CN108753644A - 一种饲料发酵剂 - Google Patents

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庄文琴
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种饲料发酵剂，属于生物领域。本发明从土壤中筛选得到一种高效降解饲料中单宁的活性菌，单宁广泛存在于植物蛋白源中，单宁与蛋白质可发生多种交联反应，与胶体蛋白质结合形成不溶性复合物，使蛋白质从分散体系中沉降出来，影响饲料的营养物质的利用率，降低饲料的消化吸收率，活性菌产单宁酶，对这类抗营养因子进行分解，能够促进动物对蛋白质、矿物质营养物质的吸收，提高生长性能，辅助添加植物乳杆菌增加动物肠道活性，提高对有害物质的高效降解，促进消化，并对肠道形成保护。本发明解决了目前发酵剂中的传统菌种发酵效率较低并且对于牲畜的机体免疫力并没有提高的问题。

Description

一种饲料发酵剂
技术领域
本发明属于生物领域，具体涉及一种饲料发酵剂。
背景技术
饲料发酵剂是经分离、筛选、诱变、提纯、复壮等一系列高科技手段而获得的高性能菌株，再与其他特效物质精工复配而成的一种干粉状活菌微生物制剂。
现有技术下的饲料发酵剂一般内含芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、丝状真菌适用范围等多种功能型微生物菌群，有效功能活菌总含量在10亿/克以上，专用于发酵制作各种精饲料和各种粗饲料，属纯天然、绿色微生物制品。
饲料发酵剂的使用原理如下：在高效生物因子（各种分解酶、多种微生物活菌）的作用下，将秸秆里的粗纤维（纤维素、半纤维素）、木质素、木聚糖长分子链、木质化合物的酯键发生酶解，把动物不能吸收的高分子碳水化合物转化成可吸收利用的低分子碳水化合物，即能量饲料；多种微生物活菌能大量吸取动物难以利用的有机氮、无机氮，使之转化成营养成份较高的多种菌体蛋白质，即蛋白饲料；多种微生物活菌在发酵中能产生大量蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素分解酶，B族维生素和A、D维生素；多种微生物活菌在动物体内建立微生态平衡，增强了免疫力。
目前，饲料发酵剂的原料多选取各种粗饲料、杂粮及其他动植物下脚料制作饲料的发酵，如谷粉、玉米粉、麦麸、米糠、鸡粪等畜禽粪便、秸秆、潲（泔）水、牧草、棉籽壳、花生壳、各种饼粕、杂粕、糟粕等。虽然都取得了一定效果，但是但是对于牲畜的机体免疫力并没有提高，且传统菌种发酵效率较低，使养殖户无法获得高质量的发酵饲料。因此，生产出一种能解决上述问题的发酵剂有很大的市场需求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对目前发酵剂中的传统菌种发酵效率较低并且对于牲畜的机体免疫力并没有提高的问题，提供一种饲料发酵剂。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
一种饲料发酵剂，其特征在于，按重量份数计包括如下组分，6~10份一号活性菌、3~7份二号活性菌、30~40份饲料发酵添加物、30~40份促摄食营养剂；
所述一号活性菌的制备方法，包括如下步骤：
（1）取土壤按质量比1：8~10加入无菌去离子水混合，超声，静置，取上清液按8~10%的接种量接种至一号活化培养基中培养，得培养物，取培养物涂布于一号筛选培养基培养，取菌径最大且形成透明圈的菌落作为一号种子菌；
（2）挑取一号种子菌划线接种至一号筛选培养基中培养，重复划线培养2~3次，得纯化菌，取纯化菌按3~5%的接种量接种至发酵培养基中发酵培养，离心，取沉淀冷冻干燥，即得一号活性菌。
所述步骤（1）中一号活化培养基：按质量份数计，取6~9份硝酸钠、0.3~0.6份硫酸镁、0.4~0.7份氯化钾、0.01~0.03份七水合硫酸亚铁、1000份水，pH为6~6.5，121℃灭菌20min；一号筛选培养基：按质量份数计，取1~3份燕麦粉、0.1~0.4份刚果红、1~5份酵母膏、20~25份琼脂、0.2~0.5份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
