CN108776190A - 沙棘中酚类物质定量检测方法 - Google Patents

沙棘中酚类物质定量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种沙棘中酚类物质定量检测的方法，包括：制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；制备内标溶液：将2‑Cl‑苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC‑MS分析，得到标准曲线；和处理沙棘样品，得到检测样本进行GC‑MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。采用本发明的方法可准确地测定出沙棘中各酚类物质的含量，具有稳定、准确、可靠的优点。

Description

沙棘中酚类物质定量检测方法
技术领域
本发明大致涉及化学物质定量检测方法类，具体涉及一种沙棘中酚类物质的定量检测方法。
背景技术
酚类物质中多含有酮基与羟基两种基团，这两种基团使得酚类物质极性较大，挥发性差，热稳定性较差，在进行GC-MS分析时导致无法定量或者定量不准确，为了更好的进行定量，往往会对物质进行衍生化处理，衍生化技术是通过化学反应将样品中难于分析检测的目标化合物定量的转化成另一种易于分析检测的化合物。通过衍生化可以有效地降低待测物的极性提高挥发性，增加热稳定性，从而提高检测灵敏度和改善色谱峰型。
背景技术部分的内容仅仅是发明人所知晓的技术，并不当然代表本领域的现有技术。
发明内容
针对现有技术存在问题中的一个或多个，本发明提供一种沙棘中酚类物质的定量检测方法，包括：
制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；
制备内标溶液：将2-Cl-苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；
制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC-MS分析，得到标准曲线；和
处理沙棘样品，得到检测样本进行GC-MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。
根据本发明的一个方面，所述多种酚类标定物包括芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E。
根据本发明的一个方面，所述混标工作液和所述内标溶液的溶剂为甲醇。
根据本发明的一个方面，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液中芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的浓度分别为：芦丁0.125mg/mL、异鼠李素0.00625mg/mL、山奈酚0.5μg/mL、杨梅素2.5μg/mL、柚皮素2.5μg/mL、槲皮素5μg/mL和维生素E 25μg/mL；和/或
所述制备内标溶液步骤中，所述内标溶液中2-Cl-苯丙氨酸的浓度为0.03mg/mL。
根据本发明的一个方面，所述制备标准曲线的步骤中，所述N为大于或等于5的整数，优选地，N为7；和/或
所述N组不同体积的所述混标工作液的体积为0-400μL中的任意N组，优选为400μL、200μL、100μL、40μL、20μL、10μL和4μL；和/或
所述N组相同体积的所述内标溶液的体积均为40μL。
根据本发明的一个方面，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液包括混标工作液A和混标工作液B。
根据本发明的一个方面，所述混标工作液A的制备方法为：
制备标准储备液：将芦丁、异鼠李素溶于溶剂中，分别制备得到0.5mg/mL的芦丁标准储备液和0.025mg/mL的异鼠李素标准储备液；和
制备混标工作液A：按照体积比为1:1将所述芦丁标准储备液和异鼠李素标准储备液混合，得到混标工作液A；
根据本发明的一个方面，所述混标工作液B的制备方法为：
制备标准储备液：取山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E溶于溶剂中，分别制备得到1mg/mL的标准储备液；
制备标准品工作液：分别稀释所述山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的标准储备液，得到10μg/mL的山奈酚标准品工作液、50μg/mL的杨梅素标准品工作液、50μg/mL的柚皮素标准品工作液、100μg/mL的槲皮素标准品工作液和500μg/mL的维生素E标准品工作液；和
制备混标工作液B：取相同体积V的各标准品工作液混合后，用甲醇稀释至体积为10V，得到混标工作液B。
