CN108812329A - 一种无nh4no3植物组织培养用培养基 - Google Patents
一种无nh4no3植物组织培养用培养基 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种无NH4NO3植物组织培养用培养基,包括SK基本培养基,该SK基本培养基中大量元素的含量为:Ca(NO3)2494mg/L、Mg(NO3)2222mg/L、(NH4)2SO4198 mg/L、(NH4)3PO4372 mg/L、NH4Cl 321mg/L和KNO32153mg/L。本发明使用(NH4)2SO4、(NH4)3PO4和NH4Cl提供NH4 +,Ca(NO3)2、Mg(NO3)2和KNO3提供NO3 -,部分替换NH4NO3,重新设计培养基,使其大量元素离子浓度与MS、ER等常用培养基接近,能维持组培苗正常生长,应对NH4NO3短缺对组培产业带来的挑战,具备现实的生产意义。
Description
技术领域
本发明属于植物生物技术领域,具体涉及一种无NH4NO3植物组织培养用培养基。
背景技术
MS培养基由Murashige 和 Skoog于1962年发布,其普遍适用性及稳定性使其广泛用于多种植物的各类组织培养,香蕉、兰花及桉树等实现工业化组培育苗的品种,其培养基均由MS衍生改良而来。硝酸铵NH4NO3为MS主要构成成分,占大量元素质量百分比36.4%,是MS铵态氮NH4 +的来源,同时维持了NH4 +与NO3 -摩尔浓度近似1:2的合适比例。NH4NO3是《危险化学品安全管理条例》及《民用爆炸物品安全管理条例》管制药剂,禁止纯品NH4NO3市场流通,NH4NO3的禁用对组培产业可谓釜底抽薪,寻求NH4NO3有效替代品维持正常生产成为产业生存与发展的重要课题。
王媛花将MS培养基NH4NO3替换为3.4 g/L(NH4)2SO4,对苹果、草莓和葡萄组培苗进行试验,报道结论为继代的植物叶片平展,叶色嫩绿,植物幼嫩组织含水量高,植株生长旺盛。大量元素的简单替换导致离子浓度大幅波动,其NH4 + 及SO4 2-水平远远超过MS、ER、B5、WPM等常用培养基,NH4 +与NO3 -比例亦是独树一帜达到2.74:1,而据普遍适用的规律,培养基内过高NH4 +水平,持续培养会抑制培养物生长,诱发玻璃化等毒害反应,该配方应用效果和适应性有待验证。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:在不使用NH4NO3的前提下,提供一种具备普遍适用性的植物组织培养用培养基。
为了解决上述技术问题,本发明提供的一种无NH4NO3植物组织培养用培养基,包括SK基本培养基,该SK基本培养基中大量元素的含量为:Ca(NO3)2 494mg/L、Mg(NO3)2 222mg/L、(NH4)2SO4 198 mg/L、(NH4)3PO4 372 mg/L、NH4Cl 321mg/L和KNO3 2153mg/L。
上述中,该SK基本培养基中微量元素、铁盐和有机物的含量与MS培养基中的相同。
上述中,该SK基本培养基中微量元素的含量为MnSO4·4H2O 22.3mg/L 、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、NaMoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L和CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;铁盐含量为NaEDTA·2H2O 37.3mg/L和FeSO4·7H2O27.8mg/L;有机物的含量为肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L和甘氨酸2 mg/L。
本发明中的SK基本培养基可替换常用的MS培养基,且与MS培养基一样,在生产用培养基制作中,在SK基本培养基基础上,根据实际培养需要添加包含但不限于大量元素水溶性肥料、有机液肥、适量激素、蔗糖和卡拉胶等,而添加的量与MS培养基一样,且调节pH至5.8,即可搅拌分装。
另外,其SK基本培养基全部或部分大量元素组分可按相同比例调整。
本发明的有益效果在于:使用(NH4)2SO4、(NH4)3PO4和NH4Cl提供NH4 +, Ca(NO3)2、Mg(NO3)2和KNO3提供NO3 -,部分替换NH4NO3,重新设计培养基,使其大量元素离子浓度与MS、ER等常用培养基接近,能维持组培苗正常生长,应对NH4NO3短缺对组培产业带来的挑战,需求迫切,具备现实的生产意义。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果,以下结合实施方式予以说明。
