CN108704119A - 一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽及其应用，涉及微生物应用领域，基于传统抗菌剂不能持续抗菌，缺乏与牙齿结合的能力而提出的。本发明的抗菌肽由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列与具有与牙齿表面结合功能的基团聚合而成，本发明的有益效果在于：抗菌肽具有与牙齿表面结合的能力，能应用于治疗和预防牙齿龋病。

Description

一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽及其应用
技术领域
本发明涉及微生物应用领域，具体涉及一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽及其应用。
背景技术
龋病是最常见的口腔疾病，对公众健康具有重要影响。研究表明龋病是由多种细菌感染引起的牙体硬组织慢性进行性破坏性疾病，其中变形链球菌被认为是龋病最主要的致病菌。变形链球菌具有产酸作用并且可以在酸性环境中长期生存，变形链球菌感染牙体表面，在局部形成较低的酸性环境，进而引起牙体硬组织脱矿和有机物的溶解，最终形成龋坏。正常情况下变形链球菌产酸形成酸性物质难以聚集，pH难以降至导致牙体组织脱矿的程度，致龋菌引起牙体组织脱矿过程中的一个重要因素是牙菌斑的形成。因此，有效的抑制致龋菌活性和牙齿表面菌斑生物膜的形成是龋病预防和治疗的重要途径。
临床常用的抗菌剂很多，如氯己定、金属盐类抗菌剂、碘、醇、酚以及三氯生等，这些抗菌剂都具有较好的抗菌和抗菌斑生物膜性能。但是由于菌斑生物膜具有较稳定的结构特性，部分传统抗生素不具有抑制菌斑生物膜的作用，另外，传统抗生素的长期和过于普遍应用已经引起较严重的细菌性耐药性问题，引起相应的健康问题。菌斑生物膜提供了致病菌稳定的生存和致病环境，传统抗生素的临床应用过程中面临的常见难题是抗菌剂的抑菌作用往往只能局限于菌斑生物膜表面，并且抗菌剂的漱口或冲洗治疗只能暂时抑制致病菌，不能发挥持续性的抗菌或抑菌效果。因此，研究能够有效控制细菌感染并治疗相关性疾病的新型抗菌剂是口腔临床龋病治疗的重要策略和迫切需要。
发明内容
本发明解决的技术问题在于传统抗菌剂不能持续抗菌或抑菌，缺乏与牙齿结合的能力。
本发明是采用以下技术方案解决上述技术问题的：
本发明所使用的变形链球菌ATCC 35668(Streptococcus mutans)为安徽医科大学安徽省口腔疾病研究重点实验室所有，由香港大学牙医学院赠送，也可以从国内外市场购买得到。
一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽，所述抗菌肽由如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列与具有与牙齿表面结合功能的基团聚合而成。
优选的，所述具有与牙齿表面结合功能的基团为两个磷酸化的丝氨酸或焦磷酸或阿仑膦酸钠。
优选的，所述抗菌肽为抗菌肽A或抗菌肽B或抗菌肽C；
所述抗菌肽A的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
所述抗菌肽B的结构为：H4P2O7-Arg-Arg-Trp-Cys-Phe-Arg-Val-Cys-Tyr-Arg-Gly-Phe-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg；
所述抗菌肽C的结构为：C4H12NO7P2·Na·3H2O-Arg-Arg-Trp-Cys-Phe-Arg-Val-Cys-Tyr-Arg-Gly-Phe-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg。
优选的，所述如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽/抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的制备方法相同。
优选的，所述如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽/抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的制备方法包括以下步骤：
(1)选用2Cl树脂为起始载体，采用固相合成法，以Fmoc-保护氨基酸为缩合原料，依次缩合磷酸化多肽氨基酸序列中相对应的氨基酸，以及两个磷酸化的丝氨酸或焦磷酸或阿仑膦酸钠；
(2)将多肽进行切割沉聚反应，纯化后冻干。
本发明还提供一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽的应用：在治疗和预防牙齿龋病的应用。
优选的，在牙膏、漱口水、口香糖的应用。
优选的，所述牙膏、口香糖中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/g，漱口水中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/mL。
优选的，在喷雾剂、抗菌凝胶、抗菌软膏的应用。
优选的，所述喷雾剂、抗菌凝胶、抗菌软膏中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为20-40μg/mL。