根据本发明的一个方面，所述N组不同体积的所述混标工作液A的体积为0-200μL中的任意N组，且每组中所述混标工作液A和所述混标工作液B的体积相同，优选为200μL、100μL、50μL、20μL、10μL、5μL和2μL；和/或
所述N组相同体积的所述内标溶液的体积为40μL。
根据本发明的一个方面，所述制备标准曲线步骤中，对所述混合液进行GC-MS分析之前，事先对所述混合液进行衍生化处理。
根据本发明的一个方面，所述对混合液进行衍生化处理包括：
挥干所述混合液，得到挥干后的标准品；优选地，所述挥干采用快速离心干燥仪；
向所述挥干后的标准品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；
向所述震荡培养物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化标准品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和
室温条件下放置所述衍生化标准品，得到分析标准品，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。
根据本发明的一个方面，所述制备标准曲线步骤中，所述混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度＝该酚类标定物特征碎片质谱响应强度/内标特征碎片质谱响应强度，以加入的混标工作液中各酚类标定物的量作为自变量x，以加入的混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度为因变量y，得到所述混标工作液中各酚类标定物的标准曲线。
根据本发明的一个方面，所述处理沙棘样品包括提取沙棘内含物和衍生化所述沙棘内含物。
根据本发明的一个方面，所述提取沙棘内含物的方法为：
向沙棘样品中加入冷甲醇-水和所述内标溶液，进行匀浆，得到匀浆物；优选地，所述沙棘样品的量为60mg，事先保存在液氮中，所述冷甲醇-水的体积比为3:1,加入的量为960μL，所述内标溶液加入的量为40μL；和
提取所述匀浆物并离心，得到沙棘内含物；优选地，所述提取方法为超声提取，超声功率为100-250W，提取时间为20-40min；所述离心转速为14000rpm，离心温度为4℃，离心时间为10min；
根据本发明的一个方面，所述衍生化所述沙棘内含物的方法为：
挥干所述沙棘内含物，得到挥干后的待测品；优选地，所述挥干采用快速离心浓缩仪；
向所述挥干后的待测品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养待测物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；
向所述震荡培养待测物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化待测品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和
室温条件下放置所述衍生化待测品，得到检测样本，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。
根据本发明的一个方面，所述GC-MS分析采用高纯氦气作为载气，优选地，载气流速1.0mL/min；和/或
所述GC-MS分析采用的升温程序为：以15℃/min从60℃升温至170℃；以5℃/min从170℃升温至305℃；305℃维持6.7min；和/或
所述GC-MS分析的进样口温度为260℃，EI源温度为230℃，电压为70V；和/或
所述GC-MS分析的质量扫描范围：m/z 55-800，延迟12min开始采集，采集速度为20谱/秒。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是本发明的芦丁的标准曲线；
图2是本发明的异鼠李素的标准曲线；
图3是本发明的山奈酚的标准曲线；
图4是本发明的杨梅素的标准曲线；
图5是本发明的柚皮素的标准曲线；
图6是本发明的槲皮素的标准曲线；
图7是本发明的维生素E的标准曲线。
具体实施方式
在下文中，仅简单地描述了某些示例性实施例。正如本领域技术人员可认识到的那样，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，可通过各种不同方式修改所描述的实施例。因此，附图和描述被认为本质上是示例性的而非限制性的。
下文的公开提供了许多不同的实施方式或例子用来实现本发明的不同方法。本发明提供了的各种特定的工艺和材料的例子，但是本领域普通技术人员可以意识到其他工艺的应用和/或其他材料的使用。
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
在本发明的第一实施方式中，提供一种沙棘中酚类物质的定量检测方法，包括：