所述步骤（2）中发酵培养基：按质量份数计，取1~3份燕麦粉、0.3~0.7份氯化钙、0.01~0.03份硫酸亚铁、0.01~0.04份硫酸镁、1~5份酵母膏、0.1~0.4份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
所述二号活性菌的制备方法，包括如下步骤：
S1.取土壤按质量比1：10~13加入无菌生理盐水，振荡20~30min，得振荡液，取振荡液稀释至10 -7的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于察氏琼脂培养基中，于25~30℃培养2~3天，挑取菌径最大的菌落划线接种至察氏琼脂培养基，于25~30℃培养18~24h，重复划线接种3~4次，得纯化菌落；
S2.取纯化菌落按3~5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25~30℃、150r/min、培养18~24h，得培养物，取培养物点种接种量接种至单宁筛选培养基中，点种2~5处，每个点之间距离相等，挑取水解透明圈圈径最大的菌落为二号种子菌，取二号种子菌按3~5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25~30℃、150r/min、培养2~3天，离心，取沉淀a冷冻干燥，即得二号活性菌。
所述步骤S2中单宁筛选培养基： 按质量份数计，取3~5份硝酸钠、0.3~0.5份氯化钾、1~3份磷酸氢二钾、0.01~0.03份FeSO4、0.2~0.6份MgSO4·7H2O、10~15份单宁酸、20~25份琼脂、1000份水， 121°C灭菌20 min，经0.22 μm滤膜过滤，取滤液，即得。
所述促摄食营养剂：按质量份数计，取1~3份二甲基-β-丙酸噻亭、2~5份二甲基-β-乙酸噻亭、1~3份甜菜碱、0.5~1.3份牛磺酸、0.2~0.5份色氨酸、1~3份混合核苷酸混合，即得促摄食营养剂。
所述混合核苷酸为混合核苷酸：按质量份数计，取0.3~0.5份胞嘧啶核苷酸、0.01~0.04份尿嘧啶核苷酸、0.2~0.4份腺嘌呤核苷酸、0.002~0.005份鸟嘌呤核苷酸、0.03~0.05份次黄嘌呤核苷酸混合即得。
所述饲料发酵添加物：按质量份数计，取2~5份植物乳杆菌、1~3份枯草芽孢杆菌、4~7份半乳麦芽聚糖、8~10份沸石粉、3~7份菊糖、2~5份藜麦提取物、8~10份大豆寡糖、2~4份乳果糖混合，即得饲料发酵添加物。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明由于谷物饲料中产生的β -葡聚糖酶酶活性低，耐热性能较差，无法适应饲料中高温发酵的工艺，在温泉土壤中筛选得到产β -葡聚糖酶的活性菌，其耐热性较好，添加至饲料发酵中，使其在动物肠道内能分解β -葡聚糖，其作为非淀粉性多糖，广泛存在于麦类饲料胚乳和糊粉细粉细胞壁中，有较高的黏性和亲水性，单胃动物采食后自身不能降解β -葡聚糖，使β -葡聚糖在肠胃中形成高黏稠物质，影响消化和吸收，高产β -葡聚糖酶有利于降低饲料的黏度，提高饲料中营养物质的消化和吸收；
（2）本发明从土壤中筛选得到一种高效降解饲料中单宁的活性菌，单宁广泛存在于植物蛋白源中，单宁与蛋白质可发生多种交联反应，与胶体蛋白质结合形成不溶性复合物，使蛋白质从分散体系中沉降出来，影响饲料的营养物质的利用率，降低饲料的消化吸收率，活性菌产单宁酶，对这类抗营养因子进行分解，能够促进动物对蛋白质、矿物质营养物质的吸收，提高生长性能，辅助添加植物乳杆菌增加动物肠道活性，提高对有害物质的高效降解，促进消化，并对肠道形成保护；
（3）本发明添加大豆寡糖、半乳麦芽聚糖低聚糖等作为营养物质，大豆寡糖、乳果糖对植物乳杆菌有增殖、促进作用，提高了发酵效率，同时降低动物粪便中的氨浓度，促进动物肠道菌群的均衡，添加藜麦添加剂，含有较多的皂苷类和多酚类等活性物质，可以直接结合氨、硫化氢和甲基吲哚等有害气体，并提高肠道的消化机能，促进养分的吸收，抑制微生物区系尿素酶的活性，从而抑制尿素的分解，同时提高机体的抗菌能力，添加促摄食营养剂能够促进发酵过程中生成营养物质被动物吸收，提高自身免疫能力。
具体实施方式