本发明的有益效果在于：本发明获得的抗菌肽可以抑制口腔致龋菌变形链球菌ATCC35668(Streptococcus mutans)的生长，具有与牙齿表面结合的能力，抑制牙菌斑的形成，可以在口腔唾液环境中保持长期有效的抑菌浓度，可以克服传统的抗菌药物出现的耐药性问题。
附图说明
图1为20μg/mL抗菌肽A(左)和抗菌肽B(右)的抑菌效果；
图2为40μg/mL抗菌肽B(左)和抗菌肽C(右)的抑菌效果；
图3为80μg/mL抗菌肽A(左上)、抗菌肽B(下)、抗菌肽C(右上)的抑菌效果，中间为无菌水处理的滤纸片的抑菌效果；
图4为160μg/mL抗菌肽A(左上)、抗菌肽B(下)、抗菌肽C(右上)的抑菌效果，中间为无菌水处理的滤纸片的抑菌效果；
图5为无菌水处理的釉质片与变形链球菌培养6h后的扫描电镜图；
图6为无菌水处理的釉质片与变形链球菌培养12h后釉质片的扫描电镜图；
图7为如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽处理的釉质片与变形链球菌培养6h后釉质片的扫描电镜图；
图8为如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽处理的釉质片与变形链球菌培养12h后釉质片的扫描电镜图；
图9为抗菌肽A处理的釉质片与变形链球菌培养6h后釉质片的扫描电镜图；
图10为抗菌肽A处理的釉质片与变形链球菌培养12h后釉质片的扫描电镜图；
图11为抗菌肽B处理的釉质片与变形链球菌培养6h后釉质片的扫描电镜图；
图12为抗菌肽B处理的釉质片与变形链球菌培养12h后釉质片的扫描电镜图；
图13为抗菌肽C处理的釉质片与变形链球菌培养6h后釉质片的扫描电镜图；
图14为抗菌肽C处理的釉质片与变形链球菌培养12h后釉质片的扫描电镜图；
图15为清洁后的兔切牙表面形态；
图16为兔左侧切牙涂抹无菌水和右侧切牙涂膜如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽的染色图；
图17为兔左侧切牙涂抹无菌水和右侧切牙涂膜抗菌肽A的染色图；
图18为兔左侧切牙涂抹无菌水和右侧切牙涂膜抗菌肽B的染色图；
图19为兔左侧切牙涂抹无菌水和右侧切牙涂膜抗菌肽C的染色图。
菌株说明：本发明所使用的变形链球菌ATCC 35668(Streptococcus mutans)为安徽医科大学安徽省口腔疾病研究重点实验室所有，由香港大学牙医学院赠送，也可以从国内外市场购买得到。
具体实施方式
为使对本发明的结构特征及所达成的功效有更进一步的了解与认识，用以较佳的实施例对本发明进行详细的说明。
实施例1：
如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽、抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C的制备：
(1)称取2Cl树脂2g，取代度0.2mmoL/g，于反应器中，用二氯甲烷(DCM)浸泡15min；
(2)用3倍树脂体积的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤树脂，然后抽干，如此重复四次；
(3)称取0.4mmoL的Fmoc-L-精氨酸(Fmoc-L-Arg(pbf)-OH)260mg加入到反应器中，加入1.2mmoL的N,N-二异丙基乙胺(DIEA)，加入N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)反应；
(4)2h后，用甲醇封头0.5h，其中甲醇与N,N-二异丙基乙胺(DIEA)的体积比为1：1，然后用3倍树脂体积的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤四次，抽干待用；
(5)向反应器中加入20％哌啶，其中哌啶与N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的体积比为1:4，反应20min，以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团，之后用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤四次，然后抽干；
(6)称取1.2mmoL的Fmoc-L-半胱氨酸(Fmoc-L-Cys(trt))和1-羟基苯并三唑(HOBT)(1.2mmoL)加入到反应器中，加入1.2mmoLN,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)，然后加N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)反应；
(7)1h后，取少量树脂检测，用茚三酮法检测，若树脂为无色，说明反应完全；若树脂有颜色，说明缩合不完全，继续反应；
(8)待反应完全后，用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤树脂四次，然后抽干，向反应器中加入20％哌啶，其中哌啶与N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的体积比为1:4，反应20min，以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团，之后用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤四次，然后抽干检测保护是否脱去；