制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；
制备内标溶液：将2-Cl-苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；
制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC-MS分析，得到标准曲线；和
处理沙棘样品，得到检测样本进行GC-MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。
根据本发明的一个优选实施例，所述多种酚类标定物包括但不限于芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E。
根据本发明的一个优选实施例，所述混标工作液和所述内标溶液的溶剂为甲醇。
根据本发明的一个优选实施例，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液中芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的浓度分别为：芦丁0.125mg/mL、异鼠李素0.00625mg/mL、山奈酚0.5μg/mL、杨梅素2.5μg/mL、柚皮素2.5μg/mL、槲皮素5μg/mL和维生素E 25μg/mL。
根据本发明的一个优选实施例，所述制备内标溶液步骤中，所述内标溶液中2-Cl-苯丙氨酸的浓度为0.03mg/mL。
根据本发明的一个优选实施例，所述制备标准曲线的步骤中，所述N为大于或等于5的整数，例如N为5、6、7、8、9、10，等；作为更优选的实施例，N为7。
根据本发明的一个优选实施例，所述N组不同体积的所述混标工作液的体积为0-400μL中的任意N组，例如当N为7时，可以选择400μL、200μL、100μL、40μL、20μL、10μL和4μL作为不同体积的所述混标工作液；所述N组相同体积的所述内标溶液的体积均为40μL。
根据本发明的一个优选实施例，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液还可包括混标工作液A和混标工作液B。
根据本发明的一个优选实施例，所述混标工作液A的制备方法为：
制备标准储备液：将芦丁、异鼠李素溶于溶剂中，分别制备得到0.5mg/mL的芦丁标准储备液和0.025mg/mL的异鼠李素标准储备液；和
制备混标工作液A：按照体积比为1:1将所述芦丁标准储备液和异鼠李素标准储备液混合，得到混标工作液A；
根据本发明的一个方面，所述混标工作液B的制备方法为：
制备标准储备液：取山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E溶于溶剂中，分别制备得到1mg/mL的标准储备液；
制备标准品工作液：分别稀释所述山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的标准储备液，得到10μg/mL的山奈酚标准品工作液、50μg/mL的杨梅素标准品工作液、50μg/mL的柚皮素标准品工作液、100μg/mL的槲皮素标准品工作液和500μg/mL的维生素E标准品工作液；和
制备混标工作液B：取相同体积V的各标准品工作液混合后，用甲醇稀释至体积为10V，得到混标工作液B。
根据本发明的一个优选实施例，所述N组不同体积的所述混标工作液A的体积为0-200μL中的任意N组，且每组中所述混标工作液A和所述混标工作液B的体积相同，例如当N为7时，可选择200μL、100μL、50μL、20μL、10μL、5μL和2μL作为不同体积的混标工作液A和混标工作液B；所述N组相同体积的所述内标溶液的体积为40μL。
根据本发明的一个优选实施例，可以将混标工作液A和混标工作液B按照等体积进行混合得到混标工作液，从而进行标准曲线的制备。
根据本发明的一个优选实施例，所述制备标准曲线步骤中，对所述混合液进行GC-MS分析之前，事先对所述混合液进行衍生化处理。
根据本发明的一个优选实施例，所述对混合液进行衍生化处理包括：
挥干所述混合液，得到挥干后的标准品；所述挥干可采用快速离心干燥仪；
向所述挥干后的标准品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；
向所述震荡培养物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化标准品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和
室温条件下放置所述衍生化标准品，得到分析标准品，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。
