CN108721313A - 一种维生素d受体激动剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种维生素D受体激动剂，其特征在于该激动剂包括：水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种；研究表明，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种能够很好的激活维生素D受体，通过激活维生素D受体，从而对乳腺癌、胰腺癌、结肠癌具有预防和治疗作用。

Description

一种维生素D受体激动剂

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种维生素D受体激动剂，即水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸等活性成分的新用途。

背景技术

维生素D是脂溶性维生素，对人类健康特别是对儿童健康具有重要意义。维生素D缺乏除了导致大家熟知的钙、磷代谢异常，钙化不良而致佝偻病外，同时也可影响神经、肌肉、免疫、造血等多种组织器官的功能。维生素D进入体内后，代谢为活性维生素D(体内最终活化形式为配体1,25(OH)₂D₃)，通过与维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)结合发挥其生物学作用。

VDR与配体活性维生素D结合后，发生构象改变，激活靶基因转录，通过基因组机制和非基因组机制介导其生物学效应。基因组机制通过核受体激活第二信使，而非基因组机制通过膜受体激活第二信使，引起一系列快速生物学效应，不依赖基因转录，作用迅速但不持久。1、免疫调节作：用已经发现人体内许多免疫细胞，如单核巨噬细胞、激活的T淋巴细胞和B淋巴细胞均能表达VDR，且其免疫活性和增殖分化均受活性维生素D的调节。活性维生素D能够优先选择辅助性T1细胞作为靶细胞，抑制Th1增生，并抑制其产生白细胞介素2和干扰素γ；活性维生素D还可以下调组织相容性抗原Ⅱ的表达。树突细胞在细胞免疫中起重要作用。活性维生素D能够抑制树突细胞成熟，使T细胞不能激活及呈递抗原，诱导免疫耐受。CD4+T细胞可分泌多种抑制因子，如IL-4、IL-10等，活性维生素D可特异性激活组织周围的CD4+T细胞，减少Th1的增生，抑制Th1分泌IL-2、IL-5。活性维生素D能通过下调IL-12和上调IL-4表达增加Th2，而IL-12在Th1的分化中亦起重要作用。活性维生素D能刺激Th2分泌IL-4、IL-5和IL-10，使免疫排斥反应向免疫耐受反应转化。活性维生素D可抑制B淋巴细胞分泌免疫球蛋白，可通过增强抑制性T细胞的功能而减弱机体的免疫反应。活性维生素D与未活化的单核细胞结合后可促进细胞对病原微生物的杀伤。活性维生素D对可抑制T细胞生长因子、粒单系集落刺激因子、白介素和干扰素的生成。活性维生素D对细胞免疫的影响为自身免疫性疾病的防治提供了新的理论依据，如糖尿病、类风湿性关节炎、白癜风、自身免疫性甲状腺炎等，其作用在多种动物模型中得到证实。2、抗肿瘤作用：VDR及其配体活性维生素D抗肿瘤的作用机制有以下几个方面:①阻滞细胞周期，诱导细胞分化。活性维生素D可使肿瘤细胞阻滞于G1期，从而使G0期细胞堆积，S期细胞下降，导致细胞周期调节蛋白表达减少，使肿瘤细胞增殖下降。活性维生素D可增加蛋白激酶C诱导肿瘤细胞分化，也可通过调节DNA结合抑制剂的表达和依赖N末端激酶来诱导肿瘤分化。②诱导肿瘤细胞凋亡。活性维生素D主要通过调节在细胞凋亡过程中起关键作用的介质来抑制肿瘤。活性维生素D与Bcl-2家族基因的关系密切。Bcl-2基因是人类重要的抗凋亡基因，Bcl家族基因与Bcl-2基因协同作用在细胞凋亡中起重要作用，大量研究显示活性维生素D能使Bcl-2表达下调，从而促进肿瘤细胞凋亡。③抑制肿瘤的转移和侵袭。活性维生素D3能降低丝氨酸蛋白激酶和硫蛋白的表达，减少蛋白水解酶，抑制其活性，减少癌细胞胶原酶，降低黏连蛋白受体的表达，抑制肿瘤血管的生成，从而减弱癌细胞增殖、浸润、转移。3、调节钙、磷代谢及其他作用：活性维生素D通过VDR介导发挥其调节钙、磷代谢的经典作用活性维生素D可促进小肠黏膜细胞合成钙结合蛋白，增加小肠黏膜对钙的吸收，随之增加磷的吸收；增加近端肾小管对钙、磷，特别是磷的重吸收；直接作用于骨的矿物质代谢，促进破骨细胞的分化，促进成骨细胞的增殖。活性维生素D及其类似物可促进外周血单核细胞向巨噬细胞分化，可以上调胰岛素样生长因子Ⅰ及结合蛋白的表达，阻断胰岛素样生长因子Ⅰ促进细胞有丝分裂的作用，对维持正常细胞的生理功能，调节细胞生长起重要作用。