以下实施例中用于配制大量元素、铁盐、微量元素及有机物的药剂均为广州化学试剂厂生产的分析纯试剂,蔗糖为食用级白砂糖,卡拉胶为北京康倍斯科技有限公司生产。翠筠(18-18-18)水溶肥由佛山市顺德区翠筠园艺有限公司生产,其标识成分为:全氮18%(其中铵态氮3.6%、硝态氮5.3%)、水溶性磷18%、水溶性钾18%、水溶氧化镁2%。
该培养基包括SK基本培养基,该SK基本培养基中各组分的含量为:
大量元素Ca(NO3)2 494mg/L、Mg(NO3)2 222mg/L、(NH4)2SO4 198 mg/L、(NH4)3PO4 372mg/L、NH4Cl 321mg/L和KNO3 2153mg/L,微量元素MnSO4·4H2O 22.3mg/L 、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、NaMoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L及CoCl2·6H2O 0.025 mg/L,铁盐含量为NaEDTA·2H2O 37.3mg/L和FeSO4·7H2O 27.8mg/L,有机物的含量为肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L和甘氨酸2 mg/L。
下面各实施例分别采用上述的SK基本培养基,添加植物生长调节剂而得各种植物组织培养基。
实施例一:
广林9号巨尾桉,增殖SK+6-BA0.2mg/L+NAA0.05 mg/L,生根SK+NAA1.0 mg/L +IBA0.5mg/L,所有培养基均加入卡拉胶6.5g/L、白砂糖30 g/L,灭菌前pH调节为5.8。
实施例二:
黑金刚橡胶榕,增殖SK+6-BA1.5mg/L+NAA0.1 mg/L,生根SK+NAA0.5 mg/L +IBA0.1mg/L,所有培养基均加入卡拉胶6.5g/L、白砂糖30 g/L,灭菌前pH调节为5.8。
实施例三:
美酒白掌,增殖SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g+6-BA1.5mg/L,生根MS+NAA0.5 mg/L +IBA0.1 mg/L,所有培养基均加入卡拉胶6.5g/L、白砂糖30 g/L,灭菌前pH调节为5.8。
应用比较例:
1.参试材料组培方法
原始培养基:(1)广林9号巨尾桉,增殖ER+6-BA0.2mg/L+NAA0.05 mg/L,生根1/2ER+NAA1.0 mg/L +IBA0.5 mg/L;(2)黑金刚橡胶榕,增殖MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1 mg/L,生根MS+NAA0.5 mg/L +IBA0.1 mg/L;(3)美酒白掌,增殖MS+6-BA1.5mg/L,生根MS+NAA0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L。所有培养基均加入卡拉胶6.5g/L、白砂糖30 g/L,灭菌前pH调节为5.8。
培养环境:培养室光照强度1600 lx、培养温度26℃±2℃;炼苗间为单层遮阳网大棚,遮光率40%,配备风机水帘。
培养周期:广林9号巨尾桉继代增殖周期20d,生根培养时间为25 d;黑金刚橡胶榕继代增殖周期30d,生根培养时间为25 d;美酒白掌继代增殖周期30d,生根培养时间为35d。
生根苗接入标准:广林9号巨尾丛生芽内高度>1.0㎝单芽可用于生根,且取长度0.5㎝顶芽接种至生根培养基;黑㎝金刚橡胶榕高度>2.0㎝单芽可用于生根,且取长度1.2~1.5㎝顶芽接种至生根培养基;美酒白掌高度>2.5㎝单芽可用于生根,将单芽完整的从丛生芽分离,接种至生根培养基。达不到高度要求但形态完整的单芽保留在接种团块上用于继代,本研究将可用于生根的单芽称为生根芽、形态完整的后备单芽称为后备芽。
2. SK培养基应用效果测试
广林9号巨尾桉增殖、黑金刚橡胶榕、美酒白掌组培苗增殖和生根培养均设置MS、ER、SK、SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g基本培养基共4个处理,广林9号巨尾桉原基本培养基为1/2ER,则基本培养基处理大量元素均减半。各物种原有培养基激素、培养环境和培养周期等保持不变。
2.1 各培养基对参试材料增殖继代的影响
以生产用继代增殖材料,接入试验培养基,每个处理重复3次,每个重复接种30瓶,继代周期完成后,选择具备代表性的增殖材料重新转入相同试验培养基进行第2代培养,共培养3代。第3代继代培养周期完成后观察其增殖苗植株形态是否出现可见变化,玻璃化程度、小芽完整程度、叶片是否正常展开。统计单瓶增殖苗内生根芽及后备芽数量,测量生根芽基部茎粗及高度等指标。
2.2各培养基对参试材料生根培养的影响
广林9号巨尾桉使用2.3.1所得SK增殖试验苗、黑金刚橡胶榕及美酒白掌使用SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g增殖试验苗作为试材,接入不同生根培养基,使用生产配方接种生根苗作为对照。每个处理重复3次,每个重复接种30瓶,接种10d,剔除污染,带瓶转移至炼苗棚炼苗,各品种生根培养时间结束后,观测生根苗顶芽生长是否正常,根系完整情况及根系质地,测量生根苗高度、根系条数并分析。