根据本发明的一个优选实施例，所述制备标准曲线步骤中，所述混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度＝该酚类标定物特征碎片质谱响应强度/内标特征碎片质谱响应强度，以加入的混标工作液中各酚类标定物的量作为自变量x，以加入的混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度为因变量y，得到所述混标工作液中各酚类标定物的标准曲线。
下表1示出了采用本发明的方法各酚类标定物的定量信息表。其中保留时间为待测样品出峰时间；特征碎片离子是某一种物质经GC-MS后产生的不同的离子碎片；可根据需求选择出此物质特异的/效果好的碎片离子作为该物质的定量离子，以防止其他物质产生相同离子而导致误差或者定量困难的存在。
表1：
如图1-图7所示，示出的是采用本发明的方法和各酚类标定物的定量信息制备得到的芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的标准曲线。
下表2和表3示出了以低、中、高三个加标水平考察本发明的定量方法的准确度和精密度。如表2所示，本发明的定量方法准确、稳定、可靠，三种不同添加浓度水平的考察下的准确度为91.36％-107.58％之间，日内精密度和日间精密度的RSD值均小于15％。
表2：
表3：
根据本发明的一个优选实施例，所述处理沙棘样品包括提取沙棘内含物和衍生化所述沙棘内含物。
根据本发明的一个优选实施例，所述提取沙棘内含物的方法为：
向沙棘样品中加入冷甲醇-水和所述内标溶液，进行匀浆，得到匀浆物；优选地，所述沙棘样品的量为60mg，事先保存在液氮中，所述冷甲醇-水的体积比为3:1,加入的量为960μL，所述内标溶液加入的量为40μL；本领域技术人员应当理解，还可以选取不同量的沙棘样品配制成不同浓度的沙棘提取样品，并相应地改变内标溶液的加入量，这些改变都在本发明的保护范围之内；和
提取所述匀浆物并离心，得到沙棘内含物；优选地，所述提取方法为超声提取，超声功率为100-250W，提取时间为20-40min；所述离心转速为14000rpm，离心温度为4℃，离心时间为10min。
根据本发明的一个优选实施例，所述衍生化所述沙棘内含物的方法为：
挥干所述沙棘内含物，得到挥干后的待测品；优选地，所述挥干采用快速离心浓缩仪；
向所述挥干后的待测品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养待测物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；
向所述震荡培养待测物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化待测品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和
室温条件下放置所述衍生化待测品，得到检测样本，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。
根据本发明的一个优选实施例，所述GC-MS分析采用高纯氦气作为载气，优选地，载气流速1.0mL/min。
根据本发明的一个优选实施例，所述GC-MS分析采用的升温程序为：以15℃/min从60℃升温至170℃；以5℃/min从170℃升温至305℃；305℃维持6.7min。
根据本发明的一个优选实施例，所述GC-MS分析的进样口温度为260℃，EI源温度为230℃，电压为70V。
根据本发明的一个优选实施例，所述GC-MS分析的质量扫描范围：m/z55-800，延迟12min开始采集，采集速度为20谱/秒。
本发明采用GC-MS气质联用分析技术对沙棘中的各酚类物质进行定量分析，根据不同的物质大小极性结构等不同会决定检测物质的出峰时间，经气相特定时间出来的某种物质经MS离子源轰击后会产生此物质的特征碎片离子，可以根据需求选择出此种物质的特异的或者效果好的碎片离子作为该物质的定量离子，实现对某种物质的定量分析。并且，本发明采用两步衍生化处理待测样品的方法，首先进行肟化反应消除酮基影响，后进行硅烷化处理消除羟基影响，建立准确、精度高、稳定性好的各酚类标定物的标准曲线。将本发明的酚类物质的定量检测方法应用于定量测定沙棘中酚类物质的方法中，例如定量检测沙棘叶、花、果实、种子、枝干等部位中各酚类物质的含量，都能得到较为准确的定量测定结果。
实施例1：
取液氮中保存的60mg沙棘丰宁品种的叶片(采集地：内蒙古磴口)加入960μL的冷甲醇-水(3：1，v/v)和40μL的内标(L-2-氯-苯丙氨酸，0.03mg/mL，甲醇配置)，匀浆(Tissuelyser-192，上海净信科技公司)，超声提取30min，低温离心10min(14000rpm，4℃)，取700μL的上清液，装入玻璃衍生瓶中，用快速离心浓缩仪挥干后，向玻璃衍生小瓶中加入80μL的甲氧胺盐酸吡啶溶液(15mg/mL)，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中37℃肟化反应90min，取出后再加入80μL的BSTFA(含1％TMCS)衍生试剂，涡旋震荡2min后，于70℃反应60min。取出样本，室温放置30min，进行GC/MS分析。