混合核苷酸：按质量份数计，取0.3~0.5份胞嘧啶核苷酸、0.01~0.04份尿嘧啶核苷酸、0.2~0.4份腺嘌呤核苷酸、0.002~0.005份鸟嘌呤核苷酸、0.03~0.05份次黄嘌呤核苷酸混合即得。
土壤：采集于天然温泉附近土壤。
一号活化培养基：按质量份数计，取6~9份硝酸钠、0.3~0.6份硫酸镁、0.4~0.7份氯化钾、0.01~0.03份七水合硫酸亚铁、1000份水，pH为6~6.5，121℃灭菌20min。
一号筛选培养基：按质量份数计，取1~3份燕麦粉、0.1~0.4份刚果红、1~5份酵母膏、20~25份琼脂、0.2~0.5份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取1~3份燕麦粉、0.3~0.7份氯化钙、0.01~0.03份硫酸亚铁、0.01~0.04份硫酸镁、1~5份酵母膏、0.1~0.4份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
单宁筛选培养基： 按质量份数计，取3~5份硝酸钠、0.3~0.5份氯化钾、1~3份磷酸氢二钾、0.01~0.03份FeSO4、0.2~0.6份MgSO4·7H2O、10~15份单宁酸、20~25份琼脂、1000份水， 121°C灭菌20 min，经0.22 μm滤膜过滤，取滤液，即得。
藜麦提取物：取藜麦干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒按质量比1：8~15加入质量分数为90%的乙醇，超声10~20min，于45~50℃保温1~2h，过滤，取滤液减压蒸馏，浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：6~9：5~8加入蒸馏水、正丁醇萃取，取萃取液旋转蒸发，即得藜麦提取物。
一号活性菌：
（1）取土壤按质量比1：8~10加入无菌去离子水混合，超声10~20min，静置1~2h，取上清液按8~10%的接种量接种至一号活化培养基中，于30~35℃、180r/min培养2~4天，得培养物，取培养物涂布于一号筛选培养基，于30~35℃培养24~36h，取菌径最大且形成透明圈的菌落作为一号种子菌；
（2）挑取一号种子菌划线接种至一号筛选培养基中，于30~35℃培养1~2天，重复划线培养2~3次，得纯化菌，取纯化菌按3~5%的接种量接种至发酵培养基中，于35~38℃、180r/min发酵培养3~5天，离心，取沉淀冷冻干燥，即得一号活性菌。
二号活性菌：S1.取土壤按质量比1：10~13加入无菌生理盐水，振荡20~30min，得振荡液，取振荡液稀释至10 -7的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于察氏琼脂培养基中，于25~30℃培养2~3天，挑取菌径最大的菌落划线接种至察氏琼脂培养基，于25~30℃培养18~24h，重复划线接种3~4次，得纯化菌落；
S2.取纯化菌落按3~5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25~30℃、150r/min、培养18~24h，得培养物，取培养物点种接种量接种至单宁筛选培养基中，点种2~5处，每个点之间距离相等，挑取水解透明圈圈径最大的菌落为二号种子菌，取二号种子菌按3~5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25~30℃、150r/min、培养2~3天，离心，取沉淀a冷冻干燥，即得二号活性菌。
促摄食营养剂：按质量份数计，取1~3份二甲基-β-丙酸噻亭、2~5份二甲基-β-乙酸噻亭、1~3份甜菜碱、0.5~1.3份牛磺酸、0.2~0.5份色氨酸、1~3份混合核苷酸混合，即得促摄食营养剂。
饲料发酵添加物：按质量份数计，取2~5份植物乳杆菌、1~3份枯草芽孢杆菌、4~7份半乳麦芽聚糖、8~10份沸石粉、3~7份菊糖、2~5份藜麦提取物、8~10份大豆寡糖、2~4份乳果糖混合，即得饲料发酵添加物。
一种饲料发酵剂，按质量份数计，取6~10份一号活性菌、3~7份二号活性菌、30~40份饲料发酵添加物、30~40份促摄食营养剂混合，即得饲料发酵剂。