3. SK培养基测试结果
3.1 基本培养基处理对各参试物种增殖继代培养的影响
基本培养基处理对广林9号巨尾桉、黑金刚橡胶榕及美酒白掌组培苗增殖均存在影响。(1)广林9号巨尾桉,MS及SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g基本培养基处理,增殖苗生长旺盛,组织含水量高呈现轻微玻璃化,丛生芽多而叶片大,丛生芽内单芽茎干纤细。ER和SK基本培养基处理,苗木形态正常,充实健壮,且丛生芽内单芽质地趋向木质化,利于生根培养。(2)黑金刚橡胶榕,MS及SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g基本培养基处理,丛生芽团块基部轻微愈伤化,增殖苗生长旺盛,丛生芽内单芽茎干粗壮整齐、未见玻璃化、顶芽色泽和形态均正常。ER和SK基本培养基处理,丛生芽团块愈伤极少,苗木形态正常,丛生芽内单芽茎粗不均匀,部分单芽较纤细、顶芽叶片小,不能正常用于生根培养。(3)美酒白掌,MS及SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g基本培养基处理,丛生芽团块少量不定根发生,增殖苗生长旺盛,丛生芽内单芽叶柄粗壮,叶片正常展开、叶色浓绿未见玻璃化,可生根单芽矮缩茎膨大。ER和SK基本培养基处理,丛生芽团块不定根发生较多,增殖苗长势稍差,部分单芽细弱、叶片窄而狭长、叶色淡绿,可生根单芽矮缩茎未见明显膨大。相关指标见表1。
表1. 基本培养基处理对增殖苗生长的影响
由表1可知,(1)对广林9号巨尾桉,MS处理效果与SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g处理效果类似,呈现后备芽多而生根芽少、生根芽纤细而高生长明显的趋势。ER和SK培养基效果类似,有效生根芽数量多,而后备芽也能正常发育为有效生根芽,生根芽粗壮敦实。(2)对黑金刚橡胶榕增殖苗的影响,各处理后备芽数量、生根芽高度不存在统计学差异。效果类似,有效生根芽数量多,单芽茎基直径大,与ER和SK处理差异显著,MS处理与SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g处理之间在有效生根芽数量和单芽茎基直径上不存在统计学差异,ER和SK处理之间亦不存在统计学差异。(3)对美酒白掌的影响,各基本培养基处理后备芽数量不存在统计学差异,ER和SK处理继代过程中后备芽不能正常发育达到生根标准,其生根芽数量和生根芽茎基直径均显著小于MS与SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g处理。
3. 2 基本培养基处理对各参试物种生根培养的影响
各基本培养基处理均能使各参试组培苗100%生根,且苗木生长健壮,顶芽色泽及形态均正常,根系完整,主根生长均匀且木质化程度良好、侧根发达,根冠比例正常。各处理相关指标见表2。
表2. 基本培养基处理对生根苗生长的影响
由表2可知,各基本培养基处理对广林9号巨尾桉、黑金刚橡胶榕和美酒白掌生根苗高度、生根苗茎基直径的影响均不构成统计学差异。低盐培养基ER和SK,生根条数优于MS与SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g处理。
4.对测试结果的评价
SK大量元素离子浓度设计合理,NO3 -/ NH4 +比例接近2:1,符合一般富盐培养基的设计规律。在培养基适应性研究过程中发现,SK或翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g培养基,可使参试物种正常增殖继代和生根培养,SK应用效果和ER接近,SK+翠筠(18-18-18)水溶肥0.5g应用效果同MS接近。MS为组培常用培养基,ER亦为经典培养基,但二者均需用到NH4NO3,SK用其它药品完全取代了NH4NO3,为应对NH4NO3禁用对组培产业的影响提供了简单可行的解决方案。
Claims (3)
1.一种无NH4NO3植物组织培养用培养基,包括SK基本培养基,其特征在于,该SK基本培养基中大量元素的含量为:Ca(NO3)2 494mg/L、Mg(NO3)2 222mg/L、(NH4)2SO4 198 mg/L、(NH4)3PO4 372 mg/L、NH4Cl 321mg/L和KNO3 2153mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种无NH4NO3植物组织培养用培养基,其特征在于,该SK基本培养基中微量元素、铁盐和有机物的含量与MS培养基中的相同。