实施例2：
取液氮中保存的60mg沙棘向阳品种的叶片(采集地：内蒙古磴口)加入960μL的冷甲醇-水(3：1，v/v)和40μL的内标(L-2-氯-苯丙氨酸，0.03mg/mL，甲醇配置)，匀浆(Tissuelyser-192，上海净信科技公司)，超声提取30min，低温离心10min(14000rpm，4℃)，取700μL的上清液，装入玻璃衍生瓶中，用快速离心浓缩仪挥干后，向玻璃衍生小瓶中加入80μL的甲氧胺盐酸吡啶溶液(15mg/mL)，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中37℃肟化反应90min，取出后再加入80μL的BSTFA(含1％TMCS)衍生试剂，涡旋震荡2min后，于70℃反应60min。取出样本，室温放置30min，进行GC/MS分析。
实施例3：
取液氮中保存的60mg沙棘丰宁品种的叶片(采集地：内蒙古磴口)加入960μL的冷甲醇-水(3：1，v/v)和40μL的内标(L-2-氯-苯丙氨酸，0.03mg/mL，甲醇配置)，匀浆(Tissuelyser-192，上海净信科技公司)，超声提取30min，低温离心10min(14000rpm，4℃)，取700μL的上清液，装入玻璃衍生瓶中，用快速离心浓缩仪挥干后，向玻璃衍生小瓶中加入80μL的甲氧胺盐酸吡啶溶液(15mg/mL)，涡旋震荡2min后，于震荡培养箱中37℃肟化反应90min，取出后再加入80μL的BSTFA(含1％TMCS)衍生试剂，涡旋震荡2min后，于70℃反应60min。取出样本，室温放置30min，进行GC/MS分析。
下表4示出了实施例1-实施例3根据本发明的沙棘中各酚类物质的定量检测方法测定的各酚类物质的含量。其中所述实施例1-1、实施例1-2和实施例1-3代表实施例1的三次不同的重复试验结果，类似的实施例2和实施例3也分别进行了三次重复试验。结果表明，根据本发明的沙棘中酚类物质的定量检测方法，可以准确地测定出沙棘中各酚类物质的含量，具有稳定、可靠的优点，可以在沙棘中各酚类物质定量测定中推广使用。
表4：
/：表示未检测到。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种沙棘中酚类物质定量检测的方法，包括：
制备混标工作液：将多种酚类标定物溶于溶剂中，得到混标工作液；
制备内标溶液：将2-Cl-苯丙氨酸溶于溶剂中，得到内标溶液；
制备标准曲线：取N组不同体积的所述混标工作液和N组相同体积的所述内标溶液混合，对所得混合液进行GC-MS分析，得到标准曲线；和
处理沙棘样品，得到检测样本进行GC-MS分析，根据所述标准曲线定量检测沙棘中酚类物质。
2.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述多种酚类标定物包括芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E；和/或
所述混标工作液和所述内标溶液的溶剂为甲醇。
3.根据权利要求2所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液中芦丁、异鼠李素、山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的浓度分别为：芦丁0.125mg/mL、异鼠李素0.00625mg/mL、山奈酚0.5μg/mL、杨梅素2.5μg/mL、柚皮素2.5μg/mL、槲皮素5μg/mL和维生素E 25μg/mL；和/或
所述制备内标溶液步骤中，所述内标溶液中2-Cl-苯丙氨酸的浓度为0.03mg/mL。
4.根据权利要求3所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备标准曲线的步骤中，所述N为大于或等于5的整数，优选地，N为7；和/或
所述N组不同体积的所述混标工作液的体积为0-400μL中的任意N组，优选为400μL、200μL、100μL、40μL、20μL、10μL和4μL；和/或
所述N组相同体积的所述内标溶液的体积均为40μL。
5.根据权利要求2所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备混标工作液步骤中，所述混标工作液包括混标工作液A和混标工作液B；
优选地，所述混标工作液A的制备方法为：
制备标准储备液：将芦丁、异鼠李素溶于溶剂中，分别制备得到0.5mg/mL的芦丁标准储备液和0.025mg/mL的异鼠李素标准储备液；和
制备混标工作液A：按照体积比为1:1将所述芦丁标准储备液和异鼠李素标准储备液混合，得到混标工作液A；
优选地，所述混标工作液B的制备方法为：