综上所述，研究新的维生素受体激动剂，得到新的药物，用于临床，对于医生和患者，都具有重要意义。

发明内容

基于上述原因，申请人经过多年创造性研究，发现一种新的维生素D受体激动剂，该激动剂包括：水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种。研究表明，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种能够很好的激活维生素D受体，通过激活维生素D受体，从而对乳腺癌、胰腺癌、结肠癌等具有治疗作用。

本发明通过下述技术方案实现的。

1、一种维生素D受体激动剂，其特征在于该激动剂包括：水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种。

2、根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于该激动剂为水晶兰苷。

3、根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。

4、根据权利要求1或2所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于水晶兰苷在制备治疗和/或预防结肠癌药物中的应用。

5、根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于水晶兰苷在制备治疗和/或预防乳腺癌药物中的应用。

6、根据权利要求1或2所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于水晶兰苷在制备治疗和/或预防胰腺癌药物中的应用。

7、根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于：水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种为活性成分制备成的药物制剂。

8、根据权利要求7所述的一种维生素D受体激动剂，其中所述的药物制剂包括口服制剂和注射制剂。

9、水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种在制备激活维生素D受体药物中的应用。

10、水晶兰苷在制备激活维生素D受体药物中的应用。

11、水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种在制备激活维生素D受体后治疗和/或预防癌症药物中的应用。