3.根据权利要求1或2所述的一种无NH4NO3植物组织培养用培养基,其特征在于,该SK基本培养基中微量元素的含量为MnSO4·4H2O 22.3mg/L 、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3BO36.2mg/L、KI 0.83mg/L、NaMoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L和CoCl2·6H2O0.025 mg/L;铁盐含量为NaEDTA·2H2O 37.3mg/L和FeSO4·7H2O 27.8mg/L;有机物的含量为肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L和甘氨酸2 mg/L。
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Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108812329A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112136688A (zh) * | 2020-08-12 | 2020-12-29 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种植物组织培养基及制备方法 |
CN112931206A (zh) * | 2021-03-04 | 2021-06-11 | 华南农业大学 | 一种不含易制爆化合物的植物培养基及其应用 |
CN115843686A (zh) * | 2022-12-03 | 2023-03-28 | 瑞盈优品(广东)农业科技有限责任公司 | 一种甘薯组培用的培养基及其制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101480166A (zh) * | 2008-01-08 | 2009-07-15 | 厦门涌泉科技有限公司 | 一种杉木组织培养生根方法 |
CN102224802A (zh) * | 2011-04-19 | 2011-10-26 | 浙江大学 | 草莓增殖培养基 |
CN103843662A (zh) * | 2014-03-10 | 2014-06-11 | 上海市农业科学院 | 一种促进石斛兰组培苗壮苗及生根的方法 |
CN105104208A (zh) * | 2015-09-22 | 2015-12-02 | 江苏农林职业技术学院 | 一种草莓组织培养基及其配制方法 |
-
2018
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101480166A (zh) * | 2008-01-08 | 2009-07-15 | 厦门涌泉科技有限公司 | 一种杉木组织培养生根方法 |
CN102224802A (zh) * | 2011-04-19 | 2011-10-26 | 浙江大学 | 草莓增殖培养基 |
CN103843662A (zh) * | 2014-03-10 | 2014-06-11 | 上海市农业科学院 | 一种促进石斛兰组培苗壮苗及生根的方法 |
CN105104208A (zh) * | 2015-09-22 | 2015-12-02 | 江苏农林职业技术学院 | 一种草莓组织培养基及其配制方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
VASIL GEORGIEV等: "Optimized nutrient medium for galanthamine production in Leucojum aestivum L. in vitro shoot system", 《JOURNAL OF BIOSCIENCES》 * |
王媛花: "硫酸铵或尿素代替硝酸铵的MS培养基对苹果、草莓和葡萄组培苗继代的效应", 《植物生理学通讯》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112136688A (zh) * | 2020-08-12 | 2020-12-29 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种植物组织培养基及制备方法 |
CN112931206A (zh) * | 2021-03-04 | 2021-06-11 | 华南农业大学 | 一种不含易制爆化合物的植物培养基及其应用 |
CN115843686A (zh) * | 2022-12-03 | 2023-03-28 | 瑞盈优品(广东)农业科技有限责任公司 | 一种甘薯组培用的培养基及其制备方法 |
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