制备标准储备液：取山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素、棕矢车菊素、维生素E和花翠素溶于溶剂中，分别制备得到1mg/mL的标准储备液；
制备标准品工作液：分别稀释所述山奈酚、杨梅素、柚皮素、槲皮素和维生素E的标准储备液，得到10μg/mL的山奈酚标准品工作液、50μg/mL的杨梅素标准品工作液、50μg/mL的柚皮素标准品工作液、100μg/mL的槲皮素标准品工作液和500μg/mL的维生素E标准品工作液；和
制备混标工作液B：取相同体积V的各标准品工作液混合后，用甲醇稀释至体积为10V，得到混标工作液B。
6.根据权利要求5所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述N组不同体积的所述混标工作液A的体积为0-200μL中的任意N组，且每组中所述混标工作液A和所述混标工作液B的体积相同，优选为200μL、100μL、50μL、20μL、10μL、5μL和2μL；和/或
所述N组相同体积的所述内标溶液的体积为40μL。
7.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备标准曲线步骤中，对所述混合液进行GC-MS分析之前，事先对所述混合液进行衍生化处理；
优选地，所述对混合液进行衍生化处理包括：
挥干所述混合液，得到挥干后的标准品；优选地，所述挥干采用快速离心干燥仪；
向所述挥干后的标准品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；
向所述震荡培养物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化标准品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和
室温条件下放置所述衍生化标准品，得到分析标准品，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。
8.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述制备标准曲线步骤中，所述混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度＝该酚类标定物特征碎片质谱响应强度/内标特征碎片质谱响应强度，以加入的混标工作液中各酚类标定物的量作为自变量x，以加入的混标工作液中各酚类标定物的质谱响应强度为因变量y，得到所述混标工作液中各酚类标定物的标准曲线。
9.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述处理沙棘样品包括提取沙棘内含物和衍生化所述沙棘内含物；
优选地，所述提取沙棘内含物的方法为：
向沙棘样品中加入冷甲醇-水和所述内标溶液，进行匀浆，得到匀浆物；优选地，所述沙棘样品的量为60mg，事先保存在液氮中，所述冷甲醇-水的体积比为3:1,加入的量为960μL，所述内标溶液加入的量为40μL；和
提取所述匀浆物并离心，得到沙棘内含物；优选地，所述提取方法为超声提取，超声功率为100-250W，提取时间为20-40min；所述离心转速为14000rpm，离心温度为4℃，离心时间为10min；
优选地，所述衍生化所述沙棘内含物的方法为：
挥干所述沙棘内含物，得到挥干后的待测品；优选地，所述挥干采用快速离心浓缩仪；
向所述挥干后的待测品中加入甲氧胺盐酸吡啶溶液后，进行震荡培养,得到震荡培养待测物；优选地，所述甲氧胺盐酸吡啶溶液的浓度为15mg/mL，加入的量为80μL；所述震荡培养的温度为37℃，培养时间为90min；进一步优选地，所述震荡培养前先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；
向所述震荡培养待测物中加入BSTFA衍生试剂进行反应，得到衍生化待测品；优选地，所述BSTFA衍生试剂中含有1％TMCS，加入的量为80μL；所述反应温度为70℃，反应时间为60min；进一步优选地，所述反应之前，事先进行涡旋震荡，所述涡旋震荡的时间为1-5min，优选2min；和
室温条件下放置所述衍生化待测品，得到检测样本，进行GC-MS分析；优选地，所述室温条件下放置的时间为30min。
10.根据权利要求1所述的沙棘中酚类物质定量检测的方法，所述GC-MS分析采用高纯氦气作为载气，优选地，载气流速1.0mL/min；和/或
所述GC-MS分析采用的升温程序为：以15℃/min从60℃升温至170℃；以5℃/min从170℃升温至305℃；305℃维持6.7min；和/或
所述GC-MS分析的进样口温度为260℃，EI源温度为230℃，电压为70V；和/或
所述GC-MS分析的质量扫描范围：m/z 55-800，延迟12min开始采集，采集速度为20谱/秒。
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