CN108732082A - 细胞分群方法 - Google Patents
细胞分群方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108732082A CN108732082A CN201810581605.2A CN201810581605A CN108732082A CN 108732082 A CN108732082 A CN 108732082A CN 201810581605 A CN201810581605 A CN 201810581605A CN 108732082 A CN108732082 A CN 108732082A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fluorescent dye
- fluorescence
- cell
- probe
- fluorescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 84
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 63
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 22
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 54
- MURGITYSBWUQTI-UHFFFAOYSA-N fluorescin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1C2=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C21 MURGITYSBWUQTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 9
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 5
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 claims description 4
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910015900 BF3 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 3
- WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N boron trifluoride Chemical compound FB(F)F WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005282 brightening Methods 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 claims description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 51
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 9
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 9
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 9
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 9
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000010748 Photoabsorption Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 2
- 101100289870 Arabidopsis thaliana LYM2 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000016425 Arthrospira platensis Nutrition 0.000 description 1
- 240000002900 Arthrospira platensis Species 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 102000006830 Luminescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010047357 Luminescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 241000206572 Rhodophyta Species 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003219 hemolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 229940082787 spirulina Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/149—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry specially adapted for sorting particles, e.g. by their size or optical properties
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1028—Sorting particles
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种细胞分群方法,包括以下步骤:使用第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针对同一份待检测样品进行荧光染色得到染色后样品,所述第一荧光染料和所述第二荧光染料具有部分或全部重叠的荧光发射光谱,且所述第一荧光染料和第二荧光染料在其重叠的荧光发射光谱的至少一个区间内的荧光强度的比值大于3:1;将所述染色后样品经流式细胞术检测得到所述区间内的荧光强度结果,根据所述荧光强度结果区分细胞亚群。本发明的细胞分群方法最少只需通过一个荧光通道的荧光强度差异即可区分不同细胞类群,如此可以减少需要的荧光通道数量,使用更少的荧光通道完成细胞分群的工作,降低对仪器设备的要求。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学领域,特别是涉及一种细胞分群方法。