12、水晶兰苷在制备激活维生素D受体后治疗和/或预防癌症药物中的应用。

附图说明

图1各组小鼠体重变化的比较。

图2各组小鼠结肠肿瘤生长情况。

图3各组小鼠脾脏肿大程度的比较。

图4各组小鼠结肠长度、厚度、肿瘤个数以及大小的比较。

图5各组小鼠肠道通透性的比较。

图6各组小鼠肿瘤组织中细胞因子水平的比较。

图7各组小鼠巨噬细胞数量的比较、各组小鼠巨噬细胞M1/M2的比较。

图8水晶兰苷对正常动物内源性VD3无促分泌作用。

图9各组小鼠体内内源性VD3的水平。

图10各组小鼠血液和肠道PGE2的含量。

图11各组小鼠结肠VDR的表达情况。

图12各组小鼠结肠癌变部位VDR的表达情况。

图13水晶兰苷等四种化合物对小鼠结肠癌的抑制情况。

图14各组动物结肠的长度。

图15各组动物的结肠厚度。

图16各组动物结肠VDR蛋白的表达情况。

图17各组动物结肠癌变部位VDR的表达情况。

图18水晶兰苷等四种化合物对体外结肠癌细胞HT29增殖的抑制情况。

图19水晶兰苷等四种化合物对HT29移植瘤增殖的抑制情况。

图20水晶兰苷等四种化合物对体外SW1990乳腺癌细胞增殖的抑制情况。

图21水晶兰苷等四种化合物对SW1990乳腺癌细胞移植瘤增殖的抑制情况。

图22水晶兰苷等四种化合物对体外MB-231胰腺癌细胞增殖的抑制情况。

图23水晶兰苷等四种化合物对MB-231胰腺癌细胞移植瘤增殖的抑制情况。

具体实施方式

以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。

本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。

本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。

实验一水晶兰苷抗结肠癌试验研究

试验方法：90只6-8周Balb/c小鼠购自广州中医药大学实验动物中心，重约18-22g，适应性饲养10天。造模共分为三个阶段。第一阶段，除正常组动物给予生理盐水注射，其余每只动物腹腔注射致癌剂AOM(10mg/kg)，次日给予2％DSS自由饮水，维持7天，换成常规饮用水14天。第二阶段，给予2％DSS自由饮水，维持10天，换成常规饮用水14天。第三阶段，给予2％DSS自由饮水，维持10天，换成常规饮用水11天。正常组全程给予常规饮用水。每天记录饮食饮水体重动物状态并进行DAI评分，第10周处死动物并取材。本实验在第二阶段造模期第一天分组并进行给药，共设为5组，第一组为空白对照组(Normal)，共12只，给予饮用水灌胃；第二组为模型组(AOM/DSS)，共22只，给予饮用水灌胃；第三组为阳性药对照组(5-ASA+AOM/DSS)，共22只，给予美沙拉嗪(5-ASA)100mg/kg灌胃给药；第四组和第五组为水晶兰苷干预组(Mo+AOM/DSS)，分别是高剂量8mg/kg和低剂量2mg/kg，每组17只动物。每日给药直至解剖。

(1)DAI评分计算公式：DAI值＝(体重下降分数+大便性状分数+便血分数)/3。

具体的评分方法如表

表1DAI的评分方法

(2)主要脏器系数及脏器保存

将动物麻醉后取材，称量肝脏、脾脏、胸腺睾丸等，计算脏器系数；剖取结肠组织，直尺测量其长度，游标卡尺测量其厚度，记录其肿瘤个数、肿瘤大小和结肠溃烂粘连程度；将各组织剪取小块固定，剩下组织冻存；固定组织用于HE染色和免疫组化测定。

(3)血清中肠道通透性的测定

第三阶段造模结束恢复饮水的第一天，每组6-8只动物禁食不禁水12h，经胃管喂入FITC-dextran40mg/100g，4h后取血，肝素抗凝，3500r/min离心15min。取血清25μl加入100μl PBS，用酶标仪测定其荧光强度，激发光波长为480nm，发射光波长为520nm，制作标准曲线并计算样品浓度。

(4)肠道肿瘤组织中细胞因子的测定

取-80℃冻存的肠道肿瘤组织并匀浆，BCA试剂盒测定匀浆液的总蛋白浓度，匀浆液稀释20倍后采用Elisa方法测定细胞因子：IL-6，IL-10，IL-1β。校正蛋白并制作标准曲线，计算样品浓度。

(5)外周血巨噬细胞的分型

用淋巴细胞分离液分离外周血得到单个核细胞，按说明书分别加入抗体CD11b，CD86，CD163。

(6)血清及肠道组织匀浆中生化指标的测定

麻醉取血后，3500r/min离心15min，取上清按说明书方法测定1,25-(OH)₂D₃和PGE2的含量。取-80℃冻存的肠道肿瘤组织并匀浆，测定PGE2的含量。校正蛋白并制作标准曲线，计算样品浓度。

(7)水晶兰苷作用靶点的检测

检测水晶兰苷干预结肠癌的潜在作用靶点。

实验结果：

(1)各组动物体重及结肠病变情况的比较

AOM造模后动物体重下降较为明显，个别动物出现松毛，动物状态较正常组差。给予DSS5天后部分模型组动物出现稀便、便血症状，体重恢复缓慢，大部分组出现下降趋势，动物精神不佳，毛发疏松、无光泽。6天后绝大多数动物出现血便症状，动物体重下降明显。换回普通饮用水后症状逐渐消失并且体重回升。造模第二阶段模型组和阳性组部分动物出现肛门脱垂的现象，换回常规饮用水后有所缓解。第三阶段模型组和阳性组各出现8-12只动物肛门脱垂，水晶兰苷给药组各出现2-6只动物肛门脱垂。肛门脱垂的小鼠解剖发现肠道末端肿瘤均环状生长造成结肠梗阻。对比模型组，给药组均有不同程度的改善。试验结果见图1和图2。

(2)小鼠脏器系数以及肠道指标

从脏器系数上来看，水晶兰苷高低剂量组均可以显著性降低AOM/DSS造模后导致的脾脏肿大，而5-ASA并没有此类效应，提示水晶兰苷可能有一定的免疫调节作用(结果见图3)。模型组的结肠长度和结肠厚度对比正常组分别下调和上调，均有极显著性差异，而三个给药组均有不同程度的改善，且差异具有统计学意义。三个给药组对比模型组肿瘤个数均有不同程度的降低，差异具有统计学意义。另外，模型组的肿瘤多数较大(>3mm)，而给药组肿瘤则相对较小(<2mm)。试验结果见图4。