(9)按照步骤(6)至步骤(8)依次接上Lys、Arg、Tyr、Cys、Phe、Gly、Arg、Tyr、Cys、Val、Arg、Phe、Cys、Trp、Arg、Arg、两个磷酸化的丝氨酸或焦磷酸或阿仑膦酸钠；
(10)待接上最后两个磷酸化的丝氨酸或焦磷酸或阿仑膦酸钠，且脱去Fmoc保护基后，用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤四次，然后用甲醇将树脂抽干，用三氟乙酸(TFA)将多肽从树脂上切割下来，最后用HPLC分离纯化，再冻干备用。
其中两个磷酸化的丝氨酸的结构式为：
焦磷酸的结构式为：
阿仑膦酸钠的结构式为：
将上述制得的抗菌肽分别用二甲基甲酰胺溶解配成5mg/mL抗菌肽试剂，再根据需要配成20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL，备用。
这里需要说明的是：本实施例中茚三酮法、HPLC分离纯化均为现有技术，两个磷酸化的丝氨酸、焦磷酸和阿仑膦酸钠均由上海科肽生物科技有限公司提供，其他试剂均为公众能购买获得；Fmoc为芴甲氧羰基。
实施例2：
抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C最小抑菌浓度的确定：
(1)制备含有脑心浸出液肉汤(BHI)的琼脂培养基培养皿；
(2)制备直径6mm圆形滤纸片若干，高压蒸汽灭菌，烘干；
(3)培养变形链球菌，调整菌液浓度至1×106cfu/mL；
(4)用消毒棉签蘸取菌液在琼脂培养基上均匀涂抹3次，每涂抹一次，培养皿转动60度，最后将棉签绕培养皿边缘涂抹一周。
(5)将滤纸片分别滴加不同浓度的抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C，滴加量为20μL，将20μL无菌水处理的滤纸片作为对照组，将滤纸片放置在变形链球菌培养皿上，滤纸片中心的距离至少相距25mm以上，且与培养皿的周缘相距15mm以上；贴放好后用无菌镊子轻压滤纸片使其紧贴于平板表面，37℃恒温厌氧培养24h观察结果。将肉眼可见的明显抑菌环的最低抗菌肽浓度组的抗菌肽浓度作为抗变形链球菌的最低抑菌浓度。
实验结果：
如图1至图4所示，抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C对变形链球菌的最小抑菌浓度为80μg/mL。
实施例3：
抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C对牙齿表面菌斑生长的影响：
(1)釉质片的制备：获取牛切牙若干，用3％的叠氮化钠消毒灭菌，并去除软组织，无菌水冲洗。将切牙制备成5mm×5mm×2mm的釉质片，先后用600、1200、2400目的砂纸抛光；再将釉质片依次用丙酮、无水乙醇、无菌水超声清洗各5min；处理后的釉质片经高压蒸汽灭菌后置于4℃冰箱中，储存备用；
(2)培养变形链球菌并制备成106cfu/mL菌液，待用；
(3)釉质片的处理：釉质片分别用无菌水、80μg/mL如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽、80μg/mL抗菌肽A、80μg/mL抗菌肽B、80μg/mL抗菌肽C浸泡釉质片，24h后取出，用无菌水冲洗；
(4)细菌培养：釉质片表面滴加20μL的106cfu/mL菌液，置于含5％蔗糖BHI液体培养基的24孔板中，厌氧培养箱中恒温培养并分别于6h、12h分别取出，无菌水冲洗、吹干、2.5％戊二醛固定，分别用50％乙醇、70％乙醇、90％乙醇、无水乙醇梯度脱水，临界点干燥后用电镜观察菌斑的生长情况。
这里需要说明的是：变形链球菌培养方法、采用电镜观察菌斑的方法为常规技术。
实验结果：
图5和图6分别为无菌水处理6h、12h的釉质片表面变形链球菌菌斑的数量，如图5所示，釉质表面有均匀分散的变形链球菌，如图6所示，釉质表面形成较厚的菌斑；
图7和图8为如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽处理6h、12h的釉质片表面变形链球菌菌斑的数量，如图7所示，釉质表面菌斑数量相对较少，如图8所示，釉质表面形成较厚的菌斑；
图9和图10为抗菌肽A处理6h、12h的釉质片表面变形链球菌菌斑的数量，如图9所示，釉质表面菌斑数量相对较少，如图8所示，釉质表面菌斑数量无明显增加；
图11和图12为抗菌肽B处理6h、12h的釉质片表面变形链球菌菌斑的数量，如图11所示，釉质表面菌斑数量相对较少，如图12所示，釉质表面菌斑数量无明显增加；
图13和图14为抗菌肽C处理6h、12h的釉质片表面变形链球菌菌斑的数量，如图13所示，釉质表面菌斑数量相对较少，如图14所示，釉质表面菌斑数量无明显增加；
实验结论：经抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C处理后，釉质片表面变形链球菌菌斑的数量没有随着培养时间的延长而增加，在6-12h下菌斑数量处于较少状态，具有长期的抑菌效果，可以克服传统的抗菌药物出现的耐药性问题，且釉质片经抗菌A、抗菌肽B、抗菌肽C浸泡后，用无菌水冲洗后仍具有抑制釉质片表面变形链球菌生长的能力，具有与牙齿表面结合的能力，相比之下，经如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽处理后，牙齿表面菌斑数量由较少状态转变为较多状态，不具有长时间的抑菌效果。
实施例4：
抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C对口腔唾液环境中兔切牙的抑菌效果：
取正常普通健康兔，正常饮食饲养1周后，用普通牙刷牙膏分别清理兔切牙，无菌水冲洗、吹干，使用小毛刷将160μg/mL如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽、160μg/mL抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C分别均匀涂抹兔左侧切牙，右侧切牙用无菌水涂抹作为阴性对照，5min后重复涂抹一次。静止干燥后置于饲养笼中以含有5％蔗糖的饲料饲养。饲养24h后用无菌水冲洗兔切牙牙面后以2％碱性品红均匀涂抹各切牙牙面，无菌水冲洗干燥，观察牙面的染色情况。
实验结果：
图15为清洁后的兔切牙表面形态；
图16为兔左侧切牙涂抹无菌水和右侧切牙涂膜如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽、经高糖饲养24h后兔切牙的染色情况，可以看出，兔左侧切牙和右侧切牙均染色明显，无明显差别；
图17为兔切牙左侧涂抹无菌水和右侧切牙涂抹抗菌肽A、经高糖饲养24h后兔切牙的染色情况，可以看出兔左侧切牙染色较多，右侧切牙染色较少；
图18为兔切牙左侧涂抹无菌水和右侧切牙涂抹抗菌肽B、经高糖饲养24h后兔切牙的染色情况，可以看出兔左侧切牙染色较多，右侧切牙染色较少；
图19为兔切牙左侧涂抹无菌水和右侧切牙涂抹抗菌肽C、经高糖饲养24h后兔切牙的染色情况，可以看出兔左侧切牙染色较多，右侧切牙染色较少。
实验结论：品红为常用的菌斑显示剂，与对照组相比，经抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C处理后，经高糖饲养24h后的兔口腔切牙经品红染色后，染色均较少，经如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽处理后染色较明显，可以看出，经过抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C处理后，兔口腔切牙菌斑较少，抗菌肽A、抗菌肽B、抗菌肽C均可以在口腔唾液环境中保持长期有效的抑菌浓度。
实施例5
在牙膏、漱口水、口香糖的应用：
一种含有抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C成分可以去除牙菌斑、清洁抛光牙面、使口腔清爽并具有抑菌作用的齿科用牙膏，主要组分为摩擦剂、保湿剂、表面活性剂、氟化物、增稠剂、甜味剂、防腐剂、以及色素、香精等。其中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/g。
使用方法：每日早晚取适量牙膏，使用牙刷清洁牙齿3分钟。
一种含有抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C成分的能清洁口腔、预防龋齿和牙周炎并具有抑菌作用的齿科用漱口水，主要组分为香精、表面活性剂、氟化物、氯化锶、酒精和水等其中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/mL。
使用方法：每日早晚刷牙后或餐后使用，每次使用20mL，持续漱口30秒后吐出。
一种含有抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C成分的能去除牙齿表面的食物残渣、增加唾液分泌并具有抑菌作用的齿科用口香糖，主要组分为胶体、糖浆、薄荷、甜味剂等。其中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/g。
使用方法：饭后或需要时咀嚼口香糖5分钟后吐出。
实施例6
在喷雾剂、抗菌凝胶、抗菌软膏的应用：
一种含有抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C成分的能去除口腔异味、清爽口腔并具有抑菌作用的齿科用喷雾剂，主要成分为水、甘油、香精、薄荷醇、麝香草酚等。其中其中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为20-40μg/mL。
使用方法：饭后或需要时将喷雾对准口腔按压喷雾2-3次。
一种含有抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C成分的能缓解口腔溃疡疼痛、促进溃疡愈合并具有抑菌作用的齿科用抗菌凝胶，主要成分为水、透明质酸等。其中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为20-40μg/mL。
使用方法：需要时将凝胶直接涂擦于患处。
一种含有抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C成分的能改善牙周炎症状、抑制牙周病原菌的成长并具有抑菌作用的齿科用抗菌软膏，主要成分为聚乙烯吡咯烷酮等。其中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为20-40μg/mL。
实施例7
本发明中的具有与牙齿表面结合功能的基团可以接枝于其他对革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌具有抑菌效果的抗菌肽上，其中两个磷酸化的丝氨酸、焦磷酸、阿仑膦酸钠也可以接枝于其他对革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌具有抑菌效果的抗菌肽上。