背景技术
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种对单个细胞表面或细胞内化学成分进行定量分析和分选的技术,主要通过采集前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)将细胞大小和细胞内粒度不同的细胞分开,并通过识别细胞表面和细胞内特异的荧光标记,实现对DNA、RNA、细胞因子、细胞表面抗原等的检测。该技术作为一种快速细胞分析技术,不仅应用于免疫学、微生物学等基础医学研究,更广泛应用于肿瘤学、血液学等临床检测。例如流式细胞术可以通过识别细胞表面特异的免疫荧光信号,来实现T淋巴细胞亚群的区分,有助于评价机体的细胞免疫功能。但是,目前通过流式细胞术进行细胞分群时需要较多的荧光通道,因此对仪器的要求也相应较高,提高了应用的门槛和成本。
发明内容
基于此,有必要提供一种需要的荧光通道较少的细胞分群方法。
一种细胞分群方法,包括以下步骤:
使用第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针对同一份待检测样品进行荧光染色得到染色后样品,所述第一荧光染料和所述第二荧光染料具有部分或全部重叠的荧光发射光谱,且所述第一荧光染料和所述第二荧光染料在其重叠的荧光发射光谱的至少一个区间内的荧光强度的比值大于3:1;
将所述染色后样品经流式细胞术检测得到所述区间内的荧光强度结果,根据所述荧光强度结果区分细胞亚群。
本发明的细胞分群方法使用不同的荧光染料与不同的探针(例如抗体等)连接,利用不同类群细胞可结合不同种类探针的特性标记不同类群细胞,同时由于第一荧光染料和第二荧光染料的荧光发射光谱具有重叠区域,均可受激发在所述重叠区域发射荧光;且第一荧光染料和第二荧光染料在重叠的荧光发光光谱的某个区间内(在流式细胞术中又称为荧光通道,其区间的波长范围由流式细胞仪中的滤光片控制),第一荧光染料和第二荧光染料的荧光强度有明显差异(例如,其比值大于3:1),因此只需通过该荧光通道的荧光强度差异即可区分出不同细胞类群。如此可以减少需要的荧光通道数量,使用更少的荧光通道完成细胞分群的目的,从而降低了对流式细胞仪器的要求,降低流式细胞术在医疗和科研领域的应用成本和门槛。
在其中一个实施例中,所述第一荧光染料和所述第二荧光染料选自以下荧光染料中的两种:荧光蛋白、荧光量子点、香豆素类荧光染料、罗丹明类荧光染料、花菁类荧光染料、方酸类荧光染料、氟化硼络合二吡咯甲川类荧光染料、高聚物荧光染料以及由上述荧光染料中的至少两种荧光染料所构成的串联染料。
在其中一个实施例中,所述第一荧光染料为荧光蛋白类的别藻蓝蛋白,所述第二荧光染料为花菁类荧光染料的Cy5。
在其中一个实施例中,所述第一荧光染料为荧光蛋白类的藻红蛋白,所述第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的RBITC。
在其中一个实施例中,所述第一荧光染料为量子点QD525,所述第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的异硫氰酸荧光素(FITC)。
在其中一个实施例中,所述第一探针和所述第二探针为抗体,所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
在其中一个实施例中,所述第一探针和所述第二探针为识别人类或其他哺乳动物白细胞分化抗原的单克隆抗体。
附图说明
图1为实施例1的细胞流式散点图;
图2为对比例1的细胞流式散点图;
图3为实施例2的细胞流式散点图;
图4为对比例2的细胞流式散点图;
图5为实施例3的细胞流式散点图;
图6为对比例3的细胞流式散点图。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述,并给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明一实施方式的细胞分群方法,包括以下步骤S1~S2:
S1、使用第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针对同一份待检测样品进行荧光染色得到染色后样品,第一荧光染料和第二荧光染料具有部分或全部重叠的荧光发射光谱,且第一荧光染料和第二荧光染料在其重叠的荧光发射光谱的至少一个区间内的荧光强度的比值大于3:1。
S2、将染色后样品经流式细胞术检测得到上述区间内的荧光强度结果,根据荧光强度结果区分细胞亚群。
在一般的流式细胞分群方法中,往往采用荧光光谱特性有显著区别的荧光染料与不同的探针连接,然后分别检测得到不同荧光通道的检测结果以区分不同类群的细胞,这种方案需要使用较多的荧光通道,也就相应需要更复杂更昂贵的仪器。本实施方式的细胞分群方法使用不同的荧光染料与不同的探针(例如抗体等)连接,利用不同类群细胞可结合不同种类探针的特性标记不同类群细胞,同时由于第一荧光染料和第二荧光染料的荧光发射光谱具有重叠区域,均可受激发在所述重叠区域发射荧光,且第一荧光染料和第二荧光染料在重叠的荧光发光光谱的某个区间内(在流式细胞术中又称为荧光通道,其区间的波长范围由流式细胞仪中的滤光片控制),第一荧光染料和第二荧光染料的荧光强度有明显差异(例如,其比值大于3:1),因此只需通过该荧光通道的荧光强度差异即可区分出不同细胞类群。如此可以减少需要的荧光通道数量,使用更少的荧光通道完成必要的细胞分群,降低了对流式细胞仪器的要求,从而降低流式细胞术在医疗和科研领域的应用成本和门槛。可以理解,荧光染料的数量不限于两种,两种以上皆可,只要其中任意两种荧光染料在上述荧光通道的荧光强度的比值均大于3:1即可,例如同时使用第三荧光染料标记的第三探针对同一份待检测细胞样品进行荧光染色则可利用一个荧光通道区分三个细胞亚群。
在一个实施例中,第一荧光染料和第二荧光染料选自以下荧光染料中的两种:荧光蛋白、荧光量子点、香豆素类荧光染料、罗丹明类荧光染料、花菁类荧光染料、方酸类荧光染料、氟化硼络合二吡咯甲川类荧光染料、高聚物荧光染料以及由上述荧光染料中的至少两种荧光染料所构成的串联染料。
在一个实施例中,第一荧光染料为荧光蛋白类的别藻蓝蛋白(Allophycocyan,APC),第二荧光染料为花菁类荧光染料的Cy5。别藻蓝蛋白是从螺旋藻中分离纯化的,能发出强烈的荧光,具有很好的吸光性能和很高的量子产率,在可见光谱区有很宽的激发及发射范围,Cy5和APC在流式细胞仪的APC荧光通道都可产生荧光信号,但APC的荧光信号强度是Cy5的5倍以上,因此仅利用APC荧光通道即可进行细胞分群。
在一个实施例中,第一荧光染料为荧光蛋白类的藻红蛋白(R-phycoerythrin,PE),第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的RBITC。藻红蛋白是从红藻中分离纯化的,在特定波长激发下能发射强烈的荧光,具有很好的吸光性能和很高的量子产率,在可见光谱区有很宽的激发及发射范围,RBITC和PE在流式细胞仪的PE荧光通道都可产生荧光信号,但PE的荧光信号强度是RBITC的5倍以上,因此仅利用PE荧光通道即可进行细胞分群。