(3)小鼠肠道通透性检测

为了测定各组小鼠肠道通透性的差异，第三阶段造模结束后，采用FITC-dextran的方法用酶标仪测定了各组小鼠的肠道通透性。从结果可知，模型组动物的肠道通透性显著性升高，三个给药组有不同程度的下调，水晶兰苷高低剂量具有显著性差异，阳性药组差异没有统计学意义。试验结果见图5。

(4)小鼠肿瘤组织内细胞因子的含量测定

明确水晶兰苷定期灌胃能否使小鼠倡肠道组织中细胞因子水平改变，我们运用Elisa的方法测定了肿瘤组织中IL-6，IL-10，IL-1β的水平。结果显示模型组中IL-6和IL-1β含量明显高于正常组，各给药组有不同程度的下调。而模型组中IL-10水平对比正常组显著性降低，阳性药组和水晶兰苷高剂量组对比模型组无太大差异，水晶兰苷低剂量对比模型组IL-10水平极显著性上调。试验结果见图6。

(5)小鼠外周血巨噬细胞的分型

为了测定各组小鼠巨噬细胞极化的差异，本实验采用流式细胞术测定了各组小鼠外周血中巨噬细胞的分型。从结果可知，模型组和各给药组对比正常组巨噬细胞比例均降低，模型组和阳性药组的M1/M2比值对比正常组也显著性降低，水晶兰苷组对比模型组有上调趋势，试验结果见图7。

(6)小鼠体内1,25(OH)₂D₃和PGE2的含量测定

为明确水晶兰苷定期灌胃能否使小鼠血清1,25(OH)₂D₃水平升高，故检测了空白对照组和各干预组小鼠以及正常动物+水晶兰苷组血清中1,25(OH)₂D₃浓度。实验结果显示，空白动物给予水晶兰苷后1,25(OH)₂D₃水平出现下调，但是没有统计学差异。在AOM/DSS结肠癌模型中，模型组的1,25(OH)₂D₃水平对比正常组显著性降低，给药组对比模型组均出现下调，推测水晶兰苷并非是通过促进1,25(OH)₂D₃的上调而发挥作用的。为了明确水晶兰苷对结肠癌模型中炎症介质的影响，我们用Elisa的方法测定了小鼠血清和肠道中PGE2的含量。如图所示，AOM/DSS组对比正常组血清和肠道中PGE2的含量均显著性上调，给药各组分别有不同程度的下调。试验结果见图8、图9、图10。

(7)水晶兰苷作用靶点研究：

Western blot结果显示水晶兰苷主要促进肠道VDR的表达，对SRC、Akt1的影响不显著。免疫组化结果显示水晶兰苷上调VDR的表达，该蛋白的表达与内源性激素1,25(OH)₂D₃的分泌无关。试验结果见图11、图12.

实验二水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸抗结肠癌试验研究

试验方法：70只6-8周Balb/c小鼠购自广州中医药大学实验动物中心，重约18-22g，适应性饲养10天。造模共分为三个阶段。第一阶段，除正常组动物给予生理盐水注射，其余每只动物腹腔注射致癌剂AOM(10mg/kg)，次日给予2％DSS自由饮水，维持7天，换成常规饮用水14天。第二阶段，给予2％DSS自由饮水，维持10天，换成常规饮用水14天。第三阶段，给予2％DSS自由饮水，维持10天，换成常规饮用水11天。正常组全程给予常规饮用水。每天记录饮食饮水体重动物状态并进行DAI评分，第10周处死动物并取材。本实验在第二阶段造模期第一天分组并进行给药，共设为7组，每组10只。第一组为空白对照组(control)，给予饮用水灌胃；第二组为模型组(model)，共10只，给予饮用水灌胃；第三组为维生素D₃阳性药对照组(VD3，0.2mg/kg)；第四～七组分别给与水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸(组别标记为：Mo，As，Aa，Da)，分别是给的剂量2mg/kg。每日给药1次直至实验结束。实验结束时，将动物麻醉后取材，剖取结肠组织，直尺测量其癌变组织的长度，游标卡尺测量其厚度。检测水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸对维生素D受体表达的影响。

实验结果：

与正常组比较，模型组的结肠长度和结肠厚度对比正常组分别下调和上调，且结肠末端长满肿瘤，而五个给药组均有不同程度的显著改善。试验结果见图图13、图14、图15。实验结果表明水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸均有抑制结直肠癌发生发展的作用。