混合核苷酸：按质量份数计，取0.3份胞嘧啶核苷酸、0.01份尿嘧啶核苷酸、0.2份腺嘌呤核苷酸、0.002份鸟嘌呤核苷酸、0.03份次黄嘌呤核苷酸混合即得。
土壤：采集于天然温泉附近土壤。
一号活化培养基：按质量份数计，取6份硝酸钠、0.3份硫酸镁、0.4份氯化钾、0.01份七水合硫酸亚铁、1000份水，pH为6，121℃灭菌20min。
一号筛选培养基：按质量份数计，取1份燕麦粉、0.1份刚果红、1份酵母膏、20份琼脂、0.2份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取1份燕麦粉、0.3份氯化钙、0.01份硫酸亚铁、0.01份硫酸镁、1份酵母膏、0.1份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
单宁筛选培养基：按质量份数计，取3份硝酸钠、0.3份氯化钾、1份磷酸氢二钾、0.01份FeSO4、0.2份MgSO4·7H2O、10份单宁酸、20份琼脂、1000份水， 121°C灭菌20 min，经0.22 μm滤膜过滤，取滤液，即得。
藜麦提取物：取藜麦干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒按质量比1：8加入质量分数为90%的乙醇，超声10min，于45℃保温1h，过滤，取滤液减压蒸馏，浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：6：5加入蒸馏水、正丁醇萃取，取萃取液旋转蒸发，即得藜麦提取物。
一号活性菌：（1）取土壤按质量比1：8加入无菌去离子水混合，超声10min，静置1h，取上清液按8%的接种量接种至一号活化培养基中，于30℃、180r/min培养2天，得培养物，取培养物涂布于一号筛选培养基，于30℃培养24h，取菌径最大且形成透明圈的菌落作为一号种子菌；
（2）挑取一号种子菌划线接种至一号筛选培养基中，于30℃培养1天，重复划线培养2次，得纯化菌，取纯化菌按3%的接种量接种至发酵培养基中，于35℃、180r/min发酵培养3天，离心，取沉淀冷冻干燥，即得一号活性菌。
二号活性菌：S1.取土壤按质量比1：10加入无菌生理盐水，振荡20min，得振荡液，取振荡液稀释至10 -7的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于察氏琼脂培养基中，于25℃培养2天，挑取菌径最大的菌落划线接种至察氏琼脂培养基，于25℃培养18h，重复划线接种3次，得纯化菌落；
S2.取纯化菌落按3%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25℃、150r/min、培养18h，得培养物，取培养物点种接种量接种至单宁筛选培养基中，点种2处，每个点之间距离相等，挑取水解透明圈圈径最大的菌落为二号种子菌，取二号种子菌按3%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25℃、150r/min、培养2天，离心，取沉淀a冷冻干燥，即得二号活性菌。
促摄食营养剂：按质量份数计，取1份二甲基-β-丙酸噻亭、2份二甲基-β-乙酸噻亭、1份甜菜碱、0.5份牛磺酸、0.2份色氨酸、1份混合核苷酸混合，即得促摄食营养剂。
饲料发酵添加物：按质量份数计，取2份植物乳杆菌、1份枯草芽孢杆菌、4份半乳麦芽聚糖、8份沸石粉、3份菊糖、2份藜麦提取物、8份大豆寡糖、2份乳果糖混合，即得饲料发酵添加物。
一种饲料发酵剂，按质量份数计，取6份一号活性菌、3份二号活性菌、30份饲料发酵添加物、30份促摄食营养剂混合，即得饲料发酵剂。
混合核苷酸：按质量份数计，取0.5份胞嘧啶核苷酸、0.04份尿嘧啶核苷酸、0.4份腺嘌呤核苷酸、0.005份鸟嘌呤核苷酸、0.05份次黄嘌呤核苷酸混合即得。
土壤：采集于天然温泉附近土壤。
一号活化培养基：按质量份数计，取9份硝酸钠、0.6份硫酸镁、0.7份氯化钾、0.03份七水合硫酸亚铁、1000份水，pH为6.5，121℃灭菌20min。