在一个实施例中,第一荧光染料为量子点QD525,第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的异硫氰酸荧光素(FITC),QD525的荧光信号强度是FITC的50~100倍。
在一个实施例中,第一探针和第二探针为抗体,抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。进一步地,第一探针和第二探针为识别人类或其他哺乳动物白细胞分化抗原(cluster ofdifferentiation,CD抗原)的单克隆抗体。
可选地,第一探针和第二探针选自以下抗体中的两种:CD45抗体、CD3抗体、CD4抗体、CD56抗体、CD19抗体、CD16抗体和CD8抗体。
在一个实施例中,荧光染色的具体步骤包括:用PBS缓冲液对待检测细胞样品离心洗涤后制成单细胞悬液,然后加入第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针,混匀后于室温避光孵育得到染色后样品。进一步地,避光孵育的时间为20~40min。可选地,PBS缓冲液的pH为7.0~7.4。可选地,制成单细胞悬液的具体步骤包括:将待检测细胞样品用PBS缓冲液重悬并调整细胞浓度为1×106~1×107个/mL,以使荧光染料标记的探针可与细胞充分接触。
在一个实施例中,荧光染色的具体步骤包括:取40~50微升EDTA-K2抗凝新鲜人血,加入第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针,混匀后于室温避光孵育10~20min,然后加入溶血剂,混匀后于室温避光溶血10~20min。
在一个实施例中,流式细胞术检测的具体步骤包括:将染色后样品置于流式细胞仪的样品台上,利用流式细胞仪进行测试,采集前向散射光、侧向散射光和上述荧光通道的检测数据。
以下为具体实施例。
实施例1
CD4+T淋巴细胞分析:使用RBITC-CD45和PE-CD4试剂染色血样得到染色后样品,将染色后样品经流式细胞术检测得到PE荧光通道的检测数据,如图1的A、B所示。图1-A中P1区域为所有淋巴细胞,图1-B中P2区域为CD4+淋巴细胞。由于RBITC-CD45可结合所有淋巴细胞,PE-CD4仅结合CD4+淋巴细胞,同时RBITC和PE在流式细胞仪的PE荧光通道都产生荧光信号,且PE的荧光信号强度是RBITC的20~30倍,因此仅通过PE荧光通道即可以区分出CD4+细胞和其他淋巴细胞。
对比例1
CD4+T淋巴细胞分析:使用FITC-CD45和PE-CD4试剂染色血样得到染色后样品,染色后样品经流式细胞术检测至少需要得到FITC荧光通道和PE荧光通道的检测数据,如图2的A、B所示,首先通过FITC荧光通道将淋巴细胞从细胞碎片中区分出来(图2-A P1区域为所有淋巴细胞),然后通过PE荧光通道将CD4+淋巴细胞从淋巴细胞中区分出来(图2-B右上象限为CD4+淋巴细胞),至少需要使用比实施例1多一个荧光通道才能得到CD4+淋巴细胞占所有淋巴细胞的比例。
实施例2
CD19+T淋巴细胞分析:使用Cy5-CD45和APC-CD19试剂染色血样得到染色后样品,将染色后样品经流式细胞术检测得到APC荧光通道的检测数据,如图3的A、B所示。图3-A中P1区域为所有淋巴细胞,图3-B中P2区域为CD19+淋巴细胞。由于Cy5-CD45可结合所有淋巴细胞,APC-CD19仅结合CD19+淋巴细胞,同时Cy5和APC在流式细胞仪的APC荧光通道都产生荧光信号,且APC的荧光信号强度是Cy5的5~20倍,因此仅通过APC荧光通道即可以区分出CD19+淋巴细胞和其他淋巴细胞。
对比例2
CD19+T淋巴细胞分析:使用FITC-CD45和APC-CD19试剂染色血样得到染色后样品,染色后样品经流式细胞术检测至少需要得到FITC荧光通道和APC荧光通道的检测数据,如图4的A、B所示,首先通过FITC荧光通道将淋巴细胞从细胞碎片中区分出来(图4-A P1区域为所有淋巴细胞),然后通过APC荧光通道将CD19+细胞从淋巴细胞中区分出来(图4-B右上象限为CD19+淋巴细胞),至少需要比实施例2多一个荧光通道才能得到CD19+细胞占所有淋巴细胞的比例。
实施例3
CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD16+淋巴细胞联合分析:使用CY5-CD45、APC-CD4、PE-CD16和APC-CY7-CD8试剂染色血样得到染色后样品,将染色后样品经流式细胞术检测得到APC、PE和APC-A750荧光通道的检测数据。如图5的A所示,LYM2区域为所有淋巴细胞,且CD4+淋巴细胞和其他淋巴细胞区分明显。由于Cy5-CD45可结合所有淋巴细胞,APC-CD4仅结合CD4+淋巴细胞,同时Cy5和APC在流式细胞仪的APC荧光通道都产生荧光信号,且APC的荧光信号强度是Cy5的5~20倍,因此仅通过APC荧光通道即可以区分出CD4+淋巴细胞和其他淋巴细胞。如图5的B所示,APC-CY7-CD8仅结合CD8+淋巴细胞,因此图5B可以区分出CD4+淋巴细胞(右下象限)和CD8+淋巴细胞(左上象限)。如图5的C所示,PE-CD16仅结合CD16+淋巴细胞,因此图5C可以区分出CD16+淋巴细胞(右下象限)和CD8+淋巴细胞(左上象限)。如此,仅通过APC、PE和APC-A750三个荧光通道可完成CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD16+淋巴细胞分群。
对比例3
CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD16+淋巴细胞联合分析:使用PerCP-CD45(PerCP为荧光蛋白类荧光染料)、APC-CD4、PE-CD16和APC-CY7-CD8试剂染色血样得到染色后样品,将染色后样品经流式细胞术检测得到PerCP、APC、PE和APC-A750荧光通道的检测数据。如图6的A所示,PerCP-CD45可结合所有淋巴细胞,通过PerCP-CD45信号和侧向散射光(SSC)信号可区分出淋巴细胞(图6-A LYM区域为所有淋巴细胞)。如图6的B所示,APC-CD4仅结合CD4+淋巴细胞,APC-CY7-CD8仅结合CD8+淋巴细胞,因此图6-B可以区分出CD4+淋巴细胞(右下象限)和CD8+淋巴细胞(左上象限)。如图6的C所示,PE-CD16仅结合CD16+淋巴细胞,因此图6-C可以区分出CD16+淋巴细胞(右下象限)和CD8+淋巴细胞(左上象限)。如此,需要通过PerCP、APC、PE和APC-A750四个荧光通道完成CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞、CD16+淋巴细胞分群,比实施例3多用一个荧光通道。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.一种细胞分群方法,其特征在于,包括以下步骤:
使用第一荧光染料标记的第一探针和第二荧光染料标记的第二探针对同一份待检测样品进行荧光染色得到染色后样品,所述第一荧光染料和所述第二荧光染料具有部分或全部重叠的荧光发射光谱,且所述第一荧光染料和所述第二荧光染料在其重叠的荧光发射光谱的至少一个区间内的荧光强度的比值大于3:1;
将所述染色后样品经流式细胞术检测得到所述区间内的荧光强度结果,根据所述荧光强度结果区分细胞亚群。
2.根据权利要求1所述的细胞分群方法,其特征在于,所述第一荧光染料和所述第二荧光染料选自以下荧光染料中的两种:荧光蛋白、荧光量子点、香豆素类荧光染料、罗丹明类荧光染料、花菁类荧光染料、方酸类荧光染料、氟化硼络合二吡咯甲川类荧光染料、高聚物荧光染料以及由上述荧光染料中的至少两种荧光染料所构成的串联染料。
3.根据权利要求1所述的细胞分群方法,其特征在于,所述第一荧光染料为荧光蛋白类的别藻蓝蛋白,所述第二荧光染料为花菁类荧光染料的Cy5。
4.根据权利要求1所述的细胞分群方法,其特征在于,所述第一荧光染料为荧光蛋白类的藻红蛋白,所述第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的RBITC。
5.根据权利要求1所述的细胞分群方法,其特征在于,所述第一荧光染料为量子点QD525,所述第二荧光染料为罗丹明类荧光染料的异硫氰酸荧光素。
6.根据权利要求1~5任一项所述的细胞分群方法,其特征在于,所述第一探针和所述第二探针为抗体,所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
7.根据权利要求6所述的细胞分群方法,其特征在于,所述第一探针和所述第二探针为识别人类或其他哺乳动物白细胞分化抗原的单克隆抗体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810581605.2A CN108732082A (zh) | 2018-06-07 | 2018-06-07 | 细胞分群方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810581605.2A CN108732082A (zh) | 2018-06-07 | 2018-06-07 | 细胞分群方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108732082A true CN108732082A (zh) | 2018-11-02 |
Family
ID=63932358
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810581605.2A Pending CN108732082A (zh) | 2018-06-07 | 2018-06-07 | 细胞分群方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108732082A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110487706A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-11-22 | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞的检测方法 |
CN110554178A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-12-10 | 杭州深度生物科技有限公司 | 一种悬浮式液态生物芯片检测方法 |
CN111044732A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-21 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 用于流式细胞仪法cd45抗原检测的试剂盒及其制备方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10053747A1 (de) * | 2000-10-30 | 2002-05-23 | Deutsches Krebsforsch | Verfahren zur gleichzeitigen Bestimmung zweier Fluoreszenz-Emissionen mit einem Einlaser-Durchflußzytometer |
CN101097181A (zh) * | 2006-06-26 | 2008-01-02 | 希森美康株式会社 | 试样分析用试剂、试样分析用试剂盒及试样分析方法 |
CN101375164A (zh) * | 2005-12-20 | 2009-02-25 | 奥里巴Abx股份有限公司 | 用于区分至少两个细胞群体的方法及其应用 |
WO2014096389A1 (en) * | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Ucb Pharma S.A. | Method for identifying antibody producing cells |
CN104662170A (zh) * | 2012-06-27 | 2015-05-27 | 新泽西鲁特格斯州立大学 | 通过使用流式细胞术的rna测量快速检测t细胞活化 |
-
2018
- 2018-06-07 CN CN201810581605.2A patent/CN108732082A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10053747A1 (de) * | 2000-10-30 | 2002-05-23 | Deutsches Krebsforsch | Verfahren zur gleichzeitigen Bestimmung zweier Fluoreszenz-Emissionen mit einem Einlaser-Durchflußzytometer |
CN101375164A (zh) * | 2005-12-20 | 2009-02-25 | 奥里巴Abx股份有限公司 | 用于区分至少两个细胞群体的方法及其应用 |
CN101097181A (zh) * | 2006-06-26 | 2008-01-02 | 希森美康株式会社 | 试样分析用试剂、试样分析用试剂盒及试样分析方法 |
CN104662170A (zh) * | 2012-06-27 | 2015-05-27 | 新泽西鲁特格斯州立大学 | 通过使用流式细胞术的rna测量快速检测t细胞活化 |
