CN108794366A - 一种虾青素的分离鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种虾青素的分离鉴定方法,包括以下步骤:(1)将田螺粉碎后进行冷冻干燥;(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15‑0.3mm;(3)采用超临界CO2方法进行萃取;(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点;(5)将刮取物溶于甲醇中,取甲醇活化固相萃取柱,取甲醇刮取物溶液至C18柱中,用甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,收集全部洗脱液,减压蒸干,加甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定。本方法分离鉴定方法,分离效率高,萃取率高,鉴定方法简单快捷准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种虾青素的分离鉴定方法。
背景技术
虾青素(3,3'-二羟基-β,β'-胡萝卜素-4,4'-二酮)是一种含氧类胡萝卜素,主要存在于海洋生物中。由于其优越的抗氧化功能,除被用于食品着色外,虾青素还具有多种生理功效,如在抗氧化性、抗肿瘤、预防癌症、增强免疫力、改善视力等方面都有一定的效果,同时还被证明对癌症等疾病具有有效的防治作用。虾青素的生产具有人工合成和生物获取两种方式。人工合成虾青素不仅价格昂贵,而且同天然虾青素在结构、功能、应用及安全性等方面差别显著。因此,大多数研究依然倾向于从天然产物中提取。田螺泛指田螺科的软体动物,属于软体动物门腹足纲前鳃亚纲田螺科,产量巨大,价格便宜,是提取虾青素的绝佳选择。
发明内容
要解决的技术问题:本发明的目的是提供一种虾青素的分离鉴定方法,分离效率高,萃取率高,鉴定方法简单快捷准确。
技术方案:一种虾青素的分离鉴定方法,成分按重量份计,包括以下步骤:
(1)将80-100份田螺,粉碎后进行冷冻干燥;
(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15-0.3mm;
(3)采用超临界CO2方法进行萃取,取10份粉末均匀填置于50 mL萃取釜内,以无水乙醇为夹带剂,萃取温度为50-65℃、萃取压力位20-40MPa、萃取时间为3-4h;
(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点,重复10-15次;
(5)将刮取物溶于20mL甲醇中,取5mL甲醇活化固相萃取柱,取2mL甲醇刮取物溶液至C18 柱中,用10mL甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,使其以3mL/min的流速流出,收集全部洗脱液,60℃减压蒸干,加5mL甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;
(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定:色谱条件:色谱柱采用GraceSmart RP-185u;柱温:30℃;流动相:甲醇:乙腈体积比为3:1,流速:1mL/min;检测波长:476nm;进样量:20μL。
进一步优选的,所述步骤(1)中冷冻干燥至水分为2-3.5g/100g。
进一步优选的,所述步骤(2)中夹带剂用量为0.3-1mL/g样品。
进一步优选的,所述步骤(4)中薄层色谱展开剂:二硫化碳与乙酸乙酯体积比为9:1。
进一步优选的,所述步骤(5)中固相萃取柱为CNW C18固相萃取柱。
进一步优选的,所述步骤(6)中色谱柱为250mm×4.6mm,5μm。
有益效果:
1. 田螺数量大,成本低,从中提取虾青素能够大大增加其价值。
2. 本发明方法采用超临界CO2法,分离效率高,萃取率高达87.4%,获得最佳的萃取条件。
3. 建立了从田螺中提取的虾青素的简单快捷准确的鉴定方法。
附图说明:
图1为实施例4薄层层析色谱图。
图2为标准品虾青素色谱峰。
图3为实施例4样品色谱峰。
具体实施方式
实施例1
一种虾青素的分离鉴定方法,成分按重量份计,包括以下步骤:
(1)将80份田螺,粉碎后进行冷冻干燥;
(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15-0.3mm;
(3)采用超临界CO2方法进行萃取,取10份粉末均匀填置于50 mL萃取釜内,以无水乙醇为夹带剂,夹带剂用量为0.3mL/g样品、萃取温度为50℃、萃取压力位20MPa、萃取时间为3h;
(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点,重复10次;
(5)将刮取物溶于20mL甲醇中,取5mL甲醇活化固相萃取柱,取2mL甲醇刮取物溶液至C18 柱中,用10mL甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,使其以3mL/min的流速流出,收集全部洗脱液,60℃减压蒸干,加5mL甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;
(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定:色谱条件:色谱柱采用GraceSmart RP-185u;柱温:30℃;流动相:甲醇:乙腈体积比为3:1,流速:1mL/min;检测波长:476nm;进样量:20μL。
本实施例虾青素的萃取率为56.3%。
实施例2
一种虾青素的分离鉴定方法,成分按重量份计,包括以下步骤:
(1)将85份田螺,粉碎后进行冷冻干燥;
(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15-0.3mm;
(3)采用超临界CO2方法进行萃取,取10份粉末均匀填置于50 mL萃取釜内,以无水乙醇为夹带剂,夹带剂用量为0.5mL/g样品、萃取温度为55℃、萃取压力位30MPa、萃取时间为3.5h;