一号筛选培养基：按质量份数计，取3份燕麦粉、0.4份刚果红、5份酵母膏、25份琼脂、0.5份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取3份燕麦粉、0.7份氯化钙、0.03份硫酸亚铁、0.04份硫酸镁、5份酵母膏、0.4份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
单宁筛选培养基：按质量份数计，取5份硝酸钠、0.5份氯化钾、3份磷酸氢二钾、0.03份FeSO4、0.6份MgSO4·7H2O、15份单宁酸、25份琼脂、1000份水， 121°C灭菌20 min，经0.22 μm滤膜过滤，取滤液，即得。
藜麦提取物：取藜麦干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒按质量比1：15加入质量分数为90%的乙醇，超声20min，于50℃保温2h，过滤，取滤液减压蒸馏，浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：9：8加入蒸馏水、正丁醇萃取，取萃取液旋转蒸发，即得藜麦提取物。
一号活性菌：
（1）取土壤按质量比1：10加入无菌去离子水混合，超声20min，静置2h，取上清液按10%的接种量接种至一号活化培养基中，于35℃、180r/min培养4天，得培养物，取培养物涂布于一号筛选培养基，于35℃培养36h，取菌径最大且形成透明圈的菌落作为一号种子菌；
（2）挑取一号种子菌划线接种至一号筛选培养基中，于35℃培养2天，重复划线培养3次，得纯化菌，取纯化菌按5%的接种量接种至发酵培养基中，于38℃、180r/min发酵培养5天，离心，取沉淀冷冻干燥，即得一号活性菌。
二号活性菌：S1.取土壤按质量比1：13加入无菌生理盐水，振荡30min，得振荡液，取振荡液稀释至10 -7的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于察氏琼脂培养基中，于30℃培养3天，挑取菌径最大的菌落划线接种至察氏琼脂培养基，于30℃培养24h，重复划线接种4次，得纯化菌落；
S2.取纯化菌落按5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于30℃、150r/min、培养24h，得培养物，取培养物点种接种量接种至单宁筛选培养基中，点种5处，每个点之间距离相等，挑取水解透明圈圈径最大的菌落为二号种子菌，取二号种子菌按5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于30℃、150r/min、培养3天，离心，取沉淀a冷冻干燥，即得二号活性菌。
促摄食营养剂：按质量份数计，取3份二甲基-β-丙酸噻亭、5份二甲基-β-乙酸噻亭、3份甜菜碱、1.3份牛磺酸、0.5份色氨酸、3份混合核苷酸混合，即得促摄食营养剂。
饲料发酵添加物：按质量份数计，取5份植物乳杆菌、3份枯草芽孢杆菌、7份半乳麦芽聚糖、10份沸石粉、7份菊糖、5份藜麦提取物、10份大豆寡糖、4份乳果糖混合，即得饲料发酵添加物。
一种饲料发酵剂，按质量份数计，取10份一号活性菌、7份二号活性菌、40份饲料发酵添加物、40份促摄食营养剂混合，即得饲料发酵剂。
混合核苷酸：按质量份数计，取0.4份胞嘧啶核苷酸、0.02份尿嘧啶核苷酸、0.3份腺嘌呤核苷酸、0.003份鸟嘌呤核苷酸、0.04份次黄嘌呤核苷酸混合即得。
土壤：采集于天然温泉附近土壤。
一号活化培养基：按质量份数计，取7份硝酸钠、0.4份硫酸镁、0.5份氯化钾、0.02份七水合硫酸亚铁、1000份水，pH为6，121℃灭菌20min。
一号筛选培养基：按质量份数计，取2份燕麦粉、0.3份刚果红、3份酵母膏、23份琼脂、0.3份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取2份燕麦粉、0.5份氯化钙、0.02份硫酸亚铁、0.03份硫酸镁、3份酵母膏、0.3份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
单宁筛选培养基：按质量份数计，取4份硝酸钠、0.4份氯化钾、2份磷酸氢二钾、0.02份FeSO4、0.4份MgSO4·7H2O、13份单宁酸、23份琼脂、1000份水， 121°C灭菌20 min，经0.22 μm滤膜过滤，取滤液，即得。