无论是Western blot还是免疫组化结果均显示：与空白组比较，维生素D₃、水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸均能促进结肠组织维生素D受体表达的增强。试验结果见图16、图17。

实验三水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸抑制结肠癌细胞、乳腺癌细胞、胰腺癌细胞增殖的试验研究

1、HT29结肠癌细胞移植性肿瘤的实验

①HT29结肠癌细胞培养

复苏HT29细胞，24小时后，换液培养。培养基配制方法：6％的血清，1％的双抗+1640基础培养基。待细胞长满后，消化传代扩大细胞数目。当细胞达到需要量时，胰酶消化后，离心，用PBS重悬制成1×10⁸个细胞/ml的细胞混悬液。一部分细胞悬液分别加入水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸，考察不同化合物对肿瘤细胞增殖的抑制率(％)。

②裸鼠饲养和分组

成年裸鼠购自广东省医学实验动物中心，体重：20～24g，雄性。动物适应性饲养7天后，除空白组外，其与动物注射PBS混悬细胞液0.2ml于动物腹背肩胛处，观察动物的反应情况，每周测定一次动物的体重。观察2周后，按照肿瘤大小对动物分组：空白组，模型组，5-氟尿嘧啶对照组(5-Full，40mg/kg)，水晶兰苷+5-氟尿嘧啶(2mg/kg水晶兰苷+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)、去乙酰基车叶草苷酸+5-氟尿嘧啶(2mg/kg去乙酰基车叶草苷酸+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)、车叶草苷+5-氟尿嘧啶(2mg/kg车叶草苷+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)、车叶草苷酸+5-氟尿嘧啶(2mg/kg车叶草苷酸+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)，组别标记为：Mo，As，Aa，Da。每组动物8只；每天给药1次。

③动物相关观察和肿瘤大小测定

每天观察动物状态，死亡情况，饮食饮水状况。每周测定一次动物体重，每4天测定动物肿瘤的大小。采用游标卡尺测定动物肿瘤体积。给药1个月后，动物眼眶取血后处死，分离动物肿瘤，称重。

2、SW1990乳腺癌细胞移植性肿瘤的实验

①SW1990乳腺癌细胞培养

复苏SW1990细胞，24小时后，换液培养。培养基配制方法：6％的血清，1％的双抗+1640基础培养基。待细胞长满后，消化传代扩大细胞数目。当细胞达到需要量时，胰酶消化后，离心，用PBS重悬制成1×10⁸个细胞/ml的细胞混悬液。一部分细胞悬液分别加入水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸，考察不同化合物对肿瘤细胞增殖的抑制率(％)。

②裸鼠饲养和分组

成年裸鼠购自广东省医学实验动物中心，体重：20～24g，雄性。动物适应性饲养7天后，除空白组外，其与动物注射PBS混悬SW1990细胞液0.2ml于动物腹背肩胛处，观察动物的反应情况，每周测定一次动物的体重。观察2周后，按照肿瘤大小对动物分组：空白组，模型组，5-氟尿嘧啶对照组(5-Full，40mg/kg)，水晶兰苷+5-氟尿嘧啶(2mg/kg水晶兰苷+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)、去乙酰基车叶草苷酸+5-氟尿嘧啶(2mg/kg去乙酰基车叶草苷酸+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)、车叶草苷+5-氟尿嘧啶(2mg/kg车叶草苷+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)、车叶草苷酸+5-氟尿嘧啶(2mg/kg车叶草苷酸+20mg/kg 5-氟尿嘧啶)，组别标记为：Mo，As，Aa，Da。每组动物8只；每天给药1次。

③动物相关观察和肿瘤大小测定

每天观察动物状态，死亡情况，饮食饮水状况。每周测定一次动物体重，每4天测定动物肿瘤的大小。采用游标卡尺测定动物肿瘤体积。给药1个月后，动物眼眶取血后处死，分离动物肿瘤，称重。

3、MB-231胰腺癌细胞移植性肿瘤的实验

①SMB-231胰腺癌细胞培养

复苏SMB-231胰腺癌细胞，24小时后，换液培养。培养基配制方法：6％的血清，1％的双抗+1640基础培养基。待细胞长满后，消化传代扩大细胞数目。当细胞达到需要量时，胰酶消化后，离心，用PBS重悬制成1×10⁸个细胞/ml的细胞混悬液。一部分细胞悬液分别入水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸，考察不同化合物对肿瘤细胞增殖的抑制率(％)。