(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点,重复13次;
(5)将刮取物溶于20mL甲醇中,取5mL甲醇活化固相萃取柱,取2mL甲醇刮取物溶液至C18 柱中,用10mL甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,使其以3mL/min的流速流出,收集全部洗脱液,60℃减压蒸干,加5mL甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;
(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定:色谱条件:色谱柱采用GraceSmart RP-185u;柱温:30℃;流动相:甲醇:乙腈体积比为3:1,流速:1mL/min;检测波长:476nm;进样量:20μL。
本实施例虾青素的萃取率为64.6%。
实施例3
一种虾青素的分离鉴定方法,成分按重量份计,包括以下步骤:
(1)将90份田螺,粉碎后进行冷冻干燥;
(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15-0.3mm;
(3)采用超临界CO2方法进行萃取,取10份粉末均匀填置于50 mL萃取釜内,以无水乙醇为夹带剂,夹带剂用量为0.8mL/g样品、萃取温度为60℃、萃取压力位30MPa、萃取时间为3.5h;
(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点,重复15次;
(5)将刮取物溶于20mL甲醇中,取5mL甲醇活化固相萃取柱,取2mL甲醇刮取物溶液至C18 柱中,用10mL甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,使其以3mL/min的流速流出,收集全部洗脱液,60℃减压蒸干,加5mL甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;
(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定:色谱条件:色谱柱采用GraceSmart RP-185u;柱温:30℃;流动相:甲醇:乙腈体积比为3:1,流速:1mL/min;检测波长:476nm;进样量:20μL。
本实施例虾青素的萃取率为78.3%。
实施例4
一种虾青素的分离鉴定方法,成分按重量份计,包括以下步骤:
(1)将100份田螺,粉碎后进行冷冻干燥;
(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15-0.3mm;
(3)采用超临界CO2方法进行萃取,取10份粉末均匀填置于50 mL萃取釜内,以无水乙醇为夹带剂,夹带剂用量为1mL/g样品、萃取温度为65℃、萃取压力位40MPa、萃取时间为4h;
(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点,重复15次;
(5)将刮取物溶于20mL甲醇中,取5mL甲醇活化固相萃取柱,取2mL甲醇刮取物溶液至C18 柱中,用10mL甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,使其以3mL/min的流速流出,收集全部洗脱液,60℃减压蒸干,加5mL甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;
(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定:色谱条件:色谱柱采用GraceSmart RP-185u;柱温:30℃;流动相:甲醇:乙腈体积比为3:1,流速:1mL/min;检测波长:476nm;进样量:20μL。
本实施例虾青素的萃取率为87.4%。图2中虾青素标准品保留时间T=3.781,而样品中相应峰(T=3.773)与虾青素标准品保留时间极为接近,并通过二极管阵列检测器在210-800nm紫外扫描表明,二者紫外吸收图谱极为相似,均在480 nm处有最大吸收,同时结合图1,判断样品在保留时间为3.773 min峰为虾青素。
Claims (6)
1.一种虾青素的分离鉴定方法,其特征在于:成分按重量份计,包括以下步骤:
(1)将80-100份田螺,粉碎后进行冷冻干燥;
(2)取出后研磨粉碎至颗粒大小为0.15-0.3mm;
(3)采用超临界CO2方法进行萃取,取10份粉末均匀填置于50 mL萃取釜内,以无水乙醇为夹带剂,萃取温度为50-65℃、萃取压力位20-40MPa、萃取时间为3-4h;
(4)将萃取到的物质进行薄层层析,以虾青素标样为基准,刮下硅胶板上与虾青素标样平行的点,重复10-15次;
(5)将刮取物溶于20mL甲醇中,取5mL甲醇活化固相萃取柱,取2mL甲醇刮取物溶液至C18 柱中,用10mL甲醇洗脱,分4次添加到柱中,调节流速,使其以3mL/min的流速流出,收集全部洗脱液,60℃减压蒸干,加5mL甲醇复溶,过0.22μm有机滤膜得处理后的样品;
(6)采用高效液相色谱法对样品进行鉴定:色谱条件:色谱柱采用GraceSmart RP-185u;柱温:30℃;流动相:甲醇:乙腈体积比为3:1,流速:1mL/min;检测波长:476nm;进样量:20μL。
2.根据权利要求 1所述的一种虾青素的分离鉴定方法,其特征在于:所述步骤(1)中冷冻干燥至水分为2-3.5g/100g。
3.根据权利要求 1所述的一种虾青素的分离鉴定方法,其特征在于:所述步骤(2)中夹带剂用量为0.3-1mL/g样品。
4.根据权利要求 1所述的一种虾青素的分离鉴定方法,其特征在于:所述步骤(4)中薄层色谱展开剂:二硫化碳与乙酸乙酯体积比为9:1。
5.根据权利要求 1所述的一种虾青素的分离鉴定方法,其特征在于:所述步骤(5)中固相萃取柱为CNW C18固相萃取柱。
6.根据权利要求 1所述的一种虾青素的分离鉴定方法,其特征在于:所述步骤(6)中色谱柱为250mm×4.6mm,5μm。
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