以上仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅限于上述实施例，与本发明构思无差异的各种工艺方案均在本发明的保护范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 安徽医科大学
<120> 一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽及其应用
<130> 2018
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Arg Arg Trp Cys Phe Arg Val Cys Tyr Arg Gly Phe Cys Tyr Arg Lys
1 5 10 15
Cys Arg
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)...(19)
<223> Xaa(1)=两个磷酸化的丝氨酸
<400> 2
Xaa Arg Arg Trp Cys Phe Arg Val Cys Tyr Arg Gly Phe Cys Tyr Arg
1 5 10 15
Lys Cys Arg

Claims (10)

1.一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽由如SEQID NO:1所示的氨基酸序列与具有与牙齿表面结合功能的基团聚合而成。
2.根据权利要求1所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽，其特征在于：所述具有与牙齿表面结合功能的基团为两个磷酸化的丝氨酸或焦磷酸或阿仑膦酸钠。
3.根据权利要求2所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽，其特征在于：
所述抗菌肽为抗菌肽A或抗菌肽B或抗菌肽C；
所述抗菌肽A的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
所述抗菌肽B的结构为：H4P2O7-Arg-Arg-Trp-Cys-Phe-Arg-Val-Cys-Tyr-Arg-Gly-Phe-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg；
所述抗菌肽C的结构为：C4H12NO7P2·Na·3H2O-Arg-Arg-Trp-Cys-Phe-Arg-Val-Cys-Tyr-Arg-Gly-Phe-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg。
4.根据权利要求3所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽，其特征在于：所述如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽/抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的制备方法相同。
5.根据权利要求4所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽，其特征在于：所述如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的抗菌肽/抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的制备方法包括以下步骤：
(1)选用2Cl树脂为起始载体，采用固相合成法，以Fmoc-保护氨基酸为缩合原料，依次缩合磷酸化多肽氨基酸序列中相对应的氨基酸，以及两个磷酸化的丝氨酸或焦磷酸或阿仑膦酸钠；
(2)将多肽进行切割沉聚反应，纯化后冻干。
6.一种杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽的应用，其特征在于：在治疗和预防牙齿龋病的应用。
7.根据权利要求6所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽的应用，其特征在于：在牙膏、漱口水、口香糖的应用。
8.根据权利要求7所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽的应用，其特征在于：所述牙膏、口香糖中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/g，漱口水中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为10-20μg/mL。
9.根据权利要求6所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽的应用，其特征在于：在喷雾剂、抗菌凝胶、抗菌软膏的应用。
10.根据权利要求9所述的杀灭口腔致龋菌及抑制牙菌斑形成的抗菌肽的应用，其特征在于：所述喷雾剂、抗菌凝胶、抗菌软膏中抗菌肽A/抗菌肽B/抗菌肽C的浓度为20-40μg/mL。
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