WO2014096389A1 (en) * | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Ucb Pharma S.A. | Method for identifying antibody producing cells |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110554178A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-12-10 | 杭州深度生物科技有限公司 | 一种悬浮式液态生物芯片检测方法 |
CN110487706A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-11-22 | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞的检测方法 |
CN111044732A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-21 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 用于流式细胞仪法cd45抗原检测的试剂盒及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Adan et al. | Flow cytometry: basic principles and applications | |
US4987086A (en) | Method for analysis of subpopulations of cells | |
Wood | 9-color and 10-color flow cytometry in the clinical laboratory | |
EP0132064B1 (en) | Method for elimination of interference of selected cell populations in analytic cytology | |
Reggeti et al. | Flow cytometry in veterinary oncology | |
Preffer et al. | Advances in complex multiparameter flow cytometry technology: Applications in stem cell research | |
Pachmann et al. | Detection and quantification of small numbers of circulating tumour cells in peripheral blood using laser scanning cytometer (LSC®) | |
CN108732082A (zh) | 细胞分群方法 | |
Loken et al. | Three‐color immunofluorescence analysis of leu antigens on human peripheral blood using two lasers on a fluorescence‐activated cell sorter | |
US7332295B2 (en) | Multidimensional leukocyte differential analysis | |
Horan et al. | Improved flow cytometric analysis of leukocyte subsets: simultaneous identification of five cell subsets using two-color immunofluorescence. | |
Rico et al. | Flow-cytometry-based protocols for human blood/marrow immunophenotyping with minimal sample perturbation | |
Terstappen et al. | Multidimensional Flow Cvtometric Blood Cell Differentiation lVithout Ervthrocvte Lvsis | |
Pierzchalski et al. | Introduction A: Recent advances in cytometry instrumentation, probes, and methods | |
Donnenberg et al. | Coping with artifact in the analysis of flow cytometric data | |
Dey | Diagnostic flow cytometry in cytology | |
CA1312537C (en) | Differential binding of potential sensitive materials by lymphocytes | |
Gilman-Sachs | Flow cytometry | |
Kwok et al. | Laser particle barcoding for multi-pass high-dimensional flow cytometry | |
US5064616A (en) | Kit for analysis of subsets of subpopulations of leukocytes | |
US20090246805A1 (en) | Method for classifying and counting basophils | |
Mackenzie et al. | Flow cytometry and its applications in veterinary medicine | |
Giudice et al. | Fluorescent cell barcoding for immunophenotyping | |
US20150309015A1 (en) | Method for determining compatibility between a donor and a recipient by means of the flow cytometric detection of alloreactive t cells | |
Blundell et al. | Flow cytometry as an important tool in proteomic profiling |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181102 |