108896470B (zh) | 2018-07-31 | 2018-07-31 | 基于led阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108896470A true CN108896470A (zh) | 2018-11-27 |
CN108896470B CN108896470B (zh) | 2021-03-16 |
Family
ID=64352769
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810856988.XA Expired - Fee Related CN108896470B (zh) | 2018-07-31 | 2018-07-31 | 基于led阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108896470B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111123497A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-05-08 | 电子科技大学 | 一种基于led阵列照明的显微镜光学装置及其校准方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1482369A (zh) * | 2002-08-30 | 2004-03-17 | 英特尔公司 | 微流体通道中的级联流体动力学集中 |
US20070243523A1 (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-18 | Fluxion Biosciences Inc. | Methods and Apparatus for the Manipulation of Particle Suspensions and Testing Thereof |
CN104765138A (zh) * | 2015-04-17 | 2015-07-08 | 南京理工大学 | 基于led阵列的多模式显微成像系统及其方法 |
CN105158887A (zh) * | 2015-09-29 | 2015-12-16 | 南京理工大学 | 基于可编程led阵列照明的多模式显微成像方法 |
CN106768396A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-05-31 | 电子科技大学 | 一种基于微分相衬成像还原定量相位图像的方法及系统 |
CN107300762A (zh) * | 2016-04-15 | 2017-10-27 | 南京理工大学 | 一种相衬显微成像装置及方法 |
CN108537842A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-09-14 | 南京理工大学 | 差分相衬显微成像中背景非均匀性的校正与补偿方法 |
-
2018
- 2018-07-31 CN CN201810856988.XA patent/CN108896470B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1482369A (zh) * | 2002-08-30 | 2004-03-17 | 英特尔公司 | 微流体通道中的级联流体动力学集中 |
US20070243523A1 (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-18 | Fluxion Biosciences Inc. | Methods and Apparatus for the Manipulation of Particle Suspensions and Testing Thereof |
CN104765138A (zh) * | 2015-04-17 | 2015-07-08 | 南京理工大学 | 基于led阵列的多模式显微成像系统及其方法 |
CN105158887A (zh) * | 2015-09-29 | 2015-12-16 | 南京理工大学 | 基于可编程led阵列照明的多模式显微成像方法 |
CN107300762A (zh) * | 2016-04-15 | 2017-10-27 | 南京理工大学 | 一种相衬显微成像装置及方法 |
CN106768396A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-05-31 | 电子科技大学 | 一种基于微分相衬成像还原定量相位图像的方法及系统 |
CN108537842A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-09-14 | 南京理工大学 | 差分相衬显微成像中背景非均匀性的校正与补偿方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111123497A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-05-08 | 电子科技大学 | 一种基于led阵列照明的显微镜光学装置及其校准方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108896470B (zh) | 2021-03-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Merola et al. | Tomographic flow cytometry by digital holography | |
US10578541B2 (en) | Flow cytometer with digital holographic microscope | |
Roy et al. | A review of recent progress in lens-free imaging and sensing | |
US9435993B2 (en) | Three dimensional microscopy imaging | |
CN104570315B (zh) | 一种基于结构照明的彩色三维层析显微成像系统及方法 | |
CN105182514B (zh) | 基于led光源的无透镜显微镜及其图像重构方法 | |
CN100477734C (zh) | 成像系统以及采用倒易空间光学设计的方法 | |
CN107966801A (zh) | 一种基于环形照明的高速傅立叶叠层成像装置及重构方法 | |
CN105158894A (zh) | 基于彩色led阵列照明的无透镜相位显微层析装置及图像重构方法 | |
KR20170013855A (ko) | 큰 손상되지 않은 조직 샘플들을 이미징하기 위한 방법들 및 디바이스들 | |
CN106023291B (zh) | 快速获取大样本三维结构信息和分子表型信息的成像装置和方法 | |
US20230359010A1 (en) | A miniaturized, low-cost, multi-contrast label-free microscope imaging system | |
US10775602B2 (en) | Microscopy method and apparatus for optical tracking of emitter objects | |
US9970858B2 (en) | Method and system for detecting at least one particle in a bodily fluid, and associated method for diagnosing meningitis | |
WO2023221741A1 (zh) | 一种基于非干涉合成孔径的光强传输衍射层析显微成像方法 | |
CN107561080A (zh) | 一种微纳米纤维素的动态表征方法 | |
Moscelli et al. | An imaging system for real-time monitoring of adherently grown cells | |
CN112114423A (zh) | 一种便携式全自动多模态显微成像装置 | |
CN109752377A (zh) | 一种分光式双模态投影层析组织血管成像装置及方法 | |
Guo et al. | Depth-multiplexed ptychographic microscopy for high-throughput imaging of stacked bio-specimens on a chip | |
CN108896470A (zh) | 基于led阵列的微流通道旋转细胞相衬成像方法及系统 | |
CN115774327A (zh) | 一种集成照明调制和瞳孔调制的定量差分相衬显微镜 | |
US11422355B2 (en) | Method and system for acquisition of fluorescence images of live-cell biological samples | |
CN209624404U (zh) | 一种分光式双模态投影层析组织血管成像装置 | |
CN109540888A (zh) | 一种新型精子质量评价方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210316 Termination date: 20210731 |