藜麦提取物：取藜麦干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒按质量比1：11加入质量分数为90%的乙醇，超声15min，于47℃保温1h，过滤，取滤液减压蒸馏，浓缩，得浓缩物，取浓缩物按质量比1：7：7加入蒸馏水、正丁醇萃取，取萃取液旋转蒸发，即得藜麦提取物。
一号活性菌：（1）取土壤按质量比1：9加入无菌去离子水混合，超声15min，静置1h，取上清液按9%的接种量接种至一号活化培养基中，于33℃、180r/min培养3天，得培养物，取培养物涂布于一号筛选培养基，于33℃培养30h，取菌径最大且形成透明圈的菌落作为一号种子菌；
（2）挑取一号种子菌划线接种至一号筛选培养基中，于33℃培养1天，重复划线培养2次，得纯化菌，取纯化菌按4%的接种量接种至发酵培养基中，于37℃、180r/min发酵培养4天，离心，取沉淀冷冻干燥，即得一号活性菌。
二号活性菌：S1.取土壤按质量比1：12加入无菌生理盐水，振荡25min，得振荡液，取振荡液稀释至10 -7的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于察氏琼脂培养基中，于27℃培养2天，挑取菌径最大的菌落划线接种至察氏琼脂培养基，于27℃培养21h，重复划线接种3次，得纯化菌落；
S2.取纯化菌落按4%的接种量接种至察氏液体培养基中，于27℃、150r/min、培养21h，得培养物，取培养物点种接种量接种至单宁筛选培养基中，点种3处，每个点之间距离相等，挑取水解透明圈圈径最大的菌落为二号种子菌，取二号种子菌按4%的接种量接种至察氏液体培养基中，于27℃、150r/min、培养2天，离心，取沉淀a冷冻干燥，即得二号活性菌。
促摄食营养剂：按质量份数计，取2份二甲基-β-丙酸噻亭、3份二甲基-β-乙酸噻亭、2份甜菜碱、0.9份牛磺酸、0.3份色氨酸、2份混合核苷酸混合，即得促摄食营养剂。
饲料发酵添加物：按质量份数计，取3份植物乳杆菌、2份枯草芽孢杆菌、5份半乳麦芽聚糖、9份沸石粉、5份菊糖、3份藜麦提取物、9份大豆寡糖、3份乳果糖混合，即得饲料发酵添加物。
一种饲料发酵剂，按质量份数计，取8份一号活性菌、5份二号活性菌、35份饲料发酵添加物、35份促摄食营养剂混合，即得饲料发酵剂。
对比例1：与实施例1的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少一号活性菌、二号活性菌。
对比例2：与实施例1的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少促摄食营养剂。
对比例3：重庆市某公司生产的饲料发酵剂。
分别将上述实例所得饲料发酵剂与对比例的发酵剂用于饲料的发酵，再对发酵后的饲料进行仔猪饲养对比试验。选择体重相近、40日龄的小猪200头，总共进行为期100的日增重、死亡率等对比试验，试验期采用常规圈养，每天上午、下午各喂食一次，保证所有猪能够自由采食。饲养过程中，每天早上6点对空腹猪进行称量，记录数据。经过为期100天的试验，结果统计如表1：
表1：
测试项目 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3
活菌数CFU/g 7.1×109 6.7×109 6.6×109 0 6.4×109 2.1×109~3.4×109
发酵天数 13 12 14 27 18 23~25
日增重kg 1.48 1.35 1.31 1.14 1.01 0.52~0.6
腹泻率% 0 0 1 1 2 8~10
死亡率% 0 0 0 0 0 2~3
综合上述，本发明的饲料发酵剂使用后对猪的饲养效果更好，值得推广使用。

Claims (8)

1.一种饲料发酵剂，其特征在于，按重量份数计包括如下组分，6~10份一号活性菌、3~7份二号活性菌、30~40份饲料发酵添加物、30~40份促摄食营养剂；
所述一号活性菌的制备方法，包括如下步骤：
（1）取土壤按质量比1：8~10加入无菌去离子水混合，超声，静置，取上清液按8~10%的接种量接种至一号活化培养基中培养，得培养物，取培养物涂布于一号筛选培养基培养，取菌径最大且形成透明圈的菌落作为一号种子菌；