②裸鼠饲养和分组

成年裸鼠购自广东省医学实验动物中心，体重：20～24g，雄性。动物适应性饲养7天后，除空白组外，其与动物注射PBS混悬SMB-231胰腺癌细胞液0.2ml于动物腹背肩胛处，观察动物的反应情况，每周测定一次动物的体重。观察2周后，按照肿瘤大小对动物分组：空白组，模型组，5-氟尿嘧啶对照组(5-Full，40mg/kg)，水晶兰苷+5-氟尿嘧啶(2mg/kg水晶兰苷+20mg/kg5-氟尿嘧啶)、去乙酰基车叶草苷酸+5-氟尿嘧啶(2mg/kg去乙酰基车叶草苷酸+20mg/kg5-氟尿嘧啶)、车叶草苷+5-氟尿嘧啶(2mg/kg车叶草苷+20mg/kg5-氟尿嘧啶)、车叶草苷酸+5-氟尿嘧啶(2mg/kg车叶草苷酸+20mg/kg5-氟尿嘧啶)，组别标记为：Mo，As，Aa，Da。每组动物8只；每天给药1次。

③动物相关观察和肿瘤大小测定

每天观察动物状态，死亡情况，饮食饮水状况。每周测定一次动物体重，每4天测定动物肿瘤的大小。采用游标卡尺测定动物肿瘤体积。给药1个月后，动物眼眶取血后处死，分离动物肿瘤，称重。

实验结果：

①体外细胞增殖抑制实验结果显示：与空白对照组比较，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸在浓度1uM时，均能显著有抑制HT29结直肠癌细胞的增殖(见图18)。在体荷瘤小鼠模型上，5-氟尿嘧啶化疗药在剂量减半下(20mg/kg)，分别与水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸联合给药，能够显著抑制肿瘤的增殖，效果与单纯化疗组(5-氟尿嘧啶剂量40mg/kg)相当。提示水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸与化疗药合用后能减少化疗药的用量、抑制结直肠癌HT29细胞增殖的作用(见图19)。

②体外细胞增殖抑制实验结果显示：与空白对照组比较，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸在浓度1uM时，均能显著有抑制HT29结直肠癌细胞的增殖(见图20)。在体荷瘤小鼠模型上，5-氟尿嘧啶化疗药在剂量减半下(20mg/kg)，分别与水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸联合给药，能够显著抑制肿瘤的增殖，效果与单纯化疗组(5-氟尿嘧啶剂量40mg/kg)相当。提示水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸与化疗药合用后能减少化疗药的用量、抑制SW1990乳腺癌细胞增殖的作用(见图21)。

③体外细胞增殖抑制实验结果显示：与空白对照组比较，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸在浓度1uM时，均能显著有抑制SMB-231胰腺癌细胞的增殖(见图22)。在体荷瘤小鼠模型上，5-氟尿嘧啶化疗药在剂量减半下(20mg/kg)，分别与水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸联合给药，能够显著抑制肿瘤的增殖，效果与单纯化疗组(5-氟尿嘧啶剂量40mg/kg)相当。提示水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸与化疗药合用后能减少化疗药的用量、抑制SMB-231胰腺癌细胞增殖的作用(见图23)。

Claims (12)

1.一种维生素D受体激动剂，其特征在于该激动剂包括：水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于该激动剂为水晶兰苷。

3.根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于，水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。

4.根据权利要求1或2所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于水晶兰苷在制备治疗和/或预防结肠癌药物中的应用。

5.根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于水晶兰苷在制备治疗和/或预防乳腺癌药物中的应用。

6.根据权利要求1或2所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于水晶兰苷在制备治疗和/或预防胰腺癌药物中的应用。

7.根据权利要求1所述的一种维生素D受体激动剂，其特征在于：水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种为活性成分制备成的药物制剂。

8.根据权利要求7所述的一种维生素D受体激动剂，其中所述的药物制剂包括口服制剂和注射制剂。

9.水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种在制备激活维生素D受体药物中的应用。

10.水晶兰苷在制备激活维生素D受体药物中的应用。

11.水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷和车叶草苷酸中的一种或几种在制备激活维生素D受体后治疗和/或预防癌症药物中的应用。

12.水晶兰苷在制备激活维生素D受体后治疗和/或预防癌症药物中的应用。