（2）挑取一号种子菌划线接种至一号筛选培养基中培养，重复划线培养2~3次，得纯化菌，取纯化菌按3~5%的接种量接种至发酵培养基中发酵培养，离心，取沉淀冷冻干燥，即得一号活性菌。
2.根据权利要求1所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述步骤（1）中一号活化培养基：按质量份数计，取6~9份硝酸钠、0.3~0.6份硫酸镁、0.4~0.7份氯化钾、0.01~0.03份七水合硫酸亚铁、1000份水，pH为6~6.5，121℃灭菌20min；一号筛选培养基：按质量份数计，取1~3份燕麦粉、0.1~0.4份刚果红、1~5份酵母膏、20~25份琼脂、0.2~0.5份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
3.根据权利要求1所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述步骤（2）中发酵培养基：按质量份数计，取1~3份燕麦粉、0.3~0.7份氯化钙、0.01~0.03份硫酸亚铁、0.01~0.04份硫酸镁、1~5份酵母膏、0.1~0.4份氯化钠、1000份水，pH自然，121℃灭菌20min。
4.根据权利要求1所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述二号活性菌的制备方法，包括如下步骤：
S1.取土壤按质量比1：10~13加入无菌生理盐水，振荡20~30min，得振荡液，取振荡液稀释至10 -7的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于察氏琼脂培养基中，于25~30℃培养2~3天，挑取菌径最大的菌落划线接种至察氏琼脂培养基，于25~30℃培养18~24h，重复划线接种3~4次，得纯化菌落；
S2.取纯化菌落按3~5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25~30℃、150r/min、培养18~24h，得培养物，取培养物点种接种量接种至单宁筛选培养基中，点种2~5处，每个点之间距离相等，挑取水解透明圈圈径最大的菌落为二号种子菌，取二号种子菌按3~5%的接种量接种至察氏液体培养基中，于25~30℃、150r/min、培养2~3天，离心，取沉淀a冷冻干燥，即得二号活性菌。
5.根据权利要求4所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述步骤S2中单宁筛选培养基： 按质量份数计，取3~5份硝酸钠、0.3~0.5份氯化钾、1~3份磷酸氢二钾、0.01~0.03份FeSO4、0.2~0.6份MgSO4·7H2O、10~15份单宁酸、20~25份琼脂、1000份水， 121°C灭菌20 min，经0.22 μm滤膜过滤，取滤液，即得。
6.根据权利要求1所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述促摄食营养剂：按质量份数计，取1~3份二甲基-β-丙酸噻亭、2~5份二甲基-β-乙酸噻亭、1~3份甜菜碱、0.5~1.3份牛磺酸、0.2~0.5份色氨酸、1~3份混合核苷酸混合，即得促摄食营养剂。
7.根据权利要求6所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述混合核苷酸为混合核苷酸：按质量份数计，取0.3~0.5份胞嘧啶核苷酸、0.01~0.04份尿嘧啶核苷酸、0.2~0.4份腺嘌呤核苷酸、0.002~0.005份鸟嘌呤核苷酸、0.03~0.05份次黄嘌呤核苷酸混合即得。
8.根据权利要求1所述的饲料发酵剂，其特征在于，所述饲料发酵添加物：按质量份数计，取2~5份植物乳杆菌、1~3份枯草芽孢杆菌、4~7份半乳麦芽聚糖、8~10份沸石粉、3~7份菊糖、2~5份藜麦提取物、8~10份大豆寡糖、2~4份乳果糖混合，即得饲料发酵添加物。
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